常用微生物菌株
微生物学技术
微生物学技术
微生物学技术是一门利用微生物进行实验研究和应用的技术学科。
该技术包括多种方法和实验技术，如细胞培养、分离纯化、鉴定和分类、基因工程、发酵工艺等。
这些技术能够在医药、农业、环保等领域发挥重要作用。
在医药领域，微生物学技术可用于筛选新药和生产药品。
其中，革兰氏阴性菌和放线菌是常用的微生物菌株。
通过基因工程技术，已经成功地生产了多种人类蛋白质和抗体。
在农业领域，微生物学技术可用于控制植物病害和改善土壤质量。
其中，植物生长促进剂、生物除草剂和生物农药等产品已经得到广泛应用。
在环保领域，微生物学技术可用于处理废水和废气、降解有机物等。
例如，利用微生物菌群对水体进行处理，可以达到净化水质的目的。
总的来说，微生物学技术是一门应用广泛、具有重要意义的学科，其在各个领域的应用还将继续扩展和深入，对人类的福祉和生态环境的保护都将起到积极的作用。
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工业微生物菌种
微生物工业对菌种的要求
①培养基原料来源广、廉价 ②培养条件易控制（pH值、温度、渗透压） ③发酵周期短； ④菌株高产 ⑤抗病毒（噬菌体）能力强； ⑥菌株性状稳定，不易变异退化； ⑦菌体本身不能是病原菌；
工业常用的微生物
1、细菌类： 短杆菌：氨基酸发酵（谷氨酸） 枯草芽孢杆菌：淀粉酶（BF7658）、碱性蛋白酶等 地衣芽孢杆菌：耐高温α-淀粉酶) 苏云金芽孢杆菌：BT生物农药 梭状芽孢杆菌：丙酮、丁酸等发酵
5、过滤除菌法：利用过滤方法阻留微生物 以达到灭菌目的的方法
培养基的灭菌方法 1、连续灭菌：培养基在发酵罐外经过一 套灭菌设备连续的加热灭菌，冷却后送 入空消后的发酵罐的灭菌法 2、间歇灭菌：指将配制好的培养基输入 发酵罐内直接通入蒸汽，使培养基和设 备同时灭菌的一种灭菌方式 3、固体培养基灭菌
4、放线菌 5、担子菌 6、藻类
常用菌种保藏方法
方法名称
主要措施
适宜菌种
保藏期
冰箱保藏法 （斜面）
低温
各ห้องสมุดไป่ตู้类
3~6月
液氮超低温保藏 法
超低温
甘油低温封藏法 低温、缺氧
各类 各大类
长期 1年以上
沙土保藏法 冷冻干燥法
干燥、无营养 产孢子微生物
1~10年
干燥、无氧、低 温、有保护剂
各大类
5~15年以上
灭菌与消毒的区别
灭菌：指利用物理或化学的方法杀灭或 去除物料及设备中所有的生命物质（包 括营养细胞、细菌芽孢和孢子）的技术 或工艺过程。
消毒：是利用物理或化学的方法杀死物 料、容器、器具内外及环境中的病源微 生物的技术或工艺过程，一般只能杀死 营养细胞而不能杀死芽孢。
消毒不一定能达到灭菌要求，灭菌则可 达到消毒的目的。
黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠分离纯化工艺
黑曲霉（Aspergillus niger）是一种常用的微生物菌株，可以利用其进行葡萄糖酸钠的发酵生产。
以下是黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠分离纯化工艺的简要流程：
1. 发酵生产：
黑曲霉通过代谢过程，将培养基中的碳源转化为葡萄糖酸钠。
发酵过程中需要控制发酵温度、pH值、氧气供应等因素，以提高产量和质量。
2. 分离：
将发酵液经过离心分离或压滤，将菌体和培养基分离。
分离后的发酵液中含有葡萄糖酸钠、杂质和其他副产物。
3. 过滤：
将分离后的发酵液通过滤器进行过滤，去除大颗粒的杂质，减少后续纯化步骤的负担。
4. 萃取：
使用适当的有机溶剂对过滤后的发酵液进行萃取，将其中的葡萄糖酸钠转移到有机层中。
将有机层与水层分离，得到含有葡萄糖酸钠的有机相。
5. 沉淀：
将有机相中的葡萄糖酸钠转化为钠盐沉淀，可以采用钠碳酸或氢氧化钠等化学物质进行反应。
沉淀后，对其进行过滤和洗涤，得到较为纯净的葡萄糖酸钠固体。
6. 干燥：
将葡萄糖酸钠固体在干燥器中进行干燥，去除其中的水分，得到最终产品。
以上是黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠分离纯化工艺的主要步骤。
在实际操作中，还需要对每个步骤进行具体的优化和控制，以提高产品的产量和质量。
微生物菌剂小知识
微生物菌剂小知识
1.微生物菌剂是一种利用微生物菌株作为活性成分的生物农药，具有高效、环保、安全等优点。
常用的微生物菌剂包括生防菌剂、生物肥料和生物修复剂等。
2. 生防菌剂是利用微生物菌株作为生物防治农业害虫和病害的主要手段。
常用的生防菌剂有拟除虫菌、杀菌菌、拟青霉菌等。
生防菌剂具有低毒、无残留、环保等特点，可以有效地控制农业害虫和病害。
3. 生物肥料是一种利用微生物菌株作为活性成分的生物肥料。
常用的微生物菌株包括固氮菌、磷解菌、植物生长促进菌等。
生物肥料具有增产增收、提高土壤生态环境等优点。
4. 生物修复剂是一种利用微生物菌株作为活性成分的生物修复剂，可在土壤和水体中修复污染物。
常用的微生物菌株包括石油降解菌、重金属污染修复菌等。
