男性不育与辅助生殖技术

⑵ 精子膜表面抗体（包被抗体）检测的意义 ① 避免精子膜内抗原释放, 反应具特异性; ② 检测活力精子, 更具临床意义.
⑶ 精子膜表面抗体检测的方法(WHO推荐）

混合凝集反应（mixedagglutination reaction, MAR）
特点：免疫性不育过筛试验，检测IgG型抗体。

免疫珠试验 (immunobead test, IBT)
男性不育的诊断 ——体格检查
全身检查：重点注意第二性征的情况，体型、
皮肤、喉结、毛发分布等 生殖器官的检查：阴茎、睾丸、附睾、输精管 、精索 直肠指诊：前列腺、精囊
男性不育症实验诊断基础
1.男性不育症实验诊断概况
男性不育症的实验诊断方法过去长期停留在较低
水平，不育症病因临床诊断困难。
血激素检测注意事项:
FSH浓度水平相对稳定可靠;
LH、T、PRL浓度均易产生生理波动；
应注意对抽血时间的有序把握，及注意对抽血前 影响因素的控制。
精浆果糖
精浆锌、柠檬酸、ACP
感染性检测
精浆中性α葡糖苷酶
精液在生殖管道中运输检测指标
附睾分泌功能指标----精浆中性α－葡糖苷酶
Seminal plasma neutral alpha- glucosidase
精子形态学染色
SpermMorphology Staining
吉姆萨染色------评价不同类型白细胞比评价精子更好 (改良)巴氏染色------经典方法 肖尔(Shorr)染色------常规精子形态分析 勃-利二氏(Bryan-Leishman)染色------适用于鉴定未成 熟生殖细胞和未成熟生殖细胞与白细胞的鉴别 Diff-Quik染色-------精子形态学分析
* 精子正常形态 < 15%, 体外受精率下降.
精液异常的定义
（WHO Laboratory Manual, CUP, 4th edn,1999）
少精症 (Oligozoospermia) 精子密度< 20 106/ ml
弱精症 (Asthenozoospermia) < 50%向前运动(a+b)或 < 25%快速向前运动(a)


精子悬液活性氧类物质(ROS)
reactive oxygen species, ROS

临床意义：
活性氧类是氧的代谢产物，包括超氧阴离子、过氧化 氢、氢氧根、过氧化氢和一氧化氮。过量存在可诱发 细胞脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤而造成病理性 损伤。
许多细胞具有酶性抗氧化剂系统（超氧化物歧化酶、 谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶）或非酶性抗氧化 剂系统（尿酸、维生素C、维生素E）。当这些防御 机制受制时，细胞功能将受到影响。
WHO制定了多项男性不育实验和临床诊断技术规
范。
正确认识辅助生殖技术（ART）的作用和适用范
围。
男性不育症诊疗基本程序（WHO）：
不育男性
病因学诊断
治疗或偿试治疗 考虑ART助孕 选择最适ART助孕方式 辅助生殖技术 男科学
实验诊断
男性不育症现代实验诊断技术
• • • • • 精液计算机辅助分析 精子功能检测 精液免疫生化检验 细胞遗传学检查 分子生物学
我国男性的精液质量呈下降趋势，正以1％的速度下降
在工业化程度越高的地区，精子质量降低越明显 无精症占男性不育症的 7-13% 有7-11%的无精症患者有染色体异常
男性不育的病因
睾丸前因素 睾丸性因素 睾丸后因allmann 综合症 特发性低促性腺激素性性腺功能低下 继发性GnRH分泌障碍 垂体功能减退 高催乳素血症 先天性 GnRH分泌障碍
灰度CASA无法检测出“精子成活率”，需进一 步作活体染色（如：HOS，伊红染色） 同一精液标本a+b+c值低于实际“精子成活率”。
灰度CASA的特点:
精子识别: 根据成像灰度识别精子,易将精液杂质误 识别为精子,需要人工干预帮助识别。
CASA临床应用存在的普遍性问题：
男性不育与辅助生殖技术
“百米冲刺”
男性不育定义
WHO规定：夫妇未采用任何避孕措施性生活1
年以上，由于男方因素造成女方不孕者，称为 男性不育 男性不育症不是一种独立的疾病，而是由某一 种或很多疾病与因素造成的结果
男性不育的概况
10-15%生育年龄的夫妇有不育症 男性不育占不育原因的 40%
WHO推荐检测方法：吲哚法或酶法


临床意义：
精囊分泌的果糖是精子能量的主要来源。 先天性精囊缺如果糖测定为阴性。 精囊炎时，果糖含量降低。 不完全射精或射精过频，果糖含量亦降低。 用于鉴别单纯性输精管阻塞所致的无精症（果糖含量正常 ）和输精管、精囊发育不良引起的无精症。
前列腺分泌功能指标（WHO推荐）
精液圆细胞(rouud cell)： 生殖道上皮细胞、生精细胞和白细胞 统称之。
正常精液： 圆细胞数<5×106/ml; 白细胞数<1×106/ml。
抗精子抗体
anti-sperm antibody
⑴血清AsAb检测指标的局限性 a) 男性特有的血睾屏障对精子施行封闭式保护; b) 精子抗原的复杂性给诊断试剂的制备带来困难.
尤以精液免疫生化检验发展得最快 ,具有十分 重要的诊断价值。
精液常规参考值
（WHO Laboratory Manual, CUP, 4th edn,1999）



