手性色谱柱知识介绍
手性色谱柱分离原理
手性色谱柱分离原理
色谱柱是分离色层的重要工具，它是利用溶剂(溶剂系统)中吸附剂配合物在色谱柱内不同地带缓慢分散的物理现象，来实现色层分离的一种技术。
色谱柱分离原理可以分为两大类：站立性色谱柱分离原理和层析性色谱柱分离原理。
站立性色谱柱分离原理：站立性色谱柱分离原理主要是利用溶剂中吸附剂配合物的相对持久性以及溶剂系统的气体泵作用，在色谱柱内不同地带缓慢分散，使不同溶质或分子阵列而形成色层，从而实现色层分离的技术。
层析性色谱柱分离原理：在层析性色谱柱分离原理中，对色层分离是采用溶剂中特定层析剂并结合气体泵运行作用原理，使特定溶质或分子阵列分散在色谱柱中，不同溶质或分子阵列会沿着吸附剂配合物的不同地带形成多个色层，从而实现分离色层的目的。
色谱柱分离原理是实现色层分离的一种重要技术，目前主要分为站立性色谱柱分离原理和层析性色谱柱分离原理。
在色谱柱分离中，能够获得高精度的色层分离效果，大大减少分离操作的时间和金钱投入，而且色谱柱分离过程实现工艺简单、操作简便，非常有利于现场应用。
ChiralCE手性色谱柱产品手册及在高效液相与超高效液相色谱中的应用说明书
凯若泰ChiralCE手性色谱柱产品手册及其在高效液相与超高效液相色谱中的应用版本 1.12016.02.16新加坡凯若泰科技有限公司ChiralTek Pte Ltd192 Westwood CrescentSingapore 648559版权与免责声明所有版权归新加坡凯若泰科技有限公司（ChiralTek Pte Ltd ）所有，并受版权法保护。
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凯若泰科技有限公司坚持采用高标准工艺生产手性色谱柱，以保证其手性色谱柱的高柱效、高重现性、高质量和高可靠性。
但是，凯若泰公司对本手册可能含有的错误或因使用、改造、运输本公司色谱柱或柱部件而导致的附带损坏或间接损坏不负任何责任。
ChiralTek Pte Ltd192 Westwood CrescentSingapore 648559凯若泰新型手性色谱柱产品简介新加坡凯若泰科技公司生产两大系列新型化学键合硅胶填充的手性色谱柱。
该两大系列手性色谱柱产品均适用于传统高效液相（ HPLC ）与现代超高效液相色谱（ UPLC ）分离分析多种手性与非手性化合物。
第一系列是ChiralCE手性色谱柱。
该ChiralCE系列是一类全新的化学衍生化纤维素键合硅胶填充色谱柱。
本产品经特殊工艺，将化学修饰后的纤维素经化学键合到高纯多孔球形硅胶（2微米或3微米）表面，以制备出ChiralCE键合填料，并采用凯若泰科技公司特有的专门装柱技术，装填出ChiralCE系列高柱效手性色谱柱。
相比其他厂商的涂敷纤维素手性色谱柱（只能用常见标准流动相），化学键合ChiralCE手性色谱柱可以使用各种标准流动相和非标准流动相（例如氯仿、二氯甲烷等）以获得最佳手性分离，并具有较高的色谱稳定性。
每一根ChiralCE手性色谱柱均可用正相、反相、以及有机极性色谱流动相分析手性与非手性化合物。
手性色谱分析(Dr.Yuan)
手性固定相（CSP） 手性固定相（CSP）法
间接法：柱前衍生 • 优点：
*可采用通用的非手性柱分离 *通过衍生化可提高检测灵敏度 *分离条件简单 *分离效果好
• 缺点：
*要有可被衍生化的基团 *要有高光学纯度的手性试剂 *对个对映体衍生化率速和平衡常数应一致 *衍生化和色谱过程中不能发生消旋化
间接法：柱前衍生
常用的手性化合物测定技术 • 高效液相色谱 (HPLC)
• • • • 气相色谱 (GC)(样品需具有一定的挥发性及热稳定性） 毛细管电泳(HPCE) 超临界流体色谱（SFC) 流动模拟床技术
