荔枝核总黄酮提取分离工艺的
荔枝不同部位的化学成分研究
第1期2020年2月No.1 February，2020荔枝（Lytchee Chinensis Sonn ），为无患子科植物。
其中，荔枝的核和成熟果实作为常用中药，其性味甘，微苦，归肝肾经，具有养血健脾、行气消肿之功效，主要用于肝郁气滞、胃脘痛、睾丸肿痛等[1]。
经研究发现，荔枝核中主要含有挥发性成分类、氨基酸类、皂苷类、黄酮类和糖类等；荔枝肉中含有大量的功能性成分，比如多糖类、多酚类化合物、微量元素等，其营养价值极高；荔枝皮主要含有多酚类化合物；荔枝叶中含有不同的活性成分，包括黄酮、酚酸、多糖以及原花青素类等活性成分[2]。
国内研究荔枝核的报道比较多，荔枝肉和荔枝皮的研究报道比较少。
对于荔枝的主要化学成分概括如下。
1 荔枝核1.1 皂苷荔枝核中含有大量的皂苷类活性成分，王妍等[3]通过利用大孔树脂的方法对荔枝核中皂苷有效成分的提取工艺进行了优化，其提取总皂苷的纯度可达68.10%。
黄祖良等[4]采用大孔吸附树脂的方法对荔枝总皂苷进行了分离和纯化，结果表明，在乙醇质量分数为60%时，测得其质量为2.642 g 。
1.2 黄酮经研究发现，荔枝核含有大量的黄酮化学成分，其中主要以色素类、黄烷酮类、黄酮醇类以及二氢黄酮醇类为主。
林大专等[5]通过观察荔枝核黄酮的提取含量来确定微波提取荔枝总黄酮的提取条件和优化参数，结果发现荔枝核中的黄酮质量分数大约为2.86%。
1.3 有机酸屠鹏飞等[6]通过色谱和GC-MS 质谱技术从桂枝中分离出硬脂酸和3-羧基甘遂烷-7，24-二烯-21-酸等。
刘兴前等[7]采用色谱分析方法对荔枝核萃取液的水溶性部分分离得到的L-1和L-2两个化合物进行了分析，通过核磁鉴定分别为5-氧-对-香豆酰基奎尼酸甲酯和原儿茶酸。
1.4 挥发性成分经研究发现，荔枝核中主要含有酮类、醇类和烯类等挥发性成分。
徐多多等[8]以同样的方法分离鉴定了挥发油成分，其结果主要含有酸类、萘、醇、烯、烷及少量的酯、酮类成分。
黄酮的提取方法及其在食品保鲜中的应用
食品科技黄酮的提取方法及其在食品保鲜中的应用娄 楠，韩晓宇，胡荣柳（漯河职业技术学院，河南漯河 462000）摘 要：近些年，伴随消费理念的变化，基于植物开发的天然防腐剂替代传统的化学合成防腐剂用于食品保鲜成为研究热点。
黄酮作为来源最为广泛的纯天然植物提取物，因具备抑菌、抗氧化和提升食品风味等功能成为食品加工领域的新宠。
本文主要介绍了黄酮类化合物常用的提取方法和黄酮类化合物在食品保鲜中应用的研究进展。
关键词：黄酮；提取技术；食品保鲜Extraction Method of Flavonoids and Its Application in FoodPreservationLOU Nan, HAN Xiaoyu, HU Rongliu(Luohe V ocational Technology College, Luohe 462000, China)Abstract: In recent years, along with the change of consumer philosophy, natural preservatives developed based on plants have become a hot research topic instead of traditional chemical synthetic preservatives for food preservation. Flavonoids, as the most widely sourced pure natural plant extracts, have become a new favorite in food processing because of their functions such as antibacterial, antioxidant and food flavor enhancement. This paper mainly introduces the common extraction methods of flavonoids and the research progress of flavonoids in food preservation.Keyword: flavonoids; extraction technology; food preservation随着经济发展水平的提升，人们的食品消费水平也逐年提升。
荔枝核总黄酮提取测定方法及工艺的优化
总黄酮率% 1
2． 430 1． 545 1． 212 3． 217 1． 547 5． 685 2． 344 7． 981 3． 904
