去内毒素质粒小提试剂盒说明书
(完整word版)质粒提取试剂盒说明书(word文档良心出品)
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2．加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备：可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程：(提取过程在室温下进行)：1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min，去上清3. 加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
（用移液枪吹打进行重悬浮）4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min，紧凑的白色沉淀就会形成，迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min，弃过滤液。
质粒提取试剂盒-说明书-翻译
精品文档。
1欢迎下载 E.Z.N.A.™ 质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文）（适用于No. D6942, D6943 & D6944）1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm ）孵育12-16h 。
使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA 非常重要。
4. 加入250μl 溶液II ，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
可能需要孵育2min 。
不要用力混合，以免使染色体DNA 断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min 。
溶液II 不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入350μl 溶液III ，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。
6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼．．．．的吸取上清液，加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。
确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。
室温下10,000 x g 离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。
8. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入500μl HB 缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完成通过柱子。
该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。
9. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。
内毒素去除试剂盒说明书
内毒素去除试剂盒说明书I. DESCRIPTION细菌内毒素(脂多糖，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。
人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用，内毒素使机体免疫功能严重受损，进一步的发展可能引发脓毒性休克，弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。
因此，内毒素的去除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的，尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。
本试剂盒使用的是一类高效内毒素去除树脂，它以修饰过的多粘菌素B（PMB）为配体，进行特异性的内毒素去除。
经此亲和树脂纯化，样品最终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。
亲和树脂的主要特性如下表：规格 1.5 ml预装柱结合能力高达2,000,000 EU/ml 树脂配基修饰的多粘菌素B (PMB)pH 范围pH 5-10基质4% 交联的琼脂糖凝胶颗粒大小90 µm保存温度2°C-8°C使用寿命18个月平衡缓冲液磷酸盐缓冲液，pH 8.0适合纯化对象蛋白，多肽，抗体，多糖等离子条件0.1-0.5 M NaCl可耐受试剂20% DMSO, 20% 乙醇, 20% 甘油;1 M 尿素, 300 mM 咪唑; 0.05% 吐温-20, 10 mM DTT 等II. KEY FEATURES·高稳定性，高去除效率·高结合力：> 2, 000, 000 EU / ml (CV)·无需恒流泵即可调节流速·重复使用5次不会改变柱子效果·使用方便，试剂盒中提供无热源缓冲液，无热源收集管，无热源枪头等III. CONTENTS试剂盒内容 3 – 5个测试亲和树脂 1.5 ml 预装柱再生缓冲液125 ml平衡缓冲液125 ml流速控制器1个无热源接收管 1 包(3个/包)无热源枪头(1 ml) 2包(6个/包) 说明书1份IV. MATERIALS AND EQUIPMENT NEEDED BUT NOT PROVIDED1. 铁架台2. 0.1 M的氢氧化钠和0.1M盐酸, 用于调节样品pH值V. ENDOTOXIN REMOVAL PROTOCOL样品处理：样品的pH值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
GENMED 无内毒素小量质粒抽提试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60007.3 v.A GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂是一种旨在通过化学和生物裂解细胞、 沉淀、亲和树脂过滤、萃取来达到脱盐、去内毒素、去蛋白、去杂质小分子的纯化无内毒素质粒DNA的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种质粒/柯斯质粒DNA样品的制备，OD260/280在1.8-2.0之间。
产物可用于各种后续分子生物学操作。
产品即到即用，性能稳定，操作方便迅速，提取效率和纯化程度高。
技术背景内毒素（Endotoxin）是一种脂多糖（Lipopolysaccharides；LPS），革兰氏阴性细菌细胞膜的组成成分。
在质粒纯化过程中，细菌裂解释放出内毒素，伴随着质粒，严重干扰后续真核细胞的转染，尤其对于敏感的细胞株。
GENMED无内毒素小量质粒DNA制备技术综合了酶解、碱裂、煮沸等优势元素，融入了特异亲和树脂充分有效地使细菌中核酶、PCR反应抑制剂失活，并清除内毒素（低达<0.1 EU/微克）以及非DNA 分子，其效率和纯度都出乎其上。
产品内容GENMED混匀液（Reagent A）毫升GENMED裂解液（Reagent B）毫升GENMED平衡液（Reagent C）毫升GENMED去毒液（Reagent D）毫升GENMED去干扰剂（Reagent E）微升GENMED沉淀液（Reagent F）毫升GENMED清理液（Reagent G）毫升GENMED保存液（Reagent H）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED混匀液（Reagent A）和GENMED去干扰剂（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5和2毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于沉淀核酸涡旋震荡仪：用于混匀反应物37℃恒温水槽：用于孵育反应物1．加入毫升含质粒的细菌到毫升离心管（注意：确保细菌量OD600＝ ;如果细菌量不足，影响质粒提取）2．放进微型台式离心机离心秒，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED混匀液（Reagent A），涡旋震荡少许，使细菌颗粒混匀5．加入微升GENMED裂解液（Reagent B），轻轻混匀6．加入微升GENMED平衡液（Reagent C），强力涡旋震荡秒7．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）8．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免絮状物9．同时移取微升GENMED去毒液（Reagent D）到另一个新的毫升离心管（注意：参见注意事项3和4）10．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）11．小心抽去上清液12．加入微升实验步骤的上清液13．涡旋震荡秒14．平放在平式摇荡仪上孵育分钟，速度为RPM15．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）16．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免黑色小粒17．加入微升GENMED去干扰剂（Reagent E），混匀18．放进℃恒温水槽孵育分钟19．加入微升GENMED沉淀液（Reagent F）20．涡旋震荡秒21．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）22．小心抽去上清液23．加入微升GENMED清理液（Reagent G）24．放进微型台式离心机离心分钟，速度为0g（例如eppendorf 5415D，RPM）25．小心抽去上清液26．空气中晾干27．加入0微升GENMED保存液（Reagent H）28．放进℃冰箱里备用注意事项1．本产品为20次操作2．本产品采用特殊树脂法3．使用GENMED去毒液（Reagent D）前，充分混匀4．使用1毫升枪头，将枪头尖端部分剪去，用于移取GENMED去毒液（Reagent D）5．细菌量是个重要因素：通常1毫升细菌可获得1－5微克无内毒素质粒6．如果需要制备各种数量的细菌质粒/柯斯质粒，可订购中量和大量规格7．本公司提供GENMED RNA清除试剂盒（GMS20059）和GENMED去内毒素试剂盒（GMS20067）8．本公司提供系列质粒提取试剂产品1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定去内毒素和纯化程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒 Mini Plasmid Kit(目录号：HS0101)产品包装（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。
