植物黄酮类化合物提取与分离研究进展
黄酮类化合物的研究进展
黄酮类化合物的研究进展陈璐食安082 2083608204摘要：黄酮类化合物是多酚化合物的一种，广泛存在于自然界中许多药用植物的根、叶、皮和果实以及水果和蔬菜中，多以苷类形式存在，一部分以游离形式存在。
目前，黄酮类化合物泛指2个苯环(A与B)通过3个碳原子相互连结而成的一系列化合物。
对黄酮类化合物的药理作用研究由来已久，大量研究发现，黄酮类化合物具有抗感染、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗心血管疾病、免疫调节等作用。
关键字：黄酮类化合物；生物活性；研究进展；作用；前景Advances in flavonoid researchChen Lu Food Safety 082 2083608204 Abstract: Flavonoids are polyphenolic compounds of the kind widely found in nature, the root of many medicinal plants, leaves, bark and fruit, and fruit and vegetables, mostly glycosides form, part of the free form. Currently, flavonoids refers to two benzene rings (A and B) by three carbon atoms linked together from a series of compounds.On the pharmacological effects of flavonoids of a long, large study found that flavonoids have anti-inflammatory, antioxidant, anti-tumor, anti-virus, anti-cardiovascular diseases, immune regulation and so on.Keywords: flavonoids; biological activity; research progress; role; prospects黄酮类化合物广泛存在于植物中，是植物长期自然选择过程中产生的次级代谢产物。
黄酮类物质的分离纯化实验报告结果
黄酮类物质的分离纯化实验报告结果
实验目的：对黄酮类物质进行分离和纯化，以获得高纯度的黄酮类化合物。
实验步骤：
1.将黄酮类植物材料加入适量的乙醇中，进行浸提。
2.过滤浸提液，得到植物材料的提取液。
3.将提取液转入蒸发器中，进行蒸发浓缩。
4.将浓缩液溶解于适量的无水乙醚中，进行萃取。
5.分取有色相的有机相液体。
6.用饱和盐酸溶液，使有机相与无水乙醚中的黄酮类物质发生转化反应。
7.经过酸化反应后，形成无色的无机酸盐。
8.用横向冷冻离心机进行冷冻离心，分离提取的黄酮类物质。
9.将离心沉淀物重新溶解于适量的去离子水中。
10.通过制备薄层层析法或者柱层析法对黄酮类物质进行进一步的分离和纯化。
11.通过紫外可见分光光度计检测黄酮类物质的纯度。
实验结果：
根据实验结果，我们成功地得到了一种高纯度的黄酮类化合物。
该化合物的纯度通过紫外可见分光光度计检测，纯度较高。
讨论和结论：
通过本次实验，我们成功地分离纯化了黄酮类物质。
该实验证明了所使用的方法在分离黄酮类物质方面的有效性。
此外，我们还可以利用其他分离纯化方法，如色谱法或逆流法等，进一步提高黄酮类物质的纯度。
然而，尽管我们得到了高纯度的黄酮类化合物，但该实验结果仅表示特定工作条件下的实验结果，并不能保证在不同条件下得到相同的结果。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的方法和条件进行黄酮类物质的分离纯化。
总之，本次实验成功地分离纯化了黄酮类物质，并得到了高纯度的黄酮类化合物。
该实验结果将有助于我们进一步研究和应用黄酮类物质。
蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究
蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究随着现代药物的发展，蒲公英药用成分的开发及应用研究受到了广泛的关注。
从蒲公英中可以提取到一类特殊的有机化合物黄酮类。
黄酮类具有保肝、抗菌、抗病毒等活性，在临床上具有重要的作用，但由于其低稳定性，在蒲公英中含量较低且分布不均，因此如何有效提取黄酮类成分及稳定性研究便显得尤其重要。
蒲公英中黄酮类化合物的提取，一般采用溶剂提取法。
首先，可以使用有机溶剂或者水溶剂，进行蒲公英的提取，从而获得所需的植物提取物。
接着，可以采用凝胶层析方法，对得到的提取物进行分离纯化。
采用不同的凝胶进行黄酮类化成分的分离，可以获得更高纯度的黄酮类化合物。
在此基础之上，可以进一步采用液相色谱等分离技术，进行深入的研究分析，从而筛选出更多的黄酮类化合物。
