土壤中性蛋白酶检测试剂盒说明书
土壤试剂盒操作手册和常见问题
FastDNA Spin Kit for Soil实验步骤1.Add up to 500 mg of soil sample to a Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中最多加入500mg土壤样品。
注意：推荐最多加入500mg土壤样品，含水量比较多的土壤或者碎屑多的土壤可适量减少样品量。
2.Add 978 μL Solution Phosphate Buffer to sample in Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中加入978μl Sodium Phosphate Buffer3.Add 122 μL MT Buffer.What’s happening: Begin to solubilize membrane proteins with detergents as well asextra-cellular proteins and contaminations in soil.加入122μl MT Buffer发生的反应：用洗涤剂溶解细胞膜蛋白以及细胞外蛋白和土壤中的污染物。
注意：为了得到更好的样品处理效果，加入土壤样品及两个缓冲液后，在裂解介质管中仍能保留有250-500μl空间。
4.Homogenize in the FastPrep Instrument for 40 seconds at a speed setting of 6.0What’s happening: mechanical disruption of cell walls of soil organisms and releasing nucleic acids into the protective buffer.将样品置于FastPrep®仪器上匀浆40s，速度为6.0m/s发生的反应：机械破碎土壤微生物的细胞壁，将核酸释放入保护缓冲液中。
5.Centrifuge at 14,000×g for 5-10 minutes to pellet debris.14,000 x g离心5-10min至沉渣注意：如果把离心时间延长到15min，可以更好地使样品量较大的，或者细胞壁结构较复杂的细胞碎片沉降到管底。
土壤酸性磷酸酶(Solid-acid phosphatase,S-ACP)活性测定试剂盒使用说明
土壤酸性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明微量法货号：BC0145规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
用前加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。
（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。
10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL蒸馏水，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。
3.标准管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL标准液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。
土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0270规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用；试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体2mL×1支，0.2μmol/mL酪氨酸溶液，4℃保存。
产品说明：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。
土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL比色皿、蒸馏水、50目筛（或更小）。
样品处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
操作步驟：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、样本测定：第1页，共2页试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.10.1--试剂一（μL）100100--试剂二（μL）200----混匀后，37℃反应24h，期间振荡5-6次，使土样与反应液充分接触。
试剂三（μL）200200--试剂二（μL）-200--混匀，10000rpm室温离心10min，取上清液--上清液（μL）220220--标准液（μL）--220-蒸馏水（μL）---220试剂四（μL）650650650650试剂五（μL）130130130130混匀，40℃水浴10min，10000rpm室温离心10min，取上清液于680nm下读取各管吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。
土壤漆酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
土壤漆酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1960规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃避光保存，临用前每瓶加15mL试剂一溶解。
试剂三：液体3mL×1瓶，常温保存。
若有白色物质析出，放于37℃中溶解即可。
产品说明：土壤漆酶（SL）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。
漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、震荡仪、30目筛（或更小）。
操作步骤：一、样本处理新鲜土样风干，过30目筛。
二、测定操作1.分光光度计预热30min，调节波长到420nm，蒸馏水调零。
2.加样表：试剂名称测定管对照管土样（g）0.10.1试剂一（μL）450450试剂二（μL）500-37℃水浴反应10min。
试剂三（μL）5050试剂二（μL）-5004℃12000g离心15min，取上清于420nm测定其吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照管。
三、土壤漆酶（SL）活性计算公式酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol ABTS自由基所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
SL活性（U/g）=ΔA÷(ε×d)×109×V反总÷W÷T=2.78×△A÷W。
ε：ABTS自由基摩尔消光系数：36000L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.001L；W，样本质量，g；T：反应时间，10min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
土壤纤维素酶活性测定试剂盒说明书(分光光度法)使用说明
土壤纤维素酶活性测定试剂盒说明书(分光光度法)货号:BC0150规格:50管/24样产品说明：S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。
本产品采用3.5－二硝基水杨酸法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
试剂组成：试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml 蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/ml。
加样表和测定步骤：对照管测定管标准管风干土样（g）0.250.25-试剂一(μL)125125-煮沸15min（盖紧）振荡混匀，室温放置15min-试剂二（μL）250250-试剂三（μL）10001000-蒸馏水（μL）250250-振荡混匀，40℃水浴糖化1h后，煮沸15min（盖紧，防止水分散失）,得糖化液糖化液(μL)505050试剂四(μL)150150150混匀，沸水浴中煮沸显色15min（盖紧，防止水分散失），冷却蒸馏水（μL）105010501050混匀，540nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，样品管计算ΔA=A测定管-A对照管标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。
以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。
活力计算：根据标准曲线，将ΔA带入公式中（x）计算样品浓度y（mg/mL）。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-CL活力（U/g）＝y×V反总÷W÷T=156×yT：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：1.625mL；W：样本质量，0.25g。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明BCA法（bicinchoninic acid assay）是一种用于测定蛋白质含量的常用方法。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明如下：试剂盒组成：1.BCA试剂A：含有重铜离子和碱性溶液。
2.BCA试剂B：含有双咪唑试剂和碱性溶液。
3.蛋白标准溶液：一系列已知浓度的牛血清蛋白标准溶液。
4.BCA试剂C：含有特殊缓冲溶液。
