05生物制品的佐剂保护剂灭活剂
04第四章 灭活剂、保护剂和免疫佐剂(兽医生物制品学)
温度越高，灭活越快，灭活作用随温度上升而加速。在低温时，温 度每上升10C，细菌死亡率可成倍增加。每升高10C，金属盐类的灭菌 作用增加2-5倍，石炭酸的杀菌作用增加5-8倍。但是，如果温度超过 40C 或更高，对微生物的抗原性将有不利影响。
(五)pH
在微酸性时灭活速度慢，抗原性保持较好，在碱性时灭活速度快，但 抗原性易受破坏。灭活初期损失较快，以后逐渐减慢，尤其甲醛溶液浓度 高时，在碱性溶液中抗原性损失更大。
附：
用乙烯亚胺衍生物对病毒进行灭活，当灭活结束时，应中止灭活并 除去其残存物，以免继续作用而损害疫苗的免疫原性。采用的方法是： 在乙烯亚胺衍生物灭活的病毒液中加入过量的硫代硫酸钠或亚硫酸钠， 不论是0.05%AEI或0.02%BEI，病毒液中硫代硫酸钠最终浓度均为2%， 以中断灭活剂灭活作用。
此外，-丙内脂（-propiolactone）也是一种良好的病毒灭活剂， 它是一种不稳定的液体，于37C 2h后能自行水解为无毒物质。
注意：这里指的是甲醛的浓度，并非福尔马林的浓度！
(二) 苯酚
酚类是以羟基取代苯环上的氢而形成一类化合物。苯酚(phenolum)， 又称石炭酸(acidum carbolicum)，为具有特殊气味的无色结晶，易潮解， 溶于水及有机溶剂，见光则颜色变深，置于空气中易被氧化，颜色也变深， 所以应避光保存。
三、影响灭活作用的因素
(一) 灭活剂的特异性
某些灭活剂只对一部分微生物有明显的灭活作用，而对另一些微生物 则效力很差。如酚类能抑制和杀灭大部分细菌的繁殖体，5%石炭酸溶液 于数小时内能杀死细菌的芽胞。阳离子表面活性剂抗菌谱广，效力快，对 组织无刺激性，能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细菌 芽胞作用弱。
生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则(国食药监注[2005]493号)
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【发布单位】国家食品药品监督管理局【发布文号】国食药监注[2005]493号【发布日期】2005-10-14【生效日期】2005-10-14【失效日期】【所属类别】政策参考【文件来源】国家食品药品监督管理局生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则(国食药监注[2005]493号)各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：为规范疫苗研发行为，指导疫苗研究单位科学地开展研究工作，根据《药品管理法》、《药品管理法实施条例》及《药品注册管理办法》，我局组织制定了《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》、《生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则》、《联合疫苗临床前和临床研究技术指导原则》、《多肽疫苗生产及质控技术指导原则》、《结合疫苗质量控制和临床研究技术指导原则》和《预防用疫苗临床试验不良反应分级标准指导原则》等6个技术指导原则，现印发给你们，并请转发辖区内各有关单位。
