血培养的原则和流程
血培养的原则和流程之消毒篇
样本采集和运输
• 血培养采集部位
• 血培养应被采集自静脉而非动脉 • 采自静脉植入装置如留置导管或留置口的血培养会伴有高的 污染率 • 如果血培养是通过静脉植入管道采集的，则不必
• 弃去起始部分的血液，或 • 使用生理盐水冲洗管道以去除残留的肝素或其他抗凝剂
• 在皮肤消毒前，血培养瓶的橡皮塞需使用70%异丙基酒精消 毒并干燥 • 采血部位皮肤消毒步骤：
抽取血培养的数量
• • • 最佳的血培养数量是不确定的，但是只抽单瓶的血培养是不够的 多套的血培养可以帮助区别血培养假阳性（如皮肤污染等） 建议：对于可能的心内膜炎患者，起始采集3套血培养，如果在24小时内 仍报告为阴性，则继续采集2套血培养，全部培养一共为5套。
方法和步骤 –影响血液标本中病原菌检出率的重要因素
• 先使用70%异丙基酒精消毒并干燥 • 再进行正式消毒步骤 • 整个过程严格遵从无菌操作，不允许在消毒后按压静脉，除非带 有无菌手套
• 许多研究表明采血和接种是否需要换针头并无明显的污染率 差异，更换针头会增加针刺伤的风险
定义：污染：血培养中生长的细菌是在样本采集或操作过程中被带入培养的，而非来 自病人的血液
样本采集和运输 • 血培养的数量
• 研究表明，采用全自动的血培养系统每套血 培养采血20ml时
• 一套检出率：65% • 二套检出率：80% • 三套检出率：96%
血培养标本的采集注意事项和运送
血培养标本的采集注意事项和运送血流感染的发生发展可以严重威胁患者的生命，其正确诊断不仅可以减少抗菌药物的误用和滥用，同时可以大大地改善患者的预后，降低患者的病死率，减少医疗花费。
本文向读者详细介绍血培养标本采集时间、套数、血量要求、样本运输、皮肤消毒注意事项、导管相关性血流感染以及感染性心内膜炎诊断规范、快速鉴定血培养中的念珠菌、MRSA、葡萄球菌等新方法。
提醒广大医务工作者严格执行血流感染的诊断规范，快速报告实验结果，强调及时与临床，提高血流感染诊断水平的重要意义。
1、采血时间研究表明，大量入血的时间为患者寒颤发热前1小时，在此期间，应同时（或间隔30-60 min）采集2-3套血培养，只有在怀疑患者有感染性心内膜炎或其它血管内感染（如导管相关性感染）时，才有必要间隔较长时间多次采集血培养。
2、血培养数量在每次败血症期间，推荐采集2-3套血培养。
对于成人，不应仅做1套血培养，不仅因为采血量不足，而且1套血培养的结果较难解释。
由于在开始抗菌治疗后，患者中的致病菌不会立即清除，2-5天内无须重复进行血培养。
但对于感染性心内膜炎患者，应多次进行血培养以评估和指导治疗；由金葡球菌引起的败血症（非感染性心内膜炎），应在48-96 小时重复培养以判断其是否为复杂性金葡菌败血症。
3、血培养采血量采血量对于败血症的检测非常重要。
对于成人，采血量在2-30 ml 时致病菌的检测与血量成正比，虽然采血量增长至40 ml（甚至更高）时血培养阳性率仍在提高，但已经不再与采血量成正比。
对于婴幼儿，采血量不应超过患儿总血量的1%。
4、血标本在需氧瓶和厌氧瓶间的分配在常规血培养中，推荐成对使用需氧瓶和厌氧瓶。
如果采血量低于推荐血量，应将血标本先注入需氧瓶，再将剩余血液注入厌氧瓶，因为大部分败血症是由需氧或兼性细菌及酵母菌引起的。
如果仅做需氧培养，每套培养应使用2个需氧瓶并保证有足够的血量。
5、皮肤消毒以避免污染为减少皮肤菌群对血培养的污染，应对静脉穿刺点进行消毒。
血培养采集操作规程
血培养采集操作规程一、概述当微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系统清除这些微生物的能力时形成菌血症或真菌菌血症。
血液和骨髓的细菌学培养对菌血症的诊断具有重要价值。
临床菌血症按病程可分为一过性菌血症、间歇性菌血症、持续性菌血症。
菌血症患者多数为间歇性菌血症，病原菌周期性出现在血液中，随之为无细菌时期。
不管临床症状经历的严重程度，患者血液中病原菌浓度相当低，据此要求临床多次采集血液标本进行培养，但24h内一般不超过3次。