生物修复剂具有低成本、高效、环保等特点。
5. 微生物菌剂的适用范围广泛，可以应用于农业、环保等多个领域。
但是，在使用微生物菌剂时需要注意对菌剂的贮存、运输、使用等方面进行严格控制，以确保其有效性和安全性。
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中检所菌种及基本技术
关于黑曲霉
第 2天 第3～ 4天 第4～ 5天 第5～ 7天
图14 黑曲霉改良马丁琼脂斜面不同培养时间的生长形态
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关于黑曲霉
一类新药IMM018
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标准菌种实验用菌液
菌液检验： 结合验证实验方法进行活菌计数。 生孢梭菌可在同步硫乙醇酸盐流体培养基 灵敏度实验中计数。
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1、认识微生物
微生物的生长（population growth）与代时（generation time） 不同微生物的代时范围是20min~10h 大肠埃希菌：20min 枯草芽孢杆菌：28min 金黄色葡萄球菌：30min 铜绿假单胞菌：35min 大肠埃希菌20min繁殖一代，繁殖13h后，其子代细胞数可 以达到1 × 1013个（约等于人体全部细胞数），培养24h后 子代细胞数则可以达到4.7 × 1021个
中国药品生物制品检定所 28
谢谢大家！
中国药品生物制品检定所
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中国药品生物制品检定所
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标准菌种的保藏与应用
菌种保藏及应用参考方法：
干菌种（0代） 100ml液体培养基复苏（1代） 100ml液体培养基复壮（2代） 加100ml 20%无菌甘 油混匀，1ml/管冻存管分装，-20℃或-80℃保存 每次使用取1支自然（室温）解冻，取0.1ml接种至10ml 液体培养基（生孢梭菌用12ml硫乙醇酸盐流体培养基） 按规定培养、稀释（3代）
注意：已经解冻的冻存管不能再冷冻保存，以免冻融！
中国药品生物制品检定所 14
标准菌种实验用菌液
菌悬液制备后应在2小时内使用，若保存在2～8℃ 的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉也可制成 稳定的孢子悬液保存在2～8℃，在验证过的贮存 期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。 各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可 行、快速稳定的菌液制备标准程序。
中国药典 标准 菌株
中国药典标准菌株中国药典标准菌株是指在《中国药典》中收录的用于微生物检验和鉴定的标准菌株。
这些菌株经过严格筛选和鉴定，具有一定的代表性和可靠性，用于药品生产、检验和研究等领域。
在药典中，标准菌株分为两类：一类是通则菌株，另一类是产品菌株。
通则菌株主要用于药品微生物检验方法的建立和验证，产品菌株主要用于具体药品的微生物限度检查和质量控制。
一、通则菌株通则菌株主要用于药品微生物检验方法的建立和验证，包括无菌检验、微生物计数、微生物鉴定等。
这些菌株在药典中均有详细的规定和描述，具体包括：1. 无菌检验法：用于检查药品是否含有微生物，包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 微生物计数法：用于检查药品中微生物的数量，包括大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等。
3. 微生物鉴定法：用于鉴定药品中的微生物种类，包括白假丝酵母、黑曲霉等。
二、产品菌株产品菌株主要用于具体药品的微生物限度检查和质量控制，根据药品的特性和使用要求，选择相应的菌株进行检验。
例如：1. 消炎药：常用的菌株有金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等。
2. 抗生素类药品：常用的菌株有金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等。
3. 生物制品：常用的菌株有白假丝酵母、黑曲霉等。
在中国药典中，标准菌株的来源和鉴定方法均有详细的规定，以确保菌株的准确性和可靠性。
同时，为了保证菌株的质量和活性，我国还建立了菌株保藏中心，负责菌株的保存、传代和分发工作。
三、标准菌株在药品检验中的应用1. 无菌检验：通过检查药品中是否含有特定的微生物，以判断药品是否达到无菌要求。
2. 微生物计数：通过测定药品中微生物的数量，以判断药品的微生物污染程度。