摘要：目的： 探讨荔枝核总黄酮的测定方法及提取工艺。方法： 紫外分光光度法在 510 nm 处测定。采用正交试验，以荔枝核总 黄酮的提取率为考察指标，优化提取工艺。结果： 建立回归方程。荔枝核总黄酮的最佳提取条件为回流提取法，60% 的乙醇， 固液比为 1： 10，提取 3 次，每次 90 min。结论： 该方法能有效提取荔枝核总黄酮，回收率高，简单可行，可作为提取荔枝核总黄 酮的优选工艺。 Abstract： Objective： To explore the determination method and extraction technology of total Litchi flavonoids． Methods： UV spectrophotometry was measured at 510nm． By using orthogonal test，the extraction rate of total flavonoids of Litchi was applied as the observatory indicator to investigate the extraction process． Results： The regression equation was established． The reflux extraction method was the optimal extraction conditions for total Litchi flavonoids with 60% of ethanol and solid to liquid ratio of 1： 10，which were extracted three times，90min per time． Conclusion： This method can effectively extract the total flavonoids of Litchi，which could be the preferred extraction process for total flavonoids of Litchi． The extraction process is simple and feasible with high recovery rate． 关键词：荔枝核总黄酮； 紫外分光法； 正交试验； 提取工艺 Key words： total litchi flavonoids； ultraviolet spectrophotometry； orthogonal test； extraction technology 中图分类号 CLC number：R284． 2 文献标识码 Document code：A 文章编号 Article ID：1674 － 8999（ 2011） 06 － 0701 － 03
荔枝多糖的提取、分离纯化及抗氧化性研究
荔枝多糖的提取、分离纯化及抗氧化性研究摘要荔枝是无患子科荔枝属植物，原产于中国。
它既是一种色、香、味俱佳的食品，又是名贵的补品，有食、疗两用之功。
近年来，荔枝中的一些活性物质已经引起了人们的关注，并做了一些研究。
研究发现荔枝中含有大量功能性成分，如花色苷、酚酸、多糖、原花色素以及其它活性成分。
荔枝果核或果皮的萃取物具有抗氧化、抗炎症、抗诱变、预防糖尿病、降血脂以及其它生理功能。
但目前对荔枝果肉中的活性物质包括荔枝多糖的研究少见报道。
本文研究了荔枝果肉多糖提取的技术条件，对荔枝粗多糖进行了分离纯化研究，并对其抗氧化的活性进行了评价，为今后荔枝多糖更深入的研究与开发奠定了基础。
研究结果如下：1. 建立了以苯酚-硫酸法测定荔枝多糖含量的测定方法，并对黑叶等几种常见的荔枝品种果肉中的多糖含量和换算因子进行了测定比较。
结果表明，荔枝品种不同，多糖的换算因子和含量也随之各异，黑叶荔枝最适合提取荔枝多糖。
2. 应用微波技术提取荔枝多糖，在单因素试验的基础上，采用响应面分析法对荔枝多糖提取工艺进行优化，其最优工艺参数为：微波时间10min、微波功率640W、水料比8，荔枝粗多糖的产率为6.17%，其多糖含量为60.1%。
微波浸提时，粗多糖产率和多糖含量均比传统热水浸提时高。
综合考虑时间和能耗等因素，采用微波提取较好。
3. 分别采用Sevag法、三氯乙酸（TCA）-Sevag法、木瓜蛋白酶-Sevag法，对粗多糖中的蛋白质进行脱除。
结果表明，木瓜蛋白酶-Sevag法效果较好。
经1%木瓜蛋白酶处理后,再经过3次Sevag法处理，蛋白质脱除率为83.94%，多糖损失率为24.56%。
4. 脱蛋白后的多糖采用大孔树脂进行脱色，采用HPD-100树脂，30℃下吸附4h，树脂用量为16g/100mL时，对荔枝多糖的脱色效果最好，且该树脂经再生后脱色效果良好，可重复利用。
