过氧化物酶
过氧化物酶活性的测定实验报告
一、实验目的了解过氧化物酶（POD）在植物生理学中的重要作用，掌握测定POD活性的方法，并分析不同因素对POD活性的影响。
二、实验原理过氧化物酶是一种广泛存在于植物组织中的酶，能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2）。
在实验中，通过测定在一定时间内POD分解H2O2产生氧气的量，来评价POD的活性。
反应方程式如下：2H2O2 → 2H2O + O2本实验采用愈创木酚法测定POD活性。
愈创木酚在POD催化下被氧化，生成对苯醌，进而与氯化铁形成紫色络合物，通过测定紫色络合物的吸光度变化来反映POD的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物叶片（如马铃薯、菠菜等）- 过氧化氢（H2O2）- 愈创木酚- 氯化铁- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸氢钠（NaH2PO4）- pH计- 离心机- 分光光度计- 研钵- 试管- 移液器- 电子天平2. 实验试剂：- 0.1 M磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 0.1 M H2O2溶液- 0.5 M愈创木酚溶液- 0.1 M氯化铁溶液四、实验步骤1. 酶液提取：将植物叶片洗净、剪碎，加入预冷的磷酸盐缓冲液，在研钵中研磨成匀浆。
将匀浆液转移至离心管中，4℃、12,000 rpm离心10分钟，取上清液即为酶液。
2. 测定酶活性：取5支试管，编号为1-5，分别加入以下试剂：- 空白组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL- 实验组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL、酶液0.1 mL将各试管混匀，置于37℃恒温水浴中保温5分钟。
取出试管，立即放入冰浴中终止反应。
使用分光光度计在波长560 nm处测定各试管吸光度。
3. 计算酶活性：以空白组吸光度为基准，计算各实验组吸光度变化值（ΔA）。
根据下列公式计算酶活性：酶活性（U/g·min）= ΔA × 0.05 × 10^3 / 酶液浓度五、结果与分析1. 不同植物叶片POD活性比较：实验结果显示，不同植物叶片的POD活性存在差异。
植物过氧化物酶实验报告
一、实验目的1. 了解过氧化物酶在植物生理过程中的作用。
2. 掌握愈创木酚法测定过氧化物酶活性的原理和方法。
3. 通过实验，提高学生运用实验方法分析植物生理问题的能力。
二、实验原理过氧化物酶（POD）是一种广泛存在于植物体内的酶，催化H2O2分解产生O2和H2O。
愈创木酚法是一种测定POD活性的常用方法，其原理是POD催化H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物，该产物在470 nm处有最大光吸收值。
通过测定该波长下的吸光度变化，可以计算出POD的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：马铃薯块茎2. 仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管3. 试剂：100 mmol/L的磷酸缓冲液（pH 6.0）、愈创木酚溶液、30% H2O2、20 mmol/L KH2PO4四、实验步骤1. 制备酶提取液：取马铃薯块茎约0.5 g，加入5 mL磷酸缓冲液（pH 6.0），研磨均匀，过滤，收集滤液，4℃下保存备用。
2. 测定酶活性：a. 设置酶活性测定体系：取2 mL酶提取液，加入1 mL 30% H2O2和1 mL愈创木酚溶液，混匀，立即放入分光光度计中，于470 nm处测定吸光度。
b. 设置对照体系：取2 mL酶提取液，加入1 mL磷酸缓冲液（pH 6.0）和1 mL愈创木酚溶液，混匀，立即放入分光光度计中，于470 nm处测定吸光度。
