胆固醇杂质-标准品
食品中胆固醇含量测定方法的研究与比较_丁卓平
由于深加工食品中模板含量少，需要利用高效的或
ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ ａｖａｉｌａｂｌｅ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ
特殊的 Ｄ Ｎ Ａ 提取方法，以提取到其中微量的 Ｄ Ｎ Ａ 。针
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９９， （９）： ３８０－３８８．
对不同的深加工食品，需要设计不同的模板提取方法。 ［４］ Ｇｅｏｒｇ Ａ Ｓ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ Ｆｏｒ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉ－
酸性溶液和弱碱性水溶液等。经过多次有机溶剂提取， ［１］ Ｄ Ｎ Ａ 大量损失；并且在酸碱和加热等提取条件下，使
Ｄ Ｎ Ａ 断裂成小片段。对于经过提纯的食品或食品原料， ［２］ 如大豆精炼油、大豆异黄酮、大豆卵磷脂、大豆蛋白
等，模板 Ｄ Ｎ Ａ 有二个显著特点：其一是含量少，其二 ［３］ 是片段小。
Ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｅｔｈｏｄ
ＤＩＮＧ Ｚｈｕｏ－ｐｕａ，ＨＥ Ｙｕ，ＺＨＡＯ Ｄｏｎｇ－ｙａｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＳＦＵ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００９０， Ｃｈｉｎａ）
130 2004, Vol. 25, No. 1
食品科学
※分析检验
３ 讨 论
样品中十几个拷贝的 Ｄ Ｎ Ａ 模板；用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 Ｎ Ｏ Ｓ ，
大豆异黄酮的提取，主要根据被提取物的性质及伴 存杂质的情况来选择合适的提取用溶剂。对大豆异黄酮 的甙类成分，一般用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、 水或某些极性较大的混合溶剂，甙元用极性较小的溶 剂，如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等来提取。在综合提取
胆固醇含量检测
法测定鸡蛋中胆固醇含量一、原理当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。
因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。
在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。
二、实验仪器及试材1.仪器：分光光度计、水浴锅2.试剂：本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。
试剂纯度均为分析纯。
（1）石油醚（沸点30-60℃）、无水乙醇、冰乙酸。
（2）50%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（3）25%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（4）10% 三氯化铁溶液：将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中，定容至100 mL，储于棕色瓶中，冷藏保存。
（5）磷硫铁试剂：取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内，加浓硫酸定容至刻度。
（6）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。
（7）胆固醇标准溶液：临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。
三、实验方法与步骤1.样品胆固醇提取准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于25mL具塞比色管中，加入0.5mL50%氢氧化钾溶液和4.5mL无水乙醇，振荡混匀，在80℃恒温水浴中皂化20min。
皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。
皂化完毕，取出比色管，冷却。
加入3mL 25%氯化钠溶液后再加入10mL石油醚，盖紧玻璃塞，振摇1min，静置分层。
取上层石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管内，在65℃水浴中让石油醚自然挥发干，加入4mL冰乙酸，轻摇使胆固醇溶解，待测。
2.样品和标准胆固醇含量测定另取两支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（标准管）加入1mL胆固醇标准溶液（0.1mg/mL）和3mL冰乙酸。
包括样品管，各管分别加入2mL磷硫铁试剂，混匀，25℃放置20min后在560nm波长下比色。
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究吴超;李润航;于中英;娄玉杰【摘要】试验随机选取了中华绿蛋鸡产的绿壳蛋和依莎褐蛋鸡产的褐壳鸡蛋各20枚,采用邻苯二甲醛分光光度计比色法和气相色谱法,测定鸡蛋中胆固醇的含量,比较两种方法在测定鸡蛋胆固醇含量上的差异.结果表明,用邻苯二甲醛比色法测得褐壳蛋蛋黄胆固醇含量176.79 mg/枚,浓度为13.35mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量142.74 mg/枚,浓度为9.69mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).用邻苯二甲醛比色法测得绿壳蛋蛋黄胆固醇含量158.12mg/枚,浓度为10.65 mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量128.70 mg/枚,浓度为8.54 mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P57-60)【关键词】胆固醇;比色法;气相色谱;鸡蛋【作者】吴超;李润航;于中英;娄玉杰【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S811.6在人们健康意识不断增强的今天，胆固醇往往片面的被认为是对人体有害的物质，但实际上，胆固醇是动物细胞各种膜结构及神经髓鞘的重要组成部分，可调节肠胃消化道中膳食脂肪的吸收，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能[7]，但如果摄入量过多，可形成高血脂症，引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病[1-4]。
