第七章原核生物的基因调控

第七讲原核生物的基因调控科学家把这个从DNA到蛋白质的过程称为基因表达(gene expression)，对这个过程的调节就称为基因表达调控(gene regulation或gene control)。

要了解动、植物发展发育的规律、形态布局特征和生物学功能，就必需弄清楚基因表达调控的时间和空间概念，掌握了基因表达调控的奥秘，我们手中就有了一把揭示生物学微妙的金钥匙。

基因表达调控主要暗示在以下几个方面：①转录程度上的调控(transcriptional regulation)；②mRNA加工成熟程度上的调控(differential processing of RNAtranscript)；③翻译程度上的调控(differential translation of mRNA).原核生物中，营养状况(nutritionalstatus)和环境因素(environmental factor)对基因表达起着举足轻重的影响。

在真核生物尤其是高等真核生物中，激素程度(hormone level)和发育阶段(developmental stage)是基因表达调控的最主要手段，营养和环境因素的影响力大为下降。

二、基因表达调控的底子道理〔一〕基因表达的多级调控基因的布局活化、转录起始、转录后加工及转运、mRNA降解、翻译及翻译后加工及蛋白质降解等均为基因表达调控的控制点。

可见，基因表达调控是在多级程度长进行的复杂事件。

此中转录起始是基因表达的底子控制点。

四个底子的调控点：〔1〕基因布局的活化。

DNA表露碱基后RNA聚合酶才能有效结合。

活化状态的基因暗示为：1.对核酸酶敏感；2.结合有非组蛋白及修饰的组蛋白；3.低甲基化。

〔2〕转录起始。

最有效的调节环节，通过DNA元件与调控蛋白彼此作用来调控基因表达。

〔3〕转录后加工及转运。

RNA编纂、剪接、转运。

〔4〕翻译及翻译后加工。

翻译程度可通过特异的蛋白因子阻断mRNA 翻译翻译后对蛋白的加工、修饰也是底子调控环节。

〔二〕基因转录激活调节底子要素1．DNA序列原核生物大大都基因表达调控是通过把持子机制实现的。

把持子通常由2个以上的编码序列与启动序列、把持序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成。

启动序列是RNA聚合酶结合并起动转录的特异DNA序列。

多种原核基因启动序列特定区域内，通常在转录起始点上游-10及-35区域存在一些相似序列，称为共有序列。

大肠杆菌及一些细菌启动序列的共有序列在-10区域是TATAAT，又称Pribnow盒〔PribnowBox〕，在-35区域为TTGACA。

这些共有序列中的任一碱基突变或变异城市影响RNA聚合酶与启动序列的结合及转录起始。

因此，共有序列决定启动序列的转录活性大小。

把持序列是原核阻遏蛋白的结合位点。

当把持序列结合阻遏蛋白时会阻碍RNA聚合酶与启动序列的结合，或使RNA聚合酶不克不及沿DNA向前移动，阻遏转录，介导负性调节。

原核把持子调节序列中还有一种特异DNA 序列可结合激活蛋白，使转录激活，介导正性调节。

顺式作用元件就是指可影响自身基因表达活性的DNA序列。

在不同真核基因的顺式作用元件中会时常发现一些共有序列，如TA TA盒、CCAA T 盒等。

这些共有序列就是顺式作用元件的核心序列，它们是真核RNA聚合酶或特异转录因子的结合位点。

顺式作用元件通常长短编码序列。

顺式作用元件并非都位于转录起点上游〔5′端〕。

按照顺式作用元件在基因中的位置、转录激活作用的性质及阐扬作用的方式，可将真核基因的这些功能元件分为启动子、增强子及沉默子等。

