遗传实验：果蝇唾液腺染色体的制片与观察
果蝇唾液腺染色体的制片与观察
果蝇唾液腺染⾊体的制⽚与观察果蝇唾液腺染⾊体的制⽚与观察121140083 朱琪璋⼀实验⽬的1观察果蝇的唾腺染⾊体，练习果蝇幼⾍唾腺分离技术及唾腺染⾊体的制⽚⽅法2观察了解果蝇唾液腺染⾊体的形态特征3了解果蝇唾腺染⾊体在遗传学研究中的意义⼆实验原理（预备知识）1果蝇唾液染⾊体的介绍果蝇、摇蚊幼⾍唾液腺细胞中的巨⼤染⾊体。
双翅⽬昆⾍的唾液腺细胞发育到⼀定阶段之后就不再进⾏有丝分裂，⽽永久停留在分裂间期。
但随着幼⾍的⽣长，唾液腺染⾊体仍不断地进⾏⾃我复制⽽且不分开，经过许多次的复制形成约 1 000—4 000拷贝的染⾊体丝，合起来直径达5µm，长度达400µm，⽐普通细胞中期染⾊体约⼤100～150倍，所以⼜称为多线染⾊体或巨⼤染⾊体。
唾液腺染⾊体的另⼀特点是体细胞中同源染⾊体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。
在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋⽩纤维丝唾液腺染⾊体是⼀类存在于双翅⽬昆⾍，如果结合在⼀起，紧密盘绕。
所以细胞中染⾊体只呈单倍数。
⿊腹果蝇的染⾊体数⽬2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染⾊体为中部着丝粒染⾊体，第Ⅳ染⾊体和第IX染⾊体为端着丝粒染⾊体。
唾液腺染⾊体形成时，染⾊体着丝粒和近着丝粒的异染⾊质区聚于⼀起形成⼀个染⾊中⼼，所以在光学显微镜下可见从染⾊中⼼处伸出6条配对的染⾊体臂，其中5条为长臂，l条为紧靠染⾊中⼼的很短的臂。
唾液腺染⾊体经染⾊后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹。
这些横纹的数⽬，位置，宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。
研究认为这些横纹与染⾊体的基因是有⼀定关系的。
通过⼀定的实验⽅法使果蝇唾液腺染⾊体各臂分散开，并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显⽰出来，是进⾏果蝇遗传学研究的很重要的⼀个环节．果蝇唾液腺染⾊体在不同种间的共同点是染⾊体的着丝点位于⼀个染⾊区域，但不同的种类往往其染⾊体臂数⽬不同．每条染⾊体臂上分布着染⾊深浅不同、粗细各异的磺纹，这些横纹的宽窄疏密程度以及排列顺序和数⽬⼜都有种的特异性和种内的差异．由此，果蝇唾液腺染⾊体近⼏⼗年来，已⼴泛⽤于种内系统发⽣和种间亲缘关系的研究中，因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染⾊体的不联会、形成泡、缢虞和间带区的伸缩性以及顶体的形态等多⽅⾯的差异，⽽特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产⽣了例位以及染⾊体的断裂、融合和重排)。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第1页
一、试验目标
1.了解唾腺CS特点 2. 学习分离唾腺技术 3. 掌握唾腺CS制片方法
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第2页
二、试验原理
• 永久间期CS • 复制而不分开 与观察
第3页
果蝇唾腺染色体特点：
• 剥离唾腺置载片中央,加一滴HCl,解离23
• 吸去HCl,冲洗23次,吸干;加1d染液,染色5
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第18页
4. 压片及观察
• 载片置平整处,加盖 片,轻敲;压片
• 低倍至高倍镜检
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第19页
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第20页
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第21页
五、注意事项
1. 水不可太多,不然幼虫会漂浮而且活跃 2. 一定加生理盐水,不然唾腺易干 3. 将脂肪组织去除洁净 4. 吸水时勿将唾腺一起吸走 5. 染色时间不可过长,不然背景也着色 6. 压片时要揉,用力要均匀
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第22页
六、作业
1. 制效果很好唾腺CS暂时片1-2张 2. 真实绘制观察到唾腺CS绘图 3. 思索题P66 1-2
4.Puff结构：幼虫不一样发育期，浓缩染色质纤维会成群解 旋、松开，形成泡状涣散结构，使对应基因得以表示，这 种泡状结构称Puff结构，亦称染色体疏松。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第7页
三、试验材料、器具、药品试剂
• 大果蝇(D. virilis)活体三龄幼虫 • 解剖镜,显微镜,培养箱;培养瓶,
1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um， 长约400um，相当于普通染色体100—150倍，因而又称为巨 大染色体。
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。
目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。
了解唾腺染色体的作用和意义。
１．引言果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。
因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。
1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。
Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。
２．实验材料和方法２．１实验材料受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油生理盐水、香柏油、镜头纸。
２．２实验方法２．２．１实验材料的获取和处理（1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。
（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。
幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。
拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。
去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。
实验四 果蝇唾腺染色体的制备和观察
五、注意事项
1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 将脂肪组织清除干净 3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃 4. 染色时间不可过长，否则背景也着色 5. 压片时要逐渐加力，用力要均匀 6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色 液，再压片 7. 吸水时勿将唾腺一起吸走
六、实验结果观察
动物遗传学实验
实验四
果蝇唾腺染色体的 制备和观察
一、实验目的
1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染
色体的制片方法
2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学
特征
二、实验原理
果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其 中的染色体是巨大的唾液腺染色体 唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许 多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起 来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多 （约100～150倍），所以又称为多线染色体 唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许 多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等 提供了独特的研究材料
三、实验材料与器具
• • • • 三龄幼虫 0.9%生理盐水 胭脂红染色液 解剖镜 解剖针 吸水纸
四、实验步骤(1)
(1)剥离唾腺 在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、 肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温 处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。 每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。果蝇 的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体 后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫 头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。 唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织 （不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白 色脂肪剥离干净。
遗传学实验实验九果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
将涂片放入盛有胃酶的 容器中，用吸管或滴管 滴加适量的胃酶溶液， 使涂片完全浸没在溶液 中。在适宜的温度下处 理一定时间，使唾腺细 胞分离。
将经过胃酶处理的涂片 取出，用吸管或滴管滴 加适量的胰酶溶液，再 次放入适宜温度下处理 一定时间，使染色体逐 渐分离出来。
将涂片用清水冲洗干净 ，用吸水纸吸干水分， 然后进行染色。
通过观察果蝇唾腺染色体标本的次级 结构，可以发现染色体的精细结构， 如染色粒、染色带等特征，有助于研 究染色体的功能和基因定位。
染色体交叉互换
在某些情况下，果蝇唾腺染色体标本 中可能会出现染色体交叉互换的现象 ，这种现象可能与基因重组和遗传变 异有关。
05
实验结论
实验结果总结
成功制备了果蝇唾腺 染色体标本，观察到 了清晰的染色体结构。
掌握果蝇唾腺染色体的观察技术
学习并掌握显微镜观察技术，包括显 微镜的基本操作、调节焦距、观察视 野等。
学习并掌握染色体标本的制备和染色 技术，了解其原理和方法步骤。
分析果蝇唾腺染色体的特点
观察并记录果蝇唾腺染色体的形 态、大小、着丝粒位置等信息，
分析其特点。
比较不同种类的果蝇唾腺染色体 的差异，分析其与物种进化的关
3. 准备载玻片和盖玻片
将载玻片和盖玻片清洗干净，晾干备用。
安全须知
实验过程中应注意安全，避免直接接触染色液和化学试 剂，如需使用手套等防护措施。
唾腺染色体的制备
制备涂片
胃酶处理
胰酶处理
冲洗涂片
安全须知
用镊子小心地从果蝇头 部取下唾腺，将其放在 干净的载玻片上，用另 一片载玻片将其轻轻压 平，形成一层均匀的涂 片。
通过实验，深入了解 了果蝇唾腺染色体的 形态和结构特点。
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。
二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。
果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。
由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。
三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。
在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。
A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。
B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。
果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。
在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。
实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。