血培养常见菌:革兰阴性菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌，伤寒沙门菌、绿脓假单胞菌、不动杆菌属等;革兰阳性菌主要包括金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、念珠菌属等。
菌血症是临床医学急症，应尽快采集血液进行培养。
二、物品准备与检验申请1、领取专用血培养瓶。
请拿检验申请单到病房二楼细菌室登记领取。
细菌室周一到周六上午正常上班。
其他时间如中午、夜班、节假日请到生化室联系。
普通血培养领取普通双相血培养瓶（绿色帽），全自动血培养领取:成人血培养领成人瓶（灰色帽），儿童血培养领儿童瓶（粉红色帽）。
2、填写检验申请单。
用钢笔填写，字迹清楚，填写完整。
填写内容包括：患者姓名、性别、年龄、科别、病区、床号、住院号、临床诊断、送检目的、申请医生及送检时间。
三、采集指征一般患者出现以下一种体征时可作为采血的重要指征:发热(≥38℃) 或低温(≤36℃) ，寒战，白细胞增多(计数大于10. 0×109/ L ，特别有“核左移”时) ，皮肤黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血压降低，C 反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养。
新生儿可疑菌血症，应该同时做尿液和脑脊液培养。
对入院危重感染患者应在未进行抗菌药物治疗之前，及时做血培养。
四、采集方法1、操作流程: 打开血培养瓶塑料盖用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞并擦干表面残余酒精→消毒皮肤后用无菌注射器抽取血液从橡皮塞处注入血培养瓶内→用75%酒精重新消毒血培养瓶橡皮塞并盖好塑料盖→立即送检。
(优选)临床血培养的指导原则
皮肤和血培养瓶的消毒方法
美国CLSI推荐皮肤的消毒方法为：
感染性心内膜炎采血方法
血培养采血套数及血量
• CLSI要求每次采集2-3套标本,每套应包括一个需氧培养瓶,一个厌氧 培养瓶
• 一个静脉穿刺点只能采集1套血培养，采集第2套血培养应该选择第2 个静脉穿刺点
• 成年病人不能只采1瓶血培养标本，采血量不足和只做1套血培养所 得得结果是很难正确解释的
Cockrill2004年报告:163位病人,血培养仪
How reliable is a negative blood culture result?
Australia, 2007
• Adequate blood culture volume
• < 1 month: ≥ 0.5 mL • 1 month – 36 months: ≥ 1.0 mL • ≥ 36 months: ≥ 4.0 mL
采血套数及血量
1套(20ml)
2套(40ml)
检出率
65%
80%
3套(60ml) 96%
血培养在需氧瓶和厌氧瓶中的分配及血量
• CLSI建议常规的血培养应该包括至少一个需氧培养瓶和一个厌氧 培养瓶（称“一套”）
• 最近的研究表明：用需氧瓶加厌氧瓶的组合检测出的葡萄球菌， 肠杆菌科菌中某些菌和苛氧菌比一对需氧瓶多。
•
对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1％
体重kg
<=1 1.1-2 2.1-12.7 12.8-36.3 >=36.3
总血量ml
50-99 100-200 >200 >800 >2200
第一套取血量ml（ 第二套取血量ml 占全身血量％）
血培养指导原则
三、标本的运送要求和拒收标准
（一）运送要求 1、采集后的血培养瓶应立即送往实验室。 2、接种前后的血培养瓶均不得冷藏或冷冻。
（二）拒收标准
如遇以下情况，实验室拒收并要求重送： 标签错误或未贴标签 血培养瓶破损或渗漏 血液凝固
四、血培养的培养周期
手工法为7天，自动仪器法为5天。
说明：送检血培养申请单明确疑为真菌感染，或者反复血培养阴 性，而有具有明显系统性炎症的临床症状，应适当延长培养时 间。
1. 2. 3. 4. 5.
