谷胱甘肽还原酶(GR)活性测定试剂盒说明书
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
人谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒说明书
人谷胱甘肽（GSH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中谷胱甘肽（GSH）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽（GSH）水平。
用纯化的人谷胱甘肽（GSH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽（GSH），再与HRP标记的谷胱甘肽（GSH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人谷胱甘肽（GSH）的含量。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
GR检测线性范围
GR检测线性范围
谷胱甘肽还原酶（GR）测定试剂盒（紫外比色法）试剂盒96T/48T 进口/国产，提供检测试剂盒价格、用途、规格、实验原理、说明书、相关实验操作等详细信息。
谷胱甘肽还原酶（GR）测定试剂盒（紫外比色法）试剂盒产品优点：
1线性范围：0-500U/L（判定依据：r2≥0.995）；
2准确度：不准确度≤10%；
3精密度：批内CV<4.0%；批间相对极差<6.0%；
4灵敏度：试剂检测下限≤4.0U/L。
谷胱甘肽还原酶（GR）测定试剂盒（紫外比色法）试剂盒声明
1.限于现有条件及科学技术水平，尚不能对所有原料进行全面的鉴定分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。
2.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的待测样品。
3.只有全部使用试剂盒内的试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。
只有严格遵守Antiscience 的实验说明才会得到最佳的检测结果。
4.有效期：6 个月。
5.本操作说明同样适用于48T 试剂盒。
抗坏血酸谷胱甘肽测定
还原型谷胱苷肽GSH2．试剂配制（1）1mM GSH标准液10mL（现用现配）：称3.0733mgGSH,加蒸馏水至10mL。
(不要)（2）5％磺基水杨酸500mL：25g溶于500mL水中。
（3）6mM DTNB：称取0.118905g DTNB溶于50mL PBS（0.1M，pH7.5）中。
（4）2mM NADPH：18.1mg NADPH溶于10mL PBS中。
（5）1mMGSSG标准液10mL：6.126mg GSSG加PBS至10mL。
(不要)实际配置0.1M PBS(pH 7.5): 3个处理*2个品种*3次重复*0.5ml*3次测定=27ml; （实际配置50 ml）6mM DTNB: 3个处理*2个品种*3次重复*0.2ml*3次测定=10.8ml; （实际配置50 ml，实际用量0.1189g）2mM NADPH: 3个处理*2个品种*3次重复*0.1ml*3次测定=5.4ml;（实际配置50 ml, 实际用量18.1mg）(1U)GRⅢ: 3个处理*2个品种*3次重复*0.1ml*3次测定=5.4ml; （实际配置50 ml, 实际用量10ml）5％磺基水杨酸：3个处理*2个品种*3次重复*0.01ml*3次测定=0.54ml;（实际配置10ml）(实际用量0.5g/10ml)0.5mM PBS: 3个处理*2个品种*3次重复*1.5ml*3次测定=81ml; （实际配置100 ml）乙醚（二乙醚）: 3个处理*2个品种*3次重复*10ml*3次测定=540ml; （实际配置1000 ml）PBS Buffer 0.5mM: 3个处理*2个品种*3次重复*1.5ml*3次测定=81ml; （实际配置150 ml）2-乙烯吡啶: 3个处理*2个品种*3次重复*0.2ml*3次测定=10.8ml; （实际用量20 ml）乙醚: 3个处理*2个品种*3次重复*10ml*3次测定=540ml; （实际用量1000 ml）1．标线制作：配制浓度为0，0.02mM,0.04mM,0.06mM,0.08mM,0.1mM,0.12mM的标准GSH溶液（吸取上述标准液各0.1mL）加入0.5mL 0.1M磷酸钠Buffer（pH7.5）(含5mM EDTA)，0.2mL 6mM DTNB,0.1mL 2mM NADPH,0.1mL(1U)GRⅢ（谷胱甘肽还原酶）(sigma),从0.1mL GSH启动反应，测定650s的A412（OD412），绘制标准曲线。
还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明
还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。
武汉生之源生物科技股份有限公司产品推荐手册说明书
武汉生之源生物科技股份有限公司WUHAN LIFE ORIGIN BIOTECH JOINT STOCK CO., LTD.电话：+86-027-******** 传真：+86-27-87196320 武汉生之源生物科技股份有限公司WUHAN LIFE ORIGIN BIOTECH JOINT STOCK CO., LTD.生化类｜POCT类发光类｜PRODUCT RECOMMENDATIONS重点产品推荐手册武汉生之源生物科技股份有限公司（以下简称“生之源”或“该公司”）是一家集研发，生产和销售于一体的国家高科技企业。
作为科技驱动型企业，公司拥有国内领先的生化产品研发平台、胶乳增强免疫比浊平台、POCT产品研发平台、化学发光产品研发平台和参考实验室平台，形成由产品研发到成品销售的完整产品链。
生之源已成为在中国拥有完整IVD试剂产业链的极少数IVD试剂公司之一。
作为体外诊断试剂和科学试剂的制造商，目前，已有80多种体外诊断试剂产品关于生之源公司介绍COMPANYPROFILE 通过了CFDA注册和CE认证。
产品主要涉及的临床应用包括：肾功能，葡萄糖代谢，胰腺，肝功能，电解质，血脂，心血管，特殊蛋白质和无机离子。
生之源的目标是提供最高质量的体外诊断试剂和科研试剂，通过与优秀团队的良好合作以及高端技术人才的吸收，公司不断完善自身技术领域的技术平台，优化产品性能，以更好地满足客户的各种需求。
限公司的全资子公司，是一家专业从事体外诊断试剂研发，生产、技术服务于一体的高新技术企业，公司坐落于位于长沙——山和医药健康产业园。
公司秉持着“用生物技术为人类服务，让人类生活更美好”的美好愿景，重视产品技术实验、技术创新以及产品升级研发，致力于为诊断客户提供性能卓越的体外诊断试剂产品。
盖肝功能，肾功能，心脑血管，代谢疾病，免疫功能及炎症等多个临床应用方向，其中包括了多个前沿的创新诊疗项目，致力于为患者提供全方位的诊断服务。
总谷胱甘肽检测试剂盒
50 μl
50 μl
50 μl
b. 加入50微升0.16mg/ml NADPH溶液，混匀。
c. 立即用酶标仪测定A412，每5分钟测定一次或实时测定，共测定25分钟，测得5个数据。(说明：为了简化实验步骤，可 以在加入NADPH溶液混匀后25分钟，仅测定一次A412)。如果仪器可以设置温度，把温度设置在25℃，否则就在室温
2. Xiao-Long W, Chuan-Ping Y, Kai X, Ou-Jv Q. Selenoprotein W depletion in vitro might indicate that its main function is not as an antioxidative enzyme. Biochemistry (Mosc). 2010;75(2):201-7.
NADPH。每检测一个样品需50微升0.16mg/ml NADPH。
2. 标准品的准备：
把10mM GSH储备液用蛋白去除试剂S溶液稀释成50μM GSH溶液。然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。取
50、25、15、10、5、2μM GSH溶液六个点做标准曲线。注意：由于GSH在蛋白去除试剂S溶液中不太稳定，用蛋白去除
b. 细胞样品的准备。请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定。PBS洗涤细胞一次，离心收集