国家食品药品监督管理局二○○五年十月十四日生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则前言本指导原则适用于已经取得生产文号的生物制品生产过程等发生变更的管理技术指导原则，所指生物制品生产过程变更是指生产者对已获国家药品管理当局批准的生产全过程中的任何过程所进行的任何变动。
包括从开始生产至终产品的全过程，及与生产相配套的辅助设施。
其中包括原液制备，半成品配制及成品分装等；变更后需重新申报按新药管理的或重新申请生产文号的不包括在此范围之内。
本指导原则首先以国家颁布的相关法规及技术指导原则为基础，并应符合国家的相关要求，如国家现行GMP规范要求。
一、原则（一）任何生产过程的改动都是以提高产品的安全性和有效性为基本出发点，在提高或至少不改变最初国家批准产品安全性和有效性的基础上进行相关改进。
（二）拟进行生产过程变更的生产企业应向SFDA提出申请，并递交相关方案和资料，提供证明资料，说明该变更不引起产品质量的内在变化，由SFDA组织专家进行审查并确定变更的类型及应递交的相关材料。
生物制品的灭活剂、佐剂及保护剂
第四章兽医生物制品的灭活剂、佐剂及保护剂【知识目标】·熟悉兽医生物制品生产中常用的灭活剂、佐剂及保护剂；·理解灭活剂、佐剂及保护剂在兽医生物制品生产中的作用；·掌握·灭活剂、佐刺、保护剂的概念；·影响灭活剂作用的因素；·影响保护剂效能的因素。
·了解·佐剂的基本要求及类型；·保护剂的组成、效能。
【能力目标】·能进行白油佐剂的乳化。
第一节灭活与灭活剂为了提高兽医生物制品的安全性、防止散毒，许多疫苗通常通过灭活制成无毒力和无感染性的制品，灭活乃是兽医生物制品中的一项基本技术。
一、灭活及灭活剂的概念灭活(inanimation)，是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但尽可能不影响其免疫原性，用以制备灭活疫苗。
广义的灭活尚包含灭能(inactivation)，即使一些活性物质(微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等)丧失活力的过程。
各种灭活疫苗、诊断抗原等的制造过程均属于灭活；血清经56℃加热30min处理，使补体丧失活性、破坏某些抑制因子的过程，以及破伤风毒素经甲醛处理后即失去致病性成为类毒素的过程均为灭能。
用来灭活的药物称为灭活剂，又称化学灭活剂。
化学灭活是制备灭活苗最重要的手段。
二、灭活的类型按其灭活作用的性质可将灭活分为物理灭活和化学灭活两类，尤以化学灭活法效果确实、方法简便而最为常用。
但不同的微生物、活性物物质采取灭活方法、灭活剂也不尽相同，因此，选择合适的灭活剂和灭活方法对研制灭活兽医生物制品十分重要。
(一)物理灭活一般常用热灭活、超声波灭活、紫外线灭活和γ射线灭活等方法杀死微生物或消除其毒性。
热灭活最早由Smith等研制猪霍乱灭活菌苗时提出，后来发现热灭括容易发生菌体蛋白质变性。
过去用加热灭活方法者较多。
该法简单易行，但加热杀死微生物的方法比较粗糙，容易造成菌体蛋白质变性，凶而免疫原性受到明显影响。
05生物制品的佐剂保护剂灭活剂
(二) 白油Span佐剂
用 轻 质 矿 物 油 ( 白 油 ) 作 油 相 ， 用 Span-80( 去 水 山 梨 醇 单 油 酸 酯 ) 或 Span-85(去水山梨醇三油酸酯)及吐温-80(Tween-80)(聚氧乙烯脱水山梨 醇单油酸酯)，作为乳化剂制成的油乳佐剂，是当前兽医生物制品中最常 用最有效的佐剂之一。白油佐剂的配制方法很多，比例互有差别，仅举一 例作为参考，即：
