_基于自噬调控肿瘤相关巨噬细胞表型极化的金纳米粒抗肿瘤机制研究
细胞自噬对肿瘤细胞生长调控的影响
细胞自噬对肿瘤细胞生长调控的影响人们习惯将细胞自噬当作细胞的一种无害的代谢过程。
其实，它是自身保护机制下，清除细胞内过多或异常内质网、线粒体等细胞组分，实现生物体代谢平衡的基本方式之一。
而不幸的是，许多肿瘤细胞正是利用这种自噬过程进行生长调控，并在阻碍自噬继续进行时，顺利逃避机体的清理浊化，从而迅速增殖。
一、什么是细胞自噬细胞自噬是一种原代质袋-溶酶体系统涉及的草根的、自我调整的物质循环途径，可以分解各种变质、异常、超时的蛋白质、膜类化合物和内源性代谢产物，以完成细胞自我平衡和内在新陈代谢的调整。
此过程基于一系列途径进行，并涉及蛋白质的适应性变化、核苷酸的代谢降解、组蛋白修饰和表观调控等多种方式。
自噬与细胞分化、凋亡、轴突的发生和突触分化、神经信号传递等多个方面息息相关。
二、肿瘤细胞与自噬的复杂关系当肿瘤细胞中遇到自噬时，内水平的分子调控机制抑制自噬可能发生任何的精细调节机制，导致工作的老化和分化不全。
如果肿瘤细胞不能完成巨噬细胞的清除，他们通过自噬释放成为可溶性因子，成为肿瘤细胞克隆的内在部分。
在上面这些过程中，类似抗私有化的恢复性自我修复机制也可能会参与其中。
自噬和细胞凋亡有密切的关联，是一种在肿瘤细胞中常常出现的现象。
对于癌细胞来讲，细胞自噬是一种把自己和环境分开的生存机制.在细胞自噬过程中，常会出现不适量的蛋白降解或一些活性物质的释放，导致细胞生长和细胞生存的环境变化。
三、如何将细胞自噬作为肿瘤细胞的药物靶点在肿瘤治疗中，研究自噬对肿瘤细胞生长调控的影响，发现自噬对肿瘤细胞具有重要的调控作用。
一方面，细胞自噬可以通过减少细胞对营养物质和能源的需求，限制肿瘤细胞的生长和生存。
同时，在肿瘤治疗时，可以通过调节自噬通路来提高其治疗效果。
根据细胞自噬机制的不同，针对不同自噬通路的药物研究也在不断进行。
例如，一些自噬抑制剂可以阻碍细胞自噬过程的进行，从而抑制肿瘤细胞的生长和分化。
另外，对于一些抗肿瘤药物，例如S-1、紫杉醇等，研究也发现其抑制肿瘤细胞生长的机制也和肿瘤细胞自噬的机制密切相关。
肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中的意义和研究进展
肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中的意义和研究进展
李明哲;申亮亮;曲璇
【期刊名称】《生物技术通讯》
【年(卷),期】2018(029)004
【摘要】肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在肿瘤间质中占有很大比例,具有不同于炎症反应中巨噬细胞的表型和功能.在不同刺激因子作用下,TAM可以分化为具有抑制肿瘤活性的M1型巨噬细胞和具有促进肿瘤活性的M2型巨噬细胞.肿瘤组织中的TAM 主要为M2型,它们促进肿瘤的发生、发展、侵袭和转移.特定的刺激可将M2型TAM逆转为M1型TAM而抑制肿瘤生长,这将为肿瘤免疫治疗提供新思路.我们简要综述肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展.
