临床标本检验

二、检验方法及结果报告
（一）检验程序 粪便标本的细菌学检验程序见图：
粪便
涂片检查
分离培养
SS和
MAC/EMB
35℃18~24 h 挑可疑菌落 初步鉴定 KIA和MIU
35℃18~24 h
最 终鉴 定
系统生化试验 血清学鉴定 药敏试验
35℃18~24 h
报告 菌种及药敏
（二）检验方法及结果报告
1、显微镜检查 一般不做直接涂片镜检， 只有在检查一些特殊疾病如霍乱、结核、葡萄球 菌或艰难梭菌引起的伪膜性肠炎才作直接涂片检 查。
培养方法 根据检验目的可选择
需氧培养、厌氧培养和二氧化碳培养。 从培养结果中区别污染菌和病原菌： ①观察菌落是否在划线上 每次培养均做无
菌对照； ②结合拟培养细菌的生长特点对照判断 ③注意培养时间，不同细菌生长速度不同 ④涂片染色检查，观察是否与目的菌一致。
四、临床标本细菌学检验基本程序：
标本选择
（二）临床意义
肠道致病菌能引起人类疾病：
①如霍乱弧菌可引起霍乱、志贺菌 可引起细菌性痢疾、伤寒沙门菌可引起伤 寒等；
②多种细菌本身或其代谢产物可引起 食物中毒，如沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、 副溶血弧菌、蜡样芽胞杆菌等，粪便培养 对细菌性食物中毒有确诊意义。
④同时挑取菌落作纯培养， 37℃ 培养18小时 后，经玻片凝集试验复核无误，即可作生化试验、 血清学试验进行全面鉴定，并报告结果。
（2）大肠埃希菌试验：
① 取脓血或糊状粪便于弱选择性培养 培养基（EMB或MAC）， 37℃培养18－24小 时后观察；
② 挑选可疑菌落接种KIA和MIU进行初 步生化鉴定；
3.应在用药物之前，并选择合适的部位采样。
4.送检 标本采集后，应注明患者姓名、年龄、采 样日期、科室或病房，标本名称、临床诊断、检验项 目等。
立即送检。
如不能及时送检，可将标本放于运送培养基 或保存液中保存送检。脑膜炎和淋病标本需放 35~37℃保温送检。
5.安全防护 在采集、运送和检验的过程中 务必注意安全，防止污染、传播和自身感染。
6.及时检验和报告 对国家规定的传染病检 验结果，必须及时报送上级部门。
三、选择合适的培养基和培养方法
临床常见标本细菌分离用培养基见 表：
临床常用细菌分离培养基
EB BA SS MAC/EMB CA SNA NYE SA
血、骨髓 + +
尿
+
粪、肛拭
+
痰、咽拭
+
生殖道标本 + +
同时做需氧
+
+
和厌氧 培养
+
+
做细菌计数、必要时加厌氧培养
+
+
霍乱则用碱性蛋白胨 水增菌和TCBS分离
++
+ 可直接涂片染色
镜检，并同时做 需氧和厌氧 培养
+
+
+
+
部分可直接
涂片镜检
眼耳口鼻 + + 标本
体液（除血 + +
+
+
+
+
部分可直接 涂片镜检
可直接涂片染色镜 检，脓汁可同时做 需氧和厌氧培养
EB：增菌肉汤 CA：巧克力平板 SNA：耐瑟菌选择培养基 SA：沙保培养基 NYE：耶尔森菌培养基
（5）空肠弯曲菌显微镜检查：若见细小、 长而弯的革兰阴性弧菌、S形或螺旋形成海 鸥状的细菌，报告“找到弯曲菌”。
2.分离培养及鉴定
（1）霍乱弧菌培养：
①种于碱性蛋白胨水中，经37℃ 6小时增菌；
②取表面生长物移种于碱性琼脂平板上或TCBS 平板；
③作氧化酶试验，阳性者用霍乱弧菌多价“O”诊 断血清作玻片凝集试验，初步报告为霍乱弧菌；
阿侧
拉 伯
金 盏 花
糖醇
肌三
梨 醇醇
1421
—+— 020
—+ + 021
+—— 400
—+ + 021
+ —— 4 00
2
3
4
3
4
相加所得数字：23434 查出相应细菌为：大肠埃希菌
血清学凝集：
1、沙门菌血清学鉴定：
先做A~F多价O血清的凝集(95%以上的沙门菌都属于A~F群)，
然后以6个O群的因子血清定群（O2凝集为A群；O4 凝集为B群；O7凝集为C1亚群;O8凝集C2亚群；O9凝 集为D群；O3,10凝集为E群；O11凝集为F群。 再用H 因子血清第一相和第二相凝集结果综合决定 其所属的血清型。