经脱蛋白、脱色、透析后的多糖，再经过DEAE-52纤维柱层析，得到经纸层析、冻融试验、紫外光谱鉴定为均一性的荔枝多糖组分。
响应面法优化龙眼核中总黄酮的提取工艺
Ｈａ ｉ ｎ ａ ｎ ５ ７ ０ ２ ２ ８ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍ ｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｌ ｆ ａ ｖ ｏ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｌ ｏ ｎ ｇ ａ ｎ ｓ ｅ ｅ ｄ ｓ ｂ ｙ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ
Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｙ Ｔ ｏ ｄ ａ ｙ ・ ２ ０ １ ４ ０ １ Ｖ ｏ １ ． ２ ４ Ｎ ｏ ． ０ １・
响 应 面法优 化 龙 眼核 中总黄 酮 的提 取 工艺
关恺珍 ， 程轩轩 ， 张旭红 ， 黄照曦。 ， 彭晓青
（ １ ．广 州市第一人 民医院 ， 广 东 广州 ５ １ ０ １ ８ ０ ； ２ ．广 东药 学院 ， 广 东 广州 ５ １ ０ ０ ０ ６； ３ ．海 南大学材料 与化 工 学院 ，海 南 海 １ ２ ： ５ ７ ０ ２ ２ ８ ）
摘要 ： 目的 采 用响应 面法优化龙 眼核 中总黄酮 的提取工艺 。方法 在 单因素试验 的基础上 ， 根据 Ｂ ｏ ｘ — Ｂ ｅ ｈ ｎ ｋ ｅ ｎ试 验设计原 理 ， 设 计三 因素三水平 的响应面分析法 ， 建立二次 多项式 回归方程 的预测模型 。结果 各 因素对黄酮提取率的影响顺序为 ： 提取时 间 ＞丙酮浓度 ＞ 提取温度 。最佳提取工艺条件为 ： 丙酮浓度 ５ ９ ％， 提取温度 ７ １℃， 提取时间 ２ ． ３ ｈ 。实 际测得 总黄酮平均提 取率为 ４ ３ ． ６ ７ ｍ ｇ ／ ｇ ， 与
Hale Waihona Puke Ｏｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｆ ｏ ｒ Ｔ ｏ ｔ ａ ｌ Ｆ ｌ ａ ｖ ｏ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ ｆ ｒ Ｏ ｍ Ｌ ｏ ｎ ｇ ａ ｎ
荔枝核中黄烷-3-醇的鉴定及原花青素的提取
科研 学究
食品研究与开发
６ ７
荔枝核中黄烷 一 一醇的鉴定 ３ 及原花青素的提取
丁丽 。 王敏 。 ， 天津 ３０ ２ ） ０ ２ ２
摘
要 ：采 用 ９ ５￣（ ｒ ）５ ｖ ｖ 、０％（ 厂 ） Ｖ ｖ 醇提 荔枝核 ， 经石油醚、 乙酸 乙酯、 正丁醇依次萃取后 ， 再利 用硅胶柱层析等方
ｌ ｓ５ ％Ｅ Ｏ ｔ ｃ ｎ ｌ ｎ， ｍ ｒｔｒ ６ ｏ ： ０ ｔＨ ａ ｅｒ ｔ ｇ ｏ ｅｔ ｅ ｐ ａ ｅ ０℃，ｏｋｒ ｉ ｈ ０ ａｓ ｏ ｍ ） ｍ ｈ ｗ ｓ ｘ ａｉ ｓ ｖ ｔ ｅ ｕ ｓ ｃ ｔ ２ （ｓ ： ｌ ｅｔ ｅ ． ｔ ａｏ ｍ ｖｕ ， ３ ｉ Ｋ ｙｗ ｒｓ Ｌｔ ｉｈｎｎｉ． ｎ ｆ ｖ 一 一 ｌ －－ ｐ ａ ｃｉ； ｒ ｙ ｉｉ；ｒ ｏｏａｔｓ ｅ ｏｄ ： ｉ ｈ ｃ ｉ ｓ Ｓ ｎ； ａａ ３ ｏ； ）ｅｉ ｔ ｈｎ ｐｏ ａ ｄ ｏｔ ｇｎ ｔ ｃ ｅ ｓ ｏ ｌ ｎ （ ｃｅ ｃｎ ｎ ｈ ｌ ｅ
社 。９ ７ １９
【】 Ｓ ｔ ｈ ｓｏ ａ ＴｔｕｉｏＯ ｅａｄＮ ｏａｕＳｋｔ． ｒｄ ｃｏ ｆ ３ ａｏ ｉ ａｋ， ａｓｈｋ ｈ ｎ ａｋｚ ａｏ Ｐｏ ｕｔ ｎｏ ｓ Ｍａ ａ ｉ Ｃ ｌｌｓ ｏ Ｇｕ ｏｅｂ ｏｔｂｃｅ ｌ ｕ Ｊ Ｊ ｏ ｅｍｅｔｉｎ ｅ ｕｏｅｆ ｍ ｌｃｓ ｙＡ ｏａｔ ｘ ｉ ｍ［． ．ｆ ｒ ｎａ ｏ ｌ ｒ ｅ ｒｙｎ ］ Ｆ ｔ
法分离纯化 ， 得到化合物 Ｉ， 通过理化性质和波谱技 术， 鉴定为黄烷一 一 ３ 醇类化合物表儿茶素 。原花青素是 由多羟基 黄烷一 一 ３ 醇单元构成的低聚体和 多聚体 ， 由不同数量 的儿茶素或表 儿茶 素结合而成 ， 通过单 因素 实验和 Ｌ ４） 。 正交 （ 实验 ， 确定原花青素的最佳提 取工艺。最佳提取条件为 ： 乙醇浓度 ５ ０％， 浸提 温度 ６ ０℃， 液比 １ ０ ｗ厂 ）浸提 时 料 ： （ ｖ、 ２
荔枝黄酮类成分研究进展
基金项目：广西一流学科建设重点课题（２０１８ＸＫ０３３）；广西中医药大学“岐黄工程”高层次人才团队培育项目（２０１８００２）。