存
化十八烷基三甲铵。
型
胺及其类似物：癸胺、癸胍及其他。
核酸及类似物：DNA、RNA、低核苷酸、多聚核苷
酸、环磷酸腺苷等。
药物：左旋咪唑及蜂胶等
佐剂的作用机理
各种佐剂的作用机理不尽相同，但概括起来有如下方面
1．对抗原的作用
(1) 增加抗原分子的表面积 某些佐剂颗粒表面可以吸附许多抗原，使抗原表面积明显
这些细胞增殖发挥更大作用。有些佐剂，如短小棒状杆菌、百日咳杆菌和 葡聚糖等，主要作用于巨噬细胞，使之激活，大量增殖分化，释放白细胞 介素-1等细胞因子，再去活化T细胞和B细胞。被激活的T细胞进一步分泌 各种细胞因子，进而促进B细胞和巨噬细胞功能。 对T细胞的作用
一些佐剂的主要作用对象是T细胞，通过T细胞的介导，增强各种免 疫功能。胸腺素、分枝杆菌及其有关成分如卡介苗及MDP等、香菇多糖、 异丙肌昔、左旋咪吐、二乙胺基二硫代甲酸钠（DTC）等均为T细胞增强 剂。它们作用于胸腺细胞系统，诱导T细胞前体细胞的产生，T细胞大量增 殖分化，形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。
被分散的物质称为分散相，承受分散的液体称为连续相，这两相间的 界面活性物质称为乳化剂。当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相
时，制成的乳剂为油包水型(W/O)，反之为水包油型(O/W)。 油包水型油乳佐剂粘稠，在机体内不易分散，抗原从乳剂中缓慢释
兽医生物制品名词解释重点
兽大夫物成品：依据免疫学道理,运用微生物.寄生虫及其代谢产品或免疫应答物制备的一类物资.作为诊断.治疗.预防特定传染病或其它疾病的制剂.通俗成品：运用一般临盆办法制备的,未经浓缩.纯化处理所制成的.精成品：将原材料用物理或化学办法去除无效成分,并进行恰当浓缩所制成的.单价制剂：只运用一种微生物的单一血清型多价制剂：运用一种微生物的若干血清型多联苗：一次打针可以预防多种疾病的疫苗.疫苗：由病原微生物.寄生虫及其组分或代谢产品制成,接种动物后能产生主动免疫,从而预防疾病的一类生物制剂.传统疫苗：运用微生物或寄生虫或代谢产品等完全个别制成的疫苗.逝世疫苗又称灭活苗：是将病原体司理化办法灭活后,损掉沾染性保持其免疫原性制成的疫苗.弱毒苗：将微生物的天然强毒株经由过程化学.物理或生物学办法,使其对原宿主动物致病力损掉或只引起亚临床沾染 ,但仍保管优越抗原性 ;以此人工整弱的毒株制备的疫苗.类毒素：是用细菌产生的外毒素经甲醛处理,去除毒性感化,保存抗原性后精制而成.亚单位疫苗：是指提取微生物有用抗原部分,运用一种或几种亚单位结构成分制成的疫苗.基因工程亚单位疫苗：是指它只含有病原体的一种或几种抗原基因,经由过程基因重组技巧转入恰当的细菌.酵母菌或哺乳动物细胞,以获得的表达产品作为免疫原制成的疫苗.基因工程活疫苗：病原微生物经由过程基因工程技巧删除其致病基因或部分片断从而获得毒力损掉或下降的毒株而制成的疫苗.基因缺掉疫苗：运用基因工程技巧,使致病的病原体基因组中某个或某些与致病性相干的基因或非须要糖蛋白缺掉构建而成.重组载体疫苗：将目标病原呵护性抗原的基因序列拔出到另一种微生物的无毒株或弱毒株基因组中,并让拔出的外源性基因正常表达,构建成重组载体疫苗株.核酸疫苗：是将一种或多种抗原编码基因克隆到真核表达质粒载体上,将构建的重组质粒直接注入到体内而激活机体免疫体系.合成肽疫苗：用人工办法按天然蛋白的氨基酸次序合成呵护性短肽,然后与载体蛋白衔接后加佐剂所制成的疫苗.