蒲公英中黄酮类化合物的应用研究，主要涉及到药物的活性研究及作用机制的研究。
在药物的活性研究中，首先可以采用实验性模型（如抗细菌、抗病毒及抗肿瘤），进行相关活性研究，从而鉴定出有效的黄酮类化合物。
此外，可以采用细胞培养等技术，利用黄酮类化合物作为药物，进行作用机制的探究。
举例而言，在抗肿瘤研究中，可以利用细胞培养研究，观察黄酮类化合物对于肿瘤细胞的抑制作用，从而探讨其抗肿瘤的机制。
此外，蒲公英中黄酮类化合物的应用研究还可以包括与现代药物相关的研究。
例如，可以采用细胞培养等方法，运用药物联合疗法，深入研究黄酮类化合物与其他药物的联合作用，从而提高药效。
此外，为了优化配伍、提高活性及降低毒副作用，可以结合全面的实验模型，进行活性成分组效应研究，尝试寻求新的抗疾病组合方案。
从总体上来看，蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究具有重要的意义。
在提取纯化研究方面，可以采用溶剂提取法、凝胶层析法等技术，分离获得优质的黄酮类化合物；在应用研究方面，可以采用实验模型、药效组合研究等方式，鉴定出有效的作用机制，从而提高药物的活性。
由此可见，蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究对于促进药物研发具有十分重要的意义。
植物药黄酮苷类化合物的分离及其构效关系分析进展
植物药黄酮苷类化合物的分离及其构效关系分析进展【关键词】植物药；黄酮苷；综述黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物，是色原烷的衍生物，其特点是具有C6-C3-C6的基本骨架，并可根据中间吡喃环的不同氧化水平和两侧A、B 环上连接的各种取代基而分为不同的黄酮类型，如黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查尔酮、二氢查尔酮、异黄酮、二氢异黄酮、花色素、黄烷醇、双黄酮、橙酮等。
实验证明，其具有广泛的生理和药理活性(包括抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等)。
因此，对该化合物的研究已成为国内外医药界研究的热门话题，是一类具有广泛开发前景的天然药物。
笔者现就对黄酮类化合物的分离及构效关系作系统概述。
1 提取分离1.1 提取黄酮苷类化合物多存在于植物的花、叶、果等组织中，一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取，其中用得最多的是甲醇-水(1∶1)或甲醇。
一些多糖苷类则可以用沸水提取。
常用的提取方法有：煎煮法、冷浸法、回流、渗漉等经典方法。
刘氏[1]对银杏叶总黄酮水浸提法作了研究，采取正交设计实验，确定了最佳水浸提条件。
煎煮法常用的溶剂为水，煎煮次数为2～3次；冷浸常用溶剂为95%乙醇、甲醇和水。
郭氏[2]运用超声技术提取黄酮苷是目前比较新的提取方法，此方法大大缩短了提取时间，提高了有效成分的提出率及药材的利用率。
1.2 分离纯化黄酮苷类的分离方法主要用各种柱层析法。
①聚酰胺柱层析法：聚酰胺对各种黄酮苷类有较好的分离效果，其层析容量较大，适合于制备性分离，洗脱剂常用水-甲醇，也有用水-乙醇和甲醇-氯仿。
②硅胶柱层析法：此法的应用范围最广，不仅可以分离黄酮苷，也可以分离各种黄酮苷元。
③葡聚糖凝胶柱层析：它主要靠分子筛作用分离黄酮苷类，在洗脱时，一般按分子量的大小顺序洗出柱体。
李氏等[3]从夏至草乙醇提取物的乙酸乙酯部位中，利用Sephadex柱色谱从中分离出2个黄酮类化合物。
杨氏等[4]利用Sephadex LH-20柱色谱对分蘖葱头进行分离纯化，分得4个黄酮苷类化合物，其中一个为新的黄酮类化合物。
黄酮类化合物生物学活性研究进展
黄酮类化合物生物学活性研究进展黄酮类化合物是一类天然产物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
近年来，随着人们对黄酮类化合物研究的深入，其潜在的生物学活性及作用机制逐渐被揭示。
本文将综述黄酮类化合物生物学活性的研究现状、常用研究方法及未来展望，以期为相关研究提供参考。
黄酮类化合物是一类广泛存在于植物、水果和蔬菜中的天然产物，主要分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇等几类。
这些化合物具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等，被广泛应用于保健品、药品和化妆品等领域。
抗氧化活性：黄酮类化合物具有强大的抗氧化作用，可有效清除体内的自由基，减缓衰老过程。
研究还发现，黄酮类化合物对某些慢性病如癌症、心血管疾病等具有一定的预防作用。
抗炎活性：黄酮类化合物具有抗炎作用，可有效缓解炎症反应，减轻疼痛。
研究显示，黄酮类化合物可通过抑制炎症介质释放、抗氧化等途径发挥抗炎作用。
