免疫 佐剂详细介绍--修改版
免疫佐剂及其应用

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铝盐佐剂
传统认为,铝盐佐剂是典型的短期贮存库,它将抗原包裹于注射部 位并缓慢释放,以提供对免疫系统的持续刺激,从而提高抗体滴度。 然而,近期研究表明抗原贮存库效应似乎并不是影响铝盐佐剂作用 的重要因素,多数抗原在肌内注射给药后数小时内即从注射部位扩 散,而铝佐剂的加入并不能增加所吸收抗原的半衰期 。铝佐剂确实 可以在注射部位介导纤维蛋白依赖性淋巴结的产生,但是这些淋巴 结在佐剂作用中并不重要。现在的研究其更倾向于铝佐剂在注射部 位创造一个免疫活性环境来促进增强抗原特异性免疫应答, 并且这 种作用是局部的、特异的、短暂的。
物理性质
• 颗粒型佐剂,如铝盐类佐剂 • 非颗粒型佐剂,如CLPS • 非微生物物质,如中药免疫佐剂佐剂
体内停留的时 间
• 贮存型佐剂,颗粒型佐剂大多属于此类 • 非贮存型佐剂,非颗粒型佐剂大多属于此类
★ 佐剂的种类丰富, 分类的方式也很多,许多佐剂有重叠和多样的生物学活性,还有一些佐 剂由多种成分配制而成,不能简单地将其归类,所以佐剂的分类并没有明显的界限和标准。
随着乳化技术的进步,油佐剂中所应用的油成分逐渐降低(≤ 5%),或 者选择可代谢油取代矿物油来制备更为安全、稳定、有效的免疫佐剂。
MF59 由角鲨烯、Tween-80 和Span-85 等组成,既可以刺激产生体 液免疫也可以产生细胞免疫,已广泛用于各种亚单位疫苗佐剂,为继铝佐剂 之后唯一被批准的人用佐剂。它对各种动物和各年龄段的人均可以产生高于 铝佐剂水平的抗体,用量少、毒性极低。
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铝盐佐剂
广泛应用于兽用疫苗,特别是菌苗以及其他以抗体为保护性免 疫的疾病疫苗,已批准的含铝佐剂疫苗包括DTP、无细胞百日 咳疫苗DTP(DTaP)、b型流感杆菌(HIB)疫苗(不是所有的)、 乙型肝炎(HB)疫苗,以及所有的DTaP、HIB或HB的联合疫苗。 还包括甲型肝炎疫苗、莱姆病疫苗、炭疽疫苗和狂犬病疫苗。
名词解释 免疫佐剂

名词解释免疫佐剂
免疫佐剂是一种物质,加入到疫苗中以增强免疫反应的强度和持续时间。
免疫佐剂能够激活免疫系统,以增加对疫苗中的抗原的反应,并促进免疫细胞的活化和增殖。
免疫佐剂的使用可以提高疫苗的效果,使其更有效地刺激免疫系统,从而产生更强大和持久的免疫应答。
在疫苗接种过程中,免疫佐剂通常与抗原一起注射到身体中,以增加免疫系统对抗原的敏感性和反应性。
免疫佐剂能够通过几种机制来提高疫苗的免疫原性。
首先,它们可以改变疫苗在体内的分布和转运,使得疫苗更容易被免疫系统接触到。
其次,免疫佐剂可以激活免疫细胞,增加它们对疫苗中抗原的摄取和处理能力。
此外,免疫佐剂还能够增加疫苗中抗原的稳定性和降解速度,从而延长免疫反应的持续时间。
一些常见的免疫佐剂包括铝盐、油乳剂、微粒和天然或合成的佐剂。
铝盐是最常用的免疫佐剂之一,它可以与抗原形成一种复合物,增加抗原的生物稳定性和持久性。
油乳剂则是由水和油组成的混合物,能够增强疫苗抗原的生物活性和持续释放。
微粒佐剂是一种由聚合物或脂质制成的微粒,能够增加抗原在免疫系统中的吸附和摄取能力。
天然或合成佐剂则是从自然界或化学合成中提取的物质,具有增强免疫反应的能力。
免疫佐剂的使用不仅可以增强常规疫苗的效果,还可以应用于新型疫苗的研发和改进。
