叶绿素a测定
叶绿素-a测定
叶绿素-a的测定方法原理（荧光分光光度法）用丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，根据提取液酸化前后的荧光值，可分别计算叶绿素-a及脱镁色素的含量。
试剂及其配置1、丙酮溶液（9+1）：量取900ml丙酮与100ml水混合，保存在棕色试剂瓶中。
2、碳酸镁悬浮液（10g/L）:称取1g碳酸镁，加水至100ml，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需要再摇匀。
3、盐酸：=1.18g/ml4、盐酸溶液（5+95）：在搅拌下，将5ml盐酸缓慢的加到95ml水中，混匀，保存于滴定瓶中。
5、硅胶仪器及设备1、荧光计2、冰箱3、离心机4、电动吸引器5、过滤装置6、玻璃纤维滤膜：直径为25mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜7、具塞离心管：容量10ml8、干燥器9、棕色试剂瓶：容量100ml，1000ml10、量筒：容量100ml、200ml、1000ml11、定量加液器：容量10ml12、镊子一般实验室常用设备分析步骤1、样品制备量取一定体积海水（通常大洋水250ml-500ml，近岸或港湾水50-100ml），加2ml 碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜过滤，过滤负压不得2超过50KPa.2、样品提取将过滤了的样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml丙酮溶液，摇荡，放置冰箱冷藏室14-24h，提取叶绿素-a。
若虑得的样品不能及时提取，应该将滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1摄氏度的冰箱中。
3、样品离心离心速度：（3000-4000）r/min离心时间:10min4、样品测定荧光计激发波长为436nm,发射波长670nm零点调节：用丙酮溶液调节，使荧光计指针指零。
将提取的上层提取液注入测定池。
选择相应量程，测定样品的荧光值R b。
加2滴盐酸溶液至测定池，摇匀，经30s后再测其荧光值Ra。
5、仪器校正用标准叶绿素-a校正。
用分光光度计校正：取一定体积正处于指数增长期的单细胞藻类培养液，依上述方法提取其叶绿素-a，用分光光度法测定，计算该提取液的叶绿素-a浓度。
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
叶绿素a的测定
The determination of chlorophyll a
第八组：四缺一小组
实验目的与意义
初步了解a的测定的原理和常规测 定方法 通过实验水体富营养化水样的前处 理的方法 熟练掌握抽滤装置及分光光度计的 使用
实验原理
浮游植物的主要光合色素是叶绿素，常见的有叶绿素a、b和c.叶绿素a存 在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1~2%是估算浮游植物生物量的 重要指标，因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物量的重要指标而被 广泛应用。 浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效 液相色谱法（HPLC法）、荧光光度计法和分光光度计法等。高效液相色谱法 能够很精确地测定各种光合色素的含量，但由于仪器昂贵，分析操作步骤繁琐， 一般不能用于野外大量样品的快速分析。荧光光度计也能够精确地测定叶绿素 a的含量，特别是能够测定叶绿素a含量较低的样品，但由于分析过程中容易受 其他色素或色素衍生物的干扰，也不利于快速分析各类不同的野外样品。因此， 分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a含量的测定方法。 在所有分光光度计法中，根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和 乙醇法等，再根据比色所用的波长，又分为单色法和多色法（例如单色丙酮法 和四色丙酮法）等。主要的细胞破碎法有研磨、低温冻融、超声破碎等。尽管 丙酮现在仍广泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对蓝 藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。 不过，甲醇对人体毒害性大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为 现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。超声波破碎法因快速、提取效率高等特点 也被研究者所青睐。
时间管理
时间就像海绵里的水，只要愿挤总还是有的! -鲁迅
叶绿素a测定仪使用方法
叶绿素a测定仪使用方法简介叶绿素是一种广泛存在于光合生物中的生物色素，其结构主要由两个部分组成：色素分子和中央离子镁离子（Mg2+）。
其中，叶绿素a是光合作用中最重要的光合色素之一。
