实时定量PCR仪简明用户手册
7500 实时荧光定量 PCR 系统手册说明书
7500 Real-Time PCR System ManualAMPLIFICATION CURVES ANALYSIS CREATE THE TEMPLATEOpen the software and select New Experiment . To perform further analysis of results with the Genvinset ® Report Viewer software, it is important to correctly create the template before the run.1. Set up the experiment properties and in Experiment type, select Quantitation - Standard Curve .2. Go to Setup > Plate Setup ,a) In the Define Targets and Samples tab, add new targets, name the genes and select the reporter asspecified in Figure 2. For multi-reaction kits, add the target genes of all reactions. b) In the Assign targets and Samples tab, select none as passive reference.3. In the Setup > Run Method tab set the amplification program.4. To save the setup of the experiment to use it on further occasions, click ok File > Save As Template .Figure 2: Exact gene spellingFigure 1: Quantification analysisIMPORTANT : To perform further analysis with the Genvinset ® Report Viewer software, genes must be named exactly as it is specified in the software manual (Figure 2).SET UP THE EXPERIMENT FROM DESKTOP SOFTWARE1. Start the software and create a new experiment from template. Select the template previously created.2. In the Plate Setup tab add samples in the Define Targets and Samples tab. Click on Assign Targets andSamples to set up the plate.3. Select the wells and tick the box of the corresponding targets and samples.4. Go to the Run tab and click on Start Run .RESULTS ANALYSISOnce the run is finished, visualize the amplification curves in linear scale to check the correct shape of the amplification curves:- An amplification curve is considered positive if a quick and regular (exponential) increase of fluorescence values is observed (sigmoidal amplification) with Ct<35.-A weak fluorescent or background lineal or exponential signal with Ct>35 should not be considered a positive amplification.The Ct value is the cycle number at the point where the amplification curve crosses a threshold of detection. By setting a threshold line and calculating the intersection with each of the curves, the Ct value for each sample is established.When setting a threshold manually, it should be set in the exponential phase of the