通过漂洗液PW 的清洗可去除杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA 。
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug 的高纯度质粒DNA ，在30 min 之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR 、测序等各种常规分子生物学操作。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液不需要另加乙醇，即开即用。
3. 高质：OD260/280在1.7 ~ 1.9之间。
4. 稳定：正确保存条件下一年内提取效果不发生变化。
操作步骤1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
（注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。
质粒小量提取试剂盒说明书
质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。
（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
无内毒素质粒小量快速提取试剂盒
1.
产品特点： 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.
独有的去蛋白液配方， 可以高效去除核酸酶。 即使是核酸酶含量丰富的菌株如 JM 系列、HB101 也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3. 4.
3.
加 250μl 的溶液 P2，温和地上下翻转 4 -7 次使菌体充分裂解，室温放置 4 分钟。 温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组 DNA 剪切断裂！所用时间不应超过 5 分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘 稠后就可以做下一步，不是一定要准确的 5 分钟。
4.
4.
得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA 。电泳可能为单一条带，也可能为 2条或者多条 DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培 养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺 旋可以超过 90%。
20 次
50 次
150µ l 15 ml 15 ml 20 ml 22 ml 25 ml 15ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
5 ml 10 ml 20 个 20 个 5 ml 10ml 50 个 50 个
本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
-1-
储存事项： 1. 第一次使用时， 将试剂盒所带的全部 RNase A 加入溶液 P1 后 （终浓度 100ug/ml） 置于 4℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量 RNA 残 留，在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。 2. 环境温度低时溶液 P2 中 SDS 可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热 几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。
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去内毒素质粒小提试剂盒说明书
试剂盒组成50次100次
RNase A 100ul 200ul
内毒素清除剂20ml 40ml
溶液P1 10ml 20ml
溶液P2 10ml 20ml
溶液P3 10ml 20ml
结合液30ml 60ml
漂洗液15ml 15ml×2
洗脱液10ml 20ml
吸附柱50个100个
收集管50个100个
说明书1份1份
注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。
产品简介：
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，同时加入Solarbio公司特制的内毒素清除剂，可最大限度地去除内毒素。
从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。
使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的试验，以及其它一些常规试验如酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离
心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液
器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入200ul溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定
要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏。
但也不要低于2min，以免裂解不充分。
4、向离心管中加入200ul溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色
絮状沉淀。
12000rpm离心10 min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
注意：溶液P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中
还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
5、加入上清1/5体积冰预冷的内毒素清除剂，振荡混匀，溶液变浑浊，冰浴2min至溶液变
清亮。
6、37℃水浴5min，不时振荡，溶液又变浑浊。
12000rpm室温离心5min，溶液应分为两相，
上层水相含质粒DNA，下层油状相含内毒素。
7、将含质粒DNA的上层水相转移至新管，弃下层油状相，注意不要吸入油状相。
重复抽提
三次，即重复步骤5-7三次。
8、加入600ul结合液，充分混匀后加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心1min，倒
掉收集管中的废液。
如果一次加不完可分两次加。
9、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分
钟，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
11、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱
中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
12、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的
无内毒素洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
13、为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置5min，
12000rpm离心1min。
注意事项：
1、使用前请先检查溶液P
2、溶液P3和结合液是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴
中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
2、洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有
影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
3、质粒DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。
由于质粒DNA本身的性质，清除程序
可导致部分质粒DNA丢失，所幸的是与清除内毒素的艰难相比质粒DNA更容易提取制备。
4、所有溶液应用无内毒素的高纯水配制，所有器械材料均应不含内毒素，玻璃器皿可高温烘
烤，非挥发性水溶液可高压处理。
5、DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的
剪切力等因素有关。
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。