免疫佐剂的使用可以加强疫苗的免疫
原性,从而降低用量或接种次数,减少疫苗副作用和成本。
因此,免疫佐剂在免疫学研究和疫苗开发中具有重要的意义。
疫苗免疫佐剂PPT课件

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Vaccine adjuvant
一、佐剂(Adjuvant):
能非特异性地增强机体对抗原的特异 性免疫应答,发挥
辅佐作用的物质。
佐剂作用:
使抗原缓慢释放
延长抗原在体内停留时间
扩大抗原的表面积
促进局部的炎症反应
增强吞噬细胞的吞噬与抗原提呈
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vaccine adjuvant
二、佐剂的类型:
油水乳剂:矿物油、乳化剂 微生物及代谢产物:脂多糖、分支杆菌、霍乱毒素等 细胞因子:白介素、干扰素等 脂质体:胆固醇类 蜂胶:蜂蜜 人工合成:胞壁酰二肽
疫苗免疫佐剂
Vaccine adjuvant
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Vaccine adjuvant
自从1925 年法国免疫学家Ranmon 发现在疫苗中加入某些 与之无关的物质可以特异性地增强机体的免疫反应以来, 至今免疫佐剂的发展已近80年。 特点: 佐剂本身可以有抗原性; 也可以不具备抗原性。
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Vaccine adjuvant
1984, 72 (4): 955-962.
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Yamamoto 等发现,具有这一功能的DNA 多以CpG为核心,属短非表 达特异重复序列。通过不同基因的克隆和人工合成单链寡核苷酸等方 法证明具有免疫激活作用的寡核苷酸特异序列是:AGCGCT、
AACGTT 等。 这些序列均有CpG 基序,其中的CpG特征结构以未甲基化的CpG
免疫佐剂的概念

免疫佐剂的概念
免疫佐剂(Immunoadjuvant)是指能够增强免疫反应的物质或药物。
它们被添加到疫苗或其他免疫制剂中,以提高其免疫原性和效力。
免疫佐剂的主要作用包括以下几个方面:
1. 增强免疫应答:免疫佐剂可以刺激免疫系统,增强对疫苗或抗原的免疫应答,从而提高疫苗的保护效果。
2. 诱导细胞免疫:一些免疫佐剂可以诱导更强的细胞免疫应答,包括 T 细胞的活化和增殖,从而增强对病原体的清除能力。
3. 延长免疫记忆:免疫佐剂可以促进免疫记忆细胞的形成和维持,从而提供长期的免疫保护。
4. 提高疫苗的稳定性和效力:免疫佐剂可以改善疫苗的稳定性和抗原递呈,使其更有效地诱导免疫应答。
免疫佐剂的种类很多,包括无机化合物(如铝盐)、微生物成分(如卡介苗)、脂质体、细胞因子、 toll 样受体激动剂等。
不同类型的免疫佐剂具有不同的作用机制和特点。
需要注意的是,免疫佐剂的使用需要谨慎,因为它们可能引起不良反应,如局部炎症、过敏反应等。
因此,在疫苗的研发和应用中,需要对免疫佐剂进行安全性评估和优化选择。
总之,免疫佐剂是一种重要的免疫调节物质,它们在疫苗和其他免疫治疗中发挥着关键作用,有助于提高免疫效果和保护机体免受病原体的侵害。
免疫佐剂及其研究进展

