DL-苹果酸检测方法介绍—科标检测
DL苹果酸检测方法介绍科标检测
DL －苹果酸检测方法介绍——科标检测OHOOH HO OC 4H 6O 5科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍：【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。
本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。
熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。
【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。
【检查】比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。
有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸及DL－苹果酸峰的分离度均应符合规定。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含富马酸5µg，马来酸2µg的溶液，作为对照品溶液。
苹果酸、柠檬酸含量测定方法(HPLC)
苹果酸、柠檬酸含量的测定（HPLC法）1）原理苹果酸、柠檬酸在酸性缓冲液中，利用反相键合色谱法将其从样品基质中分离出来，根据该类物质在紫外波长下的吸收进行定性和定量分析。
2）试剂1）溶剂：水，过滤后的二次蒸馏水2）流动相：0.5%的H3PO4/KH2PO4缓冲液，PH=2.81, 含2.5%乙腈3）苹果酸、柠檬酸标准品；纯度99.2%和99.5%4）苹果酸、柠檬酸标准溶液分别准确称取苹果酸、柠檬酸标准品0.2g 和0.02g ，精确至0.0001g，用过滤后的二次蒸馏水将标准品溶解，转移、定容于50ml容量瓶中，混匀后贴标签备用。
5）苹果酸、柠檬酸标准工作溶液分别将上述标准品贮备液以5倍和10倍比例稀释，得到三个不同浓度的系列，在给定的色谱条件下，每一浓度样品进样三次，然后绘制出标准工作曲线。
标准溶液应避光，在0~4℃下贮存，标准液贮存期不超过二个月。
3）仪器所使用的玻璃仪器必须是洁净的。
3.1 液相色谱：单元泵，可变波长检测器，化学工作站。
3.2 色谱柱：ODS反相柱150mm * 4.6mm(ID).5um填充颗粒。
3.3 进样器：20ul微量进样针3.4 色谱条件：流动相：0.5%H3PO4/KH2PO4缓冲液（PH=2.81）；含0.025%乙腈。
流量：1.0ml/min柱温：40℃检测波长：206nm进样量：5ul保留时间：苹果酸2.5min；柠檬酸3.5min以上条件是典型条件，可根据情况对给定参数作适当调整，以确保方法的稳定性和耐用性。
4）测定步骤4.1样品溶液的制备称取浓缩果汁 4.0~5.0g 或清汁10ml，精确至0.01g，用二次蒸馏水将其溶于50ML 容量瓶中，定容至刻度，混匀后，用0.45um滤膜的过滤器将其过滤至样品瓶中，贴上标签备用。
4.2 测定：在以上色谱条件下，运行仪器和测试方法，待基线稳定后，按照标准溶液、样品的顺序进样。
4.3计算根据标准液绘制的标准曲线进行外标法定量，保留时间和响应因子均由标准液确定。
苹果酸检测方法
制Hale Waihona Puke 每 1ml 中约含富马酸 10µg，马来酸 4µg，DL－苹果酸 1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取 20µl，注入液相色谱仪，理论板数按 DL－苹果酸峰计算不低于 2000，富马酸和马来酸及 DL－苹果酸峰的 分离度均应符合规定。 测定法 取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每 1ml 中约含 1mg 的溶液，作为供试品溶 液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每 1ml 中含富马酸 5µg，马来 酸 2µg 的溶液，作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各 20µl 注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保 留时间的 4.5 倍。 供试品溶液的色谱图中如有与富马酸和马来酸峰保留时间一致的峰， 按外标法以峰面积 计算，其含量分别不得过 1.0％和 0.05％。其它单个杂质峰面积不得过对照品溶液中马来酸峰面积的 0.5
DL－苹果酸检测方法介绍
——恒信检测
O HO O OH OH
C4H6O5 恒信检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪 器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以 下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍： 【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。 本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。 熔点 本品的熔点（中国药典 2005 年版二部附录 VI C）为 128℃～132℃。