【总页数】6页(P558-563)
【作者】李明哲;申亮亮;曲璇
【作者单位】空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032;空军军医大学学员一旅八连,陕西西安710032;空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032;陕西中医药大学,陕西咸阳712046
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展 [J], 支馨仪;刘岩厚;高晶;王轶楠
2.激活的巨噬细胞在抗肿瘤免疫治疗中的意义 [J], 李兰英;田国才
3.肿瘤相关巨噬细胞调节肿瘤免疫治疗作用的研究进展 [J], 徐栩
4.纳米材料调控肿瘤相关巨噬细胞进行肿瘤免疫治疗的研究进展 [J], 徐睿; 刘晨光
5.甲状腺乳头状癌中肿瘤相关巨噬细胞浸润及CD47表达的意义 [J], 刘志敏;刘天卿;王红龙;刘楠
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自噬在巨噬细胞极化中的作用研究进展
[收稿日期]2016-09-06 [修回日期]2017-08-25[基金项目]国家自然科学基金青年基金项目(81400802)[作者单位]1.蚌埠医学院,安徽蚌埠233030;2.上海交通大学医学院附属第九人民医院(北院)内分泌科,上海201900[作者简介]孔祥歆(1989-),女,硕士研究生.[文章编号]1000⁃2200(2018)03⁃0416⁃03㊃综 述㊃自噬在巨噬细胞极化中的作用研究进展孔祥歆1,2 综述,刘卉芳2,陈凤玲2 审校[关键词]自噬;巨噬细胞;极化;综述[中图法分类号]R 392.3 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2018.03.041 自噬广泛发生在真核细胞内,是清除细胞内功能异常的细胞器㊁病原体和错误折叠的蛋白质等有害大分子物质的重要途径,在维持细胞内环境稳态中发挥重要作用[1],自噬功能失调与许多疾病的发生㊁发展有关㊂巨噬细胞是机体固有免疫的重要组成部分,在防御㊁炎症㊁修复和代谢等生理及病理过程中发挥重要作用㊂同时巨噬细胞也是一种异质性细胞,在不同刺激下可活化成为不同类型(M1㊁M2型巨噬细胞),称之为巨噬细胞极化[2]㊂两种极化类型的巨噬细胞发挥不同的生物学效应㊂本文对近年来自噬与巨噬细胞极化之间关系的研究进展作一综述㊂1 自噬 自噬广泛发生于真核细胞内,是一种在进化上高度保守的过程㊂在自噬过程中,细胞内的蛋白质和细胞器被自噬体包裹后转移到溶酶体消化,调控细胞器和蛋白质的质量,并产生大量细胞内稳态所需的氨基酸和其他构成细胞组分[1]㊂自噬可由多种因素刺激所诱导,例如饥饿㊁活性氧㊁内质网应激㊁细菌感染和缺氧,自噬启动后可以清除受损的细胞器㊁聚集的蛋白和细胞内病原体,因此自噬对细胞内稳态的维持至关重要[3]㊂1.1 自噬的分类 依据不同的功能和机制,自噬分为3种[4]㊂自噬:也就是通常所说的自噬,通过形成双层膜结构的自噬体,并且发生膜的延长,进而与溶酶体相结合,融合构成自噬溶酶体,自噬体中的内容物被溶酶体降解,完成对大部分胞质成分㊁长寿命蛋白和完整细胞器的降解[1]㊂小自噬:由溶酶体膜直接包裹胞质成分进行降解㊂分子伴侣介导的自噬:与前两种自噬不同,分子伴侣介导的自噬只选择性地降解单体的未折叠的可溶性蛋白[5]㊂在小自噬和分子伴侣介导的自噬中,目标细胞内容物直接被溶酶体降解,并不形成自噬体[1]㊂本文谈及的自噬均指大自噬㊂1.2 自噬的过程与调节 目前已知在基因水平启动自噬的主要基因有p27㊁p73和p53等,p27通过CDK2/mTOR 