3. 微生物鉴定：通过鉴定药品中的微生物种类，以确定药品的质量和安全性。
4. 药品质量控制：通过对药品中微生物的检查，以确保药品在储存、运输和使用过程中的质量稳定。
总之，中国药典标准菌株在药品微生物检验和鉴定中起着关键作用，对于保证药品质量和安全具有重要意义。
微生物菌种
虽然遗传工程等新的育种方法迅速发展，但诱变育种仍是目 前广泛使用的育种手段。
《发酵工程》
第二章 微生物菌种选育
原始菌株（出发菌株）
活细胞计数 诱变剂处理 活细胞计数 中间培养
突变株分离
诱变预备处 理
初筛 复筛 生产性能试验
工业微生物来源
想菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需
菌株。
从自然界采集分离。
从一些发酵制品中分离目的菌株。
《发酵工程》
第二章 微生物菌种选育
微生物菌种的选择性分离
工业化菌种的要求
能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合 成产物； 有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造 的可操作性要强；
分离耐高渗透压酵母菌，可到甜果、蜜饯、甘蔗渣堆积处采样
《发酵工程》
第二章 微生物菌种选育
目的微生物富集的一些基本方法
让目的微生物在种群中占优势，使筛选变 富集的目的： 得可能。
富集的三种方案：
定向培养:采用特定的有利于目的微生物富集的
条件（加热、膜过滤等），进行培养。
当不可能采用定向培养时，则可设计在一个分
能分解底物的微生物便会在菌落周围产生透明 圈，圈的大小初步反应菌株利用底物的能力。
分离水解酶产生菌时较多采用，如蛋白酶、淀粉酶、 脂肪酶、核酸酶等；
《发酵工程》
第二章 微生物菌种选育
例如用此法分离产生碱性蛋白酶的芽孢杆菌 土壤经巴氏消毒，以减少不产芽孢的微生物；然 后铺在pH8-9的琼脂培养基（含有均匀的不溶性蛋白 质）表面；碱性蛋白酶产生菌能消化平板上的不溶性 蛋白质，产生一透明圈。
遗传性能要相对稳定；
不易感染它种微生物或噬菌体； 产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与 致病 菌无关）； 生产特性要符合工艺要求。
微生物标准菌株图谱
在梅里埃O157显色培养基上典型特征
非O157大肠杆菌在科玛嘉O157显色培养基上典型特征
大肠杆菌在路桥O157显色培养基上典型特征
BC菌在营养琼脂上典型特征
BC菌在MYP上典型特征
BC菌在OXOID显色培养基上典型特征
BC菌在卵黄琼脂上典型特征
霉菌在孟加拉红琼脂上典型特征
大肠菌群在科玛嘉ECC显色培养基上典型特征
大肠菌群在OXOID选择性大肠菌群/杆菌显色培养基上特征
大肠杆菌在大肠杆菌/大肠菌群显色培养基上典型特征
大肠杆菌在EC肉汤上典型特征
大肠杆菌在科玛嘉ECC显色培养基上典型特征
大肠杆菌在3M测试片上典型特征
大肠杆菌O157:H7在EMB上典型特征
大肠杆菌O157:H7在山梨醇麦康凯琼脂上典型特征
亚利桑那沙门氏菌在HE琼脂上典型特征
柠檬杆菌在HE琼脂上典型特征
其他乳糖阳性硫化氢阴性的肠道菌在HE琼脂上典型特征
沙门氏菌在WS琼脂上典型特征
沙门氏菌在XLD琼脂上典型特征
沙门氏菌（硫化氢阳性）在DHL上典型特征
沙门氏菌（硫化氢阴性）在DHL上典型特征
亚利桑那沙门氏菌在DHL上典型特征
其他乳糖阳性硫化氢阴性的肠道菌在DHL上典型特征
霉菌在3M霉菌酵母测试片上典型特征
酵母菌在孟加拉红琼脂上典型特征
酵母菌在马铃薯葡萄糖琼脂上典型特征
酵母菌在3M霉菌酵母测试片上典型特征
沙门氏菌在三糖铁琼脂斜面上典型特征
沙门氏菌在尿素酶琼脂斜面上典型特征
沙门氏菌在亚硫酸铋琼脂(BS琼脂)上典型特征
沙门氏菌（硫化氢阳性）在HE琼脂上典型特征
沙门氏菌（硫化氢阴性）在HE琼脂上典型特征
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ATCC 菌株，美国模式培养物集存库(American type culture collection，ATCC)
CICC 菌株，中国工业微生物菌种保藏管理中心（China Center of Industrial Culture Collection, CICC）CMCC 菌株，中国医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）
CGMCC 菌株，中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）
MCCC 菌株，中国海洋微生物菌种保藏管理中心（Marine Culture Collection of China, MCCC）
ACCC 菌株，中国农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）
CPCC 菌株，中国药用微生物菌种资源库（CPCC）
CFCC 菌株，中国林业微生物菌种资源库（CFCC）。