动物的克隆-1
动物克隆的原理
动物克隆的原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊动物克隆的原理，这可有意思啦！你看啊，动物克隆就像是一场神奇的魔术表演。
我们都知道，每个动物都是由一个小小的受精卵发育来的，就像一颗种子会长成参天大树一样。
那克隆呢，就是让这颗“种子”再复制一份。
比如说，有一只特别厉害的羊，它长得漂亮，身体又好，我们就想：哎呀，要是能再有一只一模一样的该多好啊！这时候克隆技术就派上用场啦。
科学家们会先从这只羊身上取一个细胞，这个细胞就包含了这只羊的所有遗传信息，就好像是这只羊的“密码本”。
然后呢，把这个细胞放到一个没有细胞核的卵细胞里，就像是给这个卵细胞换了一个“大脑”。
接着，通过一些特殊的手段，让这个新的细胞开始发育。
你想想，这是不是很神奇？就好像是给一个空房子重新装修，然后让它变成和原来那间一模一样的房子。
那有人可能会问啦，这样克隆出来的动物和原来的真的完全一样吗？嗯，大部分是一样的，但也不是完全一样哦。
就像双胞胎，虽然长得很像，但还是有自己的个性呀。
克隆技术可不是随便就能玩得转的哟！这需要很高超的技术和非常精细的操作呢。
要是不小心弄错了一步，那可就前功尽弃啦。
而且啊，克隆也不是想克隆多少就克隆多少的。
这就好比做蛋糕，材料就那么多，你总不能无限量地做吧。
动物克隆技术可是给我们带来了很多好处呢。
比如说，可以用来保护濒危动物呀，让那些快要灭绝的动物能够继续在地球上生存下去，这多有意义啊！还可以用来做医学研究，帮助我们更好地了解疾病和治疗方法。
不过呢，克隆技术也有一些让人担心的地方。
比如说，会不会有人用它来做坏事呀？会不会对自然环境造成什么影响呀？这些都是我们需要认真思考的问题呢。
总之呢，动物克隆的原理就像是一个神秘的宝藏，等着我们去探索和发现。
它既有让人惊叹的神奇之处，也有需要我们谨慎对待的地方。
我们要好好利用这项技术，让它为我们的生活带来更多的好处，而不是带来麻烦。
大家说是不是呀？。
牦牛低氧诱导因子-1α基因克隆及蛋白质结构分析
牦牛低氧诱导因子-1α基因克隆及蛋白质结构分析段荟芹;王利;李键;熊显荣【摘要】试验采用RT-PCR方法,以麦洼牦牛脾脏cDNA为模板扩增牦牛低氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因,并运用生物信息学软件对其序列进行分析.结果发现,扩增得到的麦洼牦牛HIF-1α基因编码区长为2 472 bp,编码823个氨基酸;蛋白质预测结果显示,该蛋白质分子质量为92.13 ku,等电点5.09,为亲水性蛋白,二级结构以随机卷曲和α-螺旋为主,有69个磷酸化位点和4个N-糖基化位点;系统进化树显示,麦洼牦牛与牦牛、野牦牛、普通牛亲缘关系最近.本试验成功克隆麦洼牦牛HIF-1α基因并对其序列进行了分析,为进一步研究HIF-1α基因的功能提供参考.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2016(043)006【总页数】7页(P1430-1436)【关键词】麦洼牦牛;低氧诱导因子-1α;克隆;蛋白质分析【作者】段荟芹;王利;李键;熊显荣【作者单位】西南民族大学青藏高原研究院,成都 610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都 610041;西南民族大学青藏高原研究院,成都 610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都 610041【正文语种】中文【中图分类】Q785低氧诱导因子(hypoxia inducible factor，HIF)最早是由Maroni等[1]在研究促红细胞生成素基因时发现，它是真核细胞调节氧稳态重要的转录调节因子，可靶向调控诸多低氧基因的表达。
HIF包括HIF-1、HIF-2和HIF-3，是由1个不稳定的α亚基和1个稳定的β亚基构成。
活性亚基HIF-1α是对氧气敏感的亚基，在细胞低氧信号转导过程中起枢纽作用，属于bHLH-PAS(basic helix-loop-helix-containing Per-ARNT/AhR-Sim domain protein family)蛋白家族[2-3]。
梅花鹿Galectin-1基因克隆及生物信息学分析