作者简介：李玉凤（１９９４－），女，汉族，硕士研究生在读，研究方向为中药化学成分及活性研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：１７８６４５１７１２＠ｑｑ ｃｏｍ通信作者：赵立春（１９８０－），男，汉族，博士，研究员，研究方向为中药化学成分及活性研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：３７４７３６９０＠ｑｑ ｃｏｍ荔枝黄酮类成分研究进展李玉凤１ 王 刚２ 赵立春１，２１ 广西中医药大学药学院，广西 南宁 ５３０２００；２ 广西壮瑶药工程技术研究中心，广西 南宁 ５３０２００【摘 要】 目的：对荔枝黄酮类成分化学成分及药理作用进行综述。
方法：通过检索国内外相关文献，对荔枝黄酮类的化学成分及药理作用进行归纳总结。
结果：目前从荔枝中已分离鉴定了４９个黄酮类化合物；这些化合物具有抗病毒、抗炎、抗肝纤维化、抗肿瘤、抗氧化、降血糖和抗菌等多种药理作用。
结论：对荔枝黄酮进一步进行新药研发提供参考。
【关键词】 荔枝；黄酮类；化学成分；药理作用【中图分类号】Ｒ２８５ 【文献标志码】Ａ 【文章编号】１００７－８５１７（２０２１）０９－００８０－０９ＴｈｅＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｆＬｉｔｃｈｉＦｌａｖｏｎｏｉｄｓＬＩＹｕｆｅｎｇ１ ＷＡＮＧＧａｎｇ２ ＺＨＡＯＬｉｃｈｕｎ１，２１ ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３０２００，Ｃｈｉｎａ；２ Ｒｅｓｅａｒｃｈａｓｓｏｃｉａｔｅ，ＧｕａｎｇｘｉＺｈｕａｎｇｙａｏＭｅｄｉｃｉｎｅＣｅｎｔｅｒｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３０２００，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｉｔｃｈｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗｅｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄ．ＭｅｔｈｏｄｓＢｙｓｅａｒｃｈｉｎｇｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｔｌｉｔｅｒａｔｕｒｅａｔｈｏｍｅａｎｄａｂｒｏａｄ，ｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｉｔｃｈｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗｅｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｔｐｒｅｓｅｎｔ，４９ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｈａｖｅｂｅｅｎｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｆｒｏｍｌｉｔｃｈｉ，ｗｈｉｃｈｈａｖｅｍａｎｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓ，ｓｕｃｈａｓａｎｔｉ－ｖｉｒｕｓ，ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｔｉ－ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ，ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃａｎｄａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｏｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎｅｗｄｒｕｇｓｏｆｌｉｔｃｈｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌｉｔｃｈｉ；Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ；ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓ 荔枝（ＬｉｔｃｈｉｃｈｉｎｅｎｓｉｓＳｏｎｎ ）为无患子科，荔枝属，产于中国南部，其口感之美，更是颇受人们喜爱。