run, significantly above the background level to avoid noise and below the onset of the plateau phase in later cycles.Figure 3: Plate set upTo show the amplification curves, click on Analysis > Amplification Plot . The data collected during the cycling stage of PCR amplification will be displayed.PLOT CONFIGURATIONThe following settings may help in the results visualization and interpretation: •Plot settings− Plot Type : ΔRn vs. Cycle − Graph Type : Linear − Plot colour : Target• Plot Properties: Within the Amplification Plot window, click on the icon shown in Figure 5 to edit Plot Properties .•Options: In the lower side of the Amplification Plot window, the following parameters can be set:− Target : this option allows to select which target is displayed in the graph. All targets can be displayed atonce or separately.− Threshold : uncheck all the boxes, as shown in Figure 6. − Show : check only the threshold box, as shown in Figure 6.SET THE THRESHOLDFor each target gene, follow the next steps:1. Click on Analysis Settings (in the top-right corner).2. Deselect C T Settings to Use: Default Settings .3. Deselect Automatic Threshold .Figure 6: Options menuFigure 7: C T settingsFigure 4: Plot SettingsFigure 5: Plot Properties settings4. Deselect Automatic Baseline . Set 3 as the Baseline Start Cycle and 18 as the Baseline End Cycle.5. Click Apply .6. Click on Rea nalyse to reanalyse to experiment with the new settings.Once the threshold line is on display, it can be manually moved up and down to find the desired position. Adjust the threshold line above the background signal, so that it crosses close to the inflexion point of the amplification curves. The threshold line should slightly exceed the value of the highest fluorescence obtained with negative samples for the allele detected in this channel.EXPORT THE FILEThe process to obtain a file to export to the Genvinset ® Report Viewer software is the following: File > Export An Export Data window will appear. Make sure that the Results box is selected by default. If not, check it. Name the file and chose an export file location. Finally, select the (*.xls) type of file and click on Start Export .ALLELIC DISCRIMINATION (SCATTER PLOT)IMPORTANT : Genvinset ® Report Viewer software