抗肿瘤活性：黄酮类化合物具有抗肿瘤作用，可抑制肿瘤细胞的生长和分化。
研究表明，黄酮类化合物可通过调节细胞周期、诱导细胞凋亡等方式发挥抗肿瘤作用。
其他生物活性：黄酮类化合物还具有抗菌、抗病毒、抗过敏等生物活性，可有效预防和治疗相关疾病。
然而，目前对黄酮类化合物生物学活性的研究还存在一些问题。
由于黄酮类化合物的化学结构多样，其生物学活性的发挥可能受到多种因素的影响，如物种、剂量、作用时间等。
因此，需要进一步深入研究不同因素对黄酮类化合物生物学活性的影响。
目前对黄酮类化合物的作用机制研究尚不透彻，需要加强对其作用机理的研究，以便为相关疾病的预防和治疗提供理论依据。
由于黄酮类化合物的提取和纯化过程较为复杂，目前的研究多集中于体外实验和动物模型，对人体的临床研究相对较少。
因此，未来需要在加强基础研究的同时，推动相关药物的开发和临床试验研究。
基因克隆技术：通过基因克隆技术，可以了解黄酮类化合物对相关基因表达的影响，进一步揭示其生物学活性的作用机制。
黄酮类化合物提取分离纯化及其活性的研究进展
黄酮类化合物提取分离纯化及其活性的研究进展姓名常姣专业微生物学摘要文章综述了黄酮类化合物的结构特征及提取、分离纯化技术介绍了黄酮类化合物的生物活性，并对其开发利用进行了展望。
旨在为黄酮类化合物的研究、开发以及应用提供参考。
关键词黄酮；提取；分离纯化；生物活性民以黄酮类化合物也称黄碱素, 是广泛存在于自然界的一大类化合物, 在植物体内大多与糖结合成甙的形式存在, 也有部分以游离状态的甙元存在。
由于最先发现的黄酮类化合物都具有一个酮式羰基结构, 又呈黄色或淡黄色, 故称黄酮[ 1]。
目前对天然黄酮类化合物的提取方法较多,如溶剂提取法、微波提取法、超声波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法及半仿生提取法等, 每种方法都有它各自的优点和点。
用上述方法提取的黄酮类化合物仍然是一个混合物, 不仅是含有其它杂质的粗品, 而且是几种黄酮类成分的混合物, 需进一步分离纯化, 常用的方法有柱层析法、重结晶法、铅盐沉淀法和高效液相色谱法等。
黄酮类化合物具有降低血管脆性及异常的通透性、降血脂、降血压、抑制血小板聚集及血栓形成、抗肝脏病毒、抗炎、抗菌、解栓、抗氧化、清除自由基、抗衰老、抗癌、防癌、降血糖、镇痛和免疫等生理活性[ 2-5]。
这些生理活性已被关注，对该类化合物的研究成为医药界的热门课题。
人体自身不能合成黄酮类化合物而只能从食物中摄取，因此多年来科学家都在积极研究探讨从植物体中分离纯度高、活性强的黄酮类化合物[6]。
1黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物是以2-苯基色原酮为母核而衍生的一类通过三碳链相互连接而成的大多具有基本碳架的一系列化合物，且母核上常有羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等助色取代基团。
黄酮类化合物多为晶体固体，多数具有颜色，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有旋光性外，其余则无旋光性) 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异) 一般游离态苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂) 其中，黄酮、黄酮醇、查儿酮等平面型分子，因堆砌较紧密，分子间引力较大，故更难溶于水；而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面型分子，故排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，水中溶解度稍大。
黄酮类化合物提取和分离方法研究进展
收稿日期:2007205225作者简介:梁 丹(19852),女,河南鹿邑人,贵州大学农药学硕士研究生,研究方向为植物源农药.第24卷第5期周口师范学院学报2007年9月Vol.24No.5Jo urnal of Zhoukou Normal U niversity Sept.2007黄酮类化合物提取和分离方法研究进展梁 丹1,张保东2(1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.周口师范学院继续教育学院,河南周口466001)摘 要:黄酮类化合物具有多种生理活性,从天然产物中提取和分离黄酮类化合物,引起了人们的广泛关注,其提取和分离方法也不断地改进和发展.文章主要综述了近几年来不同的提取和分离方法在黄酮类化合物中的应用进展.随着科技的进步,黄酮类化合物的提取和分离方法将更加快速、高效、完善.