【CN110044832A】一种荔枝核中总黄酮含量的测定方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910180110.3(22)申请日 2019.03.11(71)申请人 广西中医药大学地址 530200 广西壮族自治区南宁市青秀区五合大道13号(72)发明人 奉建芳 罗伟生 梁建钦 冯宇 冯茵怡 林忆龙 (74)专利代理机构 南宁市来来专利代理事务所(普通合伙) 45118代理人 来光业(51)Int.Cl.G01N 21/33(2006.01)G01N 21/78(2006.01)(54)发明名称一种荔枝核中总黄酮含量的测定方法(57)摘要本发明公开了一种荔枝核中总黄酮含量的测定方法，该方法为紫外分光光度法，包括以下步骤：（1）对照品溶液的配制：以原花青素A2为对照品，配制成梯度标准溶液；（2）供试品溶液的制备：取荔枝核粉末加入甲醇，进行回流提取后过滤、稀释；（3）显色反应液的配制：取正丁醇、浓盐酸、硫酸铁铵溶液按比例混合均匀；（4）标准曲线的绘制：对照品溶液加入显色反应液混合，测定吸光度值，绘制吸光度值-原花青素浓度的标准曲线；（5）供试品溶液的测定：取供试样品溶液测定吸光度值，代入回归方程，求得荔枝核中总黄酮的含量。
本发明的方法简单、快速，精密度、重现性、准确度和稳定性均良好，可进行批量测定，能适应工业生产检测的要求。
权利要求书1页 说明书5页CN 110044832 A 2019.07.23C N 110044832A权 利 要 求 书1/1页CN 110044832 A1.一种荔枝核中总黄酮含量的测定方法，该方法为紫外分光光度法，其特征在于：包括以下步骤：（1）对照品溶液的配制：精密称取对照品8.00～12.00 mg，用甲醇溶解并定容，制得质量浓度为1.00 mg/mL的对照品溶液；再用甲醇稀释，制成质量浓度分别为0、10、25、50、100、150、200 µg/mL 的系列对照品溶液，备用；（2）供试品溶液的制备：精密称取粉碎至10～20目的荔枝核粉末1.00～2.00g，加入50～100mL的体积浓度为50%的甲醇，于88～95℃条件下回流提取30～50min，趁热过滤，量取1mL至容量瓶中稀释25～50倍，得到供试品溶液，备用；（3）显色反应液的配制：精密量取正丁醇、浓盐酸、10%硫酸铁铵溶液按一定的比例混合均匀，制得显色反应液，备用；（4）标准曲线的绘制：精密吸取不同浓度的对照品溶液1.0 mL于10mL具塞试管中，加入9.0 mL显色反应液，塞紧塞子并摇匀，置于沸水浴中加热40～50min后，立即取出，用冰水冷却5～6 min，取出，恢复至室温后，在550 nm处以空白试剂调零，测定吸光值A550，以吸光值为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制吸光度值-原花青素浓度的标准曲线，进行线性回归分析，得到回归方程；（5）供试品溶液的测定：将步骤（2）制得的供试样品溶液在510nm处测定吸光度，将吸光值代入回归方程，计算得到供试品溶液的浓度，根据配制溶液时的稀释倍数计算出荔枝核中总黄酮的含量。
树脂法分离纯化荔枝核黄酮
树脂法分离纯化荔枝核黄酮江敏;胡小军;林彩霞;梁树尧【摘要】为了分离、纯化荔枝核黄酮,比较了4种大孔树脂的静态吸附过程,筛选出适合吸附荔枝核黄酮的树脂；研究了荔枝核黄酮在大孔吸附树脂上的动态吸附特性,并确定分离荔枝核黄酮的适宜条件.结果表明:HPD800大孔吸附树脂对荔枝核黄酮有较好的吸附分离性能,其对荔枝核黄酮的静态吸附平衡时间为10 h;在25℃条件下,通过吸附等温线,Langmuir模型比Freundlich模型能够更好的描述荔枝核黄酮在HPD800树脂上的吸附平衡过程,所得回归方程为:C/Q=C/434.78 +1/1.35×434.78(R2 =0.999 3),其相关系数R＞0.99.吸附溶液适宜的pH值为5.0.确定树脂柱的较佳操作条件为:流速3.0 mL/min,荔枝核黄酮浓度30.81 mg/mL.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2013(039)003【总页数】4页(P206-209)【关键词】荔枝核;黄酮;大孔树脂;吸附【作者】江敏;胡小军;林彩霞;梁树尧【作者单位】湛江师范学院化学科学与技术学院广东高校新材料工程技术开发中心,广东湛江,524048;湛江师范学院化学科学与技术学院广东高校新材料工程技术开发中心,广东湛江,524048;湛江师范学院化学科学与技术学院广东高校新材料工程技术开发中心,广东湛江,524048;湛江师范学院化学科学与技术学院广东高校新材料工程技术开发中心,广东湛江,524048【正文语种】中文荔枝核是无患子科植物荔枝(Litchi chinensis Sonn).的成熟种子，味甘、微苦，归肝、肾经，具有行气散结、祛寒止痛功效。