转基因植物可食疫苗：运用分子生物学技巧,将病原微生物的抗原基因导入植物,并在植物中表达出活性蛋白.抗奇特型疫苗：以抗病原体的中和抗体为免疫原,制备针对该中和抗体奇特型表位的抗体.尺度菌株或参考菌株：在研讨或特别问题检定方面须要.必须的参考菌种和毒种,其实不直接用于临盆.杂交减毒：将两种遗传性状不合的毒株,在传代培养中进行杂交,从而育成有运用价值的弱毒株.概况造就：将细菌种子液平均地接种于固体造就基概况,平放静置造就,然后收集菌苔.深层造就：将细菌种子液接种于液体造就基进行造就.透析造就：依据小分子能透过半透膜集中,而将不合分子量的物资分别道理设计的一种细菌造就装配进行细菌造就.原代细胞：由新颖组织经由剪碎.胰酶消化制备的细胞.原代细胞传代 1次后的细胞称为次代细胞细胞株：自继代造就的细胞中选育的具有特别生物学性质和标识表记标帜的细胞.细胞系：能在体外无穷传代,多半起源于癌细胞.静置造就：将细胞悬液接入造就瓶或造就板中,置于恒温箱内静置造就,细胞发展滋生成单层.转瓶造就：将细胞悬液接入转瓶后放在恒温箱的转鼓上,转速多为10~20转/h,使贴壁细胞不老是浸于造就液中,有利于细胞呼吸和物资交换悬浮造就：经由过程振荡或迁移转变装配使细胞始终疏散悬浮于造就液内的造就办法,重要用于一些在振荡或搅拌下能发展滋生的细胞.微载体造就：用渺小的颗粒作为细胞载体,经由过程搅拌悬浮在造就液内,使细胞在载体概况滋生成单层的一种细胞造就技巧.免疫血清：动物在接收抗原刺激或天然沾染康复后,其血清中平日含有针对特定抗原的高效价特异性抗体,该动物的血清即称为免疫血清.外毒素：是微生物在性命运动进程中产生并释放或排泄到四周情况中的毒素.内毒素：只有在微生物逝世亡后细胞决裂时,才干释放出来的毒素.抗毒素：以类毒素作为抗原免疫动物,刺激机体响应的B细胞活化增殖为浆细胞后,产生的特异性抗体.卵黄抗体：是在卵黄中含有针对某种病原微生物的特异性抗体.微生态制剂：是指依据微生态理论,在微生态学理论指点下,用正常微生物群成员,经特别工艺制成的只含有活菌或包含细菌菌体及其代谢产品的重要用于动物的活菌制剂.益生素：一种可经由过程转变肠道菌群均衡而对动物施加有利影响的活微生物饲料添加剂益生元：它是一类非消化性物资,能选择性的促进一种或几种定植于结肠内常住菌的活性或发展滋生,从而促进宿主健康.合生元：益生素和益生元结合运用,既可施展益生菌的活性,又可选择性地进步这些菌的数目,使益生感化更明显持久.乳酸菌：是一种可以分化糖类产生乳酸的革兰氏阳性菌,厌氧或者兼性厌氧发展.芽孢杆菌：用于益生素的芽孢杆菌是肠道的过路菌,不克不及定植于肠道中.养分感化：益生菌（如乳杆菌,双歧杆菌等）可以或许合成多种维生素如叶酸.烟酸.维生素B1.维生素B2等,促进机体对蛋白质.钙.铁和维生素D的消化接收,从而起到促进畜禽发展和进步临盆机能的感化.基因重组技巧：也称重组 DNA或分子克隆,是一种在分子程度上按照人们设计的蓝图对基因进行人工操纵的技巧.灭活剂：指用来灭活生物成品活性的化学物资,又称化学灭活剂.佐剂：是指与抗原物资混杂或先于抗原或同时注入动物体内,能非特异性地加强机体反抗原物资的免疫应答的一类物资.弗氏不完全佐剂：是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂构成的一种贮藏性佐剂.弗氏完全佐剂：在不完全佐剂的基本上加必定量的分支杆菌而成.乳化剂：指油乳剂中内相与外相间的界面活性物资,具有促进和稳固两种互不相溶物形成乳剂.