is only able to analyse experiments interpreted by amplification curves in genotyping experiments.Figure 8: Amplification plotNote 1: Before exporting the file, beware that genes should be named (exact spelling) as described in the Genvinset ® Report Viewer User’s Guide. This is important for ensuring the proper working of the Genvinset ® Report Viewer software.CREATE THE TEMPLATEThe steps to design the experiment are the following:1. Open the software and follow the next route: File > New Experiment2. In the Setup > Experiment Properties tab, select the Genotyping option, as shown in Figure 9.3. In the Setup > Plate Setup tab, edit the SNP Assay introducing the name of the experiment, the name ofeach allele to be detected and the fluorophores assigned, as shown in Figure 10. The mutated allele will be detected in the FAM channel, whereas the wild type allele will be detected in the HEX/VIC channel.4. In the Setup > Run Method tab set the amplification program.5. Last, click ok File > Save As Template .SET UP THE EXPERIMENT FROM DESKTOP SOFTWARE1. Start the software and create a new experiment from template. Select the template previously created.2. In the Plate Setup tab, add the samples to be analysed.Figure 9: Genotyping analysisFigure 10: Allele setupFigure 11: Plate set up in genotyping analysis3. Select the wells and tick the box of the corresponding SNP assays and samples.4. Go to the Run tab and click on Start Run .RESULTS ANALYSISOnce the run is finished, visualize the amplification curves in linear scale to check the correct shape of the amplification curves, as stated in the homologous section in Amplification curves analysis .SCATTER PLOTThe Allelic Discrimination Plot is displayed in Experiment Menu > Analysis for the selected SNP assay. Once you click anywhere on the graph, the data points in the plot change to the call colours. Use Plot type: Cartesian.To perform manual calls, click-drag to select the samples in the plot and select the allele call from the Apply Call drop-down list.EXPORT THE FILEOn the top-right toolbar, click File > ExportAn Export Data window will appear. Make sure that the Results box is selected by default. If not, check it. Name the file and chose an export file location. Finally, click on Start Export .Figure 12: Allelic discrimination plot。