分级报告制度
（二）、直接药敏试验结果报告 （三）、最终结果书面报告
无菌生长（孵育的时间应报告在内） 阳性结果报告（最终鉴定结果、最终药敏结果）
其他报告或记录
标本被拒收时，需即刻通知临床重新采血，并记录在案 最终结果与紧急口头报告结果不符，需要变更时，需即 刻与临床沟通，做紧急口头报告。同时必须在书面报告 上提供正确的结果，同时注明变更的内容。 其他需临床注意的事项，如：本次采血不够、标本转运 时间过长、标本采集份数不够等信息。
对于自动化血培养仪：尽管有研究表明95%-97%具有临床价 值的细菌会在3-4天内被自动化血培养系统检出，但任建议采 用5天的培养周期。
关于结果报告
原则：紧急处理和报告优先原则 在有条件的医院，通过HIS系统，让临床医生随 时掌握血培养检测的进展情况，包括：
血培养已开单但未收到 血培养已收到 检测中，尚无结果 24小时无生长 48小时无生长 阳性报警，分离培养和药敏进行中，并报告初步图片染色结果 阳性培养报告（细菌鉴定和药敏试验的最终结果）
（1）在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可
戴乳胶手段固定静脉，不可接触穿刺点。 （2）用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行 第二次穿刺，应换针头）直接注入血培养瓶，或严 格按厂商推荐的方法采血。 （3）血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血 液凝固 。
CLSI标准血培养推荐指南
展为心内膜炎 • 常见菌：口腔链球菌、金葡、肠球、牛链等
陈民钧
26
方法和操作步骤
感染性心内膜炎（IE）的血流感染
Native瓣膜心内膜炎 • 真菌心内膜炎
– 很少见 – 抗菌药不正确使用 – 严重的基础病
Native瓣膜心内膜炎 • HACEK 菌群心内膜炎
• 上机后一系列程序：孵育，结果显 示，镜检，分离，鉴定，药敏
• 报告结果方法
陈民钧
2
大纲
• 明确血培养的临床意义 • 标本的收集和运送 • 最佳的培养基和操作程序 • 自动化血培养仪的评估 • 结果解释(污染、仪器故障…..)
陈民钧
3
明确血培养的临床意义
• 血培养查病原菌对诊断以下疾病很重要：
• 3-5套血培养为好 • 若阴性，要怀疑、重新考虑此诊断
陈民钧
31
HPA BSOP 3715建议的诊断
菌血症和真菌血症的诊断依赖于： • 优质血培养仪 • 优质的实验室操作 • 优质的信息传递
陈民钧
32
HPA BSOP 3715建议的诊断
• 优质血培养仪
– 培养基质量好－少量苛氧菌均可长出 – 能中和抗菌药和血中抗菌物质 – 污染机会少 – 报警迅速 • 不同的全自动产品各有其优缺点 • 厌氧瓶最好要培养出细菌、酵母菌 • 成人用需氧瓶和厌氧瓶 • 儿童只用需氧瓶
– 多为医院感染耐药株
PVE 常见病原菌
– MRSCON – MRSA – 革兰阴性菌 – 念珠菌、曲霉菌 – 链球菌、肠球菌 – 棒状杆菌属菌
陈民钧
28
方法和操作步骤 感染性心内膜炎的血流感染特殊要求
【2017年整理】血培养标准操作规
血培养标准操作规(SOP)一、采血指征：患者出现以下一种或同时具备几种临床表现时可作为血培养的重要指征：①发热（≥38 ℃）或低温（≤36 ℃），以间歇驰张型多见，革兰阴性杆菌，如大肠埃希菌引起的感染可见双峰热；②寒战；③白细胞增多（>10.0×109/ L，特别是有“核左移”时）；④粒细胞减少（<1.0 ×109/ L）；⑤血小板减少；⑥皮肤、黏膜出血，常见于溶血性链球菌感染的菌血症，伤寒病人第4~10天可出现玫瑰疹，斑疹伤寒第4~6天可出现暗红色斑丘血疹；⑦昏迷；⑧多器官衰竭；⑨血压降低；⑩呼吸加快（呼吸率>20/分或CO2分压<32mmHg）；以及肝脾肿大；关节疼痛；C反应蛋白、内毒素、降钙素原升高等。
对新生儿可疑菌血症,还应同时做尿液和脑脊液培养。
老年菌血症患者可能不发热或体温不低，如伴有身体不适、肌痛或卒中，可能是感染性心内膜炎的重要指征。
二、标本采集时机：只要怀疑患者有血流感染的可能，在考虑使用抗菌药物之前，都应立即采集血培养标本。