冻干呵护剂：又称稳固剂,是指在冻干进程中及冻干后使生物成品的生物活性免受损坏的一种物资.GMP：优越功课规范,是一种特别重视在临盆进程中实行对产品德量与卫生安然的自立性治理轨制.载体：将一个外源基因送入受体细胞的运输对象.免疫接种：是用人工办法将免疫原或免疫效应物资输入到机体内,使机体经由过程人工主动免疫某人工主动免疫的办法获得防治某种传染病的才能.预防接种：在经常产生某些传染病的地区,或有某些潜在传染病的地区,或受到某些临近地区传染病威逼的地区,为了防患于未然,在日常平凡有筹划地给健康畜禽进行的免疫接种称为预防接种.紧迫接种：是在产生传染病时,为了敏捷息灭疫病的风行,而对疫区和受威逼地区尚未发病的畜禽进行的免疫接种.带虫免疫：沾染引起的免疫反响与机体少量寄生虫的消失相干,例如血吸虫病和旋毛虫病.在原虫,带虫免疫现象被称为传染免疫,人.猴.鸡的很多原虫就引起这种免疫.无虫免疫：体内寄生虫被完全消除,并对再沾染(或进击)消失特异性的毕生免疫,这种免疫在动物种比较多见,在人可见于皮肤利什曼氏病.SPF动物：指动物体内无特定病原体微生物,但许可消失除特定病原微生物外的其他微生物.基因免疫：由外源性基因直接刺激机体所产生的免疫反响.国度尺度品：是指用国标尺度品标定的,用于权衡某一成品效价或毒性的特定物资,其生物活性以国标单位暗示.。
灭活剂和佐剂.
甲醛 醛基
灭活浓度：需氧细菌0.1％～0.2％，厌氧细菌 0.4％～0.5％，病毒0.05％～0.4％。 灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底 灭活目的。 必要时可在灭活后加入焦亚硫酸钠，以
中断其反应。
2. 烷化剂（Alkylating agent）
N-乙酰乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水
氧化酶等酶系统的活性，从而导致微生物死亡。
• 通常：生物制品的常用量为0.3%-0.5%, 另外，芽
孢、真菌和病毒对苯酚的耐受性很强。
4. 结晶紫
• 是甲基紫、龙胆紫的纯品。 • 灭活机制：是结晶紫阳离子与微生物蛋白 质带阴性电荷的羧基形成弱电离的化合物， 从而干扰微生物正常代谢和氧化还原作用， 主要干扰细胞壁肽聚糖的合成，导致革兰
结构位点发生改变，从而丧失生命力、感染性、
毒性或活性。
• 效能常受灭火剂种类、剂量和作用温度、pH、时
间等因素的影响，使用时必须筛选最佳的灭活条
件。
• 方法简单、效果确实、最为常用。
（三）灭活剂
用于灭活微生物的化学试剂或药物 1911 年， Lowenstein DH 用甲醛处理破伤风毒素 而制成类毒素 1924年，Puntoni以苯酚或甲醛处理制成犬瘟灭活 苗 1934年，Morion Dorset等用结晶紫灭活猪瘟病毒 制成猪瘟结晶紫疫苗。
重要作用
什么是 “佐剂”呢？
一、佐剂概念与作用特点
1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫 应答的物质均称为佐剂。
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原
混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变
或增强机体对该抗原的特异性免疫应答 ,发挥其辅
佐作用的物质。 也称免疫佐剂、抗原佐剂。
第三章 灭活剂 保护剂 与免疫佐剂