叶绿素a的含量检测是研究光合作用强度和生产力的重要手段。
而叶绿素a测定仪可以通过测量植物样品中叶绿素a的吸光度来确定其含量。
本文将介绍叶绿素a测定仪的使用方法。
准备工作所需材料•叶绿素a测定仪•磷酸缓冲液•丙酮•高纯度乙醇•点滴管•显微量移液管•水浴•紫外-可见分光光度计设置光度计首先，需要设置光度计的检测波长。
由于叶绿素a的最大吸收波长为665 nm，因此需要将光度计的检测波长设置为665 nm。
1.打开光度计，在主界面中找到“波长”或“WL”一栏；2.按下调节键（通常是▲/▼）将波长设置为665 nm；3.关闭显示器保护功能（通常按“mode”键）。
注意：在设置波长后，需要进行零点校正。
具体方法请参考光度计的使用说明书。
实验步骤制备样本1.取出所需数量的植物样品，并洗净水分；2.将样品粉碎，并加入适量的磷酸缓冲液；3.混合均匀后，放入80℃水浴中加热10-15分钟，使叶绿素a脱离蛋白质和叶片结构；4.将样品离心分离出上清液，即可进行下一步操作。
取样与添加试剂1.取出约2 mL的上清液，并加入适量的丙酮，使样品溶解；2.用高纯度乙醇将测量池清洗干净，加入约2 mL的丙酮；3.加入1-2滴磷酸缓冲液，搅拌均匀；4.将样品溶液加入测量池中，搅拌均匀。
测量吸光度1.将测量池放入光度计中心；2.关闭图像显示器保护功能；3.按下“测量”键，记录测量值。
注意：每次测量前都需要进行零点校准。
具体方法请参考光度计的使用说明书。
计算结果计算叶绿素a浓度将所记录的吸光度值（A665）代入下列公式：叶绿素a浓度（mg/L）=8.02 × A665计算叶绿素a含量将样品体积（mL）乘以叶绿素a浓度（mg/L），即可得到样品中叶绿素a的含量（mg）。
浅析地表水叶绿素a的测定
浅析地表水叶绿素a的测定地表水是指地球表面流动或静止的水体，是人类生活和生产所必需的重要资源之一。
地表水的质量直接关系到人类的健康和生存环境，其中叶绿素a是一种能够反映水体叶绿素含量的重要指标。
本文将对地表水叶绿素a的测定进行浅析，以期为相关工作者提供一定的参考。
一、地表水叶绿素a的概述叶绿素a是光合作用中最主要的光合色素，也是植物和浮游植物的绿色素。
它是一种重要的生物标志物，是测定水质的重要指标之一。
叶绿素a的含量可以反映水体的营养盐含量、浊度和有机物质等。
一般情况下，水体中含有叶绿素a的浓度越高，其水质也就越差。
测定地表水中叶绿素a的含量对于评价水质具有重要意义。
二、地表水叶绿素a的测定方法1. 比色法比色法是测定叶绿素a含量的常用方法之一，可以根据样品的吸光度值来计算出叶绿素a的浓度。
具体测定步骤为：首先将样品经过预处理后，用特定的波长的光源辐射，测出样品的吸光度值，然后根据已知的标准曲线来计算叶绿素a的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种精密准确的测定方法，通过色谱柱的分离和检测系统的测定，可以快速准确地测定出叶绿素a的含量。
这种方法的优点是测定结果准确可靠，可以应用于对于叶绿素a的精确测定。
3. 荧光法荧光法是一种快速灵敏的测定方法，通过叶绿素a在光照下的荧光特性来快速准确地测定其含量。
这种方法的优点是操作简便，结果迅速，适用于对叶绿素a含量的快速筛查。
三、地表水叶绿素a的影响因素1. 光照条件光照条件是影响叶绿素a含量的重要因素之一，充足的光照可以促进叶绿素a的生物合成，有利于提高其含量。
2. 营养盐含量水体中的营养盐含量是影响叶绿素a含量的关键因素之一，过高或过低的营养盐含量都会影响叶绿素a的生物合成。
3. 温度水体中的温度也会对叶绿素a的含量产生一定的影响，适宜的温度条件有利于叶绿素a的稳定合成和积累。
4. pH值水体的酸碱度也会对叶绿素a的含量产生一定的影响，过高或过低的pH值都会影响叶绿素a的生物合成和稳定性。
水质 叶绿素a 的测定 荧光分光光度法
标题：水质中叶绿素a的测定——荧光分光光度法一、概述水是生命之源，保持水质清洁对人类健康和生态环境至关重要。
叶绿素a是植物和浮游生物体内的主要叶绿素成分，它对于水体中的生物和化学过程具有重要影响。
对水体中叶绿素a的测定具有重要意义。
在众多叶绿素测定方法中，荧光分光光度法以其快速、灵敏、准确的特点而受到广泛关注。
二、荧光分光光度法原理及优势1. 荧光分光光度法原理荧光分光光度法是通过叶绿素a在特定激发光波长下产生荧光信号，并测定荧光光谱的强度来间接测定叶绿素a的浓度的一种方法。
其原理是叶绿素a在特定波长范围内吸收光线后发生激发态转变为基态过程中发射荧光。
通过检测叶绿素a的荧光强度，可以推断水体中叶绿素a的浓度。
2. 荧光分光光度法优势a. 灵敏度高：荧光分光光度法对叶绿素a含量的检测具有高灵敏度，能够在较低浓度范围内进行准确测定。
b. 非破坏性：该方法无需对样品进行破坏性处理，不影响样品原有特性，适用于连续监测和长期调查。
c. 快速准确：荧光分光光度法测定简单快速，结果准确可靠。
三、荧光分光光度法测定叶绿素a的步骤1. 样品采集样品来源于自然水体或实验室模拟水体。
应在样品收集后尽快进行实验分析，或进行样品的冷冻保存。
2. 仪器调试根据仪器操作手册调试荧光分光光度仪，确定最佳激发波长和检测波长。
3. 样品处理将样品进行预处理，如滤过滤膜去除颗粒物，或使用溶解剂提取叶绿素a。