2．调节蛋白原核调节蛋白分为三类：特异因子、阻遏蛋白和激活蛋白。

特异因子决定RNA聚合酶对一个或一套启动序列的特异性识别和结合能力。

阻遏蛋白可结合把持序列，阻遏基因转录。

激活蛋白可结合启动序列邻近的DNA序列，促进RNA聚合酶与启动序列的结合，增强RNA聚合酶活性。

真核调节蛋白又称转录因子。

绝大大都真核转录调节因子由某一基因表达后，通过与特异的顺式作用元件彼此作用〔DNA-蛋白质彼此作用〕反式激活另一基因的转录，故称反式作用因子。

有些基因产物可特异识别、结合自身基因的调节序列，调节自身基因的开启或关闭，这就是顺式作用。

具有这种调节方式的调节蛋白称为顺式作用蛋白。

3．DNA-蛋白质、蛋白质和蛋白质彼此作用DNA-蛋白质彼此作用指反式作用因子与顺式作用元件之间的特异识别及结合。

这种结合通常长短共价结合。

绝大大都调节蛋白结合DNA前需通过蛋白质-蛋白质彼此作用形成二聚体或多聚体。

所谓二聚化就是指两分子单体通过必然的布局域结合成二聚体，它是调节蛋白结合DNA时最常见的形式。

由同种分子形成的二聚体称同二聚体，异种分子间形成的二聚体称异二聚体。

除二聚化或多聚化反响，还有一些调节蛋白不克不及直接结合DNA，而是通过蛋白质一蛋白质彼此作用间接结合DNA，调节基因转录。

4．RNA聚合酶DNA元件与调节蛋白对转录激活的调节最终是由RNA聚合酶活性表达的。

启动序列／启动子的布局，调节蛋白性质对RNA聚合酶活性影响很大。

(1)启动序列或启动子与RNA聚合酶活性：原核启动序列或真核启动子是由转录起始点、RNA聚合酶结合位点及控制转录的调节组件组成。

会影响其与RNA聚合酶的亲和力，而亲和力大小那么直接影响转录起始频率。

〔2〕调节蛋白与RNA聚合酶活性：一些特异调节蛋白在适当环境信号刺激下在细胞内表达，随后这些调节蛋白通过DNA-蛋白质彼此作用、蛋白质-蛋白质彼此作用影响RNA聚合酶活性，从而使根底转录频率发生改变，呈现表达程度变化。

三、原核基因表达调控原核生物的调控主要发生在转录程度上，按照调节机制的不同分为负转录调控和正转录调控。

在负调控系统中，调节基因的产物是阻遏蛋白〔repressor〕，起着阻止布局基因转录的作用。

按照作用特征又可分为负诱导作用和负阻遏作用。

在负诱导系统中，阻遏蛋白不与效应物〔诱导物〕结合时，布局基因不转录；在负控阻遏系统中，阻遏蛋白与效应物结合时，布局基因不转录。

在正转录调控系统中，调节基因的产物是激活蛋白〔activator〕。

在正控诱导系统中，诱导物的存在使激活蛋白处于活性蛋白；在正控阻遏系统中，效应物分子的存在是激活蛋白处于非活性状态。

〔一〕原核基因调节特点σ因子决定mRNA识别特异性原核生物细胞仅含有一种RNA聚合酶，核心酶参与转录耽误，全酶司转录起始。

在转录起始阶段，σ亚基〔又称σ因子〕识别特异启动序列；不同的σ因子决定特异基因的转录激活，决定tRNA、mRNA和rRNA基因的转录。

〔二〕乳糖把持子调节机制1乳糖把持子的发现细菌能随环境的变化，迅速改变某些基因表达的状态，这就是很好的基因表达调控的尝试型。

人们就是从研究这种现象开始，翻开认识基因表达调控分子机理的窗口的。

大肠杆菌可以操纵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而发展繁殖。

当培养基中有葡萄糖和乳糖时，细菌优先使用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌遏制发展，颠末短时间的适应，就能操纵乳糖，细菌继续呈指数式繁殖增长(图19－1)。