真菌以及革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌对各类灭活剂的敏
感性并不完全相同；细菌的繁殖体及其芽孢对化学药物的 抵抗力不同；生长期和静止期的细菌对灭活剂的敏感程度 也有一定差别。此外，细菌的浓度也会影响灭活的效果。
灭活剂浓度：以甲醛为例，甲醛浓度越高，灭活脱毒越
快，但抗原损失量亦较大。有时可以将甲醛溶液分数次加 入，加量由小至大，PH值由低到高，温度由室温开始， 逐步提高到允许的最高温度，这样对于保护抗原的免疫原 性有一定好处。
灭活温度：通常情况下，灭活作用随温度上升而加速。
但如果温度超过40℃或更高，对微生物的抗原性将有不利 影响。
灭活时间：灭活时间与灭活剂浓度和作用温度密切相关。
赋形剂：主要起骨架作用，防止低分子物质的碳化和氧
化，保护活性物质不受加热的影响，使冻干制品形成多孔 性、疏松的海绵状结构，从而使溶解度增加，如蔗糖、山 梨醇、乳糖、PVP(聚乙烯吡咯啶酮）葡萄糖等。常为高 分子物质。
抗氧化剂：可抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性
物质在冻干后储存期间的稳定性，如维生素C、维生素E 和硫代硫酸钠等。
2、非渗透剂，如聚乙烯吡咯啶酮和蛋白质等，能防止细 胞等生物活性物质由外向内渗透溶质。
非渗透性保护剂按相对分子质量大小可分为：
高分子物质和低分子物质
按化学性质，可分为：
复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
一、冻干保护剂的组成与作用
营养液：可使因冻干而受损伤的细胞修复，对水分子其
缓解作用，并能使冻干生物制品仍含有一定量的水分；还 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度，如脱脂乳、蛋白胨、氨基酸和糖类等，常为 低分子有机物。
一般随着灭活剂浓度及作用温度升高，灭火时间则缩短。 在生物制品生产中，应以保证制品安全和效力，采用低灭 活剂剂量、低作用温度和短时间处理为最佳。
4 第三章 灭活剂、保护剂与免疫佐剂
（五）-丙酰内酯 （－propiolactone），
又名为羟基丙酸-内酯。 性状为无色有刺激气 味的液体，潮气进入时缓缓分解成羟基丙酸， 其水溶液迅速全部分解。 水中溶解度37％（V/V），水溶液有效期 10℃保存18h，25℃保存3.5h，50℃保存 20min，密封于玻璃瓶中5℃保存较为稳定。能 与丙酮、醚和氯仿任意混合。 对皮肤。粘膜及眼有强刺激性，其液体对 动物有致癌性。是一种良好的病毒灭剂，病毒 灭活后，能保持良好的免疫原性，主要用于狂 犬病灭活疫苗的制备。
灭活疫苗/甲醛浓度/时间/温度
禽霍乱氢氧化铝灭活疫苗 0.1%甲醛 37℃ 7~12h 禽霍乱油乳剂灭活疫苗 0.1%甲醛 37℃ 12h 山羊传染性胸膜肺炎氢氧化铝0.1%甲醛16~18℃ 48h 兔出热组织灭活疫苗 0.4%甲醛 37℃ 12~24h 牛、羊伪狂大病灭活疫苗0.15%甲醛4~10℃ 7d 破伤风明矾沉降类毒素 0.4%甲醛 38℃21~31d 口蹄疫灭活疫苗 0.05%AEI或0.02%BEI 20~37℃ 7~20h
甲醛溶液是甲醛气体的水溶液，又称福尔马林。 常用的甲醛溶液约含37％甲醛气体（重量计），为无 色透明液体，有辛辣窒息味，对眼、鼻粘膜有强烈刺 激性，较冷温度下久贮易变混浊，形成三聚甲醛沉淀， 虽加热可变清，但会降低其灭活性能，故一般商品甲 醛溶液加10％～15％甲醇，以防止其聚合。