研究表明，来源于鸡蛋中的胆固醇与来源于其他原料的胆固醇相比更易导致人体血清胆固醇水平的提高[5-6]。
鸡蛋中的胆固醇总量在100～270 mg范围内变动[7]，为满足不同人群的需要，低胆固醇鸡蛋备受人们的关注，因而鸡蛋中胆固醇含量测定的方法及准确性是评定其营养价值的重要参数。
普利莱组织游离胆固醇酶法测定试剂盒使用说明书
组织游离胆固醇酶法测定(Tissue free cholesterol ) E1016描述：在实体组织和细胞内，胆固醇酯既是构成细胞质膜的成分，也是细胞内脂滴的主要组分。
细胞内胆固醇过度聚集与动脉粥样硬化泡沫细胞形成密切相关。
实体组织和细胞的胆固醇测定远比血液胆固醇测定复杂。
本试剂盒避免了有毒的有机溶剂抽提、繁杂的氮气吹干和脂质复溶等步骤，采用高效能试剂裂解细胞和提取胆固醇，优化了酶学反应和操作步骤，简单易行，灵敏度高，线性范围20~5000 µmol/L。
原理：本试剂盒采用WHO、中国《全国临床检验操作规程》推荐的酶学方法，结合经典GPO Trinder酶学反应1,2，原理如下：(1) 胆固醇酯酶分解胆固醇酯为游离胆固醇。
(2) 胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化，反应过程产生过氧化氢。
(3) 在过氧化物酶催化下进行生色反应，在550nm有最大吸收峰，光密度值与胆固醇浓度成正比。
参考文献1.Trinder P. Ann. Clin. Biochem. 1969, 6: 24-27.Barham D and Trinder P. Analyst. 1972, 97: 142-145适于测定样品：(1) 动物实体组织(2) 培养细胞组成(105次微板测定或30次1 ml比色杯测定)：(1)裂解液100 ml (2)R1试剂16 ml (3)R2试剂4 ml (4)5 mmol/L胆固醇标准品0.5 ml储存：4 ºC保存6个月有效所需设备：酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。
最佳工作波长550nm，如无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。
操作步骤；一. 组织细胞裂解:裂解前，组织或细胞用PBS洗涤2次去除残存血液或培养基血清，以免影响胆固醇测定。
1)培养细胞裂解：消化、离心收集细胞或直接在培养皿内裂解。
通常6孔板单孔约2x106个细胞，75cm2瓶约1x107细胞。
低密度脂蛋白胆固醇一步法参考标准
低密度脂蛋白胆固醇一步法参考标准低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）是指血液中低密度脂蛋白（LDL）中的胆固醇含量。
通过测量LDL-C水平，可以评估患者的心血管健康状况，并作为冠心病风险的一个重要指标。
制定一份可靠的一步法参考标准对于临床落实LDL-C检测具有重要意义。
一、背景介绍LDL-C水平的测定是衡量冠心病风险的重要方法之一。
目前，常用的LDL-C测定方法有直接测定法和间接测定法。
直接测定法仪器昂贵，操作复杂，且不适用于大规模筛查。
间接测定法则是根据临床化学方法测量总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）来推算LDL-C水平。
虽然间接测定法的成本相对较低且易于实施，但其精确性和准确性存在一定的局限性。
需要建立一种准确可靠的一步法参考标准来测定LDL-C水平。
二、方法步骤1. 标本制备收集患者静脉血样本后，采用抗凝剂处理，离心分离血清。
然后将血清分装于干净无菌的离心管中，封闭后冷藏储存，避免血清发生冻融过程。
2. 试剂准备准备所需的试剂，包括LDL-C试剂盒、标准品和质控品。
试剂盒和盒内试剂应根据说明书进行稳定保存。
3. 校准与质控根据试剂盒说明书进行标准品的稀释和质控品的制备。
严格按照规定的浓度进行稀释，并保证每次使用前充分搅拌均匀。
4. 仪器校准与准备根据所使用的仪器说明书，进行仪器的校准和准备工作。
确保仪器状态良好，参数设置正确。
5. 检测操作将标本从冷藏处取出并平衡到室温，避免温度的影响。
根据试剂盒的使用说明书，按照操作流程进行检测。
6. 数据分析与结果判读根据仪器测定结果，进行数据分析和结果判读。
根据参比范围和患者信息，将测定结果转换为LDL-C浓度。
三、质量控制为确保检测结果可靠性和准确性，需进行质量控制措施。
1. 校准控制：根据试剂盒要求，校准试剂和质控品，定期检验校正仪器参数，确保测量结果符合标准要求。
2. 质控品测试：每个测试批次前后，使用质控品进行测试，确认仪器状态良好，测试结果在可接受的范围内。
总胆固醇(CHOL)测定试剂盒(CHOD—PAP法)产品技术要求derui
总胆固醇（CHOL）测定试剂盒
2、性能指标
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。
表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白吸光度
试剂以蒸馏水为空白时，在波长500～550 nm，光径1.0 cm，温度37℃条件下，吸光度≤0.080。
2.3分析灵敏度
试剂盒测试0.5 mmol/L被测物时，吸光度变化值≥0.002。
2.4线性范围
2.4.1试剂盒在0.5～19.6mmol/L区间（范围）内，其回归系数r≥0.990。
2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表3 要求。
表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒批内精密度CV 值应≤4.0%。
2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤6.0%。