简化PCR仪使用方法说明书
简化PCR仪使用方法说明书PCR仪使用方法说明书一、简介PCR（聚合酶链式反应）仪是一种用于扩增DNA片段的仪器。
本说明书将详细介绍PCR仪的使用方法，旨在帮助用户快速上手操作并获得稳定可靠的实验结果。
二、仪器准备1. 环境准备确保实验室温度稳定在22-25℃，相对湿度保持在40%-60%。
2. 仪器检查* 检查PCR仪电源是否连接并插入适当的插座。
* 检查仪器的温度控制装置，确保其工作正常。
* 检查反应管孔，确保无污染或损坏。
3. 试剂准备根据实验需要，准备好PCR反应液的各种试剂，如DNA模板、引物、酶、缓冲液等。
三、操作步骤1. 反应管装载* 准备一张PCR反应管载荷表，记录每个反应管中的试剂和样品。
* 将所需试剂按照实验设计加入PCR反应管中。
* 使用适当的标签标记每个反应管以便于识别。
2. 反应管密封* 安装好PCR反应管盖或透明密封膜，确保完全封闭，避免样品蒸发或污染。
3. 程序设置* 打开PCR仪软件，并连接仪器。
* 根据实验要求，在软件界面中设置反应温度、时间等参数。
4. 仪器运行* 在PCR仪软件中选择所需的PCR程序。
* 确保仪器盖板完全关闭，并启动PCR仪程序。
5. 实验结果分析* 实验结束后，从PCR仪中取出反应管。
* 根据实验目的，可以使用凝胶电泳或其他方法对反应产物进行分析。
四、注意事项1. 实验操作* 操作前请先彻底洗手，并佩戴实验手套，避免样品污染。
* 操作过程中，注意避光并尽量减少反应管开盖的次数。
2. 仪器安全* 在操作过程中，避免触摸仪器的加热块，以免烫伤。
* 使用完毕后，及时关闭PCR仪电源，并拔掉电源插线。
3. 废弃物处理* 废弃物（如实验管、试剂、手套等）请按照实验室规定的生物废弃物处理要求进行处理。
五、故障排除1. 仪器无法启动* 检查电源连接是否正常。
* 确保插座电源正常，尝试使用其他插座。
* 如果仍无法解决问题，请联系仪器维修人员。
2. 温度控制异常* 检查仪器温度传感器是否正常。
Agilent Real-time qPCR 检测 操作手册说明书
Real-time qPCR 检测操作手册1/ 6一、实验概述Real-time Quantitative PCR Detecting System ，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，简称qPCR 。
是一种在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程，最后通过特定数学原理对未知模板进行定量分析的方法，实现了PCR 从定性到定量的飞跃。
二、实验流程三、实验材料： 1.主要试剂试剂名称 试剂来源 Cat.No. Trizol 上海普飞 3101-100 M-MLV promega M1705 dNTPs promega U1240 oligo dT 上海生工 B0205 Bulge-LoopTM miRNA广州锐博 详见实验报告 qPCR Primer Set Rnase Inhibitor promega N2115 Primer(R&F) 上海生工 详见实验报告 SYBR Master MixtureTAKARADRR041B2/ 6样本收集Trizol 法抽取RNARNA 反转录获取cDNAReal-time qPCR2.主要器材器材名称来源Cat.NoNanodrop 分光光度计Thermo 2000/2000C稳压电泳仪上海天能EPS-600超细匀浆机FLUKO公司F6/10Real time PCR 仪器Agilent公司MX3000p反转录耗材Axygen四、实验步骤：1.总RNA 抽提（1）收取样品，Trizol 裂解。
细胞样品：收集细胞（6 孔板 80%细胞密度），2000 rpm 离心5min，去上清，细胞沉淀中加入1mL Trizol，充分混匀后室温静置 5 min，然后转移至新的 1.5 mL EP 管中；组织样品：将待研磨的组织样品从液氮或者-80℃冰箱中取出，无菌刀片于干冰上将组织样品切割成约 3 mm×3 mm×3 mm 大小，置于装有 1 mL Trizol 裂解液的 1.5mL EP 管中。
实时荧光定量PCR仪操作规程
实时荧光定量PCR仪操作规程1. 开始运行仪器打开电脑；打开定量PCR仪底座开关；启动CFX Manager软件。
2. 放置样品将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。
注意，必须带一次性塑料手套，不要让手指接触到反应管表面。
将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。
3. 设置程序，运行实验定量PCR软件操作基本步骤为：a. 设置热循环程序文件（Protocol Tab）；b.设置反应板文件（Plate Tab）；c.点击“Start Run”键，运行程序；热循环程序文件（Protocol Tab）设置指南：点击Edit（编辑）或 Create New（创建新程序）；反应板设置文件（Plate Tab）设置指南：选择本次实验所要使用的荧光染料种类；单击样品类型；如要某些反应孔第一荧光染料对应的样品类型为标准品（Standard），点击“Dilution Series”键可设置其标准品浓度及稀释倍数；点击“Start Run”键。