免疫佐剂及其研究进展11720695 杨骁免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用,能够增强机体针对抗原的免疫应答能力,或改变免疫反应类型的制剂。
免疫佐剂是一种免疫调节剂,可增强抗原的免疫原性、提高免疫效果。
自1926年,Glenny等发现明矾沉淀白喉毒素能产生一种微粒,极大地增强机体对抗原的特异性免疫应答,从而拉开了佐剂使用的序幕[1]。
近年来随着研究的不断深入,越来越多的物质被发现有佐剂功能。
佐剂作用机制是通过改变抗原的物理性状,延缓抗原的降解和排除,从而延长抗原在体内的滞留时间,避免频繁注射从而更有效地刺激免疫系统;刺激单核-吞噬细胞系统,增强其处理和提呈抗原的能力;刺激淋巴细胞的增生和分化,可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度;改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应[2]。
一种良好的佐剂必须具备增加抗原的表面积,并改变抗原的活性基团构型,从而增强抗原的免疫原性;佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间,减低抗原的分解速度,使抗原缓慢释放至淋巴系统中,持续刺激机体产生高滴度的抗体;佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生,从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能;良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。
1 常用佐剂1.1 铝盐佐剂铝盐佐剂是一类含Al离子的无机盐佐剂,主要有氢氧化铝胶和明矾。
氢氧化铝胶,又称为铝胶,由于其生产成本低廉,使用方便,毒性极低。
铝盐佐剂是第一个被批准可用于人的佐剂。
它的作用有:在组织中形成抗原贮藏库;产生颗粒性抗原来促进抗原提呈给免疫细胞;使抗原滞留缓慢释放,从而吸引活性淋巴细胞,激活补体系统。
但其仍存在许多缺点,如轻度局部反应,形成肉芽肿,甚至发生局部无菌性脓肿。
抗原免疫原性弱时,不足以提高其免疫原性,特别是保护性免疫机制要求T细胞活性介导的免疫参加时应使用其他佐剂[3]。
1.2 氟氏佐剂弗氏佐剂( FA) 分为弗氏完全佐剂(FCA) 和弗氏不完全佐剂( FIA) 两种,弗氏不完全佐剂是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂组成的一种贮藏性佐剂。
微生物佐剂

免疫佐剂也称佐剂或抗原佐剂,是一类单独使用时一般无免疫原性,但与抗原物质合并使用时能增强抗原物质免疫原性,增强机体免疫应答,或改变机体免疫应答类型的物质。
1925 年,法国兽医免疫学家Ranmon 发现疫苗中某些物质的佐剂作用,1926 年Glenny 证明明矾具有佐剂作用,1951 年Freund 研制成弗氏佐剂。
目前我国对蜂胶佐剂、油乳佐剂、核酸佐剂、细胞因子佐剂等新型佐剂的研究也有迅速发展。
常用的免疫佐剂的种类有传统佐剂【铝盐佐剂、油性乳剂、微生物佐剂、天然来源及中草药佐剂、蜂胶、免疫刺激复合物(ISCOMs)、多糖、糖苷及复方中药】、DNA 疫苗佐剂【细胞因子、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、共刺激分子、CpG DNA、脂质体】。