轴抑制自噬[6],p73通过转录激活ATG5基因促进自噬[7]㊂p53也是通过抑制mTOR 诱导自噬的,其直接靶点是flj11259,但flj11259与mTOR 及ULK1之间的通路尚不清楚[8]㊂初始隔离结构的形成及自噬泡的成核和延展需要Beclin 1(酵母的ATG6在哺乳动物则称为Beclin 1),PIK3C3/VPS34,PIK3R4/VPS15和ATG14㊁AMBRA1或UVRAG 和SH3GLB1/Bif⁃1的参与[9])㊂自噬小体的形成则需要两个泛素样结合系统:ATG12⁃ATG5和LC3⁃II /Atg8⁃PE(酵母的ATG8在哺乳动物称为LC3[9])㊂在酵母菌中,这三种蛋白在自噬泡的延展与成熟过程中均发挥作用㊂在哺乳动物细胞中,LC3的亚家族在延展阶段发挥作用,随后的自噬小体成熟过程则由GABARAP 蛋白负责[10]㊂此外,溶酶体的产生及其与自噬体的融合也受调控分子严格调控㊂转录因子EB(TFEB)是溶酶体产生及功能的主要调控者[11]㊂自噬的过程需要一系列在进化上高度保守的蛋白,也就是所称的自噬相关(ATG)蛋白㊂ATG 蛋白的磷酸化和去磷酸化可以对自噬进行调控㊂其上游的mTOR 激酶在自噬途径中发挥主要作用,其在mRNA 蛋白水平上调控自噬过程的关键组分抑制自噬㊂例如,mTOR 可磷酸化ATG13,从而抑制ULK1及自噬㊂作为重要的营养物质感受器,mTOR 通过控制蛋白复合体中的某些特定分子,例如EIF4EBP1/4E⁃BP1和RPS6KB /p70S6K 的活性[12]㊂自噬在生理及病理条件下均发生,自噬功能失调与许多疾病的发生发展相关,其中包括恶性肿瘤㊁原发性心肌病和神经退行性病变等[13-14]㊂2 巨噬细胞极化 巨噬细胞是固有免疫的重要组成部分,具有抗原提呈㊁吞噬和分泌多种炎症因子及细胞因子的功能,在防御㊁炎症㊁修复和代谢等生理及病理过程中发挥重要作用,也是机体维持自身稳定的关键因素之一㊂巨噬细胞同时也是一种异质性的细胞,具有高度可塑性,在不同组织微环境条件下被激活,可以产生不同的亚型并表现出不同的功能㊂根据Th 细胞Th1和Th2的分类方法,分为经典激活的M1型和选择性激活的M2(M2a㊁M2b 和M2c)型㊂M1由Th1淋巴因子干扰素γ(IFN⁃γ)㊁脂多糖(LPS)㊁肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)等诱导活化产生㊂M1除直接参与免疫防御反应外,还可分泌促炎因子[白细胞介素(IL)⁃1β㊁IL⁃6㊁IL⁃12㊁TNF⁃α等)㊁活化氧(ROS)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS),并分泌单核细胞趋化蛋白1(MCP⁃1)㊁IL⁃8等趋化因子吸引Th1淋巴细胞,促进强烈的Th1免疫反应㊂M2型巨噬细胞还可被细分由IL⁃4或IL⁃13诱导的M2a 型,免疫复合物诱导的M2b 型及IL⁃10㊁TGF⁃β或糖皮质激素等诱导的M2c 型[15]㊂M2型巨噬细胞514蚌埠医学院学报2018年3月第43卷第3期分泌大量IL⁃10和IL⁃lRA,抑制炎症反应㊂M2高表达精氨酸酶1㊁甘露糖受体㊁清道夫受体㊁类几丁质酶3样分子3以及炎症相关的缺氧诱导有丝分裂因子等㊂M2型巨噬细胞为抑炎性,在组织修复和重建㊁血管生成和肿瘤生长浸润等均有促进作用㊂巨噬细胞极化不仅与免疫等相关,其与代谢性疾病也有密切联系,如动脉粥样硬化㊁肥胖㊁肝细胞和脂肪细胞的胰岛素抵抗等㊂M1/M2是巨噬细胞活化类型的两个极端,但在体内巨噬细胞所处微环境复杂,同时接触多种微环境信号,比体外某单一因子刺激而发生的极化过程更为复杂㊂在同一组织中可同时存在不同表型的巨噬细胞,而巨噬细胞也可兼表达M1和M2标志物㊂在某些条件下,极化的M1与M2也可发生相互转化[15]㊂巨噬细胞极化的过程复杂,相应的所受的分子信号及其通路的调控亦较复杂,目前研究较成熟的信号通路有JAK/STAT通路[16]㊁PI3K/Akt/ NF⁃κB通路[17]㊁JNK通路[18]等㊂3 自噬与巨噬细胞极化 mTORmTOR是调节自噬的一种进化上保守的蛋白激酶,并且在巨噬细胞极化过程中也起关键作用㊂自噬抑制剂3⁃MA和CQ阻断了M2巨噬细胞表面标志分子CD11b的表达[19]㊂在LPS刺激的单核细胞中,雷帕霉素抑制mTOR通路致使其向M1型极化,与此同时敲除mTOR抑制剂TSC2,激活mTOR通路则产生了相反的作用[20]㊂mTOR及其通路的Akt㊁ClassⅠPI3K/Akt㊁IGF⁃1/2㊁MAPK和下游分子p70S6可以抑制自噬[21]㊂在骨髓来源巨噬细胞中,激活PI3K⁃mTOR可促进M2型极化,而抑制PI3K或mTOR则会导致M1型极化,证明了PI3K⁃mTOR通路在巨噬细胞极化中的作用[22]㊂但有研究[23]证明,过表达受mTOR的负性调节的TFEB,显著上调自噬小体的形成和M1型标志的细胞因子,但未证明增强的自噬与M1标志表达的增多是否有直接关系,说明mTOR通路与巨噬细胞极化之间的关系可能比目前研究证明的更为复杂㊂NF⁃κB在药理或基因水平抑制自噬,可以解除NF⁃κB激活,并使已经极化为M2型的巨噬细胞产生高水平的M1型细胞因子㊂近来有研究[24-25]证明,肝癌细胞来源的Toll样受体2相关配体可以使RELA泛素化,在巨噬细胞内形成可被聚集体样结构SQSTM1/p62介导的自噬分解,通过选择性的自噬控制RELA/NF⁃κBp65,使巨噬细胞向M2亚型方向极㊂这些研究特别指出,NF⁃κB在巨噬细胞极化中的作用是由SQSTM1/p62介导的选择性自噬所控制的㊂在病原体感染或肿瘤存在的情况下,通过LPS等病原体相关分子模式(PAMP)借TLR4或IL⁃1信号可激活IKK复合物,通过STAT1和NF⁃κB两条关键炎症信号通路调节巨噬细胞的M1活化㊂而另有研究[26]发现NF⁃κB通路活化不仅参与炎症发展,也在炎症消退和诱导巨噬细胞凋亡中发挥作用,NF⁃κB 通路活化剂IKK能直接抑制STAT1活性,并且可促进肿瘤相关巨噬细胞向M2极化㊂然而,NF⁃κB在调节巨噬细胞极化和功能中的作用是复杂的,并且巨噬细胞极化和功能本身就是环境和基因共同作用导致的㊂NF⁃κB在巨噬细胞极化的特殊作用仍需进一步的研究㊂其他CCL2和IL⁃6在介导自噬和抑制巨噬细胞内的凋亡都有确切且强效的作用,并且在刺激巨噬细胞向M2型极化㊂在巨噬细胞中,抑制CASP8促进自噬,可以提高M2型极化㊂抑制自噬削弱M2型极化,直接证明了自噬在巨噬细胞极化中有重要作用[27]㊂同时,近来的研究[28]证明索拉非尼诱导自噬,抑制M1型巨噬细胞的标志物CD80的表达,表明自噬与巨噬细胞极化之间可能的联系㊂另外,有证据证明在肿瘤相关巨噬细胞中,组织蛋白酶S调节自噬在诱导M2型巨噬细胞的机制中有重要作用,从而促进肿瘤的发展[29]㊂巨噬细胞极化对自噬的影响巨噬细胞极化也可以对自噬水平产生影响㊂有些Th1细胞因子,如在巨噬细胞内,LPS 在TICAM1/TRIF依赖的TLR4途径调节下,诱导自噬小体形成[30]㊂TNF⁃α可在未激活NF⁃κB的情况下促进自噬[31]㊂IFN⁃γ通过促进自噬小体的成熟,促进和增强自噬[32]㊂部分Th2细胞因子,如IL⁃4和IL⁃13可通过Akt/mTOR途径抑制饥饿诱导的自噬,也通过STAT6途径抑制IFN⁃γ诱导的自噬[33]㊂但也有研究[34]发现,使用M2型巨噬细胞培养上清液培养人脐静脉内皮细胞,可提高LC3⁃B的表达和自噬小体的数量,降低P62蛋白的表达,在使用氯喹封闭自噬后,此种作用便消除了,且M1型巨噬细胞培养上清液并没有以上作用㊂4 小结 