细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀体积3倍量的蛋白去除试剂S溶液，即如果细胞沉淀为10微升，则加入30微升蛋白去除
试剂S溶液，充分Vortex。(细胞沉淀的体积可以根据细胞沉淀的重量进行估算。收集细胞前后分别对离心管进行称
等处理，而直接加入适量蛋白去除试剂S溶液进行匀浆)。4℃放置10分钟后，10,000g 4℃离心10分钟，取上清用于总
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货号：MS1111 规格：100管/96样谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。
GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。
GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。
测定原理：
GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。
自备仪器和用品：
低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水
试剂组成和配置：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加入 2mL 蒸馏水，混匀。
试剂三：液体×1 支，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；
然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
操作步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入170μL试剂一，20μL试剂二，10μL试剂三，
于340nm 测定10s和190s吸光度，记为A空1和A空2，△A空白管= A空1﹣A空2。
4. 测定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入150μL试剂一，20μL试剂二，20μL上清液，
10μL试剂三，于340nm测定10s和190s吸光度，记为A测1和A测2，△A测定管=A测1﹣A测2。
注意：空白管只需要测定一次。
计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
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活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADPH氧化为1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109]÷[Cpr×V
样]÷T= 536×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每克样本每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/g)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109] ÷(W×V 样÷
V 样总)÷T= 536×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每104个细胞每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/104cell)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109] ÷(细胞
数量×V 样÷V 样总)÷T= 536×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量（4）按液体体积计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每毫升液体每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mL)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷×V 样÷T
= 536×(△A 测定管-△A 空白管)
ε：NADPH 摩尔消光系数 6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4 L；106：1 mol=1×106μmol； Cpr：上清液蛋白浓度（mg/mL）；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL =2×10-2mL；V 样总：提取液体积，1mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，3 min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷[Cpr
×V 样]÷T= 1072×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr (2). 按样本质量计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每克样本每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/g)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109] ÷(W×V 样÷
V 样总)÷T= 1072×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每104个细胞每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/104cell)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109] ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1072×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量（4）按液体体积计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0条件下，每毫升液体每分钟催化1nmol NADPH氧化为1
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个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mL)= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷×V 样÷T
=1072×(△A 测定管-△A 空白管)
ε：NADPH摩尔消光系数 6.22×103 L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5 cm；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4L；106：1 mol=1×106μmol； Cpr：上清液蛋白浓度（mg/mL）；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL =2×10-2mL；V 样总：提取液体积，1mL；V 样总：提取液体积，1mL；T：反应时间，3 min。
注意事项：
（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融；（2）试剂二须现配现用，配制完后，置于冰上，未使用完的 4℃保存，三天内使用完。
（3）测定前须先用1～2个样做预实验，确保180s内吸光值变化呈线性，哺乳动物组织一般须用试剂一稀释2～5倍；
（4）细胞中GR活性测定时，细胞数目须在300 万-500万之间，细胞中GR的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。
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