单击open lid（打开热盖）或Close lid（关闭热盖）放置样品；单击Start Run，保存文件，开始运行程序。
4. 结果分析PCR反应结束后，软件会自动计算标准曲线和Ct值等。
如需进行表达量分析、等位基因分析等，在软件窗口选择相应分析功能。
点击右上方的“Report”键，还可输出结果报告单。
5. 关闭运行仪器实验结束后取出反应管，顺序关闭CFX Manager软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。
注意事项：CFX仪器上盖部分为全自动控制，在通电状态，严禁任何人为干涉上盖开启或关闭的行为，此类行为会导致上盖故障，危及仪器使用。
Archimed Analyzer 荧光定量PCR系统 简明操作手册—非洲猪瘟检测说明书
Archimed实时荧光定量PCR系统Archimed Analyzer（Software Version1.08）简明操作手册非洲猪瘟检测鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司利用Archimed荧光定量PCR仪完成一个非洲猪瘟检测实验共分8个步骤，如下图所示操作流程图：1.启动系统1.1启动电脑显示器、主机；1.2打开仪器后底板的电源开关，电源状态灯POW为蓝色，常亮；1.3等待系统自检，自检过程中状态灯STU为绿色闪烁状态，自检通过后为绿色常亮；1.4双击桌面软件图标，启动软件；1.5软件启动中界面；1.6软件启动完成后界面；2.创建实验2.1点击启动界面右下方“创建”按钮，或者通过菜单栏选择“创建”，可以创建全新的实验流程；2.2点击菜单栏的“从模板创建”，可以通过之前已保存的实验运行模板创建新实验。
3.设置实验属性点击页面左侧的实验属性选项，进入实验属性设置界面：3.1实验名称：系统默认以实验当前的时间而命名，也可以自己命名，但目前不支持中文和特殊字符，这里以系统默认名称命名；3.2仪器型号：根据实际使用机型进行选择，这里以选择Archimed-X6系统为例；3.3反应管类型：根据实际使用的反应管类型进行选择，这里以选择白管为例；3.4实验类型：选择绝对定量和相对定量（ΔΔCt）都可以，但是不能选择熔解曲线，我们这里选择绝对定量。
3.5实验试剂：根据实际使用的试剂类型进行选择，非洲猪瘟检测试剂盒多采用TaqMan试剂，所以这里以Taqman试剂为例进行说明。
4.设置运行条件实验属性设置完成后，点击页面左侧的运行条件或者右下角的下一步，进入运行条件设置界面：4.1反应体积设置：建议在5-25ul，实际实验可在1-30间选择一个值，明日达和郑州中道都选择25ul体系，反应体系后面显示热盖温度为100°C；4.2反应阶段设置：根据实际使用的试剂说明书设置反应阶段及步骤，如需增加或减少PCR反应阶段，如“保温”、“PCR反应”等，可将鼠标移至反应阶段区域，点击“+”或“-”，左侧及右侧“+”分别代表在此阶段前或后增加一个阶段，中间“-”代表去掉此阶段；如需增加或减少PCR某阶段中的反应步骤，可将鼠标移至该步骤区域，点击“+”或“-”，左侧及右侧“+”分别代表在此步骤前或后增加一个步骤，中间“-”代表去掉此步骤；4.3反应温度设置：时间、温度、升温速度（熔解曲线模式）的设定可以通过在数值区输入数值或点击进行，其中温度的设置还可通过点击拖拽温度曲线中的进行温度更改，拖动时温度以1°C为单位发生改变；注意：时间设置最小值不能小于00:01秒，进行实际更改时请避免4.4信号采集的相机图标：在每个反应步骤的时间框下面都有一个信号采集的相机图标，相机图标有两种状态，当为深蓝色时，代表处于信号采集开启状态，当为浅蓝色时，代表处于信号采集关闭状态，软件默认在每个循环扩增完成后进行信号采集；根据4.1到4.4的设置方法设置好后，明日达试剂盒运行条件如下图所示：根据4.1到4.4的设置方法设置好后，郑州中道试剂盒运行条件如下图所示：4.5运行条件模板保存：设置好的运行条件，可以点击界面左上角的保存按钮后的下拉菜单，单击另存为，即会弹出保存对话框。
实时荧光定量PCR操作指南
实时荧光定量PCR操作指南实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）是一种常用的分子生物学技术，广泛应用于基因表达、病毒检测、疾病诊断等领域。
本文将为您提供一份详细的实时荧光定量PCR操作指南，以帮助您正确高效地进行实验。
一、前期准备1.仪器准备确保实时荧光定量PCR仪的工作状态正常，能够提供稳定的温控和荧光检测功能。
2.试剂准备准备好使用的引物和探针、反转录酶、核酸模板、PCR酶、荧光探针等试剂，并按照相关说明进行稀释和储存。
3.实验室操作保持实验室环境清洁整洁，确保试剂和样品不受外界污染。
佩戴实验手套和口罩，避免DNA污染。
二、PCR体系设置根据您的实验目的和试剂系统的要求，设置PCR反应的体积和组分。
1.配置PCR体系a.将反向转录试剂盒中的试剂按照说明书中的比例进行配置，包括引物、探针、反转录酶、核酸模板等。