关键词:黄酮;提取;分离;进展中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:167129476(2007)0520087203 黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化合物,植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大类物质,已知化学结构的黄酮类物质至少有4000余种.黄酮类化合物具有广泛的生理功能,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值,如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[1,2].黄酮类化合物还在食品、化妆品等行业中广泛应用.随着市场需求量的增加,经济效益的提高,黄酮类化合物提取和分离方法也在不断地改进和提高.1 黄酮类化合物提取方法的研究进展1.1 按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂).热水一般仅限于提取苷类.在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素.此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产.郭京波等[3]以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍),可以明显提高芦丁的产率.(2)有机溶剂萃取法.乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物的最常用溶剂.高浓度的醇(90%～95%)适合提取苷元,60%左右的醇适合提取苷类,提取的次数一般为2～4次[4].胡福良等[5]提取蜂胶液中黄酮类化合物,以80%乙醇提取的总黄酮的含量最高.其他有机溶剂法是根据相似相溶原理,对不同性质的黄酮选择最佳的有机溶剂进行提取.(3)碱提取酸沉淀法.黄酮类成分大多具有酚羟基,易溶于碱水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)和碱性稀醇.因此,可先用碱性水提取,碱性提取液加酸后黄酮苷类即可沉淀析出.提取时应控制酸碱的浓度,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物的母核.当有邻二酚羟基时可加硼酸保护.此方法简便易行,橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.1.2 按提取条件不同分类(1)回流提取法.本法是加热回流提取黄酮类化合物的一种方法.所用回流剂一般有水、醇及混合溶剂.此法操作简便,但效率不够高,一般很难一次性完全提出黄酮化合物,需要反复回流提取[6,7].(2)索式提取法.该法是用索式提取器,多次提取黄酮,其溶剂可反复利用,操作方便,价格低廉且提取效率高,但此法所需时间较长.索式提取黄酮类化合物的方法已广泛为人们所利用[8].(3)微波辅助提取法.该法是利用微波加热的特性对成分进行选择性提取的方法.此法具有快速、高效、高选择性、对环境无危害等特点.刘峙嵘等采用微波萃取银杏叶中黄酮类化合物及唐课文等采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物,与传统溶剂萃取方法相比,微波萃取法更简单,而且具有萃取时间短、成本低、萃取效率高等优点[9,10].(4)超声提取法.该法是利用超声波浸提黄酮类化合物的一种方法.其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的能量,使它们做高速的运动,加速细胞内物质的释放和溶解以及有效成分的浸出,大大提高了提取效率.超声提取法具有提取时间短、效率高、无需加热等优点[4].刘海鹏等[11]用超声波提取银杏叶总黄酮比回流法提取率高,且操作简便,节省时间,其最佳条件为:提取时间25min,温度10℃,连续提取3次,总黄酮提取率达96%.霍丹群等[12]在综合考虑成本等可行性因素下,提取山楂中黄酮类物质,提取时间大大缩短,产率较高,且实验可在室温下进行,设备简单,操作方便.(5)超滤法.该法是一种膜分离法,而且是唯一能用于分子分离的过滤方法,能从周围的介质中分离出100～1000nm的微粒.因此,超滤既可应用于除去溶液中胶体悬浮微粒,又能分离出溶液中的溶质.超滤的工作原理是:凡含有两种或两种以上溶质的溶液,通过滤膜分离流动时,其中分子体积小的溶质,经滤膜流出,而分子体积较大的溶质,不能通过滤膜而被截留[13].超滤法以多孔薄膜为分离介质,依靠薄膜两侧压力差作为推力来分离溶液中不同分子量的物质,从而起到提纯的作用.它具有不需加热,操作条件温和,不必添加化学试剂,不损坏黄酮类化合物,不存在相的转换,耗能低,分离率高,超滤装置可反复使用等优点.控制超滤膜孔径大小能有效除去溶液中大分子物质,选用适宜孔径的超滤膜是提高产品收率和质量的关键.20世纪80年代后期,采用超滤技术提取黄芩苷,收到了较好的效果.在溶液温度为14℃, p H=1.5时,提取黄酮类化合物的收率较高[14].