2.6准确度
使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标示值的相对偏差应在±10.0% 内。
2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。
GC-MS测定血清胆固醇及其标志物前处理条件正交试验优化研究
GC-MS测定血清胆固醇及其标志物前处理条件正交试验优化研究张钰;王栋芳;曹冰;罗世恒;刘雅琼;黄宁华;闫赖赖;王京宇【摘要】采用正交试验优化 GC-MS测定血清胆固醇及其标志物的样品前处理条件，并对最优试验方案进行方法学评价。
采用 L16(211)正交设计对影响 GC-MS 测定血清胆固醇及其标志物前处理的3个关键步骤共7个因素———皂化(KOH-乙醇浓度、皂化温度和时间)、萃取(正己烷用量)和衍生化(衍生化温度、时间和用量)进行优化。
得到最优前处理条件组合如下：KOH-乙醇溶液浓度为1 mol·L-1；皂化温度70℃；皂化时间60 min；萃取剂用量2 mL；衍生化温度70℃；衍生化时间60 min；衍生化试剂用量100μL。
所建方法准确性和精密性良好，方法学评价指标优于文献报道。
%The obj ective is to use orthogonal experiment to optimize the pretreatment on the determination of serum cholesterol and its markers by GC-MS.And then the method is evaluated in a methodological perspective.The methodis to Use L16 (211 )or-thogonal experiment design to observe the influence of three key steps,althogether seven factors of pretreatment,which are sa-ponification (KOH ethanol solution concentration,temperature and time),extraction (dose)and derivatization (temperature , time and dose).As for the results,the conditions of optimal pretreatment are as follows:the ethanol solution is 1 mol·L-1 KOH,the saponification temperature is 70 ℃;the saponifica tion time is 60 min;the Solvent quantity is 2 mL;the derivatization temperature is 70 ℃;the derivatization time is 60 min,and the derivatization agent is 100μL.Through the optimization by or-thogonal design andmethodological evaluation,the determination of serum cholesterol and its markers by GC-MS is excellent in terms of accuracy and precision,and methodological evaluation indexes are better than those reported in other papers.【期刊名称】《光谱学与光谱分析》【年(卷),期】2016(036)005【总页数】6页(P1488-1493)【关键词】GC-MS;正交试验;胆固醇;标志物;前处理【作者】张钰;王栋芳;曹冰;罗世恒;刘雅琼;黄宁华;闫赖赖;王京宇【作者单位】北京大学公共卫生学院，北京 100191;北京大学公共卫生学院，北京 100191;北京大学公共卫生学院，北京 100191;岛津企业管理中国有限公司，北京 100020;北京大学公共卫生学院，北京 100191;北京大学公共卫生学院，北京 100191;北京大学公共卫生学院，北京 100191;北京大学公共卫生学院，北京100191【正文语种】中文【中图分类】R113胆固醇是机体内重要的代谢组分之一，与人体健康和疾病密切相关。
HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量
HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【摘要】应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对不同种类鸡蛋中胆固醇的含量进行测定.采用C18色谱柱为固定相,以甲醇为流动相,流速为1 mL·min-1,柱温为25℃;蒸发光散射检测器的氮气流速为2 L·min-1,漂移管温度为85℃.结果表明,胆固醇进样量在4.008～40.080 μg范围内,其对数与峰面积的对数呈良好的线性关系,相关系数R=0.9991,低、中、高三个浓度回收率为95.4%～99.1%.该方法操作简便、快速,精密度好,结果准确可靠.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)003【总页数】3页(P76-78)【关键词】高效液相色谱-蒸发光散射检测器;鸡蛋;胆固醇;含量测定【作者】王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【作者单位】广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006【正文语种】中文【中图分类】O657.72胆固醇是环戊烷骈多氢菲的衍生物，亦称“胆甾醇”，是动物体内维持正常生理活动所必需的最重要的固醇，通常以游离状态或酯化状态存在于动物组织中[1]。
但是人体内过多的胆固醇将引起高血脂，进而引发动脉粥样硬化、高血压、冠心病等一系列心血管疾病[2]，因此控制饮食中胆固醇摄入量非常必要。
鸡蛋中含有大量的胆固醇，是人体摄入胆固醇的重要途径。
对于鸡蛋中胆固醇含量的测定，文献报道多以在208 nm波长处紫外检测为主，对流动相的要求高，且样品中高紫外吸收物质的干扰大，易造成基线不稳，如果梯度洗脱则会引起基线漂移，使得胆固醇定量难度较大[3]。