3. 计算酶活性：a. 酶活性 = [(A1 - A2) / (t2 - t1)] × 0.01 × (1.977 - 0.874) / 10 × 0.01 × 250.027575b. 其中，A1为酶活性测定体系的吸光度，A2为对照体系的吸光度，t1为酶活性测定体系测定时间，t2为对照体系测定时间。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过实验，得到马铃薯块茎中POD的活性为0.027575 U/g。
2. 结果分析：a. 从实验结果可以看出，马铃薯块茎中含有一定量的POD，且活性较高。
氧化还原酶(过氧化物酶 过氧化物酶)汇总
①正 铁血红 素 过氧化 物 酶 ：含有正铁血红素 Ⅲ （羟高铁血红素）为辅基，存在于高等植物、 动物和微生物中。 ②绿过氧化物酶：绿过氧化物酶的辅基也含有一 个铁原卟啉基团，这类酶存在于动物器官和乳 中（乳过氧化氢酶）。 （ 2 ）黄蛋白过氧化物酶：含有黄素腺嘌呤二核苷酸
作为辅基，这类酶存在于微生物和动物组织中。
第7章 氧化还原酶
主要内容：
一、过氧化物酶
二、多酚氧化酶
一、过氧化物酶（POD peroxidase）
过氧化物酶是由单一肽链与一个铁卟啉辅基结合构 成的血红蛋白。多数植物过氧化物酶与碳水化合物结 合成为糖基化蛋白。糖蛋白有避免蛋白酶降解和稳定 蛋白构象的作用。
过氧化物酶是存在于各种动物、植物和微生物体内 的一类氧化酶。催化由过氧化氢参与的各种还原剂的 氧化反应。
240单位/g组织）。
2 过氧化物酶在食品加工中的应用
（1） 过氧化物酶是果蔬成熟和衰老的指标：如 苹果气调贮藏中，过氧化物酶出现两个峰值，
一个在呼吸转折（成熟），一个在衰老开始。
（2） 过氧化物酶的活力与果蔬产品，特别是非
酸性蔬菜在保藏期间形成的不良风味有关。
（ 3 ）过氧化氢酶属于最耐热的酶类，在果蔬加
4.2. 过氧化物酶冷冻增活效应
果蔬热烫后，有多少残余活力或再生活力
被允许留在被保藏的产品中，残余酶活力在冰
冻保藏后，质量比酶完全失活时要高。
速冻蔬菜能否永久保藏？
4.3. 非脂肪氧合酶用
在热失活中过氧化物酶分子聚集成寡聚体， 分子量增加一倍，这个过程包括酶分子展开和 展开的酶分子进一步堆积，血红素基暴露，增 加了血红素蛋白非酶催化脂肪氧化的能力，导 致不良风味的产生，这一过程非脂肪氧合酶作 用（热烫钝化）。
过氧化物酶
13
3 3
应
用
纺织行业: 在印染加工过程中，传统的去除过氧化氢的工艺有 两种，一为织物经漂白后用大擞热水、冷水反复清洗 (至少应洗3次)再进行染色；二为织物经漂白后用还原 剂还原，再用水清洗一遍后进行染色。而应用过氧化氢 酶可快速去除过氧化氢，只需要冷洗一遍，甚至不用水 洗，并可以与染色工艺同浴。该方法可节约用水及能源、 缩短工艺时间、实现安全染色、减少布面磨损，并有利 于保护环境.
11
3 3
应
用
环保行业: 用CAT取代化学试剂降解工业废水中含有的过氧化 氢可以避免二次污染，同时也可以降解芳环化合物秘脂 族化合物。其中辣根过氧化氢酶(HRP)由予价格便宣且 失活慢，已在很多含酚废水处理中得到了应用。
12
3 3
应
用
造纸行业: 近年来造纸行业相继以过氧化氢漂白代替传统漂白 方法，并通常用二氧化硫和亚硫酸氢钠去除漂白后的过 氧化氢。随着世界各国对环境和安全问题的考虑，促进 了去除过氧化氢方法的深入研究，有研究表明，CAT可 在10 min内将过氧化氢降解，在这个领域具有广阔的使 用前景。2004年美国能源部的爱达荷国家工程和环境 实验室(INEEL)的研究者们从中分离并生产了一种过氧 化氢产品(命名为超稳定过氧化氧酶)，可应用于纺织和 造纸行业的漂白过程，该项工作被R&D杂志评为2004年 100个最显著的技术成果之一。
3
3 1
简
介
2.分类 大多数过氧化物酶是亚铁血红素蛋白，一般以 FeIII和原卟啉IX（高铁血红素IX）作为辅基，可 分为哺乳动物过氧化物酶、植物过氧化物酶、微生 物过氧化物酶。 ----影响酶促反应速度的因素 * 底物浓度 米氏公式 * 温度 * 酶浓度 * 激活剂、抑制剂 * pH
过氧化物酶汇总.