(6)酶提取法.植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内,提取时细胞壁造成传质阻力,使提取效果受到很大的限制.酶的作用可使细胞壁疏松、破裂,因此需要减小传质阻力,加速有效成分的释放,从而提高提取效率[15].毕会敏等[6]用纤维素酶法提取红景天总黄酮,最佳工艺条件为:加酶量1.95%(以原料干重计),液料比70∶1(体积质量比,mL∶g),p H 值5.5,酶解温度40℃,酶解时间5h,红景天总黄酮的浸出率为4.385%.研究表明,采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率,且粗提物产率高,DPP H清除活性强.(7)超临界流体提取法.该法(Supercritical Flu2 ids Ext raction,SFE)是20世纪80年代发展起来的一项提取分离技术,利用超临界流体(Supercritical Fluids,SCE)为萃取剂,从液体或固体中萃取出待测组分,其中超临界二氧化碳最为常用(SCF2 CO2)[16].SFE具有提取效率高、无溶剂残留、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优点,同时还可以通过控制临界温度和压力的变化,达到选择性提取和分离化合物的目的.2 黄酮类化合物分离方法的研究进展由于黄酮化合物的性质不同,其分离原理有: (1)极性大小不同,利用吸附能力或分配原理进行分离;(2)酸性强弱不同,利用p H梯度萃取进行分离;(3)分子大小不同,利用葡聚糖凝胶分子筛进行分离;(4)分子中某些特殊结构,利用与金属盐络合能力的不同进行分离[17].2.1 p H梯度萃取p H梯度萃取适合分离酸性强弱不同的游离黄酮类化合物.将混合物溶于有机溶剂(如乙醚),依次用5%碳酸氢钠(萃取7,4′2二羟基黄酮)、5%的碳酸钠(萃取72羟基黄酮或4′2羟基黄酮)、0.2%氢氧化钠(萃取一般酚羟基黄酮)、4%氢氧化钠(萃取52羟基黄酮)萃取而使其分离[3].2.2 高效液相色谱分析(HPL C)法运用H PL C法分离黄酮类化合物的报道很多.有人对18种黄酮及黄酮苷类化合物在C8、C18和CN3种固定相上洗脱的RP2H PL C法分离做了研究,结果表明C18基本可以使植物黄酮苷元和配基实现分离,但它对极性大的苷部分洗脱出峰快,分离效果不大理想.而C8介于C18和CN之间,因而对黄酮苷的分离比较理想,峰形和分离也最好[18].H PL C 也可以用来测定黄酮的含量[19].2.3 高速逆流色谱分离法高速逆流色谱分离法(high speed co untercur2 rent chro matograp hy,HSCCC)是一种新的分离技术.其具有两大突出特点:(1)线圈中固定相不需要载体,因而清除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象;(2)特别运用于制备性分离,每次进样体积较大,进样量也较多[16].李彩侠等[20]提取荷叶中黄酮类化合物,经HSCCC分离纯化的效果很好,结合TL C分析、颜色反应鉴定得到两种纯度很高的黄酮醇类化合物.HSCCC对分离和制备黄酮类化合物有很大的优势,其应用前景越来越受到人们的关注.2.4 柱色谱法(1)硅胶柱色谱[17,18].此法应用范围最广,非极性与极性化合物都能用,适用于分离黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮醇类、二氢黄酮类、异黄酮类、黄酮苷元类.少数情况下,在加水活化后也可以用于分离极性较大的化合物,如羟基黄酮醇类及其苷类等.与硅胶88 周口师范学院学报2007年9月混存的微量金属离子,应预先用浓盐酸处理,以免干扰分离效果.(2)聚酰胺柱色谱[17,18].分离黄酮类化合物,聚酰胺是较为理想的吸附剂.其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目、位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小.由己内酰胺聚合而成的尼龙-66及由己二酸与己二胺聚合而成的尼龙-66,最早应用于黄酮类化合物的分离.此法是目前最有效而简便的方法.(3)葡聚糖凝胶(Sep hadex gel)柱色谱[18].黄酮类化合物的分离,主要使用两种型号的凝胶:Sep ha2 dex G型和Sep hadex L H220型.其原理主要是吸附作用.凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离羟基的数目.但分离黄酮苷时,分子筛的性质起主导作用.在洗脱时,黄酮苷类大体上是按相对分子质量由大到小的顺序流出柱体.(4)大孔吸附树脂分离法.该法是以大孔吸附树脂为吸附剂和分子筛的柱色谱分离形式.其原理是吸附性和分子筛性.吸附性主要来源于范德华力和氢键作用力;分子筛性来源于大孔树脂的多孔性结构产生的渗透和过滤作用.