HPLC
• 80年代初HPLC法迅速成为药物对映体分离 和测定最为广泛应用的方法。 • 特别适用于极性强、热稳定性差的手性药 物的分析。 • HPLC用于手性分离概括起来可分为两大途 径：间接(CDR)和直接(CMPA、CSP)方法。
冠醚固定相结构
大环抗生素型（Macrocyclic antibiotics） 大环抗生素型（Macrocyclic antibiotics）
hydrogen bonding & dipole stacking sites amine
H3 C NH HO H O NH O O NH NH HO O O NH COOH NH 2 HO OH
含肽或蛋白质手性固定相
Characteristics
Peptide chain: Carbohydrate content: Molecular weight: Isoelectric point (pI) 183 aa 45% 40000 2.7
• CHIRAL-AGP
Chiral-AGP固定相是a-酸性糖蛋白(alpha1-acid glycoprotein), 这种非常稳定的蛋白质被键合到5um 球型硅胶表面, 能够耐受高比例有机流动相, 宽范围 的pH, 以及更高的操作温度. Chiral-AGP用于反相色 谱, 能够分离数量非常多的各种手性化合物.
手性色谱柱安全操作及保养规程
手性色谱柱安全操作及保养规程手性色谱柱是一种用于手性化合物分析和分离的高级色谱柱，在实验室中的应用越来越广泛。
为了确保手性色谱柱的正常工作并延长其使用寿命，我们需要掌握手性色谱柱的安全操作规程和保养规程。
本文将详细介绍手性色谱柱的安全操作及保养规程。
手性色谱柱的安全操作规程1. 安装和连接安装手性色谱柱时，应先查看安装位置是否稳定，以确保不会对分析精度造成影响。
使用支架支撑的柱子，要确保支架小臂下方的安全承载力，同时确保柱子垂直放置，避免柱子与流动相的接触位置发生任何改变。
连接方法通常分为手动法和工具法，新人不熟悉连接时可请教其他工作人员或技术人员。
连接手柄时要轻轻拧紧，避免过紧导致出现漏液、卡住或者更换柱子时不能正常拆卸等情况。
2. 样品的准备每个实验操作都需要事先准备标准品或校正样品，并根据需要合理配置流动相。
在选择检测器时，应根据样品的性质和通量要求选择合适的检测器。
在样品制备过程中，应注意不要弄丢样品或污染手性色谱柱。
3. 操作技巧为了得到高质量的分析结果，应掌握一些操作技巧。
在操作时，应保持手机色谱柱的温度稳定，避免突然的温度变化或者过高的温度对柱子的损害。
应根据实验要求慢慢调整流速，避免快速调整对手性色谱柱造成太大的压力。
针对不同的光谱，调整检测器的增益和增益设置。
4. 实验结束处理实验结束后需要进行柱子后续处理，避免对柱子造成损害。
应先停止流动相的进药口，建议在冲洗氮气中断开流除相和燃料进口阀门，在氮气中冲洗至极干，直到不再有气体流出，再把柱子上的残留液排除。
在该流程中，与自己身体有直接联系的任何设备（手套、护眼镜等）都应佩戴好。
手性色谱柱的保养规程手性色谱柱的保养中，可以分为自然保养和人为保养两部分。
1. 手性色谱柱的自然保养柱子在使用过程中，应该仔细保护，避免机械碰撞和震动，确保其环境湿度和温度均衡，并避免阳光直射。
柱子在使用时，应该减少大幅度的温度变化，避免由于突然的温度变化而造成损坏。
手性色谱柱知识介绍(4)
由于形成包合物速度较慢，因此可能导致色谱峰峰形较差，同样也影响了其在制备色谱中的应用。
环糊精固定相的选择性取决分析物的分子大小；α-环糊精只能允许单苯基或萘基进入，β-环糊精允许萘基及多取代的苯基进入，γ-环糊精仅用于大分子萜类。
β-环糊精手性固定相应用范围最广。