荔枝核的化学成分有甾类、皂苷、挥发油、鞣质、脂肪酸、聚合花色素、糖类、蛋白质、无机盐以及黄酮［1－3］。
黄酮是其主要成分之一，荔枝核黄酮在Hep－2细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用［4］，还具有抗氧化［5］、抗流感病毒［6］、抗乙型肝炎病毒［7］、抗SARS 病毒［8］等多种药理作用。
超声波协同酶法提取荔枝壳中总黄酮及抗氧化性
超声波协同酶法提取荔枝壳中总黄酮及抗氧化性阮尚全;宋秋菊;何慧蓉;张裕;罗大英;兰子平【摘要】以荔枝壳为原料,试验了超声波协同酶法提取荔枝壳中的总黄酮.考察了单因素乙醇体积分数、料液比、超声波功率、pH值、酶用量、提取温度和提取时间对黄酮提取率的影响.采用正交试验确立了最优提取条件,即乙醇体积分数为50％、料液比为1:70、提取时间为100 min、酶用量为0.12％,总黄酮的提取率达5.10％.提取物具有较强的清除·OH自由基及O2-·自由基的能力.【期刊名称】《四川师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(037)004【总页数】5页(P574-578)【关键词】荔枝壳;超声波;纤维素酶;黄酮;抗氧化性【作者】阮尚全;宋秋菊;何慧蓉;张裕;罗大英;兰子平【作者单位】内江师范学院化学化工学院,四川内江641112;内江师范学院四川省高等学校果类废弃物资源化重点实验室,四川内江641112;内江师范学院化学化工学院,四川内江641112;内江师范学院化学化工学院,四川内江641112;内江师范学院化学化工学院,四川内江641112;内江师范学院化学化工学院,四川内江641112;内江师范学院化学化工学院,四川内江641112;内江师范学院四川省高等学校果类废弃物资源化重点实验室,四川内江641112【正文语种】中文【中图分类】O629.9;O652.62荔枝（Litchi chinensis Sonn.）为无患子科荔枝属常绿乔木,是热带和亚热带的特色水果,主要分布于我国广东、广西、福建、台湾以及四川的合江县等地区.合江荔枝产量占四川全省的90%以上,2012年产量已达1 100多万kg.荔枝壳为荔枝的外果皮,含有如花青素、红色素、黄酮类、酚酸和多糖类等多种活性成分,具有很高的药用价值［1］.黄酮是广泛存在于植物细胞内的细胞次生代谢、具有酚羟基的化合物,由于其自身被氧化而具有抗氧化作用,在体内和体外都具有较强的抗氧化性,对人的毒副作用小,因而受到了国内外学者的高度重视［2-3］.纤维素酶能催化破坏细胞壁,改变细胞壁的通透作用,利于细胞内含物渗出,同时其具有专一性,不破坏其他物质,保持其他物质的原生结构,因此与传统提取方法相比,具有无毒、反应条件温和及催化活力可调控制等优势,在植物成分的提取中得到了广泛应用［4］；超声波在介质中传播时产生的空化作用、机械效应、热效应、化学效应,可提高目标物从固相转移到液相的传质速率,提高提取产率,同时不影响大多数有效成分的生理活性［5-6］.本文将纤维素酶和超声波的优点相结合,以四川合江县产的荔枝壳为原料,建立荔枝壳中黄酮提取的新方法,并对提取物清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力进行了初步实验,对提高荔枝壳的综合利用价值具有重要意义.1 材料与方法1.1 主要仪器与试剂1.1.1 主要仪器 T6新世纪紫外可见分光光度计（北京普析）、KQ-400KDB超声波清洗器（江苏昆山）、TD-5台式低速离心机（四川蜀科）、DFT-100型中药粉碎机（温岭）、电热鼓风干燥箱（重庆银河）、AE240电子分析天平（梅特勒-托利多）、HH-S2恒温水浴锅.1.1.2 试剂纤维素酶（11 kU/G）,芦丁（BR）,三羟甲基氨基甲烷（BR）,亚硝酸钠、硝酸铝、无水乙醇、氢氧化钠等均为分析纯.1.2 实验方法1.2.1 提取工艺流程荔枝壳清洗→烘干粉碎→溶剂浸泡酶解→超声提取→分离显色→测定.1.2.2 黄酮的提取与测定试验用荔枝壳采自于四川合江县,材料洗净低温烘干、粉碎.准确称取一定量荔枝壳粉于提取瓶中,按照一定固液比加入乙醇和纤维素酶酶解,在一定的温度下超声提取,离心分离上层清液定容,按照文献［7］方法测定吸光度值,根据标准曲线回归方程得到提取液浓度,计算总黄酮提取率.1.2.3 芦丁标准曲线的绘制准确称取0.020 0g芦丁标准品溶解于体积分数30%的乙醇中,定容于100 mL容量瓶中,得到0.20 mg/mL标准液.