2021.3基金项目:山东省自然科学基金项目“β-半乳糖凝集素在禽网状内皮组织增生症病毒感中作用机制研究”(ZR2019MC036);菏泽学院培育基金项目“ATP1B1对禽网状内皮组织增生症病毒复制影响研究”(XY18PY01)。
作者简介:张淑萍(1995.11-),女,山东省高密市人,研究方向:动物疫病。
*通信作者。
梅花鹿Galectin-1基因克隆及生物信息学分析张淑萍1张厚锋2孔娜2温海燕2周宛蓉2姜莉莉2樊兆斌2*(1,山东省菏泽市食品药品检验检测研究院274000;2,菏泽学院药学院274715)摘要:本试验拟克隆梅花鹿半乳糖凝集素-1(Galectin-1)基因,并对其编码产物进行生物信息学预测分析。
根据ncbi 数据库中已发表的梅花鹿Galectin-1mRNA 序列,设计合成梅花鹿Galectin-1基因扩增引物。
提取梅花鹿肝脏组织RNA ,反转录为cDNA 为模板,利用RT-PCR 技术扩增梅花Galectin-1基因序列,并对其核苷酸和推导氨基酸序列进行遗传演化分析,结果显示,梅花鹿Galectin 1基因编码区为408bp ,编码135个氨基酸。
Galectin-1编码蛋白理论分子量为14.69kD ,理论等电点为5.1,不稳定系数为14.87,推测该蛋白为稳定蛋白。
脂肪系数为81.04,总平均亲水指数为-0.145。
Galectin-1编码蛋白不含信号肽,无跨膜区;存在1个潜在的磷酸化位点不含O-和N-糖基化修饰位点;含有7个抗原决定簇区域,抗原倾向指数高。
本试验成功克隆了梅花鹿Galectin-1基因,并对其进行了生物信息学分析预测,为深入研究Galectin-1编码蛋白的功能提供依据,进一步阐明了其生物功能。
关键词:梅花鹿;Galectin-1基因;基因克隆;序列分析半乳糖凝集素(Galectin)属于S 型凝集素,是一类不依赖钙离子的可溶性凝集素,在脊椎动物、无脊椎动物、原生动物和真菌等各种生物体内广泛存在。
动物克隆的基本过程
动物克隆的基本过程
嘿，朋友们！今天咱来聊聊动物克隆这神奇的事儿。
你说这克隆就像是变魔术一样，能复制出一个一模一样的动物来。
咱先说说这细胞吧，就好像是动物身体的小零件。
要克隆呀，就得先找到合适的细胞。
这就好比你要盖房子，得先找到好的砖头不是？然后呢，把这个细胞放到一个特殊的环境里，就像给小零件找了个特别的家。
接下来，就有个关键的步骤啦！得把这个细胞和一个卵细胞结合起来。
这就像是把两个不同的拼图块拼在一起，组成一个新的整体。
这可不是随随便便就能成功的哦，得非常精细地操作才行。
然后呢，这个新的组合就开始发育啦！就像一颗种子开始发芽、长大。
慢慢地，它就会长成一个和原来的动物几乎一样的新生命。
你说神奇不神奇？
想想看啊，如果我们能把那些珍稀的动物都克隆出来，那不是能保护它们不灭绝了吗？这多好呀！但是，这也不是没有问题的哟。
比如说，克隆出来的动物真的能和原来的完全一样吗？它们的性格、行为会不会有差别呢？这都是值得我们思考的问题呀。
而且啊，克隆也不是随便就能做的。
这需要很高的技术和很严格的条件。
可不是我们在家里就能随便试试的，那可不行！要是弄错了，那可就麻烦啦。
不过呢，虽然有这些问题，动物克隆还是给我们带来了很多希望和可能性。
说不定以后我们能通过克隆技术做出很多对我们人类有益的事情呢。
总之，动物克隆是个既神奇又复杂的事情。
我们既要看到它的好处，也要注意它可能带来的问题。
我们要好好地研究它，让它为我们的生活带来更多的好处，而不是坏处。
你们说是不是这个理儿呀？。
动物克隆的基本原理及过程
动物克隆的基本原理及过程《动物克隆的基本原理及过程》动物克隆是指通过人工手段复制原始个体的生殖过程。
这项技术的发展引起了广泛的关注和讨论，同时也引发了一系列伦理和道德问题。
本文将介绍动物克隆的基本原理及过程，以帮助读者更好地理解这一领域的发展和挑战。
动物克隆的基本原理是利用体细胞核移植技术，将一个成熟核移植到一个去核的卵细胞中，然后通过合适的刺激使其发育成一个完整的新个体。
在这个过程中，克隆个体将完全或部分地拥有捐赠体细胞的遗传信息。
动物克隆的过程可以分为以下几个关键步骤：1. 获取捐赠体细胞：捐赠体细胞可以来自成年个体的体细胞，比如皮肤细胞或肌肉细胞。
这些细胞将成为克隆个体的遗传来源。
2. 准备去核卵细胞：通过一系列的实验操作，去除卵细胞中的细胞核，以确保克隆个体将只携带捐赠体细胞的遗传信息。