1 免疫佐剂的作用机理1.1 提高抗原物质免疫活性某些佐剂颗粒表面可吸附抗原,使其表面积明显增加,特别是可溶性抗原或半抗原,经吸附后可产生较高抗体滴度。
1.2 延长抗原在体内存留时间,如矿物胶体、乳剂类佐剂等可在注射部位形成抗原储池,以延缓抗原释放速率,延长免疫反应,增加免疫记忆细胞数量。
Nicoll等的试验中,以PBP为佐剂制备的疫苗接种后形成的局部抗原储池在疫苗接种部位至少可存在1 年以上。
1.3 对单核巨噬细胞的作用,如短小棒状杆菌、葡聚糖等免疫佐剂可激活免疫细胞,尤其是巨噬细胞等抗原提呈细胞(APC),刺激其产生白细胞介素1、4 (IL-1、IL-4)、干扰素(IFN)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等细胞因子,提高免疫细胞局部浓度,促进APC 表面组织相容性复合体Ⅱ类基因(MHC-Ⅱ)表达,提高APC 抗原递呈功能。
1.4 对T 细胞的作用不同佐剂因病原体相关分子模式(PAMP)不同,提供的激活信号不同,诱导APC 向不同方向分化,如革兰阴性菌的脂多糖(LPS)促进树状突细胞(DC)向DC1 亚类分化,线虫中含磷酸胆碱的糖蛋白诱导DC 向DC2 亚类分化。
疫苗佐剂综述

疫苗佐剂综述疫苗佐剂是一类特殊的药物,它能增强或调节疫苗引起的免疫反应,从而使疫苗的使用剂量和免疫保护时限降低。
几乎所有的疫苗都需要添加佐剂来提高其免疫效果,只有黄热疫苗、麻疹、腮腺炎、风疹疫苗等少数疫苗不需要添加佐剂。
早在20世纪初,科学家们就开始研究使用铝盐作为第一个疫苗佐剂。
1940年代,由于在第二次世界大战中大规模接种镰状短杆菌疫苗,起到了防止士兵因细菌感染身亡的作用,使得疫苗佐剂的研究得以快速发展。
疫苗佐剂的选择很重要,它不仅需要能有效地提高疫苗的免疫效率,还需要在安全性、稳定性和生产成本等方面具有可行性。
目前,广泛应用的疫苗佐剂主要有铝盐、油乳和佐剂复合体等。
铝盐佐剂包括铝水合氢氧化物和铝磷酸盐,是现在最常用的疫苗佐剂。
它的优点是适用范围广,制备方便,成本低,免疫效果稳定。
缺点是对一些疫苗的增强效果不明显,而且对蛋白质疫苗和复合型疫苗的增强效果有限。
油乳佐剂包括MF59、AS03等,并且通过对油乳成分和配比的改变,可以调节佐剂的释放速度和免疫效果。
MF59和AS03佐剂含有二十碳五烯酸和α-生育酚,能够有效地刺激免疫系统的炎症反应,从而增强抗体的产生。
另外,复合体佐剂主要包括MPLA-铝盐复合体和CpG-铝盐复合体等。
这类佐剂通过复合体方式,利用微生物成分(如脂多糖和DNA)与人体自身成分的相互作用,增强疫苗的免疫效果。
最近,随着纳米材料的研发,纳米佐剂也开始被用于疫苗中。
纳米佐剂具有尺寸小、分散性好、生物相容性强等优点,可以提高疫苗的免疫效果和减轻疫苗的副作用。
因此,佐剂的引入,使疫苗免疫防护效果大大提高,人群免疫效果显著。
未来通过深入研究疫苗佐剂的作用机制,为设计和制备新型佐剂,提高疫苗免疫效果,提供更大的帮助。
总的来说,疫苗佐剂是非常重要的一个环节,在与疫苗原液配伍的过程中,它起到增强疫苗免疫反应,提升免疫效果的关键作用。
未来,随着测序技术和基因工程技术的不断发展,定制型疫苗将会成为主流,疫苗佐剂的研发也会变得更加复杂和多样化。
第五章 佐剂

第五章
(二)对机体的作用
1.对单核巨噬细胞中:引起细胞浸润,促进细胞增 殖。 2.对T淋巴细胞的作用:促进T淋巴细胞增殖分化, 形成效应淋巴细胞,产生淋巴因子。 3.对B淋巴细胞的作用: 4.非特异性免疫增强作用:加强NK细胞和K细胞的 非特异性免疫性。