准确移取标准液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL 于25 mL 比色管,按文献［7］方法加入质量分数5%的NaNO2溶液1.0 mL,6 min后加入质量分数10%的硝酸铝溶液1.0 mL,放置6 min,加质量分数4%NaOH溶液10.0 mL,用蒸馏水定容,在511 nm处测定吸光度,绘制标准曲线.1.2.4 单因素实验准确称取荔枝壳粉1.000 g于100 mL提取瓶中,做以下因素试验:固定料液比为1∶30、pH5、0.06%的纤维素酶、50℃酶解 80 min、280 W超声波提取20 min条件,乙醇体积分数分别为10%～80%；固定乙醇体积分数为40%、0.06%的纤维素酶、pH5、50℃酶解80 min、280 W超声波提取20 min条件,料液比分别为1∶20～1∶80；固定乙醇体积分数为40%、料液比1∶30、pH5、50℃浸泡80 min、280 W超声波提取20 min条件,纤维素酶用量分别为0.00%～0.30%；固定乙醇体积分数为40%、料液比1∶30、0.06%的纤维素酶、pH5、酶解80 min、280 W超声波提取20 min条件,酶解温度为30～70℃；固定乙醇体积分数为40%、料液比1∶30、0.06%的酶用量、pH5、280 W超声波提取20 min条件,50℃酶解20～80 min；固定乙醇体积分数为40%、料液比1∶30、0.06%的纤维素酶、50℃酶解80 min、280 W超声波提取20 min条件,pH值分别为3～7；固定乙醇体积分数为40%、料液比1∶30、0.06%的纤维素酶、pH5、50℃恒温酶解80 min、超声波提取20 min条件,超声波功率分别为160～400 W.1.2.5 抗氧化性实验对·OH清除能力采用水杨酸法,参照文献［8］方法,在反应体系中加入荔枝壳提取物,利用H2O2与Fe2+混合产生·OH,在反应体系中加入水杨酸有效地捕捉·OH产生有色产物,产物在510 nm波长处测定其吸光度.O2-·清除的实验采用邻苯三酚自氧化法,参照文献［9］利用邻苯三酚在弱碱性条件下自身氧化产生O2-.和有色中间产物,在反应体系中加入荔枝壳提取物,O2-·的生成受到抑制,邻苯三酚自氧化受阻,在420 nm波长处测定其吸光度.2 结果与讨论2.1 标准曲线实验结果实验测得标准曲线回归方程为:吸光度 A ＝0.0114c-0.0019,c/（μ g/mL）为芦丁质量浓度,复相关系数R2＝0.9993,芦丁质量浓度在8.0～56.0 μ g/mL范围内线性关系良好,如图1所示.2.2 单因素试验结果2.2.1 乙醇体积分数对黄酮提取率的影响总黄酮提取率随着乙醇体积分数的升高而增加,乙醇体积分数为50%时达到最高,随后逐渐降低.这是由于黄酮溶解于乙醇,乙醇体积分数增大利于黄酮的溶出,致提取率增大.但过高的乙醇体积分数使体系介质发生的改变可能降低了超声波功能作用,致使黄酮的提取率降低,如图2所示.2.2.2 料液比对黄酮提取率的影响总黄酮提取率随着乙醇体积分数的升高而增加,料液比为1∶60时达到最高,随后变化不大,如图3所示.2.2.3 酶用量对黄酮提取率的影响总黄酮提取率随着酶用量的升高而增加,在酶用量为0.12%时达到最高,随后逐渐降低.原因是纤维素酶破坏原料的细胞壁,让黄酮更易扩散到溶剂中,以提高提取率；过高的酶量会使总黄酮的提取率减小,这是由于底物配比对酶解作用有较大的影响,同时纤维素酶的加入也会加大大分子物质（如:果胶等）的溶出,对黄酮产生吸附,致总黄酮得率降低,如图4所示.2.2.4 酶解温度对黄酮提取率的影响总黄酮提取率随温度的升高而增加,温度为60℃时最高,随后逐渐降低.这是由于温度越高,对原料作用越充分,提取率提高；而酶有一个最适作用温度,当温度过高时,酶的活性会降低,黄酮也会分解,故提取率降低,如图5所示.2.2.5 酶解时间对酮提取率的影响总黄酮提取率随着酶解时间的增加而增加,酶解时间为80 min时提取率最高,然后逐渐降低.原因是提取时间增长,有利于黄酮的溶出,提取率增大；但过长的时间也会导致黄酮氧化分解,且乙醇也会挥发,导致黄酮提取率会降低,如图6所示.2.2.6 酶解pH值对黄酮提取率的影响总黄酮提取率随着pH升高而增加,pH＝5时最大,随后逐渐降低.是由于纤维素酶的活性受pH影响,在黄酮提取过程中pH值为5时是纤维素酶的最适酸度,pH值过低和过高时,酶的活性会逐渐降低,故黄酮提取率会也会随之受到影响,如图7所示.2.2.7 超声波功率对黄酮提取率的影响总黄酮提取率随着超声波功率的升高而增加,超声波功率为240 W处达到最高,随后逐渐降低.超声波功率的增大,有利于黄酮的溶出,但能量过高,也会导致黄酮分解,如图8所示.2.3 正交试验及结果在单因素实验结果的基础上,其他因素为最佳的条件下,主要考查乙醇体积分数、料液比、酶用量、酶解时间对提取率影响进行正交试验设计.