自噬作为近年来的研究热点,不仅发挥维持细胞内稳态的作用,且与多种生理㊁病理过程及疾病相关㊂巨噬细胞极化在炎症㊁防御㊁修复㊁代谢等生理及病理过程中发挥重要作用㊂自噬与巨噬细胞极化有密切关系,多数实验表明自噬调节巨噬细胞向抑炎的M2型方向活化,但尚存在争议㊂若自噬在巨噬细胞极化过程中的作用明确,未来可通过调节巨噬细胞内自噬水平,从而调节巨噬细胞极化方向,则可治疗或改善巨噬细胞极化用作参与的疾病,如肿瘤的浸润和发展㊁动脉粥样硬化㊁代谢性炎症等,为这些疾病的治疗提供可能的途径和手段㊂[参考文献][1] MIZUSHIMA N,LEVINE B,CUERVO AM,et al.Autophagyfights disease through cellular self⁃digestion[J].Nature,2008,451(7182):1069.[2] CHEN P,BONALDO P.Role of macrophage polarization in tumorangiogenesis and vessel normalization:implications for newanticancer therapies[J].Int Rev Cell Mol Biol,2013,301:1.[3] MIZUSHIMA N,LEVINE B.Autophagy in mammalian developmentand differentiation[J].Nature Cell Biol,2010,12(9):823. 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肿瘤相关巨噬细胞抗肿瘤靶点探究
肿瘤相关巨噬细胞抗肿瘤靶点探究作者：李勃刘森来源：《科技视界》2016年第11期【摘要】肿瘤相关巨噬细胞（TAM）在肿瘤细胞的发生、生长、侵袭和转移方面起到了重要作用，其功能特性类似 M2型巨噬细胞。
目前多项研究表明TAM与血液系统恶性肿瘤的临床表现及预后相关。
基于TAM的促肿瘤作用，目前针对TAM的活化、招募、促血管生成活性、存活及基质重塑等方面设计的靶向治疗药物也进入了基础或临床试验。
【关键词】肿瘤相关巨噬细胞；促肿瘤作用；靶向治疗巨噬细胞是固有免疫系统中重要的细胞组成部分，具有广泛的功能，包括吞噬作用、抗原提呈作用、防御微生物的细胞毒作用及分泌生长因子、细胞因子、蛋白酶和前列腺素等功能，所以巨噬细胞的激活成为肿瘤治疗进展中一个具有诱惑力的方法。
然而，在肿瘤微环境中的巨噬细胞，被统称为肿瘤相关巨噬细胞（TAM），其能够分泌一些刺激肿瘤细胞发生、生长、侵袭和转移的物质，尤其与肿瘤血管和淋巴管的生成密切相关。
本文将针对TAM的一些肿瘤靶向免疫治疗进行综述。
1 减少TAM的聚集TAM受到多种趋化因子调控，其中最重要的是聚集刺激因子-1（colony stimulating factor-1，CSF-1）和CCL2。
低表达CCL2的人源黑色素瘤（IIB-MEL）植入小鼠的皮下组织，发现肿瘤的生长速度会明显放缓，但是如果在该细胞株内转入CCL2的表达质粒，可以明显促进肿瘤的生长速率。
在体外实验中使用宾达利（Bindarit）处理转入CCL2表达质粒的细胞株，以可以抑制CCL2的产生，从而使巨噬细胞和瘤内的血管密集度下降[1]。
因此可以发现如果阻断肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤组织中的聚集，TAM的促肿瘤形成能力将会受到明显抑制。
2 直接摧毁TAM一旦TAM进入肿瘤位点，单核巨噬细胞选择性的产生具有细胞毒性的抗肿瘤抑制剂，不但可以杀死肿瘤细胞，也可以选择性的杀灭TAM。
最新的研究表明，曲贝替定（Trabecedin，商品名：Yondelis，主要用于治疗软组织肉瘤罕见病）对NK细胞和TAM有很强的细胞毒性，但是他对淋巴细胞亚细胞群不产生杀伤作用[2]。