第五章
四 分类
颗粒型佐剂
(一)物理性质
非颗粒型佐剂
第五章 佐剂
内 容 简 介
第一节 概述 第二节 常规免疫佐剂 第三节 新型免疫佐剂
第一节 概述
一 概念
第五章
1 佐剂 (adjuvant) :词来源于拉丁语,原为辅助之意。 在免疫学和生物制品学上又称为免疫佐剂 (immunologic adjuvant)。凡是可以增强抗原特异性 免疫应答的物质均称之为佐剂,也称免疫佐剂。 2特点 ( 1 )能明显增强多糖或多肽等抗原性微弱的物质诱 导机体产生特异性免疫应答。 ( 2 )用最少量的抗原和最少的接种次数刺激机体可 产生足够的免疫应答和高滴度的抗体。
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免疫佐剂:基本描述:--见到客户时可以背诵下来从而吸引感兴趣的客户与常规使用的弗氏佐剂相比,QuickAntibody免疫佐剂具有极大的优势:(1)无需乳化;(2)免疫周期短,与常规免疫相比可以节省3-5周免疫时间;(3)抗原用量少,仅为弗式佐剂的1/10;(4)不破坏抗原天然构象,易获得针对天然构象的抗体;(5)不含任何蛋白成分,佐剂本身不刺激机体产生抗体;(6)肌肉免疫;(6)无毒。
展开描述--针对客户就上述几个问题的提问,基本可以从以下几方面回答为什么无需乳化?QuickAntibody系列佐剂为水溶性佐剂,抗原与佐剂仅需用移液器吹打几下,即可混匀;弗式佐剂为油性佐剂,需要繁琐的乳化,形成油包水的稳定结构。
因此与弗式佐剂繁琐的乳化相比,QuickAntibody佐剂可节省大量时间与精力。
现在的学生事情比较多,不喜欢乳化,因此这条可以吸引他们的注意,工业客户因为免疫动物多,乳化(即使使用乳化仪)需要大量的时间,因此对这点也会有极大的兴趣。
免疫周期短?QuickAntibody佐剂有二周快速小鼠多抗制备佐剂、三周快速小鼠单多抗制备佐剂以及五周标准小鼠单多抗制备佐剂三种。
若多抗即可满足客户需求,可以建议客户制备小鼠多抗,使用我们的佐剂最快仅需2周即可制备高滴度的小鼠多抗,最慢也只需5周即可制备成功,比常规弗式佐剂8周的制备时间相比,可节省3-6周的时间,从而大大提升了客户实验效率;若客户制备单抗,可以使用我们三周佐剂或五周佐剂,与常规使用弗式佐剂免疫时间8周相比,可以节省3-5周时间,也大大提升了客户实验效率。
尤其对于实验进度要求比较着急的客户,在这一点上会产生浓烈的兴趣!另外,很多客户的动物为外包饲养,饲养成本较高,也会感兴趣!抗原用量少?QuickAntibody免疫佐剂通过减少免疫针次(常规弗式佐剂免疫需要至少4针,QuickAntibody佐剂仅需免疫2针)以及每针次抗原用量,降低抗原使用量。
每针次抗原用量真核细胞表达仅需1-10ug每针,原核细胞表达仅需10-20ug,病毒源颗粒仅需1-5ug每针。
若客户抗原为直接购买抗原、真核表达抗原(真核表达量低)、抗原表达量极低、或抗原为天然组织纯化(如从植物组织或动物组织中纯化的天然抗原),因抗原贵重或产量较低,此处会极大吸引客户。
不破坏抗原天然构象?弗式佐剂为油性佐剂,在与抗原乳化时,需要形成油包水的稳定结构,而蛋白一般亲水基团暴露在外侧,疏水基团在内侧未暴漏,形成油包水的稳定结构,必然伴随着疏水基团的外翻,从而导致抗原天然构象的改变。
QuickAntibody佐剂为水溶性佐剂,不会导致疏水基团外翻,保留抗原的天然构象,因此可以获得针对构象性表位的抗体。