被分离的成分根据其分子的大小不同和吸附能力的差异而分离[3].近年来大孔吸附树脂在中药成分(如黄酮、生物碱等)精制纯化等领域中应用越来越广泛[21223].刘健伟等[22]对D101型(非极性)、Hz2806型(中等极性)和AB28型(弱极性)3种大孔吸附树脂进行了筛选,并对甘草中总黄酮分离纯化工艺进行了研究;王雅君等[23]则用D101大孔树脂进行了制备菟丝子总黄酮的研究.这些研究表明,大孔吸附树脂对于黄酮类化合物具有良好的分离纯化效果,与传统的分离方法相比,具有操作简便、树脂再生容易、耗费有机溶剂少、提取率高等优点.3 展望近几年来,科学家对黄酮进行了广泛而深入的研究,发现了黄酮不少令人感兴趣的新用途,黄酮类天然产物是近年来天然药物和人类健康产品研究开发的热点.从药用植物和经济植物中提取具有生理活性的黄酮作为天然药物、保健品和化妆品等行业的原料,已日益引起重视,其应用前景无限广阔.随着科学技术的不断进步和发展,黄酮类化合物的独特效能将得到不断的发掘及应用.因此,黄酮类化合物的提取和分离方法也将得到更加深层的研究和开发,已有的方法将会日趋成熟和完善,各种高效、方便快捷的新方法将会不断涌现.参考文献:[1]黄锁义,黎海妮,余美料.益母草总黄酮的提取及鉴别[J].时珍国医国药,2005,16(5):3982399.[2]姚小敏,覃成箭,羊金梅.茶叶中总黄酮的提取、鉴别及其含量测定[J].右江民族医学院学报,2005,27(6):7792 781.[3]郭京波,王向东,张燕,等.不同提取方法对苦荞类黄酮提纯得率的影响分析[J].食品科学,2006,27(10):4332 436.[4]杨红.中药化学实用技术[M].北京:化学工业出版社,2004:9.[5]胡福良,李英华,朱威,等.不同方法提取的蜂胶液中总黄酮含量的测定及抗肿瘤与抗炎作用研究[J].2005,5(3):11215.[6]毕会敏,张守勤,刘长姣.纤维素酶提取红景天总黄酮的研究[J].天然产物研究与开发,2006,18:8182821. 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黄酮分离实验报告
一、实验目的本实验旨在通过溶剂萃取、柱层析等方法，从植物材料中提取和分离黄酮类化合物，并对其纯度和含量进行测定，以了解黄酮类化合物的提取和分离纯化过程。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物材料：某种富含黄酮类化合物的植物（如银杏叶、橙皮等）- 提取溶剂：乙醇、水、甲醇等- 分离材料：硅胶、氧化铝、大孔树脂等2. 实验仪器：- 热水浴锅- 烘箱- 漏斗- 筛子- 烧杯- 蒸馏装置- 分光光度计- 薄层层析装置三、实验步骤1. 提取：- 将植物材料干燥、粉碎，过筛后备用。
- 称取一定量的植物粉末，加入适量的提取溶剂，置于热水浴锅中加热回流提取。
- 提取结束后，将提取液过滤，收集滤液。
2. 溶剂萃取：- 将滤液分别用不同极性的有机溶剂（如石油醚、氯仿、乙酸乙酯等）进行萃取。
- 将有机溶剂层收集于烧杯中，水层用有机溶剂重复萃取，直至水层颜色不再变化。
3. 薄层层析：- 将分离后的有机溶剂层浓缩干燥，得到粗提物。
- 将粗提物用适当溶剂溶解，点样于薄层层析板上。
- 以不同极性的有机溶剂为展开剂，进行薄层层析。
- 观察并记录各化合物在薄层层析板上的位置。
4. 柱层析：- 将薄层层析中分离出的目标化合物，进行柱层析分离。
- 将柱层析柱装填好固定相，将目标化合物溶解于适当溶剂，进行上样。
- 用不同极性的有机溶剂梯度洗脱，收集各洗脱液。
- 对各洗脱液进行检测，确定目标化合物的位置。
5. 纯度测定：- 将分离出的目标化合物进行纯度测定，如紫外光谱法、红外光谱法等。
- 根据实验结果，确定目标化合物的纯度。
6. 含量测定：- 采用适当的方法测定目标化合物的含量，如分光光度法、高效液相色谱法等。
- 计算目标化合物的含量。
四、实验结果与分析1. 提取：- 实验结果表明，乙醇为较佳的提取溶剂，提取效率较高。
2. 溶剂萃取：- 实验结果表明，不同极性的有机溶剂对黄酮类化合物的萃取效果不同，可利用这一性质进行初步分离。
3. 薄层层析：- 实验结果表明，目标化合物在薄层层析板上的位置较明显，有助于进一步分离。
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植物黄酮类化合物提取与分离研究进展摘要：结合目前已报道的多种植物黄酮类化合物提取与分离的技术方法，对植物黄酮类化合物提取与分离研究进展进行了综述。
关键词：植物黄酮类化合物；提取；分离中药主要起源于我国，我国对其有着悠久的研究历史。
中药作为中华民族的瑰宝，为中华人民和世界人民的健康做出了巨大的贡献。
尤其是近年来随着西药毒副作用的日益明显，以及对中药学研究的深入，中药学引起了人们越来越多的兴趣和重视。
黄酮类化合物是中药的有效成分之一，物广泛存在于植物的各个部位，尤其是花叶部位，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科、与菊科等。