2 ml， <6ml 7.2~ 7.8 <60分钟 20 106/ ml 40 106/ ml/一次射精 50%向前运动(a+b)或 25%快速向前运动(a) (射精后60分钟内） 形态 精子正常形态参考值> 15%* 活率 75%活精(除外伊红染精） 白细胞数 < 1 106/ ml 免疫珠试验 < 50%活精与免疫珠粘附 混合抗免疫蛋白试验 < 50%活精有粘附颗粒 量 pH 液化时间 精子浓度 总精子数 活动力
精浆柠檬酸定量（酶法）
（Seminal plasma citric acid ）
精浆酸性磷酸酶定量（PNPP法）
（Seminal plasma acid phosphatase ）
精浆锌定量（5-Br-PAPS法）
（Seminal plasma zinc ）
静止性生殖道感染性检测
精液白细胞过氧化物酶染色 （Leukocyte Peroxidase） 精液白细胞群组化酶免定量 （Leukocyte Subpopulations ） 精浆粒细胞弹性硬蛋白酶定量 （PMN-elastase）
当精子畸形率>70%或畸形精子指数(TZI)
>1.6时，可引起生育障碍，导致不育症。
来自辅助生殖技术项目的资料表明，使用本方法
所描述的分类方法，如果正常形态的精子数低于 15%或精子畸形指数(SDI) >1.6时，体外受精率降低。
正常精子形态>14%
(Kruge & Menkfeld标准)
血清抑制素B
生殖细胞凋亡
染色体及无精子候 选基因
常用血激素
FSH特性：
垂体前叶分泌； 不是总能准确预测生精功能状态； 一般 地，血FSH水平与精原细胞的数量紧密相关,精 原细胞缺乏或明显减少时,血FSH常常会升高. 当精原细胞数量正常,但出现精母细胞或精子细胞完 全性生精阻滞时,血FSH一般在正常范围。
病因
先天性 GnRH分泌障碍，Kal-x 基因缺陷 肿瘤，创伤，放射线，营养不良 肿瘤，创伤，手术 肿瘤，药物 睾酮，中肾旁管抑制物质缺乏，先天性解剖障碍 静脉功能不全 感染，生精上皮受损 先天性/获得性 顶体结构缺失 减数分裂未分离
睾丸
隐睾 精索静脉曲张 睾丸炎 睾丸生精停滞 圆头精子症 Klinefelter syndrome

检测方法：
Kennedy法（BAPNA法）：
BAPNA
精氨酸酰胺酶
硝酰基苯胺
（BAPNA： Nα-苯甲酰-DL-精胺酸-ρ-硝酰基苯胺 ）
不足之处： 反应时间过长（3小时） BAEE（苯甲酰精氨酸乙酯）法：

精子顶体酶活性检测标本留取； 顶体酶检测标本：原精液与洗涤后精子。 精子顶体酶活性检测常见实验检测错误。
WHO推荐检测方法：Cooper法（PNPG法）
临床意义：


附睾分泌功能的指标。中性α-葡糖苷酶较左 旋肉毒碱和甘油磷酸胆碱对附睾更特异更灵 敏。 结合精浆果糖、激素和睾丸其他指标,对远端 输精管阻塞有较好的诊断价值。
精囊分泌功能指标-----精浆果糖
Seminal plasma fructose
c) MAR: ≥10%为可疑，>50%有确定临床意义。 I BT: ≥20%为可疑, >50%有确定临床意义。
性交后试验

意义 禁欲至少两天 准确推算排卵期 前一天夜间同房，禁用润滑剂，性交后不能 行阴道冲洗及盆浴 9－24小时取精
精子低渗膨胀试验(HOS)
Sperm Hypo-Osmotic, HOS
精子转运 障碍
阴茎及尿道畸形 勃起障碍 射精障碍
男性不育的诊断 ——病史
全面了解家族遗传史、婚育史、性生活史、过
敏史、手术外伤史和其他对生育可能造成影响 的因素，还要简要了解女方病史，记录患者的 个人信息 既往史：重点了解与生育相关的疾病和因素， 主要包括腮腺炎、睾丸炎、发烧、附睾炎以及 手术外伤史，内分泌史、性功能、用药史、生 活习惯。环境与职业因素等
精子形态学染色（Diff-Quik）
精子形态学计算举例：
计数的精子数： 200 正常精子数： 78 正常精子百分比：（78/200×100%） 39% 缺陷精子数：（200-78） 122（61%） 头部缺陷精子数： 110（55%） 中段缺陷精子数： 18（9%） 尾部缺陷精子数： 16（8%） 缺陷总数：（110+18+16） 144 畸形精子指数(TZI) = (缺陷总数/ 缺陷精子数) = 144/122=1.18 精子畸形指数(SDI) = (缺陷总数/所数精子总数) = 144/200=0.72