（3）结核分枝杆菌显微镜检查：取蚕豆大小粪 块与饱和盐水10－15ml混合，静置1－2小时，取 浮面液体少许作涂片，行萋－尼染色镜检。若找 到红色杆菌，可报告“找到抗酸杆菌”
（4）艰难梭菌显微镜检查：发现革兰阳 性粗大杆菌，无荚膜，有卵圆形芽胞于菌体 一端者，可报告找到“革兰阳性芽胞杆菌， 形似艰难梭菌”。
挑取不发酵乳糖的小而透明的菌落，接种KIA 和MIU 37℃ 孵育后，观察结果。
用生化试验和血清学凝集试验作最后鉴定并报 告。如生化试验符合，诊断血清不发生凝集，则将 待检菌液隔水煮沸1小时以破坏K抗原和Vi抗原， 再作凝集试验。
肠道杆菌系统生化反应：
肠杆菌科生化反应
氧 化 酶
硝 酸
吲
甲
V
盐
基
还哚红P
只有了解标本的来源及病人的临床情况，才 能有目的地选择正确的检验方法，检出病原菌。
二、正确采集和处理标本
1.无菌操作 在采集血液、脑脊液或穿刺液时，应 严格无菌操作，避免杂菌污染。
2.使用适当的容器 血液、脑脊液等应放在无菌容 器内，其他标本尽量用无菌容器盛装。容器灭菌应采 用干热、湿热或紫外线照射等方法。
出液状粪便，种于环丝氨酸－甲氧头孢霉素－果糖 琼脂（CCFA）平板上， 37℃厌氧培养48小时后，选 择可疑菌落移种于庖肉培养基备毒素测定，同时做 其他试验加以鉴定，最后报告。
（5）沙门菌及志贺菌属培养（重点）：
取脓血、粘液粪便种于GN增菌液或亚硒酸盐 增菌液。
或直接划线接种于强选择性培养基（SS、XLD 等）和弱选择性培养（MAC、EMB、CB等）各一 个，经37℃培养18－24小时。
+
A~F多价+ A群+
+
A~F多价+ B群+
+ A~F多价+ C群+ vi+
+
A~F多价+ C群+
+ A~F多价+ D群+ vi+
+ A~F多价+ 肠炎+
微量生化反应系统
Micro-ID系统
硝苯
V
酸
丙 氨
盐酸
还脱
P
原羧
酶
421
硫吲鸟赖丙 尿七O
化 氢
哚
氨 酸
氨 酸
二 酸
素
叶 甘
N P
盐
G
42142142
— + + +/ d +
变形杆菌属 — + d + -/+ d +/- + — + — — — — +
克雷伯菌属 — + d d d d — d d — d — — + —
沙门菌属细菌的初步鉴定
斜面
KIA
底层 产气 H2S
MIU 触酶 氧化酶
硝酸盐 还原
诊断血清凝集
甲型副伤寒 K A + -/+ + -- + — 乙型副伤寒 K A + ++ + -- + — 丙型副伤寒 K A + ++ + -- + — 猪霍乱沙门菌 K A + -/+ + -- + — 伤寒沙门菌 K A -- +/- + -- + — 其他沙门菌 K A + + + -- + —
原
柠 檬 酸 盐
硫 化 氢
尿 酶
丙 二 酸 盐
苯 丙 氨 酸 脱 氨 酶
赖 氨 酸 脱 羧 酶
鸟 氨
精
氨O
动
酸 脱 羧 酶
酸 双
N
水P
解G
力
酶
埃希菌属 — + + + — — — — — — + d — + +/-
志贺菌属 — + d + — — — — — — — d — d —
沙门菌属 — + — + — + + —
采集 （保存、运送）
观察、前处理
直接涂片检查 快速检验
报告
报告
分离培养（需氧、厌
氧、二氧化碳培养）
可疑菌落
增菌（需氧、厌
氧、二氧化碳培养）
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验
报告
第四节 粪便标本的细菌学检查
一、标本采集
（一）自然排便采集法 挑取有脓血、粘液部分的粪便2－3g或液状粪便絮 状物1－2ml，盛于无菌广口瓶/蜡纸盒中或置于保存液/增 菌液中送检。 志贺菌检验常用甘油缓冲盐水送检。 霍乱弧菌用碱性蛋白胨水送检。 （二）直肠拭子采集法
③ 从斜面是挑取菌苔或直接从上述平 板挑取5－10个菌落，分别与致病性大肠埃 希菌诊断血清进行凝集，并与单价血清做分 型鉴定。
（3）金黄色葡萄球菌培养：
①取呕吐物、粪便等种于高盐甘露醇琼脂或高 盐卵黄琼脂平板；