b.添加核酸模板到体系中，确保模板的质量和浓度适合实验要求。
c.添加合适的PCR酶，如Taq DNA聚合酶、Platinum Taq DNA聚合酶等。
d.添加稀释的胶原酶。
2.装管设置a.在无菌条件下，将PCR反应体系分装至PCR管中。
b.避免气泡的产生，确保体系均匀混合。
三、PCR参数设置根据实验需求和试剂系统的建议，设置PCR反应的温度和时间参数。
1.反转录步骤a.按照试剂盒说明书的建议，设置反转录温度和时间。
常见的反转录参数为42℃，60分钟。
2.PCR扩增步骤a.设置初始变性温度和时间。
常见的初始变性参数为95℃，5分钟。
b.设置PCR循环数和每个循环的温度和时间。
常见的PCR循环参数为95℃，15秒；60℃，1分钟，共40个循环。
c.设置荧光检测温度和时间。
根据荧光探针的特性，设置合适的温度和时间窗口。
四、数据分析和结果解读1.数据采集实时荧光定量PCR仪会自动记录荧光信号和温度变化数据，确保您保存这些数据供后续分析和结果解读使用。
实时荧光定量PCR仪使用说明书
实时荧光定量PCR仪使用说明书一、引言实时荧光定量PCR仪是一种高精度的分子生物学实验仪器，广泛应用于基因表达分析、病原体检测、遗传多态性分析等领域。
本说明书将介绍实时荧光定量PCR仪的基本操作流程、主要功能模块及相关注意事项。
二、仪器概述实时荧光定量PCR仪由以下组成部分构成：1. 仪器外观：实时荧光定量PCR仪外形美观大方，采用高质量塑料和金属材料制成，确保仪器的稳定性和耐用性。
2. 基本功能模块：实时荧光定量PCR仪包含恒温控制系统、光学采集系统和数据处理系统等主要模块。
(1) 恒温控制系统：实时荧光定量PCR仪可精确控制反应体系的温度，支持高速升温和快速降温，同时提供恒温状况下的稳定控制。
(2) 光学采集系统：实时荧光定量PCR仪配备高灵敏度的光学传感器，可实现对荧光信号的准确采集。
(3) 数据处理系统：实时荧光定量PCR仪可实时监测和记录PCR反应的信号强度，并通过内置算法对数据进行分析和处理。
三、操作流程实时荧光定量PCR仪的操作流程如下：1. 准备样本和试剂：根据实验需要，准备好待检测的样本溶液和PCR试剂。
2. 设置反应条件：按照实验方案要求，在仪器上设置好所需的反应条件，包括温度、时间和循环次数等参数。
3. 导入样本：使用专用导入工具，将样本溶液小心地加入PCR反应管或板中，并确保导入的样本量准确。
4. 启动仪器：按下仪器上的启动按钮，开始PCR反应过程。
5. 反应监测：实时荧光定量PCR仪会自动监测荧光信号的变化，并将数据实时显示在仪器屏幕上。
6. 数据分析：在PCR反应结束后，使用仪器自带的数据处理软件对监测到的荧光信号进行分析，根据实验需要得出结果。
四、注意事项使用实时荧光定量PCR仪时需要注意以下事项：1. 按照仪器说明书准确操作：在使用实时荧光定量PCR仪之前，仔细阅读使用说明书，并按照说明书上的操作步骤进行操作。
2. 仪器检查和维护：定期检查仪器的温度控制系统和光学采集系统，确保其正常工作。
实时荧光定量PCR仪操作流程
实时荧光定量PCR仪操作流程实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）仪是一种常用的分子生物学实验仪器，用于定量检测DNA或RNA样本中的特定序列。
通过对PCR反应进行荧光检测，可以实时监测目标序列的扩增过程，并且具有高灵敏度和高特异性的优势。
下面将介绍实时荧光定量PCR 仪的操作流程，以帮助您正确进行实验。
1. 准备工作在开始实时荧光定量PCR实验之前，需要准备以下实验器材和试剂：（1）实时荧光定量PCR仪：确保仪器已预热至适当的温度；（2）PCR反应管或板：根据实验需要选择适当的规格；（3）PCR试剂盒：包括DNA模板、引物、探针、酶等；（4）DNA/RNA样本：按照实验设计合理稀释或提取，确保样本质量良好；（5）聚合酶链式反应混合液（PCR Mix）：根据试剂盒说明配置混合液。
2. 操作步骤（1）设置PCR仪参数：将需要的实验参数输入PCR仪中，包括扩增阶段的温度、时间和循环次数等。
（2）制备PCR反应体系：按照试剂盒说明书中的配方将PCR Mix、DNA模板、引物和探针等加入PCR反应管或板中。
（3）密封反应管或板：确保反应管或板密封良好，避免样品蒸发或污染。
（4）放入PCR仪：将密封好的PCR反应管或板放入PCR仪中，确保仪器已预热至适当的温度。
（5）运行实验：启动PCR仪，开始实时荧光定量PCR反应。
仪器会根据设置的参数自动进行温度循环和荧光信号监测。
（6）数据分析：实验进行过程中，可以通过PCR仪的软件实时监测扩增曲线和荧光信号，获得相关的实验数据。
（7）结果解读：根据实验目的和结果，对荧光信号和扩增曲线进行分析和解读，获得所需的定量PCR结果。
3. 注意事项（1）实验操作应按照严格的无菌操作要求进行，避免PCR反应受到外部污染。
（2）实时荧光定量PCR仪涉及的试剂和标本具有一定的生物安全风险，应按照相关安全规范进行操作和处理。
（3）准确的数据记录和标注是保证实验结果可靠性的重要环节，务必在实验过程中进行详细记录。