【鉴别】 （1） 取本品约 0.5g，加水 10ml 使溶解，用氨水调 pH 值至中性，加 1%对氨基苯磺酸溶液 1ml，在沸水浴中加热 5 分钟，加 20%亚硝酸钠溶液 5ml，置水浴中加热 3 分钟，加 4%氢氧化钠溶液 5ml， 溶液应立即呈红色。 （2） 本品的红外光吸收图谱应与 DL－苹果酸对照品的图谱一致 （中国药典 2005 年版二部附录Ⅳ C） 。 【检查】 比旋度 取本品， 精密称定， 加水溶解并稀释制成每 1ml 中含 0.2g 的溶液， 依法测定 （中国药典 2005 年版二部附录 VI E） ，比旋度为－0.10～＋0.10。 有关物质 照高效液相色谱法（中国药典 2005 年版二部附录 V D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂， 以 0.005mol/L 硫酸溶液为流动相； 检测波长为 210nm；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释
L-苹果酸gb13737-92
中华人民共和国国家标准GB 13737-92食品添加剂L-苹果酸Food additive L-Malic acid━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1 主题内容与适用范围本标准规定了食品添加剂L-苹果酸的技术要求、试验方法、检验规则和及标志、包装、运输和贮存等本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的L－苹果酸。
该产品主要用作食品的酸度调节剂。
化学名称L-羟基丁二酸分子式：C4H6O5结构式：HO—CH—COOH｜CH2—COOH相对分子质量：134.09(按1989年国际相对原子质量)2 引用标准GB 601 化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备GB 602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB 613 化学试剂比旋光度测定通用方法GB 6678 化工产品采样总则GB 6682 实验室用水规格GB 8450 食品添加剂中砷的测定方法GB 8451 食品添加剂中重金属限量试验法GB 9728 化学试剂硫酸盐测定通用方法GB 9729 化学试剂氯化物测定通用方法GB 9741 化学试剂灼烧残渣测定通用方法3 技术要求3.1 外观性状:白色结晶或结晶粉末,有特殊的酸味。
3.2 食品添加剂L-苹果酸钾应符合下表要求。
━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━项目┃指标━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━含量(以C4H6O5计),％≥┃99.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━20 ┃比旋光度〔α〕, °┃－1.6～－2.6D ┃━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━硫酸盐(以SO4计),％≤┃0.03━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━氯化物(以Cl计),％≤┃ 0.005━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━砷(以As计),％≤┃ 0.000 2━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━重金属(以Pb计),％ ≤┃ 0.002━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━灼烧残渣,％ ≤┃0.10━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━易氧化物┃合格━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━澄清度┃合格━━━━━━━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━━4 试验方法除特殊注明外,试验中所用的试剂为分析纯试剂;试验用水应符合GB 6682中三级水规格;试验所需分析用标准溶液、杂质测定用标准溶液以及所用试剂及制品分别按GB 601 GB 602、GB603规定配制。
DL-苹果酸
DL －苹果酸PingguosuanMalic AcidOHOOH HO OC 4H 6O 5 134.09[617-48-1]本品为(RS)-(±)-羟基丁二酸，按无水物计算，含C 4H 6O 5不得少于99.0％。
【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。
本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。
熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。
【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。
【检查】比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。
有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸及DL －苹果酸峰的分离度均应符合规定。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含富马酸5µg，马来酸2µg的溶液，作为对照品溶液。