3. 核移植：将捐赠体细胞的细胞核注射到去核卵细胞中。
4. 诱导发育：经过核移植后，为了启动克隆个体的发育，科学家通常需要提供一些刺激，比如电脉冲或化学物质。
这些刺激可以激活细胞的发育能力，使其开始分裂和发育。
5. 移植和孵化：克隆胚胎可以被移植到一只母兽体内，或在试管中孵化出来。
无论哪种方法，都需要为克隆个体提供适当的环境和条件，使其正常生长和发育。
需要注意的是，动物克隆是一项复杂和技术密集型的过程，目前仍然面临许多挑战和限制。
成功率仍然相对较低，伦理和道德问题也一直备受关注。
然而，动物克隆也有着广阔的应用前景。
它可以用于保护濒临灭绝的物种、提高家畜和农作物品质、以及研究人类和动物发育等基础科学问题。
随着技术的不断发展和完善，我们相信动物克隆将在未来发挥更大的作用。
总之，动物克隆是一项具有巨大潜力和困难的技术。
通过核移植和发育诱导等关键步骤，科学家可以实现原始个体的复制和繁殖。
尽管仍面临许多挑战，但动物克隆在生物学和应用领域的潜力仍然令人兴奋。
动物的克隆
2.培育过程
去核卵细胞
体细胞核
3、原理 动物体细胞核具有全能性
细胞核移植 重组细胞
电脉冲刺激 早期胚胎(或重组胚胎）
胚胎移植
母体子宫
妊娠、出生 个体
绵羊“多莉”克隆过程：
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多
卵细胞
莉
乳腺细胞
羊 的
细胞质
细胞核
培 育
细胞核移植
融合后的卵细胞
卵裂
早期胚胎
胚胎移植
过
程
C母绵羊子宫
妊娠 分娩
原代培养 传代培养
细胞系、细胞株
原代培养物
…………
细胞系
原代培养物在首次 传代时就成为细胞系
可连 续培 养的
不能 连续 培养 的
连续 有限 细胞系 细胞系
细胞系、细胞株
细胞株： 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞 系中获得的具有特殊性质的细胞，称为细胞株。
细胞株一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。
单克隆 抗体
抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能 与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能 的球蛋白。
什么是抗体？
由何种细胞产生？ 效应B细胞
主要分布在哪里？ 血清 起何作用？ 特异性免疫作用
什么是单 用单个B淋巴细胞进行无性增殖（扩 克隆抗体？ 增），也就是通过克隆，形成细胞群，
这样的细胞群就有可能产生出化学性质 单一、特异性强的抗体。
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂 就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？ 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。
这样的过程叫做传代培养
动物克隆的技术和原理
动物克隆的技术和原理
动物克隆是指通过人工手段复制一个动物的基因组，使其与原生态个体相同或相似的过程。
目前，动物克隆技术主要包括体细胞克隆和胚胎克隆两种方法。
体细胞克隆是利用已成熟的体细胞（如皮肤细胞）经过处理，使其转化为“全能细胞”，再将其注入到空心的卵细胞中，使其发育成胚胎，最终通过移植到代孕母体中获得一个新生个体。
这种方法最早应用于羊的克隆，被称为“多莉”，成功率较低，但是可以利用一个体细胞克隆出多个个体。
胚胎克隆是利用早期胚胎的细胞，通过细胞分裂产生多个完全相同的胚胎，再将其移植到代孕母体中发育成新生个体。
这种方法的成功率相对较高，但需要采集和操作早期胚胎，对于某些动物来说难度较大。
动物克隆技术的原理是基于细胞分裂和基因组重组的原理。
每个动物细胞都包含着完整的基因组，通过不同的基因表达和调控，才能发挥出不同的细胞类型和个体特征。
通过对细胞进行特殊处理，可以使其恢复到某种发育状态，从而重新分裂产生新的胚胎或个体。
动物克隆技术在基础研究、药物研发、种质保护等领域有广泛应用，但也存在伦理和安全等问题，需要进一步探究和规范。