Ibuprofen通过β-环糊精色谱柱得到分离，说明了pH值对氢键的影响。
当流动相的pH=7时，观察不到拆分的迹象。
pH=4时，可达到好的分离效果。
通常分离氨基酸时，常采用低的pH值，以抑制酸性基团的离子化，同时也增强氨基的质子化。
磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐证明对β-环糊精色谱柱来说是很好的缓冲液。
通常缓冲液是0.1%三乙胺溶液，用磷酸或醋酸调节到合适的pH值。
高的流速会降低形成复合物的能力，低流速分离效果较好，0.5-1ml/min的流速最好。
另外，增加缓冲液的浓度可以克服流速的影响，因为它可以增加环糊精洞穴和流动相的吸引力。
常用缓冲液及其使用浓度如下表所示：缓冲液浓度目的TEAA（乙酸三乙胺盐）0.01-2% NH4NO310-500mM（用于减小包埋）柠檬酸盐10-200mM（特别适合于酸性化合物）醋酸铵10-200mM pH值选择见下表: 醇和胺pH4(加强NH的离子化) 酸 pH7 优化手性分离条件要考虑的方面有：pH值对分离度的影响；流速对分离度的影响；柱温、有机相比例、缓冲盐浓度对分离度的影响。
环糊精的修饰：最近，对环糊精的修饰使环糊精型手性色谱柱可以分离更多的化合物，并可用于气相手性色谱分离。
衍生化是通过将不同的基因键合到环糊精洞穴表面的羟基上。
衍生化反应包括乙基化、S-羟基丙基化、生成S或R-萘基乙基氨基甲酸盐、3，5二甲基苯基氨基甲酸盐和环状对甲苯酰酯。
这些新型的环糊精固定相有许多优点，它们可以分离更多化合物，价格上也有竞争力，由于改进了手性识别能力使其更适用于制备色谱。
手性色谱柱知识介绍（6）
蛋⽩质型： 蛋⽩质型⼿性⾊谱柱属于第5种类型。
分离依赖于疏⽔相互作⽤和极性相互作⽤。
已经有多种蛋⽩质⽤于此类⼿性⾊谱柱。
⽬前使⽤较多的是α-酸性糖蛋⽩（α-Acid Glycoprotein，AGP），⼈⾎清⽩蛋⽩（Human Serum Albumin，HSA），⽜⾎清⽩蛋⽩（Bovine Serum Albumin，BSA）和卵类粘蛋⽩（Ovomucoid，OV）。
α-酸性糖蛋⽩分⼦由181个氨基酸残基和40个唾液酸（sialic acid）残基构成。
α-酸性糖蛋⽩分⼦偏酸性，等电点为2.7。
含有两个⼆硫键，性质很稳定。
α-酸性糖蛋⽩分⼦可以共价键合到硅胶上，制成⼿性⾊谱柱，可以分离许多化合物。
α-酸性糖蛋⽩⼿性⾊谱柱使⽤的流动相通常为pH 4-7的磷酸盐缓冲液和很⼩⽐例的有机相。
有机相⾸选异丙醇，如达不到分离要求，可以尝试⼄腈，⼄醇，甲醇或四氢呋喃。
有机相的改变导致蛋⽩结构发⽣暂时的改变。
⾊谱柱的负载量⾄关重要，典型的负载量为0.02mg/ml的浓度样品，进样20µl。
pH 的改变对⼿性选择性起关键作⽤，尤其是胺类化合物。
pH降低导致蛋⽩质负电荷的降低，引起胺类化合物保留时间减⼩，然⽽这意味着可以减⼩有机相⽐例，使选择性增加，峰形改善。
通过调节有机相⽐例仍⽆法达到分离效果时，有时需⽤电荷调节剂。
但这可能引起蛋⽩结构的永久改变，这些电荷调节剂包括丁酸、⾟酸、癸酸和⼆甲基⾟胺。
有时也⽤到1，2 亚⼄基⼆醇，1，2丁醇和氯化钠。
温度对分离也有影响，温度增加保留时间，减⼩分离因⼦。
⼈⾎清⽩蛋⽩（HSA）分⼦量为69,000，等电点为4.8。
蛋⽩中认为存在两个药物结合位点：华法令-氮杂普鲁帕宗（warfarin-azapropazone）和苯基⼆氮杂-吲哚（benzodiazapine-indole）结合位点。
流动相中加⼊⾟酸，采⽤⼈⾎清⽩蛋⽩⼿性⾊谱柱可以有效分离benzodiazapine。
手性柱介绍
手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。
