兔子髓过氧化物酶(MPO)说明书
小鼠髓过氧化物酶(MPO)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
仅供科研使用，不得用于临床检验。
小鼠髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书黄石市艾恩斯生物科技有限公司【产品名称】通用名称：小鼠髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）英文名称：Mouse Myeloperoxidase（MPO）ELISA KIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度。
【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。
在预包被抗小鼠髓过氧化物酶（MPO）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入小鼠髓过氧化物酶（MPO）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗小鼠髓过氧化物酶（MPO）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。
加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度正相关。
拟合校准品曲线，可以计算出样本中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度。
【主要组成成分】主要成分校准品检测范围：0.156-10ng/ml。
校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA检测试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大鼠髓过氧化物酶（MPO）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠髓过氧化物酶（MPO）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠髓过氧化物酶（MPO）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品（480 U/L）0.6mL 0.6mL 按说明书进行稀释标准品稀释液6mL 3mL 无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：480、240、120、60、30、15 U/L 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
髓过氧化物酶(MPO)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求百奥泰康
髓过氧化物酶（MPO）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中髓过氧化物酶浓度。
1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1试剂组成:液体双试剂。
1.2.2校准品的组成五个水平的冻干校准品，在磷酸盐缓冲液(50mM)中添加髓过氧化物酶纯品。
定值范围：(50-100)ng/mL；(100-180) ng/mL；（200-500）ng/mL；（550-800）ng/mL；（800-1400）ng/mL。
1.2.3质控品的组成两个水平的冻干质控品，在牛血清(20g/L)中添加髓过氧化物酶纯品。
定值范围：（30-150）ng/mL；（500-1000）ng/mL。
2.1 外观液体双试剂：试剂1：无色至淡黄色澄清液体，试剂2：乳白色液体。
校准品：冻干品，复溶后为无色至淡黄色澄清液体。
质控品：冻干品，复溶后为无色至淡黄色澄清液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白吸光度试剂空白吸光度应在0.3-2.0之间。
2.4 分析灵敏度浓度为120ng/mL时，吸光度变化范围应大于0.01。
2.5 线性测试血清或血浆样本，试剂线性在(0,1000]ng/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.990；在(0,200]ng/mL范围内绝对偏差不超过20ng/mL，在（200,1000]ng/mL范围内的相对偏差不超过±10%。
2.6 批内重复性试剂盒测试项目重复性CV≤10%。
2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤15%。
2.8 准确度：回收试验：回收率应在90%-110%之间。
2.9 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。
2.10 批内瓶间差校准品批内瓶间差瓶间重复性CV≤5%质控品批内瓶间差CV≤5%。
2.11校准品溯源性根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供髓过氧化物酶校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。
髓过氧化物酶抗体(MPO-Ab)定量测定试剂盒及其检测方法[发明专利]
![髓过氧化物酶抗体(MPO-Ab)定量测定试剂盒及其检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1a73356d83d049649a66584e.png)
专利名称：髓过氧化物酶抗体(MPO-Ab)定量测定试剂盒及其检测方法
专利类型：发明专利
发明人：于大为,杨晓勇
申请号：CN201410136534.7
申请日：20140405
公开号：CN104459107A
公开日：
20150325
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于临床免疫学检测技术领域，公开了一种髓过氧化物酶抗体(MPO-Ab)定量测定试剂盒，包括磁分离试剂、酶标记试剂、校准品、清洗浓缩液、底物溶液以及稳定剂。
本发明还公开了上述试剂盒的制备方法。
本发明还公开了上述试剂盒的检测方法。
本发明制备的试剂盒精确度、灵敏度以及稳定性较好，并且成本低廉，操作简单，具备广阔的应用前景。
申请人：北京中航赛维生物科技有限公司
地址：100049 北京市大兴区经济技术开发区经海二路29号院8号楼二层
国籍：CN
代理机构：北京富天文博兴知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：刘寿椿
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髓过氧化物酶MPO的临床应用
髓过氧化物酶指数在57例急性冠状动脉综合征患者的临床应用髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。
分子量为150KDa。
MPO基因位于人第17号染色体，其编码蛋白翻译修饰后形成2条轻链和2条重链，构成四聚体糖基化蛋白。
在早期由北京协和洛克和美国克利夫兰医院共同研究发现出来，它具有早期预警和提前筛查心脑血管疾病一个标记物。
另一方面血液中95%的MPO来源于多形核白细胞。
尽早明确急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的诊断、危险分层及正确地评估个体近期发生ACS的危险性,对尽早干预治疗ACS至关重要。
有研究表明,血浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MP0)是早期诊断ACS的重要指标,与心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)联合应用更能增加ACS诊断的灵敏度[1]。
尤其是当cTnI正常时,血浆MPO升高可预测心脏事件的发生[2]。
但血浆MPO检测方法繁琐,目前无法自动化,临床应用受到限制。
Unionluck全自动血细胞分析仪是一种基于流式细胞分析原理的仪器,现在广泛应用于大中型医院实验室,在计数全血细胞的同时可根据细胞内MPO染色的情况得出中性粒细胞过氧化物酶活性指数(myeloperoxidase index,MPXI),用于评价炎症状况和白血病[3-4]。
现将本院分析MPXI在57例ACS患者的临床应用报道如下。
1资料与方法1.1一股资料选择2011年5~8月本院收治的ACS患者57例。