若客户需要针对构象性表位的抗体,此优点会很感兴趣!对于诊断试剂公司,因为检测的蛋白基本为天然抗原,需要针对构象性表位的抗体,具有极大的吸引力。
不含有蛋白成分?QuickAntibody佐剂不含有任何蛋白成分,因而佐剂本身不会产生针对自身的抗体;弗式佐剂含有卡介苗的蛋白成分,会产生很多针对佐剂的抗体。
使用QuickAntibody佐剂制备单抗,阳性克隆率远远高于使用弗式佐剂,因此更容易获得诊断试剂需要的高质量配对抗体。
诊断试剂公司对抗体要求较高,好的单抗为百里挑一甚至更低,我们可以提供更多的阳性克隆,可以大大提高筛选获得高质量抗体的几率。
肌肉免疫?通常免疫小鼠为皮下多点免疫、足垫免疫和腹腔免疫等,本佐剂为小鼠后腿小腿肚肌肉免疫,只需一手抓住小鼠,一手免疫,一人操作,一针免疫,极大方便了免疫方法。
无毒?弗式佐剂等因含有卡介苗和矿物油等毒性物质,会造成动物机体发炎,伤口溃烂,严重可以导致动物的死亡,从而造成用户一定的损失;有客户在免疫的时候也会不小心免疫到自己的手部,从而导致手部发炎,严重的甚至需要手术切除;QuickAntibody佐剂为无毒佐剂,不会造成动物机体发炎和动物死亡。
客户实例:1、客户A--一知名诊断试剂公司:抗原为购买自俄罗斯的天然抗原,100ug/支,进货价为6000元每支,之前使用sigma公司弗式佐剂,需购买三支抗原,总金额18000元,使用我们的佐剂后,仅需购买一支抗原,节省12000元。
现已大量使用我们的佐剂,为我公司大客户之一!2、客户B--一知名抗体生产商:使用弗式佐剂免疫一只小鼠的佐剂成本为5元钱,使用QuickAntibody佐剂免疫一只小鼠的成本按照报价计算为60元;客户B,一只小鼠饲养成本为1.5元/天,使用我们的佐剂与弗式佐剂相比可节省30天时间,一只小鼠节约动物饲养成本为45元。
若代理商给予一定的折扣,QuickAntibody的佐剂成本客户完全可以接受,于此同时,我们的佐剂大大提升了客户做抗体的效率。
现在客户B为我公司佐剂大客户,今年佐剂使用量大概为200-300支。
3、客户C--一知名抗体公司:该客户对抗体要求较高,使用的抗原基本为真核表达抗原(酵母表达),要求尽可能获得针对构象性表位的抗体,我们的佐剂不破坏抗原的空间构象,因此更容易获得针对抗原构象性表位的抗体,从而使获得的抗体更容易识别天然抗原。
该客户现在正在积极试用我们的佐剂,试用成功后会大量使用该佐剂。
4、客户D--一知名诊断试剂公司:该客户因为是做诊断试剂,所以希望获得更多的阳性克隆,得到更好的配对抗体,我们的佐剂与弗式佐剂相比,阳性克隆率高,便于筛选最合适的配对抗体。
一为佐剂免疫应答强,佐剂效果好,二为不含有卡介苗,不产生无关克隆。
5、客户E--一知名生产胶体金的公司:该客户抗原均为有机小分子,如三聚氰胺、瘦肉精、黄曲霉毒素等,因为这些小分子为半抗原,需要与BSA、KLH等偶联成完全抗原。
获得优良的有机小分子抗体与获得优良的蛋白抗体相比,更加的困难。
事实证明,在使用弗式佐剂免疫时,结果有好有坏。
客户E现在在做该类抗原的抗体时,一般会分两组,一组使用弗式佐剂,一组使用QuickAntibody 佐剂,作为一个双保险,并且事实证明,由于无杂蛋白干扰,QuickAntibody佐剂更易筛选获得阳性克隆。
6、客户F--一知名抗体外包服务商:该公司结合我公司QuickAntibody佐剂,推出了快速小鼠单抗制备服务,与常规佐剂的6个月的时间相比,该公司快速小鼠单抗制备时间为2个月,并且可以提供多株细胞株;同时该客户使用我公司2周快速小鼠多抗制备佐剂,为客户提供三周快速小鼠多抗制备服务,通常兔多抗制备时间2-3个月,极大地节约了客户的时间。