甲醛的灭活作用机理
（四）灭活温度
通常情况下，灭活作用随灭活温度上升而加速。 在低温时，温度每上升10℃，细菌死亡率可成倍 增加。每升高10℃，金属盐类的灭菌作用增加 2~5倍，石炭酸的杀菌作用增加5~8倍。 但是，如果温度超过40℃ 或更高，对微生物 的抗原性将有不利影响。
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B细胞的作用 某些佐剂可以直接作用于B细胞，如细菌脂多糖，以B细胞为主要靶细
胞，使之多克隆增殖，并诱导B细胞对T细胞的敏感性，从而增强对TD抗 原的免疫应答，提高抗体水平。
非特异性免疫增强作用 佐剂效应，除加强抗原引起免疫应答能力以外，还能对各种感染和
肿瘤具有非特异性免疫增强作用，主要是加强NK细胞和K细胞的活性。 这种非特异性的免疫作用，至少有一部分是通过诱导干扰素生成而造成 的。香菇多糖、葡聚糖、云芝多糖、果聚糖等多糖在体内都能诱生干扰 素。
广义的讲，凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物质均 可称为佐剂。
对佐剂的基本要求
因为几乎所有畜禽及其产品都是直接或间 接人类食品，所以佐剂作为一些生物制品的 成分，必须考虑其安全性和副作用，既要考 虑对动物的安全性，也必须考虑对人的安全 性。
世界卫生组织及一些专家认为：生物制品的佐剂， 在考虑其免疫增强效应的同时，必须具有以下条件
存
化十八烷基三甲铵。
型
胺及其类似物：癸胺、癸胍及其他。
核酸及类似物：DNA、RNA、低核苷酸、多聚核苷
酸、环磷酸腺苷等。
药物：左旋咪唑及蜂胶等
佐剂的作用机理
各种佐剂的作用机理不尽相同，但概括起来有如下方面
1．对抗原的作用
(1) 增加抗原分子的表面积 某些佐剂颗粒表面可以吸附许多抗原，使抗原表面积明显
增加，特别是可溶性抗原或半抗原，经胶体颗粒吸附后，抗 原性增强，抗体滴度明显提高。
(2) 延长抗原在体内的存留时间 抗原与某些佐剂混合后形成凝胶状，延长抗原在体内的
贮存时间，使其徐徐释放，因而提高抗原物质的免疫原性。
2．对机体的作用
对单核巨噬细胞的作用 佐剂能引起细胞浸润，出现巨噬细胞、淋巴细胞及浆细胞聚集，促进
必须具有以下条件
无致癌性，也不应是辅助致癌物质，不能促进肿瘤的 形成；
无毒性，肌肉或皮下注射均安全； 化学纯； 吸附力强； 易于吸收； 不含有与人体或动物体有交叉反应的抗原物质； 佐剂不应引起对其本身的超敏感性，也不应与血清抗
体结合而形成有害的免疫复合物； 佐剂疫苗经1-2年保存应当稳定不变质，效力无明显
改变，不引起任何不良反应。
佐剂的分类
目前尚无一致的公认合理的分类方法，从不同角度可作如下分类：
根据佐剂的性质分类
(1) 微生物及其组分微生物 微生物如有结核杆菌、卡介苗、短小棒状杆菌、沙门氏菌、乳杆菌、
双岐杆菌、葡萄球菌、链球菌、副粘病毒及细小病毒等。
微生物组分：如有分枝杆菌细胞壁的胞壁酰二肽、乳酸菌及粪链
球菌的细胞壁肽聚精、短小榨状杆菌的细胞壁骨架成分、耻垢分枝杆菌 等提取的水溶性佐剂、分枝杆菌提取的高分子多肽糖酯(即腊质I)、革兰 氏阴性菌的脂多糖、肺炎杆菌的糖蛋白、酵母菌提取的酵母多糖及香菇 的香菇多糖等。
(2) 非微生物物质
A. 高分子物质 例如DNA、RNA、聚丙烯酸、聚乙烯吡啶烷酮。 B. 低分子物质 例如硫酸铝、氢氧化铝、磷酸钙、钾明矾等。 C. 油类 包括矿物油(如白油)、植物油(如花生油)等。 D. 药物类 例如吡喃、丙胺肌苷、左旋嘧啶等。 E. 中草药类 如冬虫夏草、天麻、黄芪、苦参等也有佐剂作用。 F. 表面活性剂 能降低液体表面张力的物质，包括：