低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。
因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。
迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
chiralpak agp色谱柱使用说明书
chiralpak agp色谱柱使用说明书
摘要：
1.引言
2.chiralpak agp 色谱柱的特点
3.使用说明
4.注意事项
5.结论
正文：
1.引言
chiralpak agp 色谱柱是一种手性色谱柱，广泛应用于手性化合物的分离和分析。
其独特的结构和优良的性能，使得其在手性分析领域有着广泛的应用。
2.chiralpak agp 色谱柱的特点
chiralpak agp 色谱柱具有以下特点：
（1）高效：采用高性能的固定相，使得色谱柱具有高的分辨率和回收率。
（2）稳定性：色谱柱的稳定性高，使用寿命长。
（3）灵活性：可以根据需要选择不同的规格和型号。
3.使用说明
（1）安装：将色谱柱连接到色谱系统上，确保连接处紧密无漏。
（2）样品准备：将待分析的手性样品溶解在适合的流动相中。
（3）运行：开启色谱系统，进行样品的分析。
4.注意事项
（1）在使用过程中，要避免色谱柱的摔落和碰撞，以免损坏。
（2）色谱柱的使用温度应在20-30 度之间，避免高温使用。
（3）使用后，要清洗色谱柱，以备下次使用。
5.结论
chiralpak agp 色谱柱是一种性能优良的手性色谱柱，适用于各种手性化合物的分离和分析。
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手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。
低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。
因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。
迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。
因此参考Irving Wainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种：刷（Brush）型或称为Prikle型纤维素（Cellulose）型环糊精（Cyclodextrin）型大环抗生素（Macrocyclic antibiotics）型蛋白质（Protein）型配位交换（|Ligand exchange）型冠醚（Crown ethers）型刷型：刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bill Prikle及其同事的卓越工作。
六十年代，Bill Prikle将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究中，通过不断实践，发明了应用范围较广、柱效很好的手性色谱柱。
刷型手性色谱柱是根据三点识别模式设计的，属于Irving Wainer分类中的第一种类型。
刷型手性固定相分为π电子接受型和π电子提供型两类。
最常见的π电子接受型固定相是由（R）-N-3，5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸键合到γ-氨丙基硅胶上的制成。
此类刷型手性色谱柱可以分离许多可提供π电子的芳香族化合物，或用氯化萘酚等对化合物进行衍生化后进行手性分离。