食品添加剂 L-苹果酸标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品添加剂L-苹果酸1 范围本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的食品添加剂L-苹果酸。
2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1 化学名称L-羟基丁二酸2.2 分子式C4H6O52.3 结构式2.4 相对分子质量134.09（按2007年国际相对原子质量）3 技术要求3.1 感官要求感官要求应符合表1的规定。
表1 感官要求3.2 理化指标理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标附录A检验方法A.1 警示试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。
操作者应采取适当的安全和健康措施。
A.2 一般规定本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。
试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的规定制备。
试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.3 鉴别试验A.3.1 试剂和材料A.3.1.1 氨水溶液：2+3。
A.3.1.2 对氨基苯磺酸溶液：10 g/L。
A.3.1.3 亚硝酸钠溶液：200 g/L。
A.3.1.4 氢氧化钠溶液：40 g/L。
A.3.2 鉴别方法A.3.2.1 苹果酸氨盐呈色试验称取0.5 g试样，精确至0.01 g，置于50 mL试管中，加入10 mL水溶解。
用氨水溶液中和至中性，加入1 mL对氨基苯磺酸溶液，在沸水浴中加热5 min。
加入5 mL亚硝酸钠溶液，再置于水浴加热3 min 后，加入5 mL氢氧化钠溶液，试验溶液应立即呈红色。
A.3.2.2 旋光特性试验试验方法同A.5，试样水溶液应呈左旋特性。
A.4 L-苹果酸(C4H6O5)含量的测定A.4.1 方法提要以酚酞为指示剂，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定试样水溶液，根据氢氧化钠标准滴定溶液的用量，计算以C4H6O5计的总酸含量为L-苹果酸含量。
A.4.2 试剂和材料A.4.2.1 无二氧化碳的水。
苹果酸和柠檬酸的测定报告 (1)
生物仪器分析课程实验报告姓名：开课时间：2016－2017学年第 2学期授课教师：一、实验目的1、了解液相色谱仪的基本原理、结构及使用注意事项。
2、掌握液相色谱的操作方法。
二、实验原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC）又叫做高压或高速液相色谱，是色谱法的一个重要分支。
它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
果汁中含有多种有机酸，苹果酸和柠檬酸是果汁中重要的有机酸。
样品经离心及过滤后，直接注入反相液相色谱体系，以磷酸二氢铵为流动相，经分离后采用紫外检测器在210nm处外标法定量分析。
三、实验简要步骤（最好以流程图形式表达）1、标准溶液的配制：分别准确称取100mg苹果酸及柠檬酸标准标准品并用超纯水定容至100mL，配制成1000mg/L的贮备液。
然后分别吸取上述溶液2mL、4mL、8mL、10mL定容到10mL（相当于浓度200mg/L、400mg/L、800mg/L、1000mg/L），配制标准品混合溶液；2、样品的处理：将样品经0.45μm水相微孔滤膜过滤后备用；3、流动相的配制及过膜：0.05mol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调节至pH=2.5）配制，并过膜，脱气；4、高相液相色谱仪操作流程：1）开机顺序：点击电脑图标，听到哔哔两声则说明仪器和LCsolution工作站已连接上。
（关机顺序完全相反）2）柱平衡排气（Purge）：使用前按A泵、B泵和进样器的Purge键进行自动排气排杂。
3）流动相选择事先处理好的无机相0.05mol/L磷酸二氢铵在A泵输送。
4）工作站LCsolution中的系统设置及开启①在LCsolution中，点击“Normal”，对时间程序和结束时间（通过单标保留时间定性，第一次设置时间可设置久一点）、泵（Pump）、柱温（Oven）、总流速（Total Flow）、B泵浓度（Pump B Conc）进行设置；②点击高级设置“Advanced”，选择泵“Pump”，选择二元梯度洗脱模式、对A泵B泵流速进行详细设置；③选择“PDA”，打开所需要的检测灯（Lamp）、检查波长（要包括所检验的波长，紫外区范围190~1100nm）；④设置好之后，保存检测方法（Save Method File As..），再下载（点击“DownLord”）,然后开始运行。
l-苹果酸质量标准
l-苹果酸质量标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：l-苹果酸，英文名为l-Malic acid，是一种广泛存在于自然界中的有机酸，常见于水果和植物中。
l-苹果酸是苹果和其他水果中的主要成分之一，具有许多重要的生物学功能和应用价值。
在食品工业中，l-苹果酸被广泛用于调味剂、酸味剂、抗氧化剂和蓄电剂等方面。
为了确保l-苹果酸的质量和安全性，各国纷纷制定了相应的质量标准，以规范l-苹果酸的生产和使用。
一、l-苹果酸的生产l-苹果酸可以通过化学合成和生物发酵两种方式生产。
化学合成主要采用马来酸和乳酸为原料，经过一系列的反应制得l-苹果酸。
