谷胱甘肽还原酶检测试剂盒简介讲课讲稿
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
离心 10min，取上清用于酶活性的测定。
GSH 工作液的配制：用 GSH 配制夜：GSH 储存液(100μ mol/L)=99:1 的比例稀释至 1mmol/L，即为 GSH 工作液(1mmol/L)，该溶液配制好以后可 4℃保存 1 天。
2、 GSH-Px 酶促反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
30.8mg 200ml 125ml 30ml 100ml 说明书
Storage
RT -20℃ RT RT -20℃ 避光 -20℃ 避光
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理： ① 血清、血浆样本：从待测样本中分理出的血清或血浆丌应有溶血，如果含有应去除红细
胞后，直接检测，如超过检测范围，用生理盐水稀释后检测。血清去除红细胞的简易方 法如下：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少 500μl 全血。弃上清，用冰冷的红细 胞沉淀 10 倍体积的样品匀浆液重悬沉淀，再同前离心，弃上清。加入约红细胞沉淀 4 倍体积的冰冷的 ddH2O 裂解红细胞。取上清。亦可采用红细胞裂解液去除红细胞，如 Leagene ACK 红细胞裂解液等。 ②组织样本：动物用含有 20U/ml heparin 的生理盐水(0.9% NaCl containing 20U/ml heparin)灌流清除血液后获取组织样品。按照每 20mg 组织加入 200μl 样品匀浆液的比例，
计算：
谷胱甘肽过氧化物酶酶活力单位的定义：1 个酶活力单位(1unit)是指在 37℃， 每 1L 血清，排除非酶促反应，1min 内可以催化 1μmol/L GSH 氧化所需(减少)的酶量为一个 GSH-Px 活性单位。
GSH-Px(U/L)= (A 本底－A 测定－A 空白)/(A 本底－A 空白)×200
还原型谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB速率比色法)简介：谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。
谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测还原型谷胱甘肽的试剂盒，其检测原理是待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG，通过分光光度法(分光光度计)检测吸光度，与相应处理的GSH标准比较，获得样品的GSH含量。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中还原型谷胱甘肽(GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、离心管或小试管2、蒸馏水3、离心机编号名称TO1037100TStorage试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准10mg 4℃避光试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT试剂(C): DTNB 20mg RT 避光试剂(D): 蛋白沉淀剂4g RT 避光试剂(E): NADPH 10mg -20℃避光使用说明书1份4、水浴锅5、比色杯6、分光光度计或生化分析仪操作步骤(仅供参考)：1、配制GSH标准储存液：取还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入l ddH2O，溶解并混匀，即为还原型GSH标准储存液(10mM)。
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。
GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理：GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10μL×1支，-20℃保存。
试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
GSH-Px测定操作：1. 酶标仪预热30 min，调节波长到340 nm。
2. 混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。
3. 混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一20 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。
还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明
还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。
谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)活性测定试剂盒使用说明
谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,GR）活性测定试剂盒使用说明产品简介：GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，通常昆虫中GR被TrxR取代，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一。
GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。
GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR 还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。
GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时不断消耗NADPH；通过测定NADPH减少量，即可测定GR活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存3个月试剂二×1支，充分溶解于6ml双蒸水中，4℃保存3个月试剂三×2支，临用前配制，每支充分溶解于3ml双蒸水中操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）GR测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min二、测定操作表：测定管空白管试剂一0.75ml0.85ml试剂二0.05ml0.05ml样本0.1ml/试剂三0.1ml0.1ml迅速混匀，于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。
GR活力计算：GR活力单位定义：在25℃，pH8.0条件下，每毫克蛋白每分钟氧化1mmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。
计算公式：GR酶活(U/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)/3÷6.22×（V总/V样）×稀释倍数×1000/Cpr=(△A测定管-△A空白管)×535.91×稀释倍数÷Cpr△A=A1-A2，6.22：NADPH的毫摩尔消光系数，V总：反应总体积（ml），V样：所用样品体积（ml），Cpr：蛋白浓度（mg/ml）。