取3个水平按L9（34）进行正交实验,以黄酮提取率为评价标准,确定最佳工艺.实验结果见表1,方差分析见表2.表1 L9（34）正交实验设计及结果Table 1 L9（34） orthogonal experimental design and results注:K1、K2、K3为各因素水平黄酮提取率平均值,R为极差.序号 A乙醇体积分数/% B料液比 C酶解时间/min D酶用量/%总黄酮提取率/%1 1（40） 1（1∶50） 1（60） 1（0.06） 3.80 2 1 2（1∶60） 2（80）） 2（0.12） 4.01 3 1 3（1∶70） 3（100）） 3（0.18） 4.12 4 2（50） 1 2 3 4.42 5 2 2 3 1 4.40 6 2 3 1 2 4.29 7 3（60） 1 3 2 4.24 8 3 2 1 3 3.99 9 3 3 2 1 4.24 K1 3.977 4.153 4.027 4.147 K2 4.370 4.133 4.223 4.180 K3 4.1574.217 4.253 4.177 R 0.393 0.084 0.226 0.033由表1和表2可知:乙醇体积分数、料液比、酶解时间、酶用量等因素均对荔枝壳中总黄酮的提取有影响；由极差R可知,各因素对黄酮提取率的影响主次顺序为:A ＞C＞B＞D；从荔枝壳中提取黄酮的工艺条件最优组合为A2B3C3D2,即乙醇体积分数50%,料液比1∶70,提取时间为100 min,酶用量为0.12%为最佳提取条件.方差分析知:乙醇体积分数及酶解时间对黄酮提取率有影响具有显著性,料液比及酶用量对黄酮提取率有影响但不具显著性.为进一步验证正交试验的结果及重现性,在最优条件下进行4次平行实验,荔枝壳的黄酮提取率分别为:5.145%、5.177%、5.016%、5.048%,平均提取率为5.10%.表2 正交试验的方差分析Table 2 The variance analysis of the orthogonal experiment因素偏差方和自由度 F 显著性乙醇体积分数/% 0.233 2 116.500 α＝0.05料液比 0.011 2 5.500酶解时间/min 0.091 2 45.500 α＝0.05酶用量/% 0.002 2 1.000误差 0.000 22.4 抗氧化性试验结果2.4.1 清除·OH活性实验结果为:提取物在2.9～29 μ g/mL范围内,对·OH 清除率为 19.89% ～66.67%,如图9所示.2.4.2 清除O2-·活性实验结果为:提取物在29～116 μ g/mL 范围内,对 O2-·清除率为13.41%～50.227%,如图10所示.3 结论本文采用单因素联合正交试验设计,建立以超声波协同酶法提取了荔枝壳中的总黄酮方法,并对提取产物实验了清除·OH和O2-·活性测定,得出提取荔枝壳中黄酮的最佳工艺条件为:乙醇体积分数50%,料液比1∶70,提取时间为100 min,酶用量为0.12%,荔枝壳中黄酮类物质的提取率为5.10%.提取产物对O2-·和·OH自由基具有较强的清除能力.本法作为一种天然产物活性成分分离提取的新技术,具有条件温和、快速的特点.将超声波和纤维素酶的特点综合利用,对提取荔枝壳中的黄酮具有一定的适用价值.荔枝壳中黄酮物质的分离纯化等问题有待进一步探究.致谢内江师范学院自然科学基金（12NJZ02）对本文给予了资助,谨致谢意.参考文献［1］杨宝,赵谋明,李宝珍,等.荔枝壳活性成分提取工艺条件研究［J］.食品与机械,2004,20（6）:28-30.［2］裴凌鹏,惠伯棣,金宗濂.黄酮类化合物的生理活性及其制备技术研究进展［J］.食品科学,2004,25（2）:203-207.［3］赵继红,梁宇,颜达予.黄酮类化合物抗氧化活性的结构因素［J］.北方工业大学学报,2001（1）:36-44.［4］闫训友,刘志敏,史振霞,等.纤维素酶在食品工业中的应用进展［J］.食品工业科技,2004,25（10）:140-142.［5］魏燕华,成差群,谭秀芬.超声波提取法与索氏提取法提取化橘红中柚皮苷的比较［J］.中国药业,2009（18）:47-48.［6］付伟丽,黄作喜,唐正义,等.铁皮石斛多糖研究进展［J］.内江师范学院报,2011,26（4）:40-44.［7］张海悦,王黎兵,郭新力.狭叶荨麻总黄酮的测定［J］.食品科技,2007（12）:181-183.［8］张春生,方玉梅,王毅红,等.野生鱼腥草黄酮化合物对羟基自由基的清除作用［J］.食品科技,2009,34（6）:188-190.［9］海平,苏雅乐其其格.蒙家小白蒿中总黄酮的提取及其抗氧化活性研究［J］.中国实验方剂学杂志,2012（3）:59-63.。