许多研究已表明黄酮类化合物具有多种生物活性，除利用其抗菌、消炎、抗突变、降压、清热解毒、镇静、利尿等作用外，在抗氧化、抗癌、防癌、抑制脂肪氧化酶等方面也有显著效果所以提取分离出具有较高生物活性的黄酮类化合物对医药及食品工业是十分重要的。
关于黄酮类化合物提取及分离、纯化方法的研究报道很多，总结起来主要包括以下几个方面的内容。
1黄酮类化合物的提取方法1.1溶剂提取法包括有机溶剂提取法、水提取法及碱水提取法三种。
1.1.1有机溶剂提取法对苷类和极性较大的苷元如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查耳酮等,常用某些极性较大的溶剂如甲醇、乙醇或混合溶剂提取,对大多数苷元则用乙醚、氯仿、乙酸乙酷等极性较小的溶剂提取。
虽然有机溶剂对黄酮的提取率高,但缺点是（1）大多有机溶剂都易燃易爆;（2）多数有机溶剂有毒或具有强刺激性,会危害人体和污染环境;(3)一般成本较高。
邵金华等[1]人以桂花叶为原料,采用有机溶剂提取法对桂花叶中黄酮类化合物的提取工艺进行研究,通过单因素试验研究了不同浸提溶剂,提取时间,提取温度,乙醇体积分数,固液比对桂花叶黄酮提取率的影响,采用正交试验优化得出桂花叶中黄酮类化合物提取的最佳工艺条件为:浸提时间2h,提温度85℃,乙醇体积分数75%,固液比1︰20(g/mL),在该条件下桂花叶黄酮提取率达1.926%。
1.1.2水提取法由于黄酮苷类物质易溶于水，所以对黄酮苷类物质含量较高的原料，可以采取热水提取法。
浸提、煮提均可。
但由于水的极性大，易把蛋白质、糖类等溶于水的成分浸提出来，从而使提取液存放时，易腐败变质，为后续的分离带来困难，但是因为消耗溶剂的成本比其他方法低，设备简单，仍为一种可取的提取方法。
李秀信等[2]以紫苏茎为实验材料，按如下步骤：称取干燥样品10g,加人20倍样重的水,在水浴锅恒温90℃提6h,趁热过滤,渣重提1次。
合并滤液,浓缩至一定体积,加人无水乙醇,使多糖、蛋白质等大分子沉淀,过滤,继续浓缩直至加人无水乙醇后无絮状沉淀产生,将滤液浓缩至膏状,将浸膏在50一60℃烘箱中烘干,得粗黄酮,称重,最后算粗提物中黄酮含量。
实验测得黄酮的提取率为19.6%，略低于同时进行的80%乙醇提取法所得的2.138%和60%丙酮提取法所得的2.0064%。
另外，阮俊等[3]以野菊花为实验材料得到水提法的最佳工艺：即野菊花用水提取2次,水的用量依次为8、6倍,提取温度100°C,提取时间为40、40min。
1.1.3碱水提取法由于黄酮类化合物大多具有酚羟基，其易溶于碱水而在酸水中溶解度较小。
因此，在提取黄酮类化合物时，可先用碱水浸出;然后再酸化提取液;这样可使黄酮类成分形成沉淀析出。
常用的提取碱水溶液有饱和石灰水和氢氧化钠水溶液。
但建明等[4]:应用正交设计法,考察氢氧化钠浓度、体积、提取温度、提取时间等因素对甘草黄酮提取率的影响。
实验结果表明最佳提取工艺条件为:氢氧化钠的浓度为0.2mol L,甘草渣提取剂为1∶14,提取温度为90℃,提取时间为0.5h。
此提取条件下的提取率高达96%。
1.2微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从基体或体系中分离,进人介电常数较小、微波吸收能力相对差的提取剂。
[5]此法的主要优点是（1）可有效地保护药材中的功能成分,对提取物具有较高的选择性,提取率高;（2）提取速度快、省时,溶剂用量少;（3）安全节能、设备简单,节省投资。
王世宽等[6]以鼠曲草为研究对象，应用微波法提取鼠曲草中的黄酮类化合物，采用单因素实验，正交实验得出微波提取法的最佳工艺条件为：微波作用时间5m in,乙醇体积分数15%,料液比1∶60(g/m l),微波功率700W。
在此参数组合条件下,黄酮提取率为4.72%。
与传统溶剂法的对比实验表明,微波法不仅节省时间,而且提取效率高,是一种快速、高效、节能的新型提取工艺。
1.3超声波提取法超声波提取技术的基本原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出。
此外,超声波的次级效应,如机械振动、乳化、扩散、击碎等也能加速提取成分的扩散释放,有利于提取。
该法时间短、提取率高、成本低、污染小、容易实现产业化。
李帅等[7]以金银花为原料，以总黄酮得率为指标，采用超声波提取法提取金银花中的总黄酮。
采用单因素试验和正交试验原理，得出结果：最佳提取条件为超声功率为900W，提取时间40min，料液比1：40，乙醇体积分数80%，在此条件下金银花中黄酮得率为6.26%。
1.4超临流体界萃取法超临界流体萃取技术是通过控制临界温度和压力达到选择性提取和分离纯化的目的。
其利用不同密度时流体对物质的溶解能力的差异，实现对混合物的分离。
在本法中一般采用CO2为超临界溶剂，使用乙醇为夹带剂。
付玉杰等[8]采用单因素试验对甘草地上部分(茎叶)的超临界CO2提取工艺进行了研究。