S0055-谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(Glutathione Reductase Assay Kit)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以催化如下反应。
NADPH在340nm有吸收峰，因此可以通过测定A340的减小来计算出谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase，简称GR)的活性。
本试剂盒可以检测组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
保存条件：-20℃保存，半年有效。
NADPH溶解后宜-70℃保存，4℃可以保存一天，-20℃保存一周后NADPH会减少10%以上。
GSSG 在配制成溶液后，适当分装，-20℃保存。
注意事项：本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。
另外，硫酸钠、硫酸铵和铁氰化物都会干扰本试剂盒的测定。
请尽量避免。
样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。
一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。
NADPH不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1．样品的准备：a.细胞样品的准备。
可以用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)参考相应的说明裂解细胞样品。
b.组织样品的准备。
动物用含有1mM EDTA的生理盐水(0.9% NaCl)灌流清除血液后获取组织样品。
可以用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液参考相应的说明裂解组织样品。
《实验一谷胱甘肽》课件
步骤二
按照一定比例混合谷氨酸、半胱氨酸和甘 氨酸，加入磷酸盐缓冲液调节pH值。
步骤四
通过高效液相色谱法检测谷胱甘肽的合成 情况。
步骤三
在一定温度和pH值条件下，通过酶促反 应合成谷胱甘肽。
02
谷胱甘肽介绍
谷胱甘肽的化学结构
谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的 三肽。
谷胱甘肽分子中，谷氨酸和半胱氨酸之间形成了 一个肽键。
实验原理
谷胱甘肽是一种重要的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，具有抗氧化、解毒和维持细胞内环境稳定等作用。 本实验将通过化学合成和生物提取两种方法制备谷胱甘肽，并对其性质和功能进行表征。
步骤一
谷胱甘肽的合成
THANKS
感谢观看
讨论与展望
总词
综合讨论与未来方向
详细描述
在讨论与展望部分，应对实验结果进行综合分析和推理，探讨实验结果的可能应用和实 际意义。同时，应结合当前领域的发展趋势和未来需求，提出对实验的改进和进一步研
究的方向，为后续的研究提供参考和启示。
05
结论
本实验的主要发现
谷胱甘肽具有抗氧化和解毒作用
实验结果显示，谷胱甘肽能够清除自由基，减轻氧化应激对细胞的损伤，同时能够结合并 排除有毒物质，保护细胞健康。
《实验一谷胱甘肽》 ppt课件
目录
• 实验简介 • 谷胱甘肽介绍 • 实验操作过程 • 结果与讨论 • 结论 • 参考文献
01
实验简介
实验目的
探究谷胱甘肽对某些疾病 的治疗作用。
了解谷胱甘肽在生物体内 的生理作用。
掌握谷胱甘肽的合成方法 。
01
03 02
实验原理
01
谷胱甘肽是一种含有活性巯基(-SH)的三肽，由谷氨酸、半胱氨 酸和甘氨酸组成。
谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)试剂盒使用说明
谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒使用说明微量法注意：正是测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1195规格：100管/96样产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1支，-20℃保存。
混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一20mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。
（注意：必须现配现用，当天使用完）试剂四：液体×1瓶，4℃保存。
产品说明：GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。
GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
GSH-Px催化H2O2氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）:试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量104个：试剂一体积（ml）500~1000:1的比例,建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测。
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谷胱甘肽还原酶检测试剂简介
谷胱甘肽还原酶的作用：
一、谷胱甘肽还原酶（GR）在人类细胞中具有极其重要的生理功能，广泛存在于人体肝、肾、心红细胞、单核巨噬细胞等组织细胞中。
它可及时地清除人体代谢过程中产生的氧自由基（OFR），是维持细胞中还原型谷胱甘肽（GSH）含量的主要黄素酶。
对保护肝细胞膜完整具有非常重要的作用意义。
在《临床肝病实验诊断学》和《临床检验诊断解析》中明确标示，血清谷胱甘肽还原酶活性测定可用于协助诊断肝脏疾病，血清谷胱甘肽还原酶活性上升可以辅助诊断肝炎、肝硬化、梗阻性黄疸及相当数量引发的肝肿瘤。
原发性肝细胞癌和广泛转移性肝肿瘤时，血清谷胱甘肽还原酶活性明显升高，急性病毒性肝炎或中毒性肝炎中度升高，而肝硬化是血清GR轻度升高。
二：检测谷胱甘肽还原酶的临床意义
1、急性肝炎早期阶段，血清谷胱甘肽还原酶敏感性最高，可用于肝损的早期检测；
2、急性肝炎患者GR比转氨酶更早增加达到峰值，早早期肝脏损伤判断的首选指标；
3、GR有助于判断亚临床DILI，提高临床DILI的诊断率
4、不同于ALT和AST在肝细胞膜破裂和线粒体破裂时才能检测出来，GR填补肝细胞受损早期自我修复阶段至破裂进程中诊断的空白，将更有利于早期肝炎的诊断和治疗
三、临床解读：
谷胱甘肽和谷丙、谷草在化验单上的具体解读，谷胱甘肽的血清血浆正常值是33-73U/L，共有四种情况。
1、谷胱甘肽指标升高，谷丙和谷草指标正常，提示有肝损伤的风险，建议加强对肝脏的检测频率，有利于发现早期肝损伤。
2、谷胱与谷丙，谷草同时升高，提示进入肝损伤爆发期，建议临床治疗措施干预。
3、谷胱甘肽升高，谷丙、谷草下降，提示正在进行肝损伤修复，可以结合三者评估临床治疗情况。
4、当三者都出现下降，情况有两种极端提示：（1）是修复完成，临床好转。
（2）是重型肝炎出现严重情况，出现胆酶分离现象。
另外一种是红细胞的检测，正常值4.7-13.2U/gHb
红细胞主要针对“蚕豆病”和遗传性伯氨喹溶血病人，谷胱甘肽还原酶降低，红细胞的细胞膜容易被氧化和分解，导致溶血性贫血和溶血性黄疸。