而生物发酵则是通过细菌或真菌发酵产生l-苹果酸，这种方法更环保和可持续，受到越来越多生产商的青睐。
1.外观：l-苹果酸应为无色晶体或结晶性粉末，无明显杂质。
2.纯度：l-苹果酸的纯度应在99.0%以上，水分含量应在2.0%以下。
3.重金属：l-苹果酸中不得检出铅、镉、汞等重金属及其化合物。
4.微生物指标：l-苹果酸中不得含有大肠杆菌、霉菌和酵母菌等微生物。
5.残留溶剂：l-苹果酸不得使用禁用的有机溶剂进行生产，且不得检出有机溶剂残留。
6.其他有害物质：l-苹果酸中不得含有对人体有害的物质，如重金属离子、农药残留、放射性物质等。
1.食品工业：l-苹果酸是一种天然有机酸，被广泛用于食品工业中作为酸味剂、酸度调节剂和防腐剂等，能够改善食品的口感和保质期。
2.医药工业：l-苹果酸具有抗氧化、抗菌和抗病毒等生物活性，被用于医药工业中制备药品或保健品。
3.化妆品工业：l-苹果酸被广泛添加在化妆品中，具有保湿、抗氧化和美白等功效，能够改善肌肤质地。
l-苹果酸虽然被认为是一种相对安全的食品添加剂，但过量摄入也会对健康造成影响。
长期大量食用l-苹果酸可能会引发食道炎、肠胃炎等消化系统疾病，应注意适量食用。
第二篇示例：l-苹果酸是一种常见的有机酸，具有多种生物活性和医疗应用价值，广泛应用于食品添加剂、医学和农业领域。
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DL －苹果酸检测方法介绍
——科标检测
OH
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C 4H 6O 5
科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍：
【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。
本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。
熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。
【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。
【检查】
比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。
有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸
及DL－苹果酸峰的分离度均应符合规定。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含富马酸5µg，马来酸2µg的溶液，作为对照品溶液。
精密量取上述两种溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4.5倍。
供试品溶液的色谱图中如有与富马酸和马来酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量分别不得过1.0％和0.05％。
其它单个杂质峰面积不得过对照品溶液中马来酸峰面积的0.5倍（0.1%）；其它杂质总量不得过对照品溶液中马来酸峰面积的2.5倍（0.5%）。
溶液的澄清度与颜色取本品5.0g，加水25ml，充分振摇使溶解，溶液应澄清无色（中国药典2005年版二部附录IX A B）。
水分取本品，照水分测定法（中国药典2005年版二部附录Ⅷ M）测定，含水分不得过2.0%。
水中不溶物取本品25.0g，加水100ml使溶解，用经100℃恒重的4号垂融坩埚滤过，反复用热水冲洗滤器后，在100℃干燥至恒重，遗留残渣不得过0.1％。
易氧化物取本品0.10g，置100ml蒸发皿中，加水25ml及硫酸溶液（1→20）25ml使溶解并摇匀，置20±1℃水浴中冷却，加入0.02mol/L高锰酸钾滴定液5ml,溶液的颜色应在3分钟内不消失。
氯化物取本品1.0g,依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ A），与标准氯化钠溶液5.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.005％）。
硫酸盐取本品1.0g,依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ B），与标准硫酸钾溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.03％）。
砷盐取本品1.0 g,加盐酸5ml与水23ml,依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ J第一法），应符合规定（0.0002％）。
炽灼残渣不得过0.1％（中国药典2005年版二部附录Ⅷ N）。
重金属取本品1.0g，加氢氧化钠试液5ml与水20ml使溶解，依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ H第三法），含重金属不得过百万分之二十。
【含量测定】取本品约1.0g,精密称定，置250ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，置锥形瓶中，加酚酞指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至显微红色并保持30秒内不褪色。
每1ml氢氧化钠滴
定液（0.1mol/L）相当于6.704mg的C
4H
6
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5。