4. 校准仪器利用标准叶绿素a溶液校准荧光分光光度仪，确定荧光强度和叶绿素a浓度的线性关系。
5. 测定样品放置校准后的仪器测定样品荧光强度，根据标准曲线计算叶绿素a 的浓度。
四、荧光分光光度法在水质监测中的应用荧光分光光度法在水质监测中具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 监测水体富营养化程度：叶绿素a是水体富营养化的重要指标之一，荧光分光光度法可以快速准确地测定水体中叶绿素a的含量，从而评估水体富营养化程度。
2. 生态环境评估：荧光分光光度法可对水体中微生物的活性和生态环境进行评估，对水体生物多样性和生态平衡的研究具有重要意义。
叶绿素A的测定
叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于 水，但溶于有机溶剂（通常采用丙 酮），叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素B呈 黄绿色，二者同时被提取出来。在可 见光的范围，两者分别在663nm和 645nm处波长有最大吸收。
叶绿素A的测定方法
利用分光光度法，将所得的上清液在 分光光度计上，用1cm光程的比色皿， 分别读取在 750nm,663nm,645nm,630n m波长处的吸光度，并以90%的丙 酮作空白吸光度测定，对样品吸光度 进行校正。
叶绿素a的测定叶绿素a的测定方法叶绿素a的测定国标叶绿素a叶绿素a测定方法叶绿素a的测定标准叶绿素a的测定公式水体叶绿素a的测定叶绿素含量的测定叶绿素含量测定
目录
1 2 3 4
叶绿素A的测定原理
叶绿素A的测定方法
叶绿素A的测定步骤
叶绿素A的测定影响
叶绿素A的测定原理 有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中 的叶绿素，用分光光度计测定其吸光 度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用 相关公式计算其含量。 叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B,前 者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素 B分子式为C55H70O6N4Mg。
将所测的对应波长的吸光度，代入如 下公式计算： 叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630D750)*V1
式中:D为所测的吸光度 V为水样体积 V1为提取液定容后的体积 L为比色皿光程
叶绿素A的测定步骤
测定叶绿素A时，样品应该尽快测定， 防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温 弱光条件下进行。
控制好提取时间，使得提取更充分，保 证较高的提取效率。
这个实验叫做叶绿素A的测定方法探 讨，实验误差较大，最佳的方法还在 不断地深入研究中，有兴趣的同学可 以查阅相关资料，开动大脑马达，提 出自己的见解。
叶绿素a的测定原理
叶绿素a的测定原理叶绿素a是一种存在于植物和藻类细胞叶绿体中的绿色色素，它起到了光合作用中接受和传递光能的关键作用。
测定叶绿素a的浓度对于研究光合作用的机制以及评估植物和藻类的生长状态具有重要意义。
在实验室中，存在多种方法来测定叶绿素a的浓度，其中包括光度法、荧光法和高效液相色谱法。
下面将重点介绍常用的光度法测定叶绿素a的原理和步骤。
光度法是一种通过测量溶液对特定波长的光的吸收来确定溶液中某种组分浓度的方法。
对于叶绿素a的测定，通常使用的波长为650nm或663nm。
叶绿素a在这两个波长的光下有很强的吸收能力，而溶液中的其他组分对该波长的光吸收较小。
因此，测定叶绿素a的浓度可以通过测量溶液对650nm或663nm光的吸光度来间接确定。
下面是光度法测定叶绿素a浓度的一般步骤：1. 样品制备：将待测样品中的叶绿素a提取到有机溶剂中，一般使用甲醇、乙醇或二氯甲烷等极性较强的有机溶剂作为提取剂。
提取的方法可以根据需求选择，包括搅拌法、超声波法或研磨法等。
提取过程需要避光，以防叶绿素a被光降解。
2. 溶液制备：将提取出的叶绿素a溶解在适当的溶剂中，一般使用甲醇或乙醇等有机溶剂。
溶液中的叶绿素a浓度可以通过分光光度计测定吸光度来确定。
3. 吸光度测定：使用分光光度计，在650nm或663nm的波长下测量样品吸光度。
为了获得准确的测量结果，一般需要对比测量待测样品和纯溶剂的吸光度，以消除对溶剂的吸光干扰。
4. 计算叶绿素a浓度：根据比色法或校正曲线法，将测得的吸光度转换为叶绿素a的浓度。
比色法是通过比较待测样品吸光度与已知浓度叶绿素a标准溶液吸光度的关系，进行定量测定。
校正曲线法是首先制备不同浓度的叶绿素a标准溶液，然后测定它们的吸光度并绘制出吸光度与浓度的标准曲线，通过待测样品的吸光度在标准曲线上插值得到其浓度。
需要强调的是，在测定叶绿素a浓度时，有几个实验注意事项需要注意。
首先，提取过程需要避光，以免叶绿素a被光降解，影响测量结果。
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实验三 富营养化湖中藻量的测定（叶绿素 a 法） 、实验目的