π电子供给型固定相常见的是共价结合到硅胶上的萘基氨基酸衍生物，这种固定相要求被分析物具有π电子接受基团，例如二硝基苯甲酰基。
醇类、羧酸类、胺类等，可以用氯化二硝基苯甲酰、异腈酸盐、或二硝基苯胺等进行衍生化后，用π电子供给型固定相达到手性分离。
刷型固定相的优势在于其易于合成。
合成方法在Bill Prikle的著作中有详细的说明。
另外，刷型固定相具有高的容量因子，因此具有高的选择因子。
它的不利之处在于它仅对芳香族化合物有效，有时不得不进行衍生化反应。
但值得一提的是，这种衍生化反应是非手性衍生反应，所以不存在手性衍生的问题。
刷型手性色谱使用的流动相基本是极性弱的有机溶剂，这对于制备色谱来讲未必是缺点。
近来，刷型固定相出现了π电子供给和接受基因的混合固定相。
如：WHELK-O和BLAMO，及α-BURKE-Ⅱ固定相。
α-BURKE-Ⅱ相十分适用于β-阻断剂的手性分离。
典型的流动相为二氯甲烷-乙醇-甲醇混合物，比例为85：10：5。
加入10mM醋酸铵可以调整保留时间。
SS BLAMO Ⅱ，同时具有π电子供体区和受体区，形成手性裂缝，因此对于某些分子具有很高选择性。
纤维素型：纤维素型手性色谱柱的分离作用包括相互吸引的作用及形成包埋复合物。
它们属于Wainer 分类中的第2种类型。
市售的手性色谱柱为微晶三醋酸基、三安息香酸基、三苯基氨基酸盐纤维素固定相。
很多化合物可通过此类型的色谱柱得到分离。
这种类型的手性色谱柱种类也很齐全。
流动相使用低极性溶剂，典型的流动相为乙醇-己烷混合物。
但特别要注意由于氯可以使纤维素从硅胶上脱落，因此要确保流动相中无含氯溶剂。
这种类型的手性色谱柱主要的制造商之一是日本的Daicel公司，他们生产的纤维素酯和氨基甲酸纤维素柱可以分离多种生物碱和药物。
特别值得一提的是OD柱。
在某手性化合物异构体的分离中，分离度超过了25，这意味着载样量可以很高，对于制备十分有利。
纤维素固定相的每个单元都为螺旋型，而且这种螺旋结构还存在极性作用、π-π作用及形成包埋复合物等手性分离因素。
淀粉代替纤维素制成的此类手性柱显示了和纤维素柱不同的选择性，但是稳定性较差。
因为淀粉是水溶性的，因此流动相中必须绝对无水才能保证柱子寿命。
目前此类型的柱子能分离80%左右可能面临到的所有手性化合物。
此类柱子通常用于正相系统，用正己烷-乙醇，正己烷-异丙醇混合溶剂为流动相。
OD柱也可用于反相的情况，但流动相必须含有高浓度的高氯酸盐缓冲液，以防止固定相溶解。
即使这样，使用较长时间以后色谱柱也难免要受到损害，但是在某些情况下使用反相系统分离效果要优于使用正相系统。
环糊精型：环糊精是通过Bacillus Macerans 淀粉酶或环糊精糖基转移酶水解淀粉得到的环型低聚糖。
通过控制环糊精转移酶的水解反应条件可得到不同尺寸的环糊精。
市售的环糊精主要是α、β、γ三种类型，分别含6、7、8个吡喃葡萄糖单元。
环糊精分子成锥筒型，构成一个洞穴，洞穴的孔径由构成环糊精的吡喃葡萄糖的数目决定。
环糊精类型及洞穴的孔径等见下表：环糊精糖元数目洞穴孔径可进入洞穴的分子类型手性中心数目α 6 4.5-6.0 5-6元环的芳香族化合物 30β 7 6.0-8.0 联苯或萘 35γ 8 8.0-10.0 取代芘和类固醇 402，3位仲羟基分布在环糊精洞口，6位伯羟基在环糊精分子的外部，这意味着洞穴内部是相对疏水的区域。
用环糊精手性固定相产生手性识别要求被拆分物的疏水部分能嵌入环糊精洞穴中，形成可逆的、稳定性不同的包合物，环糊精洞口的羟基和被拆分物的极性基团相互作用。
由于形成包合物速度较慢，因此可能导致色谱峰峰形较差，同样也影响了其在制备色谱中的应用。
环糊精固定相的选择性取决分析物的分子大小；α-环糊精只能允许单苯基或萘基进入，β-环糊精允许萘基及多取代的苯基进入，γ-环糊精仅用于大分子萜类。