汇 报 人： 小组成员： 汇报时间：年份-月-日
汇报内容
简 介
1 2 3
作用机理 应 用
2
3 1
简
介
peroxidase）
一、过氧化物酶（POD
1.定义： 过氧化物酶是由微生物或植物所产生的一类氧化还原酶， 它们能催化很多反应。 过氧化氢为电子受体催化底物氧化 主要存在于细胞的过氧化物酶体中 由单一肽链与一个铁卟啉辅基结合构成的血红蛋白 多数植物过氧化物酶与碳水化合物结合成为糖基化蛋白 。糖蛋白有避免蛋白酶降解和稳定蛋白构象的作用。
10
3 3
应
用
过氧化物酶广泛应用于工业生产和物质的分析检测。
食品工业: 半个世纪以前CAT就开始应用于食品工业。利用 CAT能分解过氧化氢产生氧气的性质，可在烘烤食品裁 造过程中将CAT和过氧化氢一起用作疏松剂。但CAT更广 泛的应粥是对牛奶等的消毒。在牛奶保存或奶酪制造前 用过氧化氢对牛奶或液体鸡蛋制品进行消毒，然后用 CAT去除残余的过氧化氢。这一过程可以在低温下进行， 从而避免高温处理造成的蛋白质变性和某些营养物质的 破坏。
3
3 1
简
介
2.分类 大多数过氧化物酶是亚铁血红素蛋白，一般以 FeIII和原卟啉IX（高铁血红素IX）作为辅基，可 分为哺乳动物过氧化物酶、植物过氧化物酶、微生 物过氧化物酶。 ----影响酶促反应速度的因素 * 底物浓度 米氏公式 * 温度 * 酶浓度 * 激活剂、抑制剂 * pH
43 1简源自113 3应
用
环保行业: 用CAT取代化学试剂降解工业废水中含有的过氧化 氢可以避免二次污染，同时也可以降解芳环化合物秘脂 族化合物。其中辣根过氧化氢酶(HRP)由予价格便宣且 失活慢，已在很多含酚废水处理中得到了应用。
实验五_过氧化物酶酶活性的测定
实验五_过氧化物酶酶活性的测定一、实验原理1. 过氧化物酶（POD）在植物生长过程中发挥重要作用。
在压力、紫外线辐射、微生物侵入和病原体感染等外界刺激下，植物组织中的过氧化物酶活性会显著增加，以保护植物免遭伤害。
2. 过氧化物酶是一种氧化酶，催化产生氧气的反应（如下）：ROOR′+ 酶———> R′OH + O23. 过氧化物酶活性的测定实验基于上述反应，利用巴尔的显色方法测定过氧化物酶催化下的氧化反应速率。
二、实验步骤1. 将100mL的3% H2O2（v/v）制成浓度为60mmol/L的过氧化氢溶液。
2. 按0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL 5个等份，取出浓度分别为6、12、18、24、30mmol/L的H2O2溶液，放入5个试管中。
4. 将1mL的20mg/mL酶溶液加入中等浓度（12mmol/L）的H2O2溶液中，混合均匀。
缓慢倾斜试管，使溶液彻底混合。
5. 取出一根手指，将其浸泡于硫酸铁铵溶液中。
将试管倾斜，瓶口与硫酸铁铵溶液接触，放入深100°C的水浴中加热2min。
将溶液混合均匀。
6. 将试管移出水浴，冷却到室温后，再加入1mL的硼酸缓冲液，混合均匀。
7. 测定吸收值（深紫色的铁化合物阴离子形成）。
利用光度计在546nm处测量。
8. 按照如上步骤分别测定不同浓度下的H2O2溶液。
三、结果分析1. 计算各试管中产生的氧气量，并绘制曲线（以5mmol/L，10mmol/L，15mmol/L，20mmol/L，25mmol/L的浓度为横坐标）。
2. 计算过氧化物酶活性（OD/min/mg）。
四、实验注意事项1. 检查瓶塞和试管，确保没有损坏。
2. 操作过程中，需严格按照试剂用量来添加试剂。
3. 热水浴器的温度应为100°C。
4. 硫酸铁铵溶液应略微加热一会儿，以充分溶解。
5. 实验过程中避免强光照射。
过氧化物酶体的作用
过氧化物酶体的作用
过氧化物酶体（peroxisomes）是细胞中的一种细胞器，它在细胞代谢中扮演着重要的角色。