这些细胞增殖发挥更大作用。有些佐剂，如短小棒状杆菌、百日咳杆菌和 葡聚糖等，主要作用于巨噬细胞，使之激活，大量增殖分化，释放白细胞 介素-1等细胞因子，再去活化T细胞和B细胞。被激活的T细胞进一步分泌 各种细胞因子，进而促进B细胞和巨噬细胞功能。 对T细胞的作用
一些佐剂的主要作用对象是T细胞，通过T细胞的介导，增强各种免 疫功能。胸腺素、分枝杆菌及其有关成分如卡介苗及MDP等、香菇多糖、 异丙肌昔、左旋咪吐、二乙胺基二硫代甲酸钠（DTC）等均为T细胞增强 剂。它们作用于胸腺细胞系统，诱导T细胞前体细胞的产生，T细胞大量增 殖分化，形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。
类型
佐
剂
贮
不溶性胶体佐剂：Al(OH)3、AlPO4、Kal(SO4)2•12H2O、Ca(PO4)2、炭
末等Biblioteka 存 型油乳佐剂：弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、Span白油佐剂等。
生物佐剂
结核菌、卡介苗、乳酸杆菌、短小棒状杆菌、葡 萄球菌、链球菌、细菌脂多糖、酵母多糖等
非 非生物佐剂
贮
表面活性剂：Tween80、溶血卵磷脂类似物、溴
免疫佐剂、保护 剂和灭活剂
————三类重要的生物制品原料
免疫佐剂
佐剂的概念 基本要求
一、佐剂概述 佐剂的分类
作用机理
二、不溶性盐类胶体佐剂
三、油乳佐剂
佐 剂概述
佐剂的概念
单独使用时一般没有免疫原性，与抗原物质合并使用时， 能增强抗原物质的免度原性，增强机体的免疫应答，或者改 变机体免疫应答类型的物质，称为佐剂（adjuvant），也 称免疫佐剂（immune adjuvant）或抗原佐剂（antigen adjuvant）。
不溶性盐类胶体佐剂
动物疫苗中的灭活苗和类毒素，需用佐剂来加强它的免 疫效应，铝佐剂是最常用的佐剂之一。它们性质稳定，便于 贮存，接种后只在局部产生小的肉芽肿，对肉的品质没有严 重影响。
这些佐剂的作用机理是：将佐剂与抗原混合，形成凝胶状态，注入动 物体内后形成“抗原贮存库”，这些不溶性颗粒能吸附、分散抗原物质， 增加抗原表面积，在组织中形成一个富含巨噬细胞的肉芽肿，延缓吸收。 此外，铝化合物能激活补体，引起过敏毒素的产生，在注射部位形成慢 性炎症，并可在记忆性B细胞产生过程中起促进作用，促进体液免疫。
①阴离子表面活性剂，如硬酯酸铝、单硬酯酸甘油酯等； ②阳离于表面活性剂，如十二烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基
溴化铵、十八烷基酪氨酸盐酸盐等； ③非离子性表面沽性剂，如Span-80、Span-85、Tween-80等。
根据佐剂在体内存留时间分类
(1) 贮存型佐剂（depot type adjuvant）
佐剂与抗原混合成悬浊状态，使其尽可能存留于注射局部较长时间， 以使抗原缓慢地释放，持续刺激机体免疫系统，使之产生较强免疫应答。
(2) 非贮存型佐剂（non-depot type adjuvant）
多属细胞毒性物质，又称为细胞毒型佐剂(cytotoxic type adjuvant)。 这类佐剂不同抗原混合，两者在相互隔开的部位分别注射也可出现效果。 非贮存型佐剂又可分为生物佐剂和非生物佐剂两类 。