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Thermo Scientific 实时定量PCR仪PikoReal®简明用户手册目录1目录目录 (1)仪器总体介绍 (2)硬件操作和注意事项 (4)仪器安装连接 (4)仪器打包运输 (4)仪器使用注意 (5)仪器维护 (5)单机操作指南 (6)运行已有程序 (6)软件安装和操作指南 (9)软件安装 (9)连接仪器 (10)软件简介和设置 (11)新建和运行程序 (13)常见程序示例 (19)板布局 (23)结果分析和数据导出 (27)绝对定量（标准曲线）的板布局和分析 (28)相对定量的板布局和分析 (33)双探针法等位基因分型的板布局和分析 (37)高分辨率熔解曲线的板布局和分析 (41)2仪器总体介绍PikoReal 实时定量PCR仪仪器正面：上方为用户界面，下方有U盘插口和抽屉仪器背面：中间有类别标贴（REF代表仪器型号，SN代表序列号），正下方有电源线插口和网线插口用户界面：正下方有仪器名称“PikoReal 24”或“PikoReal 96”，左上角有上下并列的2个状态指示灯（上灯长时间保持蓝色——空闲待运行，上灯蓝色闪烁——程序运行中，下灯长时间保持红色——仪器出错）PikoReal和计算机通过网线相连。
如果您的计算机需要通过网线上网，可以通过USB网线转换器将计算机连接到网络；或者，您可以通过无线路由器和USB无线网卡（台式计算机需要配备，笔记本一般有内置式无线网卡，无需配备）和连接到网络USB网线转换器无线路由器PikoReal安装运行时推荐环境温度+15℃到+25℃，相对湿度不超过50%，高温和潮湿都会影响仪器的性能和实验结果。
此外，请保持入风口和出风口的气流通畅。
请勿将仪器放在热的表面或实验室桌面的纸上。
请勿将纸或其他东西弄到仪器底部，因为这会妨碍气流，甚至会被吸到仪器里面去。
出风口和其他物品或墙壁之间保持至少10厘米的距离。
请勿让其它仪器的出风口直接对着仪器请定期清理散热片此外，请勿将仪器置于灰尘多、震荡（如台式离心机周围）、强磁场、阳光直晒、穿堂风、过度潮湿或者温度波动大的地方。
PikoReal 通过专业的软件PikoReal Software（最新版2.1）来进行控制，软件安装（详见第9页）后会在桌面生成以下2个图标：左为染料校正软件（主要用于定义新的染料），右为仪器控制软件34硬件操作和注意事项仪器安装连接1. 请先将电源线插入仪器背面的电源插口，再将电源线连接电源，仪器会自动开启并进行自检。
2. 网线两端分别连接计算机和仪器，网址设置正确。
3. 点击计算机桌面上的图标，启动软件，软件会自动识别并连接到仪器。
一般先开仪器，再开软件。
仪器打包运输如长期不使用定量PCR 仪，或者需要长途运输，请一定要先执行仪器锁定程序，防止仪器损坏！1. 在主菜单中按键选择“TOOLS ”，按键进入TOOLS 菜单（图1）；在TOOLS 菜单中按5次键选择“PARK INSTRUMENT ”，按键确认，开始打包仪器（图2），请根据屏幕上的指示进行操作。
图1 图22. 首先等待热盖上升，抽屉打开（图3）；放入一块空板，按键确认（图4）；图3图4 3. 等待抽屉收回，热盖压下，按键确认（图5）；仪器打包完成，按键确认（图6）；图5 图64. 长按电源开关等仪器关闭，即屏幕变暗后，请从电源插座上拔下电源线，打包完成。
5.请用原包装打包仪器进行运输。
仪器使用注意1.请将仪器放置在整洁、干燥的环境中，务必远离水槽和风口。
2.请勿堵塞仪器的入风口和出风口。
3.仪器配备了一个200 w的电源适配器，适配器上的灯绿表示正常运行。
仪器正常运行时电源适配器会发热。
如果发生电源跳闸，电源适配器的绿灯会灭掉。
这时请将电源线从插座上拔下，静置5分钟后再插上。
4.PCR板封膜后无需剪膜，如减去板边缘多余的膜可能造成膜上的粘面外翻，粘在热盖上。
5.放板后，请确认板左测第一列孔对准放入金属槽左侧第一列孔中，否则可能会因为板顶部不平衡而损坏热盖压力传感器。
板孔务必对准金属槽上的孔6.若发生粘板，请勿强行拔出。
推上抽屉后运行某个程序（程序开始时热盖温度会上升），热盖温度上升后5 - 10秒即可停止该程序，按开/关抽屉键退出抽屉，手动把板取出。
仪器维护1.使用完毕，请关闭电源，从电源插座中拔下电源线。
2.仪器表面：用湿的软布或者纸巾擦拭外表面。
3.金属槽：用棉球蘸水，95%乙醇或者100倍稀释的漂白剂擦拭样品槽孔。
4.散热片：变脏或者积灰时，用棉签，刷子或压缩空气除尘。
5单机操作指南运行已有程序1.在主菜单选择RUN ，按键确认。
2.请选择您要运行的程序所在的文件夹，按键确认。
RECENT文件夹储存仪器上最近运行的六个程序；SHARED文件夹是共享文件夹，任何用户都可以从中储存和调用程序。
用户也可以自定义文件夹。
如果仪器上插入U盘，会自动显示USB文件夹。
请注意，仪器只能识别U盘中文件名不超过8个英文字符，且后缀名为.ptp的程序文件。
3.文件夹里的所有程序都会被显示，请选择您要运行的程序，按键确认。
程序默认以图形模式GRAHICAL 显示，如需更改为列表显示模式，请按键选择LIST ，按键确认。
如需浏览程序，请通过或键选择LEFT或RIGHT ，按键向左或向右浏览。
4.确认程序无误后，选择START 键，请按键选择开始运行程序。