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克隆动物的原理
克隆动物的原理
克隆动物的原理是通过细胞核移植技术来实现的。
该技术的基本步骤如下：
首先，从欲克隆的动物身体中取出成熟细胞，通常选择来自皮肤或肌肉的细胞。
然后，从另一只动物的卵细胞中去除其细胞核，形成一个空的卵细胞。
这个过程称为去核化。
接下来，将已取出的成熟细胞注射到去核化的卵细胞中，使其取代原来的细胞核。
随后，将充满新细胞核的卵细胞进行体外培养，直至它发育成一个早期胚胎。
最后，将早期胚胎植入一只代孕母动物的子宫中，进行妊娠和胎儿发育，最终诞生出一个克隆动物。
通过这种方式，科学家可以复制一只动物的基因组，使其与原动物基本一致。
然而，由于细胞核移植技术的复杂性和不稳定性，成功克隆出健康动物的几率相对较低。
同时，克隆动物也可能会出现一些不正常的生理和行为特征，因为基因组的复制并不完全等同于原动物的全部遗传特征被复制。
克隆动物的研究对于科学研究、遗传学研究以及生物医学领域具有重要意义。
它可以帮助科学家更好地理解动物发育和遗传
机制，促进生物医学研究，推动科学技术的进步。
此外，克隆动物的出现也引发了一系列伦理和道德问题的讨论，如个体权利、动物福利、基因改造等问题，需要进一步深入研究和探讨。
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无限增殖、 产生大量的单克隆抗体
(3) 单克隆抗体的制备： 阳性孔
如何得到一个细胞的克隆？
3、单克隆抗体的应用
• 诊断和防治各种疾病。
• 研究抗原物质在细胞中的定位及其功能。
• 在单抗上连接抗癌药物，制成“生物导弹”， 治疗癌症。
位素的单抗
-----生物导弹
植物组织培养与动物细胞培养的比较
抗原 反复注射
从血清中分离
动物
抗体
得到
特点：
产量低、 纯度低、 特异性差。
一个B淋巴细胞只产生一种特异性抗体
在体外，如果
克隆
单个B淋巴细胞
细胞群
产 生
化学性质单一、 特异性强的抗体 （单克隆抗体）
(3) 单克隆抗体的制备：
科勒 德国
米尔斯坦 英国
一个B淋巴细胞
一个骨髓瘤细胞 细胞杂交
1975年，两位科学家创 造性的工作解决了这一难 题。二人于1984年获得了 诺贝尔生理或医学奖
20世纪80年代出现了电融合技术。
(2)动物细胞融合的过程
细胞融合 细胞杂交 （P31）
2、杂交瘤技术和单克隆抗体的制备过程
(1)什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生
特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
一个病原体有多个抗原，可以与多个 抗体特异结合
(2)传统的抗体制备技术：
第二章 克隆技术
第三节 动物的克隆
动物克隆的技术基础是动物的细胞培养。
动物细胞和组织培养技术的发展
1885年Roux 用生理盐水培养鸡的神经板，发现它可在盐水中生 活一段时间。
1903年Jlly分别将皮肤及白1907年Harry为探讨神经纤维的真正来源，从蛙胚中分离出一部 分神经管，培养在一滴蛙的淋巴液中，成功地看到了神经纤维的 末端的生长，其中一根神经纤维在25分钟之内长到20微米，另一 根在50分钟内长到25微米，最长的达到了200微米。
比较 项目
原理
结果
用途
植物组 织培养
动物细 胞培养
细胞的全 能性
细胞的增 殖
培育成 植株
培育成 细胞群
快速繁殖等
获得细胞的 产物或细胞
等
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
细胞融合原理 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性
融合前的处理
去除细胞壁
诱导融合的方法物理（离心、振动、 物理、化学方法
电刺激）
（同左）
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
用途
获得杂种植株 制备单克隆抗体
资料：
（1）淋巴细胞合成DNA有D和S两条途径， 其中D途径能够被氨基喋呤阻断。但是一般 不分裂增殖。 （2）骨髓瘤细胞是特殊选择的代谢缺陷型 细胞，其DNA合成过程只具有D途径，能被 氨基喋呤阻断。 （3）杂交瘤细胞则既可无限增殖，又具备 两条DNA合成途径。