得出的最佳工艺参数为:采用40～60目原料，80%乙醇为夹带剂，萃取时间:1.5h;萃取压力:30.0MPa;萃取温度:50℃;CO2流量:10kg·h－1;分离压力:5.8MPa;分离温度:40℃。
实验结果表明超临界二氧化碳萃取甘草总黄酮的提取率2.09%，含量5.42%，工艺具有提取率高，纯度高的特点，为规模化生产甘草总黄酮的提取提供了研究基础。
1.5酶解法对于一些黄酮类物质被细胞壁包围不易提取的原料可以采用酶法提取。
植物细胞壁的主要成分是纤维素,恰当地利用纤维素酶处理,可使细胞壁发生不同程度的改变,如软化、膨胀和崩溃等,从而可改变细胞壁的通透性,提高黄酮类化合物的提取率。
王晖等[9]研究了银杏叶中黄酮的酶法提取工艺,银杏叶原料经纤维素酶预处理后浸提,总黄酮得率显著提高,对叶得率可达到2.01%。
并得到其酶解过程的最优参数为:料液中酶的质量浓度为0.125g/L,酶与底物配比为1：1200,酶解温度45℃,自然pH值,酶解时间2h。
1.6半仿生提取法半仿生提取法是指从生物药剂学的角度,模仿口服药物及其在胃肠道的转运过程,采用一定pH的酸水和碱水依次连续提取,其目的是提取含指标成分高的活性混合物。
这种提取法的特点是可以提取和保留更多的有效成分,能缩短生产周期,降低成本。
庞中磊等[10]对柚皮总黄酮半仿生提取工艺进行了研究。
以柚皮总黄酮提取量为考察指标，考察了提取温度、提取时间、液料比(提取液体积与柚皮质量之比)对柚皮总黄酮提取量的影响。
在单因素试验和正交试验的基础上，获得半仿生法提取柚皮总黄酮的最佳工艺条件:以pH=2.5的盐酸和pH=7.5、pH=8.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液作为提取液，液料比为25mL /g，70℃下提取60min，重复提取3次，在此条件下柚皮总黄酮的提取量为50.65mg/g。
1.7闪式提取法闪式提取技术其依靠机械剪切力和超速动态分子渗透作用，在室温及溶剂存在下数秒内将植物组织破碎至细微颗粒，并使有效成分达到组织内外平衡，实现提取目的.鞠健等[11]，采用闪式提取法对玉米须中的黄酮进行提取。
在料液比1:50，乙醇体积分数50%，提取时间6min，提取电压40V的条件下总黄酮的提取率最高为3.83mg/g。
1.8其它提取方法除了上面提到的各种单一的提取方法，为了更好地提取植物中的黄酮类化合物，还经常将两种方法联合使用。
如邵圣娟等[12]采用超声波辅助纤维素酶解法提取马尾松花粉中的总黄酮，并得到最优提取工艺参数组合为：纤维素酶质量分数0.2%,溶剂乙醇体积分数60%，液固比25∶1，超声时间30min，总黄酮含有量12.02mg/g。
以及黄秀香等[13]采用正交试验的方法对一点红多酚超声波辅助半仿生法提取的工艺进行了优化，得到最佳的提取条件为：料液比1∶30、超声功率60W、超声温度60℃、超声时间25min，多酚平均含量为12.08mg/g，含量较高。
2黄酮类化合物的分离、纯化办法2.1柱色谱法（柱层析法）柱色谱常用的固体填料有硅胶、聚酰胺树脂、葡萄糖凝胶、大孔树脂等，这几种吸附剂均可用于黄酮类化合物的分离纯化。
2.1.1硅胶柱层析法张瑞等[14]使用硅胶柱层析法对新疆紫花苜蓿中黄酮类化合物进行分离分析，以硅胶G为:V正丁醇=5:1:4，混匀静置后，用展开剂的上层液作为淋洗剂，固定相，配置展开剂V蒸馏水:V冰乙酸单向一次性进行色谱分离，可以获得较好的分离效果。
2.1.2聚酰胺柱层析法田宜柏[15]以薇菜为原料提取黄酮类化合物，以上样量、洗脱流速、乙醇浓度为考察对象，采用聚酰胺柱层析法优化分离纯化工艺条件。
结果表明：最佳分离工艺参数为上样量3mL（浓度0.749mg/mL）、70%的乙醇、200mL/h的流速洗脱，谱峰较窄，洗脱峰的黄酮含量达到14.45%。
此法可较好地分离纯化薇菜黄酮类化合物，经济实用。
1.1.3大孔树脂吸附分离大孔树脂在中草药研究中的应用越来越广泛,已被有效地用于银杏叶提取物的分离、葛根总黄酮的分离纯化等研究中。
大孔树脂的极性、孔径,吸附洗脱条件等,都会影响分离的效果。
陈菁菁等[16]通过实验发现NKA-9型大孔树脂对桑叶总黄酮有较大的吸附量，并得到最佳提取工艺：以20mg·ml-1浓度上样,6倍量水洗涤,70%乙醇洗脱。
此条件下,乙醇洗脱物中桑叶总黄酮纯度达到58.2%。
与一般方法相比,应用大孔树脂分离纯化桑叶总黄酮,能得到较高纯度的总黄酮,而且方法简便、迅速、经济。
2.2薄层色谱法薄层色谱法是将固定相(一般为固体吸附剂，如硅胶等)均匀地薄薄涂布于光滑底板上(如玻璃等)，将试样点于薄层板的一端，置于密闭容器内展开后，分别以各组分斑点的所处位置及密度来实现对试样的定性和定量分析的一种分析方法。
许沧等[17]在判断银杏叶浸膏中是否含有银杏双黄酮类物质时，发现硅胶G-聚酰胺混合板能将银杏双黄酮与其它黄酮类明显分离,斑点集中清晰，而硅胶G板分离效果较差。
2.3纸色谱法纸色谱法可用于分离各种类型的黄酮类化合物，其具有易得到满意的分离效果、适用范围广、所需设备简单、材料费用少等优点。