其中,不稳定型心绞痛(UAP)20例为UAP组,其中,男12例,女8例,年龄(70.00±10.10)岁。
非ST段抬高心肌梗死(NSTEMI)20例为NSTEMI组,其中,男12例,女8例,年龄(67.00±18.10)岁。
ST段抬高型心肌梗死(STEMI)17例为STEMI组,其中,男8例,女9例,年龄(69.90±15.20)岁。
髓过氧化物酶
髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是一种重要的含铁溶酶体，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对MPO研究的深入，人们发现MPO基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发展密切相关，因此越来越受到国内外学者的重视。
髓过氧化物酶MPO研究1.MPO的结构髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。
MPO是I相代谢酶。
每个酶分子有两个铁素基团，顺磁共振波谱表明血红素中的铁是在甲酰基血红素部分。
MPO的合成是粒细胞进入循环之前在骨髓内合成并贮存于嗜天青颗粒内，外界刺激可导致中性粒细胞聚集，释放髓过氧化物酶(MPO)。
在成熟的粒细胞中，MPO是含量最丰富的糖蛋白，约占外周血多形核中性粒细胞(PMNs)内总蛋白质含量的5%，血液中95%的MPO来源于PMNs。
MPO的相对分子质量为150×103，是由2个亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链(α链,相对分子质量约60×103)和一条轻链(β链,相对分子质量约15×103)所构成。
2个亚单位在α链处由1个二硫键相连。
重链具有亚铁卟啉基团，说明MPO是铁依赖性的。
MPO以3种亚形存在于髓系细胞中，分别为MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。
3种亚型主要是重链有差异，轻链的差异较小，导致它们在相对分子质量及疏水性等方面不同，3种亚型在功能上的差异还不明确，有待进一步研究。
2.MPO基因及其多态性人髓过氧化物酶基因位于染色体17q23?q24，含有12个外显子和11个内含子，长约14 638 bp，调控其基因表达的是生长因子。
MPO的mRNA在早幼粒细胞的表达水平最高，其次是原始粒细胞、幼稚和原始单核细胞；当细胞分化到成熟时期，MPO基因表达水平迅速下降。
髓过氧化物酶测定试剂盒(酶法)产品技术要求lepu
髓过氧化物酶测定试剂盒(酶法)适用范围：用于体外定量测定人血清中髓过氧化物酶的活性。
1.1规格试剂1: 1×24mL，试剂2: 1×12mL，试剂3: 1×9mL；试剂1: 2×24mL，试剂2: 2×12mL，试剂3: 2×9mL。
1.2主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：试剂3主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液；试剂3：无色或淡黄色透明溶液。
外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在505nm处测定试剂空白吸光度，应≤1.2；2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.3。
2.4 分析灵敏度测试150 ng/mL的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0055。
2.5 准确度在样品中加入一定体积的纯品，计算回收率，应介于90%-110%之间。
2.6 重复性批内变异系数（CV）应不超过10％。
2.7 线性2.7.1在[50,1300] ng/mL区间内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2 [50,156 )ng/mL L区间内绝对偏差不超过±18.7 ng/mL；[156,1300] ng/mL 区间内相对偏差不超过±12%。
2.8 批间差对同一份样品进行重复测定，相对极差≤12％。
2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
过氧化物酶(Peroxidase POD)试剂盒说明书
货号：MS1502 规格：100管/96样过氧化物酶(Peroxidase，POD)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理：POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体×1瓶，4℃保存；用时加入3mL试剂一充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体3 mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上。
470nm下30s时第1页，共3页的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。
计算ΔA＝A2-A1。
注意事项：1、若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入10µL样本和240µL混合液测定。
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12.5U/L
1 号标准品
150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl， 然后再加待测样品 10µl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结：
兔子髓过氧化物酶(MPO)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 6U/L - 200U/L
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定兔子血清，血浆及相关液体样本中髓过氧化物酶(MPO)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔子髓过氧化物酶(MPO)水平。用纯化的兔子髓
过氧化物酶(MPO) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入髓过氧
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
计算 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
化物酶(MPO)，再与 HRP 标记的髓过氧化物酶(MPO) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体
复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸
的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的髓过氧化物酶(MPO)呈正相关。用酶标
仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中兔子髓过氧化物酶(MPO)
释。
200U/L
5 号标准品
150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
100U/L
4 号标准品
150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
50U/L
3 号标准品
150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
25U/L
2 号标准品
150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液
20ml×1 瓶
7 终止液
6ml×1 瓶
2 酶标试剂
6ml×1 瓶
8 标准品（400U/L） 0.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液
6ml×1 瓶
10 说明书
1份
5 显色剂 A 液
6ml×1 瓶
11 封板膜
大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月
2张
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