1912年Carrel发现鸡胚浸出液对多种细胞生长有高度促进作用， 他将7天鸡胚心脏的组织块培养在血浆和鸡胚提取液的混合物中， 当细胞生长出晕后再把它分成两份进行培养，鸡胚细胞的培养连 续维持了34年之久。 Carrel使用的培养液，采用的无菌技术， 以及后来设计的培养瓶(卡氏瓶)等都是对组织培养的重要贡献。
1950年Morgan等人经过大量研究设计的“199”培养液至今仍广泛 用于人及哺乳动物细胞的培养。
一、动物细胞培养
从动物机体中取出相关的组织，将它分散 成单个细胞，然后，放在适宜的培养液中，让 这些细胞生长和增殖。
一、动物细胞培养
1、动物细胞培养的条件
① 无菌、无毒环境 ② 营养：糖、氨基酸、促生长
受精作用
细胞融合是正常的生命活动
(1)细胞融合技术的发展
Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中有多核的血细 胞存在。
1958年日本学者冈田（Okada）发现仙台病毒具有触发动物 细胞融合的效应。
1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学 融合法。
1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨 髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
资料：用HAT培养基筛选得到杂交瘤细胞
单克隆抗体技术中人工诱导小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后，细胞将以多种形式 出现，如脾细胞-瘤细胞、脾细胞-脾细胞、瘤细胞-瘤细胞、细胞多聚体、未融合的脾 细胞和瘤细胞等，其中只有脾细胞-瘤细胞的融合体是有用的。正常的脾细胞在培养 基中存活仅5-7天，无需特别筛选，细胞多聚体也容易死去，关键问题是要去除未融 合的瘤细胞。选择培养基具有3种关键成分：次黄嘌呤（hypoxanthine）、氨甲蝶呤 （aminopterin）和胸腺嘧啶核苷（thymidine），故名HAT培养基。这个培养基通 过抑制瘤细胞的核苷酸合成，达到去除未融合瘤细胞的目的。细胞有两条基本途径合 成嘌呤核苷酸，一条是从磷酸核糖、氨基酸、CO2和NH3等化合物开始，叶酸是重要 的辅酶，而氨甲蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻断瘤细胞通过这一途径合成核苷酸。另一 条途径是利用已存在的碱基，经特异的磷酸核糖转移酶催化合成核苷酸，如次黄嘌呤 经过次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）转变为嘌呤核苷酸。融合所用的瘤细胞是 选择出来的HGPRT缺陷细胞株，因此不能在HAT培养基中生长，而且不合成或不分 泌免疫球蛋白。只有融合细胞具有亲代双方的遗传性能，可在HAT培养基中长期存活 与繁殖并分泌抗体。用于筛选具有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活 性缺陷细胞的培养基。是含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的完全 培养基。在氨基蝶呤(二氢叶酸类似物)存在下，这种酶缺陷的细胞不能通过核苷酸合 成旁路合成次黄嘌呤和胸苷。HPRT和TK缺陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨 髓杂交瘤细胞选择性培养基。
因子、无机盐、微量元素、 动物血清等。 ③ 温度：一般与动物体温接近， 哺乳动物多以36.5±0.5为宜。 ④ 适宜的pH：多数细胞的最适 pH为7.2-7.4，CO2可以维持培 养液pH。一般为95%+5%的混 合气体。
2、动物细胞培养的过程
原代培养：从机体取 出后立即进行的细 胞培养。（P28）
传代培养：将细胞从 一个培养瓶分装到 多个培养瓶中继续 培养。 （P28）
细胞系 细胞株
一、动物细胞培养
3、动物细胞培养技术的应用
① 生产有价值的生物制品。 ② 检测有毒物质的毒性。 ③ 培养细胞用于生理、药理、病理研究为治疗和
预防疾病提供理论依据。
二、动物细胞融合与单克隆抗体 1、细胞融合与细胞杂交