维生素B1标准品 杂质 对照品
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量李刚（四川大学华西药学院四川成都）摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法2.1 测定波长的选择：分别称取维生素B1标准品，维生素B1片粉，维生素B1空白辅料各10mg，平行配制：加盐酸溶液适量溶解后，用盐酸溶液定容至50ml，摇匀后精密量取1ml，盐酸溶液定容至25ml，摇匀后在紫外/可见光区进行全波长扫描，测得不同波长下的吸光度值。
2.2 线性与范围：取五个100ml的容量瓶，精密量取维生素B1对照品（200ug/ml）4.00、5.00、6.00、7.00、8.00ml，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，每瓶中对照液浓度分别为8.00、10.00、12.00、14.00、16.00ug/ml，在246nm波长处进行吸光度测定，以吸光度与维生素B1对照液浓度进行最小乘法回归分析，得到回归方程，此为标准曲线。
维生素B1、B2的测定方法比较
维生素B1、B2的测定方法比较比较维生素B1、B2含量测定方法。
方法：采用紫外分光光度法中三种不同方法测定维生素B1、B2含量。
结果：1、按 E 值测标示量维生素B1：98.3 ± 2.51，维生素B2：94.8 ±0.308，复合维生素B片中维生素B1:102.1± 1.70，维生素B1平均回收率为100.4%，RSD为2.13%(n=6)，维生素B2平均回收率为94.9%，RSD为6.5%(n=6)。
2、标准曲线法维生素B1、B2浓度分别在3～18、1～8μg/ml范围内，均呈良好线性关系，标示量分别为：102.9±0.661，98.4±0.152。
3、双波长法测维生素B1标示量：94.2±1.97。
结论：三种方法用于维生素B1、B2含量测定，操作简便、快速、准确，精密度好。
近年来对维生素B1、B2测定方法报道较多，如高效液相色谱法[1,2]、流动注射化学发光法[3]、多元线性分光光度法[4]、荧光分光光度法[5]、毛细管电泳电化学法[6]、氧瓶燃烧电位滴定法[7]等。
这些方法操作麻烦、时间较长。
本文采用紫外分光光度法中按 E 值测定法、标准曲线法和双波长分光光度法，测定维生素B1、B2含量，并将三种方法进行比较。
三种方法均操作简便、快速、准确。
1 仪器和材料仪器：722型分光光度计DU-7紫外—可见分光光度计材料：维生素B1、B2对照品(购自Sigma 公司) ；维生素B1片(批号：20021202) 维生素B2片(批号：20021288-02)；复合维生素B片(批号：20021283-02)三种片剂均为昆明制药股份有限公司产品；冰醋酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。
2 试验及结果2.1 维生素B1含量测定2.1.1 按E 值测定维生素B1标示量取本品 1 0 片，精密称取、研细，精密称取适量(约相当于维生素B125mg)，加盐酸(9 →1000)约70ml，振摇15min使之溶解，再加盐酸(9→1000)定容至100ml，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取滤液5 m l，用盐西装盐酸(9 →1000)稀释至100ml，摇匀，扫描得最大吸收波长为246nm(图1)，在该波长处测定吸光度，按其吸收系数( )为421计算：A 为供试品在246nm 波长处测得的吸光度；D 为稀释倍数；W 为维生素B1片的平均片重；W样为称取的维生素B1片粉重；S标为标示量，测定结果(X ±SD)：98.3±2.51(n=7)。
维生素B_1_B_2含量测定方法比较
［１６］ Ｊｅａｎ－Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅ Ｌｅ Ｂａｉｌ， Ｙｖｅｓ Ｃｈａｍｐａｖｉｅｒ， Ａｌｂｅｒｔ－Ｊｏｓｅ Ｃｈｕｌｉａ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ｏｎ ａｒｏｍａｔａｓｅ， ３β ａｎｄ １７β－ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｈｕ－ ｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２０００， ６６（１４）： １２８１－ １２９１．
※分析检验
食品科学
2004, Vol. 25, No. 6 153
［１３］ Ｐａｕｌ Ｊ． Ｎｅｓｔｅｌ， Ｓｙｌｖｉａ Ｐｏｍｅｒｏｙ， Ｓａｌｌｙ Ｋａｙ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｒｅｄ ｃｌｏｖｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｒｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｌａｓｍａ ｌｉｐｉｄｓ ｉｎ ｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｗｏｍｅｎ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉ－ ｃａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ＆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ， １９９９， ８４： ８９５－８９８．