它们可以在细胞内合成和分解一系列的物质，并参与细胞对外界环境的适应。
过氧化物酶体能够合成和分解氢氧化物。
它们包含有丰富的过氧化物酶，这种酶能够将细胞内产生的氢氧化物转化为无害的水和氧气。
这个过程对于细胞代谢非常重要，因为氢氧化物是一种高度活性的物质，对细胞内的生物大分子会造成损害。
过氧化物酶体通过降解氢氧化物，保护细胞免受氧化应激的损害。
过氧化物酶体还能够参与脂质代谢。
它们可以合成和分解一系列的脂质分子，包括胆固醇和脂肪酸等。
比如，在肝脏细胞中，过氧化物酶体可以合成胆固醇，并将其转运到细胞质中，用于细胞膜的合成和其他生物过程。
同时，过氧化物酶体也能够分解过剩的脂质，将其转化为能量，供细胞使用。
这个过程对于维持细胞内脂质平衡至关重要。
除了合成和分解物质外，过氧化物酶体还能够参与细胞对外界环境的适应。
比如，在一些特殊的生理条件下，细胞需要产生更多的过氧化物酶体来应对氧化应激。
过氧化物酶体的数量和功能的调节能够帮助细胞应对氧化应激，维持细胞内的稳态。
这个过程对于细胞的生存和发育非常重要。
过氧化物酶体在细胞代谢中扮演着重要的角色。
它们能够合成和分解一系列的物质，并参与细胞对外界环境的适应。
过氧化物酶体的功能调节能够帮助细胞应对氧化应激，维持细胞内的稳态。
正是由于过氧化物酶体的存在和功能，细胞才能够正常运作，维持生命的正常进行。
过氧化物酶的字母缩写
过氧化物酶的字母缩写过氧化物酶（peroxidase）是一类重要的氧化酶，广泛存在于生物体中。
它能够催化过氧化氢和有机过氧化物的分解反应，从而在氧化还原反应中发挥重要的催化作用。
过氧化物酶的字母缩写为POD，下面我们来详细介绍一下它的结构、功能和应用。
一、过氧化物酶的分类和结构目前已经分离鉴定的过氧化物酶有多种类型。
根据不同的分类标准，可以将其分为多种亚型。
常见的分级方法有四级系统和六级系统，六级系统将过氧化物酶分为A、B、C、D、E、F六类。
根据其氧化物底物的多样性，又可将其分为双氧水型（HP）和过氧化氢型（H2O2）两种。
由于过氧化物酶在结构上和功能上的多样性，其命名和系统命名方法均较为复杂。
例如，植物过氧化物酶可分为类A、类B、类C和微粒体过氧化物酶等，动物过氧化物酶可分为髓鞘鞘膜过氧化物酶、肌红蛋白过氧化物酶等。
不过，过氧化物酶的普遍结构特征是四个分子内含一个铁离子的血红素分子。
其中，两个血红素分子构成一个血红素域，这个域是过氧化物酶催化作用的关键部位。
二、过氧化物酶的功能过氧化物酶的功能多样，主要表现在以下几个方面：1.氧化剂：过氧化物酶能够作为氧化还原反应中的氧化剂，在许多化学反应和生物化学过程中都起着重要作用。
2.保护作用：过氧化物酶可以清除细胞内外的有害物质，对于细胞的保护作用非常重要。
3.生物辅助剂：过氧化物酶可以用于提高酶催化反应的效率，从而在生物工程技术中起到生物辅助剂的作用。
4.反应催化：过氧化物酶还能促进一些反应的催化，如脱水酶催化脱水反应等。
三、过氧化物酶的应用由于其多样化、高效和特异性的酶学特性，过氧化物酶已经广泛应用于生命科学和工业生产等多个领域。
以下介绍了其中一些应用：1.食品加工保鲜方面：将过氧化物酶添加到食品中可促进其保鲜，例如包装膜涂覆、果蔬真空浸泡等。
2.环境污染治理方面：过氧化物酶可用于水处理、垃圾处理等方面，通过酶催化作用在环境中清除有害物质。
3.生物传感器方面：过氧化物酶可用于制作生物传感器，实现生物分析和检测等目的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
三、过氧化物酶活性的测定
过氧化物酶通过催化酚类物质与H2O2反应生成醌类来清除植物体内的H2O2.过氧化物酶还与生长素、NADH、NADPH的氧化有关，在植物代谢中起着重要作用。
实验前思考