注意事项：1.所有试剂和样品在使用前均需室温下静置至少30分钟。
2.打开试剂盒后，避免将试剂直接暴露于空气中，以免影响试剂稳定性。
3.在所有步骤中，使用干净且蛋白污染的工具可能会导致错误的结果。
步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的蛋白标准溶液，如0、20、40、60、80和100μg/mL。
2.取0.1mL蛋白标准溶液加入1.9mL去离子水，即配制出100μg/mL的稀释溶液。
3.以同样的方法依次配制出20、40、60和80μg/mL的稀释溶液。
4.将每个稀释溶液的0.2mL与2mLBCA试剂A混合，放置30分钟。
5.加入0.5mLBCA试剂B，再次混合均匀。
6.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
7. 使用紫外-可见光谱仪测定吸光度，以280 nm为波长，绘制标准曲线。
步骤2：测定待测样品1.取待测样品，如细胞裂解液，加入BCA试剂C进行稀释，使得样品中的蛋白质浓度在标准曲线范围内。
2.取样品0.1mL加入1.9mL去离子水，配制出与标准曲线相同浓度的稀释液。
3.加入1mLBCA试剂A混合均匀，放置30分钟。
4.加入0.2mLBCA试剂B，再次混合均匀。
5.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
6. 使用280 nm波长的紫外-可见光谱仪测定吸光度。
步骤3：计算蛋白质含量1.将待测样品的吸光度值与标准曲线进行比较，根据吸光度值确定样品中蛋白质的含量。
2.通过线性拟合标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。
土壤纤维素酶活性测定试剂盒说明书
货号：QS2936 规格：50管/24样土壤纤维素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。
测定原理：
采用3.5－二硝基水杨酸法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存；
加样表和测定步骤：
第1页，共2页
混匀，550nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。
S-CL活力计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.3356x - 0.012；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.012) ÷0.3356×V反总÷W÷T =465×(ΔA+0.012)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：1.625mL；W：样本质量，0.25g。
第2页，共2页。
蛋白定量试剂盒说明书BIORAD_RC_DC_Protein_Assay
3Pipet 25 µl of standards and samples into clean, dry microfuge tubes.4Add 125 µl RC Reagent I into each tube, vortex. Incubate the tubes for 1 minute at room temperature.5Add 125 µl RC Reagent II into each tube, vortex. Centrifuge the tubes at 15,000xg for 3-5 minutes.6Discard the supernatant by inverting the tubes on clean, absorbent tissue paper. Allow the liquid to drain completely from the tubes.7Add 127 µl Reagent A´ to each microfuge tube, vortex. Incubate tubes at room temperature for 5 minutes, or until precipitate is completely dissolved. Vortex before proceeding to the next step.8Add 1 ml of DC Reagent B to each tube and vortex immediately. Incubate at room temperature for 15 minutes.9After the 15 minutes incubation, absorbances can be read at 750 nm. The absorbances will be stable for at least 1 hour.Section 5StorageRC Reagent I and RC Reagent II should be stored at room temperature (20°C to 30°C) away from direct sunlight. Both reagents have a shelf life of 12 months. (Also see DC Protein Assay Instruction Manual for storage conditions for DC Protein Assay Reagent A, Reagent B and Reagent S.)Note: Also seeDC Protein Assay Instruction Manual for additionaltroubleshooting recommendations.Questions1May I use a wavelength other than750 nm?2What should I do if the proteinpellet is still soft after centrifugation for 3 to 5 minutes?3What can I do to minimizeinterference from supernatantcarry-over? RecommendationsYes, absorbance can be measured at 650-750 nm.Increase the centrifugation duration to 6-10 minutes. Protein pellet may take longer to dissolve after the addition of Reagent A´.Option #1:A second wash can be performed as follows:Standard AssayAfter step #6, repeat step #4 with500 µl of Reagent I, repeat step #5with 160 µl of Reagent II, repeatstep #6 before going on to step #7.Microfuge Tube AssayAfter step #6, repeat step #4 with125 µl of Reagent I, repeat step #5with 40 µl of Reagent II, repeat step#6 before going on to step #7. Option #2:At step #6: to maximize supernatant removal, discard supernatant by aspiration before going on to step #7.Option #3:After step #6, dry tubes under vacuum to reduce residual supernatant before going on tostep #7.Section 6Troubleshooting Guide。
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货号: QS2909 规格：50管/24样
土壤中性蛋白酶检测试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。
S-NPT在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：
中性条件下，S-NPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水
试剂组成和配置：
试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入100uL试剂七使粉剂润湿，然后加入20ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入50ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂六：液体1.5mL×1支，0.05mg/ml标准酪氨酸溶液，4℃避光保存；
试剂七：液体1.5mL×1支，4℃保存；
测定操作：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
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注意：标准管只需测一次。
每个测定管设一个对照管。
S-NPT活性计算：
单位定义：每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个 S-NPT活力单位。
S-NPT(mg/d/g)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=48×(A测定管-A对照管)÷A标准管
C标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.4mL；T：反应时间，30min=1/48d；W：样本质量，0.02g。
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