β-环糊精手性固定相应用范围最广。
Ibuprofen通过β-环糊精色谱柱得到分离，说明了pH值对氢键的影响。
当流动相的pH=7时，观察不到拆分的迹象。
pH=4时，可达到好的分离效果。
通常分离氨基酸时，常采用低的pH值，以抑制酸性基团的离子化，同时也增强氨基的质子化。
磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐证明对β-环糊精色谱柱来说是很好的缓冲液。
通常缓冲液是0.1%三乙胺溶液，用磷酸或醋酸调节到合适的pH值。
高的流速会降低形成复合物的能力，低流速分离效果较好，0.5-1ml/min的流速最好。
另外，增加缓冲液的浓度可以克服流速的影响，因为它可以增加环糊精洞穴和流动相的吸引力。
常用缓冲液及其使用浓度如下表所示：缓冲液浓度目的TEAA（乙酸三乙胺盐） 0.01-2%NH4NO3 10-500mM (用于减小包埋)柠檬酸盐 10-200mM (特别适合于酸性化合物)醋酸铵 10-200mMpH值选择见下表:醇和胺 pH4(加强NH的离子化)酸 pH7优化手性分离条件要考虑的方面有：pH值对分离度的影响；流速对分离度的影响；柱温、有机相比例、缓冲盐浓度对分离度的影响。
环糊精的修饰：最近，对环糊精的修饰使环糊精型手性色谱柱可以分离更多的化合物，并可用于气相手性色谱分离。
衍生化是通过将不同的基因键合到环糊精洞穴表面的羟基上。
衍生化反应包括乙基化、S-羟基丙基化、生成S或R-萘基乙基氨基甲酸盐、3，5二甲基苯基氨基甲酸盐和环状对甲苯酰酯。
这些新型的环糊精固定相有许多优点，它们可以分离更多化合物，价格上也有竞争力，由于改进了手性识别能力使其更适用于制备色谱。
配位交换型：手性配位交换色谱（Chiral Ligand Exchange Chromatography，CLEC）由Davankov发明，是通过形成光学活性的金属络合物而达到手性分离，属于Irving Wainer分类中的第4类手性固定相，主要用于分离氨基酸类。
由于此类固定相是由手性氨基酸—铜离子络合物键合到硅胶或聚合物上形成，因此流动相中必须含有铜离子以保证手性固定相上的铜离子不至流失。
其它的过渡金属元素也已用于手性配位交换色谱，但铜离子应用最广。
形成络合物的过程十分缓慢，因此有时需提高柱温，最佳温度约50℃。
手性配位交换色谱仅对α- 氨基酸和其类似物有效。
β- 氨基酸很难用手性配位交换色谱得以分离。
手性配位交换色谱可用于制备，由于流动相中存在铜离子，虽然铜离子能用离子交换柱除去，但增加了样品处理的困难。
大环抗生素型：大环抗生素型手性色谱柱是最近发展起来的，通过将大环抗生素键合到硅胶上制成的新型手性色谱柱。
大环抗生素型手性色谱柱的出现归功于Dan Armstrong的贡献。
此类色谱柱常用的大环抗生素主要由三种：利福霉素（Rifamycin），万古霉素（Vancomycin），替考拉宁（Ticoplanin）。
利福霉素作为手性添加剂在毛细管电泳分离手性化合物方面得到了成功运用。
万古霉素和替考拉宁分子结构中存在“杯”状结构区和糖“平面” 结构区。
此类色谱柱性质稳定，可用于多种分离模式。
手性分离基于氢键、π-π作用、形成包合物、离子作用和肽键等。
替考拉宁分子量为1885，结构中存在20个手性中心，3个糖基和4个环。
酸性基团在多肽“杯”/ “裂层”的一端，碱性基团在它的另一端。
酸性基团和碱性基团提供了离子作用点。
糖基在三个平面上，可折叠起来将化合物分子包埋在多肽“杯”中。
万古霉素分子量为1449，结构中存在18个手性中心，3个环。
万古霉素具有“篮状”结构，它的附近还有一个可弯曲的糖平面，可将分析物分子包埋在“篮子”中。