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维生素b1片含量测定的方法验证
维生素B1在体内参与糖代谢，对维持神经系统正常 功能和防止脚气病有重要作用。
维生素B1的测定方法
荧光分光光度法
01
利用维生素B1在特定波长下的荧光特性进行定量分析。
高效液相色谱法
02
通过色谱柱将维生素B1与其他杂质分离，再通过紫外检测器进
行定量。
微生物法
03
利用含有维生素B1的微生物培养基培养微生物，通过测定微生
维生素B1片含量测 定的方法验证
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
确定维生素B1片的含量
目的
通过实验测定，确定维生素B1片 中维生素B1的含量，为生产质量 控制和药品监管提供依据。
方法
采用高效液相色谱法（HPLC）进 行测定，通过色谱柱分离、检测 器检测，计算峰面积并外标法定 量。
采用合适的统计分析方法，如平 均值、标准差、变异系数等，对 数据进行分析和比较。
实验误差分析
误差来源
分析实验过程中可能产生的误差来源，如称量误差、滴定误差、 读数误差等。
误差传递
根据误差来源，计算误差对最终结果的影响，并评估误差传递的 规律和特点。
误差控制
针对误差来源，采取相应的措施，如使用高精度天平、规范操作 流程等，以减小误差对结果的影响。
05
CATALOGUE
结论
实验结论总结
实验结果表明，采用高效液相色谱法测定维生素B1片 的含量是可行的，该方法具有较高的准确度和精密度
，能够满足药品质量控制的测定要求。
输标02入题
在实验过程中，我们发现维生素B1片在波长为 246nm处有最大吸收，因此选择该波长作为检测波长 较为合适。
(完整word版)维生素B1检验记录
维生素B1检验记录记录编号：YL-WB1-20一．性状：本品为（白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭,味苦）。
结果：吸收系数：紫外分光光度计型号: （应为406～436) 取本品（约62。
0mg）精密称定w＝_______g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶液并稀释至刻度.摇匀，精密量取（2.0ml）_____，移至100ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000)稀释至刻度，摇匀.照分光光度法在246nm波长处测得吸收度A＝______,计算得吸收系数（E1cm1％）为______计算：结果：二．鉴别：1．天平型号：取本品（约5mg)，加氢氧化钠试液 (2.5ml）溶解后，加铁氰化钾试液________（0.5ml）与正丁醇________（5ml）,强力振摇2分钟，放置使分层,上层醇液显____ （强烈的蓝色荧光），加酸成酸性，荧光即（消失），再加碱成碱性,荧光________（又出现）。
结果：2．取本品适量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2小时测定。
本品的红外光吸收图谱与对照的图谱(应一致）结果：3．（1)取本品_____（约0。
2g）,置试管中,加水20ml溶解后，加硝酸2ml，加硝酸银试液1ml，即生成______________（白色凝乳状沉淀)，分离沉淀，加量试液,沉淀________（即溶解）加硝酸使成酸性,沉淀___________（复生成）。
(2）取供试品少量,置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热,即发生（氯气),能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。
结果：三．检查：天平型号：酸度计型号:1．酸度: (pH值应为2.8—3.3)定位用标准缓冲液:磷酸盐标准缓冲液pH= ；校准用标准缓冲液：邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液pH= 。
取本品 g,加水 ml溶解后，依法测定，1： ,2：，平均为。
结果：2．溶液澄清度与颜色：取本品_____（1.0g），加水10ml溶解后，溶液_____（应澄清无色)；如显色，与对照液(取比色用重铬酸钾液0.1ml,加水适量使成10ml）比较________ (不得更深）。
维生素B1、B2的定性实验
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与讨论 • 实验总结与建议
01 实验目的
了解维生素B1、B2的性质
1
了解维生素B1、B2的物理性质，如溶解性、颜色 等。
2
了解维生素B1、B2的化学性质，如酸碱性、氧化 还原性等。
3
了解维生素B1、B2的生物学活性及其在人体内的 生理功能。
学习定性实验的方法
学习如何设计实验方 案，选择合适的实验 材料和设备。
学习如何观察实验现 象，记录实验数据， 分析实验结果。
学习如何进行实验操 作，包括样品处理、 试剂配制、实验步骤 等。
掌握维生素B1、B2的检测技术