1、POD和CAT清除H2O2的反应有何不同
2、植物体内有哪些主要的过氧化物酶？
原理
愈创木酚（邻甲基苯酚）可作为过氧化物酶的底物，与H2O2反应生成茶褐色产物。
该物质在470nm处有最大吸收峰，故可以分光光度计测定过氧化物酶的活性。
材料、仪器与试剂
1、材料
马铃薯块茎或其他植物组织材料
2、仪器及用具
紫外分光光度计；离心机；研钵；5ml量筒；25ml容量瓶；微量进样器；秒表。
3、试剂
（1）50mmol·l-1ph值为5.5的磷酸缓冲液。
（2）50mmol·l-1愈创木酚溶液；称取6.207g愈创木酚，用少许酒精溶解，然后定容至1000ml。
（3）2% H2O2；取30% H2O267ml，加水至100ml。
方法与步骤
1、酶液的提取
取5.0g洗净去皮的马铃薯块茎，切碎至于研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，将匀浆全部转入离心管中，以3000g离心10min，上清液转入25ml容量瓶。
沉淀用5ml磷酸缓冲液再提取两次，上清液并入容量瓶，定容至25min，低温下保存备用。
2、过氧化物酶活性测定
酶活性测定的反应体系包括：2.9ml50 mmol·l-1磷酸缓冲溶液，1ml2%HO，1ml50mmol·l-1愈创木酚溶液和0.1ml酶液。
取2支试管分别加入上述各溶液，1支于沸水中5min作为对照，另1支于37℃水浴中保温15min。
反应结束后立即利用分光光度计检测其在470nm 波长下的吸光度，测定3～5min的吸光度变化。
结果与计算
以每分钟内的△A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位。
过氧化物酶活性（u·g-1·min-1）=△A470V÷0.01W t Vt
式中：△A470：反应时间内吸光度的变化；
W为材料鲜重（g）
V为酶提取液总量（ml）；
V t为反应系统中加入的酶液量（ml）；
t为反应时间（min）。
试验后思考题
1、在此实验中△A470反应时间如何掌握？
2、使用愈创木酚溶液时要注意什么？为什么？
母亲的眼神是那么的慈爱，自打儿女呱呱坠地起，那一抹温柔的眼眸，就有如一道无形的细线，系在儿女的身上，儿女走到哪里，母亲的牵挂就延伸到哪里。
冬天怕儿女冻着了，夏天怕儿女热着了；晴天怕儿女晒着了，雨天怕儿女淋着了……
担忧似乎就是母亲的专利，操心好像就是母亲的代名词。
俗话说得好“儿行千里母担忧”,若想让母亲不为儿女担忧，不为儿女操心，那似乎是毫不可能的事。
所以，母亲就习惯性地用她那无言的牵挂，默默地守护着自己的儿女，寸步不离。
无论什么时候，母亲都不会嫌弃自己的儿女，不会置自己的儿女于不顾。
母亲像蜡烛，燃烧自己，只为照亮儿女的人生路；母亲像雨伞，挡住狂风暴雨的吹打，只为给儿女一份温暖；母亲像孺子牛，用自己的血汗，哺育儿女茁壮成长。
母亲是山，总能包容儿女的过错；母亲是水，总能涤尽儿女心灵的污垢；母亲是树，总想为儿女洒下一片阴凉；母亲是路，总是尽力为儿女铺就一条阳光大道。
儿女的生日唯有母亲不会忘记，儿女打个喷嚏唯有母亲会在意，儿女的喜好唯有母亲能铭记在心，儿女的点点滴滴就是母亲的整个世界。
母亲的一辈子好像就是为儿女而生，为儿女而活。
一天天、一月月、一年年、一辈子，母亲不停歇地为儿女操劳，用她那无声的母爱，缔结母子情缘，生生不息。
母亲如和煦的春风，不仅孕育了我们，还用她的爱滋润着我们成长；母亲如坚实的路，默默无闻地为我们构建人生；母亲如奔腾不息的长江，用她的青春铸成绵绵不绝的爱来哺育我们；母亲如沉稳的高山，用她的血与肉来维护我们的幸福。
世界上任何的语言都无法来歌颂母爱的伟大，因为母爱的力量，总是在无形中，“大音希声，大象无形”.母爱，是一首不需歌颂，却静静流淌在每个人内心深处的不老赞歌。