若患者已行抗菌药物治疗，则应选择含有抗菌药物吸附物的培养瓶，并在下一次抗菌药物应用前采血培养。
细菌通常在寒战和发烧前1小时入血，此时为采集血培养标本进行病原菌培养的最佳时机。
三、采血的标准流程1、标本采集部位要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。
必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。
说明：不建议采集动脉血，其诊断价值不高，且增加了抽血污染的机会。
尽量避免从静脉留置导管采血培养，因其常伴有高污染率［10，11，12]。
如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读（参见3.4 导管相关血流感染）。
1.1.3 血培养的次数：要求：对怀疑菌血症、真菌血症的成人患者，推荐同时或短时间间隔（10分钟内）从不同部位（如双臂）采集2～3套血培养标本，做到“双瓶双侧”。
如有必要，可同时或短时间间隔内从下肢静脉采血接种第三套培养瓶。
血透室导管血培养的正确采集方法
血透室导管血培养的正确采集方法
血透室导管血培养的正确采集方法如下：
1. 准备工作：在采集血培养样本之前，确保手部清洁，并穿戴适当的个人防护装备（如手套）。
2. 选择合适的采血时间：最好在患者出现寒战、发热等感染症状时或在使用抗生素之前进行采血。
3. 选择采血部位：对于带有导管的患者，通常选择从导管中抽取血液进行培养。
4. 消毒：使用适当的消毒剂（如碘伏）对导管周围的皮肤进行消毒，并确保消毒范围足够大。
5. 采血：使用无菌技术，将注射器或采血器连接到导管上，并抽取适量的血液。
注意避免触碰导管和采血器具的非无菌部分。
6. 标注和送检：将采集的血液样本标注清晰，包括患者姓名、住院号、采样时间等信息。
尽快将样本送往实验室进行培养和检测。
需要注意的是，血培养的采集过程需要严格遵守无菌操作原则，以避免污染和误导培养结果。
此外，根据医院的规定和操作流程，可能会有一些具体的细节和要求，操作人员应确保在进行血培养采集之前接受过相关的培训和指导。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Bact/ALERT 3D 全自动细菌、分 枝杆菌培养检测系统
Bact/ALERT 3D检测系统
• 工作原理:
系统采用非侵入性检测原理，并采用具有专利技术 的颜色不可逆液乳感应器来检测是否有微生物生长。 利用微生物在培养基中代谢基质时，产生二氧化碳， 进而使瓶底液乳感应器中PH发生改变，颜色就由墨绿 色变黄。仪器培养孔底的光电探测器测量反射光变化 并按相应公式计算，在设定时间内报告培养阳性或阴 性。
Blood Culture Set：一套组合的血培养瓶，其接种的是同一来源的 标本（同一穿刺）
血培养现状
• 阳性率不高，但2次送检阳性率明显提高
RJH 0704
每日送检1套阳性率 3.8%
每日送检2套阳性率 17.6%
采血量
– 对于成年患者，每套血培养瓶推荐的采血量 为20至30ml
– 对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量 的1％
Staphylococcus Species
Streptococcus Species
S. pneumoniae
Enterococcus
E. faecium
S. pneumoniae
Gram-Positive bacilli
Clostridium species C. perfringenes
血培养实验室报告
1级 2级 3级
养 培
革
兰
染
色
鉴
定
血培养
电 话 报
直
鉴
定
＋
药
敏
终报告
告
接
药
敏 （
DA ST )
一级报告---血培养革兰染色
改善血流感染早期治疗的简单而 有效的方法
临床微生物室
临床医生
革兰染色的处理和报告
革兰染色
• 革兰氏染色阳性球菌,成堆 • 革兰氏染色阳性球菌,成链或成对 • 革兰氏染色阳性杆菌,偏小
是否进行厌氧培养
• 血培养在需氧瓶和厌氧瓶中的分配