掌握维生素B1、B2的检测方法， 如荧光法、色谱法、生化法等。
掌握各种检测方法的原理、操作 步骤和注意事项。
黄色针状结晶
维生素B2在结晶状态下也呈黄色针状，同样具有 特定的光学性质。
旋光性
维生素B2同样具有旋光性，可被旋光仪检测。
氧化还原性质
维生素B2具有氧化还原性，易被氧化剂氧化，可 在还原环境中稳定存在。
定性实验的原理
利用维生素B1和维生素B2的化学性质进行检测
通过观察反应现象，如颜色变化、沉淀生成等，判断是否存在维生素B1或维生素B2。
通过观察颜色变化来判断是否存在维生素B1和B2。
02
实验步骤
按照实验指导书进行操作，包括样品的提取、试剂的配置、颜色变化的
观察等步骤。
03
实验结果
通过观察颜色变化，判断样品中是否存在维生素B1和B2。
对实验的建议和改进
试剂纯度
操作规范
建议使用高纯度的试剂， 以降低实验误差。
硫胺素的测定实验报告
1. 掌握硫胺素在酸性条件下与高铁氰化钾反应生成蓝色复合物的原理。
2. 学习使用分光光度法测定硫胺素含量。
3. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理硫胺素（维生素B1）在酸性条件下，与高铁氰化钾反应生成蓝色复合物，该复合物在特定波长下有最大吸收。
根据吸光度与硫胺素浓度的关系，可以计算出样品中硫胺素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 硫胺素标准品- 硫胺素样品- 0.1 mol/L硫酸- 0.1 mol/L盐酸- 0.01 mol/L高铁氰化钾- 95%乙醇2. 仪器：- 分光光度计- 电子天平- 移液器- 离心机- 烧杯- 试管- 比色皿1. 标准曲线绘制：（1）配制一系列不同浓度的硫胺素标准溶液（0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mg/L）。
（2）取10 mL标准溶液于试管中，加入0.1 mol/L硫酸1 mL，充分混匀。
（3）加入0.01 mol/L高铁氰化钾2 mL，混匀，放置10 min。
（4）以试剂空白为参比，在波长625 nm下测定吸光度。
（5）以硫胺素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：（1）称取一定量的硫胺素样品，用95%乙醇溶解，配制成一定浓度的样品溶液。
（2）取10 mL样品溶液于试管中，加入0.1 mol/L硫酸1 mL，充分混匀。
（3）加入0.01 mol/L高铁氰化钾2 mL，混匀，放置10 min。
（4）以试剂空白为参比，在波长625 nm下测定吸光度。
（5）根据标准曲线，计算样品中硫胺素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：标准曲线呈线性，相关系数R²=0.999。
2. 样品测定：样品中硫胺素含量为X mg/g。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意试剂的准确配制和溶液的充分混匀，以确保实验结果的准确性。
2. 实验过程中，应控制好反应时间，避免因时间过长导致吸光度下降。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量前言维生素B1又称盐酸硫胺或抗神经炎素, 化学名为４-甲基-３-［（２-甲基-４-氨基-５-嘧啶基）甲基］-５-（２-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐。
为白色结晶或结晶性粉末。
在酸性溶液中很稳定, 在碱性溶液中易被氧化和受热破坏。
遇光和热效价下降，故应置于遮光、凉处保存, 且不宜久贮, 具有维持正常糖代谢的作用，在临床上常用于防治缺乏维生素B1所致的脚气病，也用于神经炎、消化不良等症的辅助治疗[1] 。
近年来测定维生素B1片含量的方法较多，如高效液相法[2] 、荧光分光光度法[3] 、毛细管电泳电化学法[4] 、氧瓶燃烧电位滴定法[5] 等。
这些方法操作麻烦、实验时间较长。
紫外分光光度法仪器较便宜，普及度高且操作较简便，此外，维生素B1是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐[6] 。
维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收峰，故本次选用紫外分光光度法测定维生素B1含量，根据朗伯-比尔定律，利用紫外吸收光谱来进行定量分析，方法准确、简便、重复性好。
1. 仪器与试药1.1仪器紫外分光光度仪，分析天平，25mL棕色容量瓶，移液管。
1.2 试药维生素B1片；维生素B1生化试剂BR；0.1mol·L -1 HCl（自制）2．实验方法与结果2.1 样品预处理取维生素B1片20片（标示量为10.0mg），总重为1.23921g，其平均质量为61.96mg，充分研磨并混匀，称取3份样品置于25mL棕色容量瓶中，3份样品质量各为10.53mg、10.28mg、10.27mg，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL备用。
2.2对照品溶液配制维生素B1对照溶液：在分析天平上精密称取维生素B1 10.90mg置于25mL 棕色容量瓶，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL，作为维生素B1对照品储备液。