7、客户G--一知名医疗生化试剂生产商:该公司主要生产羊抗,如羊抗胱抑素C等。
客户使用弗式佐剂免疫山羊,因免疫剂量较大,会造成免疫部位大面积发炎、溃烂,从而导致山羊精神状态极差,尤其是在5月-10月份,北京天气炎热,情况更加严重。
使用QuickAntibody佐剂该情况得到明显改善,因我们的佐剂不含有毒性成分(如弗式佐剂的卡介苗和矿物油等),不会造成动物机体的过多伤害,更符合动物福利的标准。
现在该客户在10-5月份使用弗式佐剂,在5-10月份使用我们公司的佐剂。
8、客户H--一知名抗体生产商:该客户动物免疫量极大,一批需同时免疫300只动物。
起初使用弗式佐剂,虽然购买了6台昂贵的乳化仪(一台金额要1w以上),一个离心管样品的乳化30s,但是大量的样品乳化,也需要1个上午的时间。
而QuickAntibody佐剂,仅需抗原与佐剂在离心管中混匀即可,无需乳化,客户可以现混现用,为他们提供了极大的方便。
使用中已经出现的问题:1、有客户没有仔细阅读说明书,使用QuickAntibody佐剂时按照弗式佐剂方法与抗原进行乳化等操作,并在4度冰箱放置过夜,第二日取出直接免疫,结果造成效价不理想。
答复:QuickAntibody佐剂无需乳化,而且无论是佐剂本身还是与抗原混合后,长时间静置均易产生沉淀,因此均需要摇匀后才能配制和注射。
2、有客户没有仔细阅读说明书,使用QuickAntibody佐剂之前发现佐剂里面有沉淀成分,以为是污染物,离心去除,导致实验结果效价不理想。
答复:QuickAntibody佐剂产生沉淀为正常现象,只需在用前摇匀即可,若离心去除,必然影响免疫效果。
3、有客户使用QuickAntibody佐剂免疫小鼠后腿小腿肚肌肉时,误把踝关节当成膝关节,从而使免疫部位太过偏下,免疫100ul的佐剂与抗原混合液时,大量液体流出。
答复:小鼠后腿大腿一般被腹部皮肤包裹,我们正常见到的后腿肌肉部分为小腿肌肉。
另外若免疫至踝关节,由于免疫部位距离发生有效免疫应答部位较远,抗原在扩散至淋巴结前容易被降解,导致免疫应答效率降低。
4、有客户使用QuickAntibody佐剂免疫小鼠,因动物较多,免疫时间较长,最后佐剂在针管中沉淀在管壁,导致前面免疫的小鼠抗体效价较高,后面免疫的小鼠抗体效价较低。
答复:QuickAntibody佐剂易产生沉淀,建议在熟练使用之前,每次抽取较少量佐剂与抗原混合物进行免疫(以二、三只小鼠用量为佳);在操作熟练后,可以适当增加免疫动物的数量(如每抽取一次免疫五只以上小鼠)。
5、有客户使用QuickAntibody佐剂制备单抗,抗原为多肽偶联载体蛋白,免疫两针后针对多肽的ELISA滴度仅为1:200,但是成功融合出4株杂交瘤细胞株,其中两株产生的单抗可以做免疫组化,完全达到他们的预期结果!答复:我们说明书中所说的效价为蛋白抗原免疫后的效价,对于多肽和小分子来说,免疫后不可能达到如此高的滴度!原因是多肽和小分子为半抗原,本身只有一个表位或不足一个表位,而蛋白抗原有成百上千个表位。
建议客户检测针对载体蛋白的ELISA滴度,如果达到说明书滴度范围,而且检测到一定水平的多肽或小分子滴度,则表明免疫成功,完全可以继续后续的融合工作。
此时多肽或小分子滴度高低取决于该表位的免疫原性和偶联效率,基本与佐剂无关!然而,与蛋白抗原相比,多肽或小分子单抗的阳性克隆率则要低得多,因此客户需要筛选更多的克隆。