说明酶可以诱导。

在不含乳糖及β-半乳糖苷的培养基中，lac+基因型每个大肠杆功细胞内大约只有1-2个酶分子。

如果在培养基中参加乳糖，酶的浓度很快达到细胞总蛋白量的6%或7%，每个细胞中可有超过105个酶分子。

当有乳糖供应时，在无葡萄糖培养基中发展的lac+细菌中将同时合成β-半乳糖苷酶和透过酶，如图。

用32P标识表记标帜，成果说明培养基中参加乳糖1-2min后，编码β-半乳糖苷酶和透过酶的lac mRNA量就迅速增加。

去掉乳糖后，lac mRNA 量当即下降到几乎无法检测到，说明乳糖确实能激发lac RNA的合成。

事实上，研究诱导作用时很少使用乳糖，因为培养基中的乳糖会被诱导合成的β-半乳糖苷酶所催化降解，从而使其浓度不竭发生变化。

尝试中通常使用乳糖类似物：异丙基硫基半乳糖苷〔IPTG〕、琉甲基半乳糖苷〔TMC〕和O-硝基半乳糖苷〔ONPG〕。

它们都是高效诱导物，因为它们都不是半乳糖苷酶的底物，所以又称为安抚性诱导物〔gratuitous inducer〕。

为了证明诱导物的作用是诱导新合成酶而不是将已存在于细胞中的酶前体物转化成有活性的酶，把大肠杆菌细胞放在加有放射性35S标识表记标帜的氨基酸但没有任何半乳糖诱导物的培养基中繁殖几代，然后再将这些带有放射活性的细菌转移到不含35S、无放射性的培养基中，随着培养基中诱导物的参加，β-半乳糖苷酶便开始合成。

别离β-半乳糖苷酶，发现这种酶无35S标识表记标帜。

说明酶的合成不是由前体转化而来的，而是参加诱导物后新合成的。

把持子模型的提出—莫洛(Monod)和雅各布(Jacob)获1965年诺贝尔生理学和医学奖1940年，Monod发现：细菌在含葡萄糖和乳糖的培养基上发展时，细菌先操纵葡萄糖，葡萄糖用完后，才操纵乳糖；在糖源转变期，细菌的发展会呈现停顿。

即发生“二次发展曲线〞。

1947年，陈述：“酶的适应现象及其在细胞分化中的意义〞。

1951年，Monod与Jacob合作。

发现两对基因：Z基因：与合成β-半乳糖苷酶有关；I基因：决定细胞对诱导物的反响。

Szilard：I基因决定阻遏物的合成，当阻遏物存在时，酶无法合成，只有有诱导物存在，才能去掉该阻遏物。

Jacob：布局基因旁有开关基因〔即把持基因〕，阻遏物通过与开关基因的结合，控制布局基因的表达。

2布局大肠杆菌的乳糖把持子含Z、Y及A三个布局基因，别离编码β-半乳糖苷酶、透酶、乙酰基转移酶，此外还有一个把持序列O、一个启动序列P 及一个调节基因Ⅰ。

Ⅰ基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使把持子受阻遏而处于转录掉活状态。

在启动序列P上游还有一个分解〔代谢〕物基因激活蛋白CAP结合位点，由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成LAC把持子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达。

A P-O区P区是从I基因结束到mRNA转录开始点为止，而O区的范围是按捺物结合区。

mRNA是从第85对碱基开始的，所以P区共84个碱基，按捺物结合区从78－112，共35对碱基，和P区有7个碱基的重复。

使这段序列可能无法同时结合RNA聚合酶和阻遏蛋白，也可能虽然可以同时结合，但无法形成开放的转录起始复合物。

P-O区碱基对的命序，是从mRNA起始的第一个核苷酸为＋1与转录标的目的一致的为正，与转录标的目的相反的为负。

所以P区从－84到－1，按捺物庇护区是－7到28。

B阻遏蛋白的负性调节当大肠杆菌在没有乳糖的环境中保留时，1ac把持元处于阻遏状态。

i 基因在其自身的启动子Pi控制下，低程度、组成性表达发生阻遏蛋白R，每个细胞中仅维持约10个分子的阻遏蛋白。

R以四聚体形式与把持子O结合，阻碍了RNA聚合酶与启动子P1ac的结合，阻止了基因的转录起动。