– 对于常规的血ห้องสมุดไป่ตู้养，建议采取包括需氧和厌 氧的一套血培养瓶
– 当采血量不能满足推荐的采血量时，首先应 进行需氧瓶的培养
要不要做厌氧培养？
菌血症病原菌种类构成 需氧瓶
需氧菌
厌氧瓶
厌氧菌
兼性厌氧菌
病原菌培养更完整
样本采集和运输
• 样本的转运
– 血培养瓶应立即被送往实验室 – 血培养瓶保留在室温不得超过数小时 – 接种后血培养瓶禁止冷藏或冷冻
提高血培养阳性率关键点
4.采血量：至少10ml/套，5ml/瓶，血量多，阳
性率相对较高。最佳组合（需氧＋厌氧 X2 ）。 5.严格无菌操作：消毒剂在皮肤表面停留至少30” 以上，以保证消毒效果，避免污染。 6.血培养瓶放在常温下，采血后及时送检，不得 放冰箱。
血培养三级报告制度
提高血培养的临床应用价值
样本采集和运输
• 血培养的时间
– 细菌通常在寒战和发烧前1小时入血 – 考虑到操作上的原因，血培养应同时采集， 除非有怀疑心内膜炎或其他静脉内感染，如， 导管相关性感染
采血时间
寒战 血培养
体温
细菌浓度
0
30 时间 (分钟)
体温与细菌浓度并不完全同步
60
血培养的次数
• 血培养的数量
– 研究表明，当每套血培养采血20ml时
CLSI 血培养的原则和流程： 基本内容
• • • • 范围 定义 血培养的临床重要性 标本采集和运输
– – – – – – – 时间 数量 采血量 在需氧和厌氧瓶中的分配 皮肤准备和污染预防 采集 拒收标准
• 方法和步骤
– – – – – 检出率的重要影响因素 方法 真菌 分枝杆菌 特殊话题
• • • •
斯 特)
报告
可疑为葡萄球菌属 可疑为链球菌属
可疑为革兰氏染色阳性杆菌(如李
• 革兰氏染色阳性杆菌,偏大 • 革兰氏染色阴性的杆菌
可疑为厌氧的革兰氏阳性杆菌 可疑为革兰氏阴性杆菌(如弧菌)
• 革兰氏染色阴性的球菌 可疑为革兰氏阴性球菌(如鲍曼不动杆 菌, 脑膜炎球菌,厌氧的革兰氏阴性球菌
• 酵母菌 菌) 酵母菌(可疑为隐球菌或白色念珠
Listeria monocytogenes
Corynebacterium spp.
P. aeruginosa
Neisseria meningitidis
Candida species
C. tropicalis
C. glabrata
制定血培养的原则和流程的目的和意 义
• • • • • • • 如何提高阳性率 如何避免污染 血培养一次还是多次 采血量 采样时间 是否需要做厌氧培养 如何及时报告
血培养标准操作规程（SOP）的 制定和培训
Principle and Procedure for Blood Culture （ CLSI Proposed Guideline M47-P，Oct 2006）
结果报告 污染 安全问题 质量保证
– 检查前 – 检查过程中 – 检查后
Bact/ALERT 3D培养基
• 7种多层聚合碳纤维培养瓶可供选择使用，包括标准需氧/ 厌氧瓶，含活化碳粉的需氧/厌氧瓶，儿童瓶及两种结核 分枝杆菌瓶（无菌和有菌标本） 。
• 具同时细菌和真菌的培养检出，培养基成分对真菌有良好 的复活性。 • 3D培养系统为当前国际上唯一可同时进行细菌和结核分 枝杆菌（无菌和有菌标本）培养功能的多功能仪器。
样本采集和运输
• 样本拒收标准
– 标签错误或在血培养瓶上未贴标签 – 破损的或渗漏的血培养瓶 – 血液凝固的血培养瓶
提高血培养阳性率关键点
1. 时机：一旦怀疑血流感染，应该立即采 集血培养（尽可能在患者寒战或发热 时），无须等到发热最高峰。 2.次数：每名患者应至少采集2次血培养， 最好为 3 次，每次间隔不超过 30 分钟且 为不同部位。 3. 采样要求：在抗菌药物使用前或血药浓 度最低时。如果已经使用抗菌药物，使 用能中和抗菌药物的血培养瓶。
• 一套检出率：65% • 二套检出率：80% • 三套检出率：90%
– 目前的指南推荐采集2~3套血培养 – （Single blood culture）单一的血培养结果将很难做出临 床解释。 – 血培养在采取血培养后的2至5天内，不需要重复采取血培养， 因为采取治疗后的2至5天内血液中的感染细菌不会马上消失。