5.【96孔的PikoReal 96请跳过此步】如果您的仪器是24孔的PikoReal 24，请进行耗材选择，如果您用的是8– 15个0.2 mL 单管，请选择“< 16 TUBES”，如果您用的是16 – 24 个0.2 mL单管或24 孔Piko PCR 板，请选择“ > 16 TUBES OR PLATE”。
建议您用4个空管置于金属槽的四角以保持热盖的平衡。
66.用或键输入每孔中的样品体积，请按键确认。
7.当程序开始运行时，用户界面上的蓝色状态指示灯会闪烁。
8.您可以通过两种方式查看程序的运行：状态屏或时间屏。
选择TIME ，按键进入时间屏，屏幕中间的数字显示正在运行的程序还有多长时间（小时，分，秒）结束。
程序和程序所在的文件夹显示在屏幕上方。
如需返回状态屏，选择STAT ，按键返回状态屏。
9.如果您运行的是U盘上的程序，且运行过程中未拔出该U盘，程序运行结束后，结果会自动在该U盘内生成一个名为“rundata-AAAABBBBCCCCCC”（AAAA是当前年份，BBBB是几月几日，CCCCCC是小时/分钟/秒钟，每个程序都不同）的文件夹内。
如果您运行过程中拔出了U盘或者您想要导出最近一次实验的数据，请插入U盘（图1），在主菜单按键选择TOOLS（图2），按键确认，在TOOLS界面中按6次键选择RUN DATA TO USB（图3），按键确认，结果会自动在该U盘内生成一个名为“rundata-AAAABBBBCCCCCC”。
图1 图2 图3因为数据量较大，导出需要几分钟的时间，请耐心等待。
导出的结果需要导入PikoReal Software分析。
10.把U盘插入计算机的U盘插口，双击打开计算机上的PikoReal Software。
11.根据下图中的数字序号进行操作。
7812.点击板布局进行布局，详见第23页。
13.点击进行结果分析和数据导出，详见第27页。
软件安装和操作指南9软件安装和操作指南软件安装目前软件最新的版本是PikoReal Software 2.1，软件可以从光盘上安装，安装方法如下：1、首先请检查您的计算机配置是否满足以下要求：2、请把光盘插入光驱，光盘会自动运行并跳出安装界面。
若未跳出，请双击安装光盘内。
在安装界面内有2个软件，请先安装Microsoft .NET Framework 4.0，完成后再安装PikoReal Software 2.1；3、安装完成后桌面自动显示软件快捷图标10连接仪器1、网线两端分别连接计算机和仪器，打开仪器电源；2、修改本地连接：3、双击打开软件4、出现软件主界面，在主界面的右下方会显示当前连接的仪器。
软件简介和设置1、程序默认的保存格式为.ord文件，该文件可保存在您指定的任意位置，但只能由PikoReal Software打开查看。
2、程序由反应程序（Protocol）、板布局（Plate Layout）组成，运行后采集到数据可以通过分析（Analysis）进行分析，程序未运行前不会出现分析界面。
3、点击设置，在出现的新界面中点击Select language右边的下拉箭头，下拉菜单中提供3种语言：英文English，日文Japanese，中文Chinese。
选择Chinese。
4、设置程序默认保存的文件夹，点击Default folder点击右下角的Exit退出。
115、弹出对话框提示要完全退出软件，点击右下角OK，退到软件主界面，点击右上角的X，退出软件。
6、重新双击打开软件，软件会以选定的语言版本显示。
12新建和运行程序1.双击打开软件；2.点击新建一个程序，点击，进入热循环程序编辑界面；3.反应程序的基本设定：a)首先点击“反应程序”；b)点击去掉没有用到的荧光染料（反白），如果您所用的荧光染料不在列表中，请把该染料的激发和发射波长与列表中的染料的波长做比较（预校正染料的激发和发射波长请见表1，），选择波长最相似的染料名替代，如VIC的波长和HEX相似，选择HEX，即表示用HEX的通道检测VIC的荧光，如所用染料的激发和发射波长与列表中的染料的波长相差较大，建议您在使用之前先进行染料校正。
如TET的波长和第二通道的HEX、YY相差都比较大，需要先做染料校正再使用该染料；表一预校正染料的激发和发射波长13表二常见染料的激发和发射波长c)设定反应体积，通过键盘上的数字键输入，也可以通过上下键调整，所有需要设定数字的地方都可以通过相同的方法进行修改；14d)高级属性：一般不需要修改。
4.修改步骤参数：a)点击选中需要修改参数的步骤，该步骤的参数会显示在右边的“属性”框中；b)在“属性”框中，输入所需的参数；c)各步骤的设置如下：循环：温度：数据采集：如果某个“温度”步骤中已经包含“数据采集”，则“数据采集”的图标会显示为灰色，否则，则可向该“温度”步骤添加“数据采集”，数据采集中所显示的测量通道和步骤3(b)相关联，如果需要关掉不需要的测量通道请参见步骤3(b)1516熔解曲线：如果整个反应程序中已经包含“熔解曲线”，则“熔解曲线”的图标会显示为灰色，否则，可以向该反应程序中添加“熔解曲线”，如果需要进行高分辨率熔解曲线，只需要把温度增量改小即可17更改步骤的位置或者删除步骤：选中相应的步骤，点击“向上移动”或者“向下移动”可以更改当前选中步骤的位置，点击删除步骤，可以删除当前选中的步骤5.可通过导出把当前的反应程序在计算机上另存为.ptp文件，如下次要运行同样程序，则可在“反应程序”界面直接点击导入，无需重新设置程序。