富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中
10微克 /升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素 a 浓度，以考查其富营 养化情况。
二、器材与用品
分光光度计（波长选择大于 750nm ，精度为0.5— 2nm ）。
蔡氏滤器；滤膜（ 0.45 微克，直径 47mm ）。
的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素
a 浓度常大于
1、 2、 比色杯（ 1cm ； 4cm ）。
3、 台式离心机（ 3500r/min ）
4、 离心管（ 15ml 具刻度和塞子） ；冰箱
5、 匀浆器或小研钵。
6、 7、 真空泵（最大压力不超过 300kpa ）。
MgC03悬液：Ig MgC03细粉悬于100ml 蒸馏水中。
90％的丙酮溶液： 90 份丙酮＋ 10 份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各 2L.
三、方法和步骤
8、 9、
1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml ,池塘
300ml 。
采样点及采水时间同“浮游植物” 2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤
剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素
a 分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取 500ml 减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入 0.2ml MgCO 3
悬液、摇匀直至抽干水样。
加入 MgCO 3 可增进藻细胞滞留在滤 膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素 a 被分解。
如过滤后的 载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷
（4C ）暗处保存，放置时间最多不能超过 48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加 2 - 3ml90 %的丙 酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻 度离心管中，用 5ml90%丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加 90%丙酮，使管内总体积为
10ml 。
塞紧塞子并在管子外部罩上
遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取 18－24小时。
离心10min ，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管 中，塞上塞子，3500r/min 在离心10min 。
正确记录提取液的体 积。
6、测定光 密度：藻 类叶绿素 a 具有其 独特的吸 收光谱 (663nm )，因此可以用分光光度法测其含量。
用移液管将提取 液移入 1cm 比色杯中，以 90％的丙酮溶液作为空白，分别在 750、663、645、630nm 波长下测提取液的光密度值( OD )。
注 意：样品提取的 O D 663值要求在 0.2与 1.0 之间，如不在此范围
50－ 5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上 3500r/min ，
内，应调换比色杯，或改变过滤水样量。
OD663小于0.2时，应
该用较宽的比色杯或增加水样量；OD663大于1.0时，可稀释提
取液或减少水样滤过量，使用1cm 比色杯比色。
7、叶绿素a浓度计算：将样品提取液在663、645、630nm波长
下的光密度值( OD663 OD645 O D 630)分别减去在750nm 下的光密度值( OD750) ,，此值为非选择性本底物光吸收校正值。
叶绿
素 a 浓度计算公式如下：
(1)样品提取液中的叶绿素a浓度Ca为:
Ca(微克/升)=11.64 (OD663 —OD750)—2.16 (OD645 —OD750)
+0.1(OD630－OD 750
(1) 水样中叶绿素a浓度为: 叶绿素a(微克/升)=Ca x v/(V x L)
叶绿素a(微克/升)=Ca x v/V x L
Ca:样品提取液中叶绿素a浓度（微克/升） v : 90%丙酮提取液体积（ml）
V :过滤水样的体积（L）
L :比色杯宽度（cm）四、实验报告将测定结果记录于表4-1中
表4—1测定结果
根据测定结果，参照表4-1中指标评价被测水样的富营养化程度。
表4-2湖泊富营养化的叶绿素a评价标准
五、思考题
1、比较两种水样中的叶绿素a浓度，通过本实验你的结论是什么？
2、如何保证水样叶绿素a浓度测定结果的准确性？主要应注意哪几个方面的问题?。