2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。
将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。
首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。
解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。
在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。
遗传实验3—果蝇唾液腺染色体制片与观察
压片
❖ 盖上盖玻片（避免气泡），保证盖玻片下充满染液。 ❖ 解剖针轻敲样本正上方使组织细胞分散。 ❖ 扶住盖玻片边缘，用拇指快速按压样本正上方并维持压
力3秒钟，使细胞膜破裂，细胞质流走，染色体散开。 ❖ 滤纸吸干多余染液
果蝇唾液腺染色体制片与观察
实验目的
❖ 掌握果蝇唾液腺染色体的制片技术 ❖ 观察唾腺染色体的形态特点
实验材料及流程
❖ 果蝇三龄幼虫 melanogaster 2n=8 virilis 2n=12
流程：剥离唾液腺-解离-染色-压片-镜检
解剖幼虫
❖ 工具：镊子、解剖针 ❖ 生理盐水(0.7% NaCl)中操作、保存。注意液体量的
控制
解剖幼虫-拉断
❖ 唾腺位置：头部两侧、位置在虫体的1/3-1/4 ❖ 两根解剖针的落点：近头端口器 1/3-1/2处 ❖ 口器处解剖针平稳前移，身体破裂，一部分器官随口器
牵拉而出，另一解剖针向前滚动挤出剩余器官。
解剖幼虫-找到唾液腺
❖ 4倍镜下寻找唾液腺（光圈10，淡黄色条状） ❖ 对比肉眼观察，锁定唾腺目标，透明条状，倒像 ❖ 体视镜下唾腺透明度很高不利于寻找
解剖幼虫-剥离唾液腺
❖ 体式镜下剥离唾液腺（肉眼辨认也可） ❖ 解剖针定期引流，维持湿环境
体视显微镜 *
❖ 双物镜 ❖ 立体视觉 ❖ 正像 ❖ 超长焦距 ❖ 放大倍数连续调节
滤纸吸干液体-换液
❖ 一定注意保护样本，不要将其吸到滤纸上 ❖ 液体较多时滤纸离样本远一点，随着液体减少再逐渐靠
近样本解离-水洗-染色 Nhomakorabea镜检
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察一、实验目的1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法；2、观察果蝇的唾腺染色体。
二、实验原理1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。
唾腺染色体的显著特征是：（1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍；（2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；（3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。
唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。
横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。
横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记；（4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。
唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。
一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。
许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。
果蝇唾液腺：2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，构成一个永久间期系统。
唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。
由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流程：剥离唾液腺-解离-染色-压片-镜检
1 剥离唾液腺
❖ 唾腺位置：头部两侧、位置在虫体的1/3-1/4 ❖生理盐水：0.7% NaCl *
2 解离 *
❖ 目的：破坏胞间质及组织结构，使细胞容易散开 ❖方法：1M HCl 室温 处理3-5min
多线染色体的生理意义 *
❖ 分泌腺体需要在一定空间范围内具备高效分泌的 能力——细胞体积大、蛋白合成能力强。
❖ 多线染色体能够增加细胞核体积，进而增加细胞 体系。
❖ 多线染色体每一个基因具有数千拷贝，为细胞提 供更高的基因表达水平，提高蛋白合成能力。
多线染色体的形态特点 *
❖1 拟联会（体细胞联会）：同源染色体的同源臂 紧密结合，在DNA复制过程中新产生的染色质纤 丝互相缠绕，在光学显微镜石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异 染料
❖ 步骤： 1 滴加1-2滴染色液 2 染色8min
4 压片
❖ 单侧慢放盖玻片（领取） ❖ 用解剖针轻敲样本上方使其组织细胞分散 ❖ 用拇指按压载玻片使细胞膜破裂，细胞质流走，
染色体臂散开
5 镜检
JLU
果蝇唾液腺染色体的制片与观察
多线染色体（polytene chromosome）*
❖ 1881年首次发现
❖ 在双翅目昆虫的分泌组织细胞内存在一种光学显 微镜下可见的巨大染色体。称为多线染色体，是 细胞内持续进行的DNA的复制造成的。这种细胞 不分裂而DNA持续复制的现象被称为核内有丝分 裂（endomitosis）。多线染色体的每一条染色单 体都拥有数千个拷贝。
多线染色体的带型（banding pattern）*
❖ 深色带：螺旋程度高、难接近、非活化 ❖ 浅色带：螺旋程度低、易接近、活化 ❖ 胀泡（puff）：基因活跃转录区域
❖ 带型：种属特异性（缺失、重复、倒位、易位）
实验目的
❖ 掌握果蝇唾液腺染色体的制片技术 ❖ 了解唾腺染色体的形态特点。
实验材料及流程 *
❖2 染色中心：所有染色体的着丝粒及附近的异染 色质区域都集中在一起，染色后形成一个深色的 染色中心。
3 多线染色体形态：以染色中心为中心，向四周伸 出数条拟联会染色体臂。
果蝇唾液腺染色体形态 *
❖黑腹果蝇 2n=8
❖5长臂 1短臂
果蝇唾液腺染色体形态 *
❖virilis果蝇 2n=12
❖5长臂 1短臂