肿瘤相关巨噬细胞研究进展
肿瘤相关巨噬细胞研究进展作者：周旋来源：《中国科技博览》2019年第10期[摘要]巨噬细胞作为重要的免疫细胞广泛分布于机体，在固有和适应性免疫反应中发挥着重要的作用。
根据功能和表型的不同，巨噬细胞大致可以被分为M1型和M2型两类。
当受到IFN-r、LPS刺激时，单核细胞则极化为M1型巨噬细胞；当受到Th2型细胞因子如IL-4和IL-13，IL-10和肾上腺皮质激素诱导成M2型。
瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages，TAM）指在肿瘤组织中存在，并且能够广泛浸润和具有免疫抑制、促进肿瘤进展作用的巨噬细胞，这类巨噬细胞被专家们认为是分型中的M2型巨噬细胞。
鉴于肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤演进中起重要作用，其作为潜在抗肿瘤靶点备受关注。
[关键词]肿瘤相关巨噬细胞；细胞因子；巨噬细胞极化；抗肿瘤靶点中图分类号：TP649 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）10-0394-01白细胞亚群的累积是肿瘤发生的标志。
实体瘤的主要成分除了肿瘤细胞之外，包括基质细胞（成纤维细胞和内皮细胞）和白细胞。
TAM是肿瘤微环境中数量最多的免疫细胞。
一些研究表明，当适当刺激时，巨噬细胞有可能在体外杀死肿瘤细胞。
用脂多糖（LPS）和干扰素（IFN）治疗后。
然而，诱导M1型极化的细菌刺激和Th1细胞因子通常不存在于肿瘤部位。
相反，分化的巨噬细胞可能遇到最常使它们向M2型巨噬细胞极化的因子，例如白细胞介素（IL-10）。
多年来，越来越实验证明TAM是肿瘤进展过程中的积极参与者。
此外，在临床研究中，大量肿瘤内巨噬细胞与高血管密度和肿瘤进展相关。
鉴于肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤演进中起重要作用，其作为潜在抗肿瘤靶点备受关注。
1、TAM的起源和募集Rudolf Virchow首次注意到白细胞浸润到恶性组织表明癌症在慢性炎症区域出现，并对TAM的起源，募集，存活和增殖方面进行了研究。
TAM来源于循环的单核细胞，并通过肿瘤衍生的单核细胞趋化因子在肿瘤部位募集，后来被鉴定为趋化因子CCL2 / MCP-1。
细胞自噬在肿瘤中作用的研究进展
Beclin-1 基 因 是 Atg6 的 哺 乳 动 物 同源基因，其作为肿瘤抑制基因通过调 控细胞自噬以维持机体内环境稳定。 Beclin-1 与 UVRAG （UV irradiation resistance-associated tumor suppressor gene）、Vps15 形 成 的 多 蛋 白 复 合 体 对 激 活 Vps34 十 分 重 要 ，其 是 参 与 调 控 自 噬 体双层膜形成过程的关键因子。 另外， 应 用 RNAi 抑 制 Atg5、 Atg10、 Atg12 可 阻止自噬体形成，而应用自噬抑制剂氯 喹 （Chloroquine） 可 阻 止 自 噬 体 与 溶 酶 体 结 合 以 干 预 细 胞 自 噬 过 程 ［2］。 激 素 在 自噬的调控中也起重要作用，胰岛素可 抑制自噬， 而胰高血糖素则促进自噬。 酪 氨 酸 激 酶 受 体 、MAP 激 酶 、钙 也 存 在 于自噬过程错综复杂的调控网络中，但 其 机 制 还 不 甚 清 楚 。 ［10］
细胞自噬调控机制研究
细胞自噬调控机制研究随着生命科学的发展，对于细胞自噬调控机制的研究也越来越深入。
细胞自噬是一种细胞内的降解和再利用方式，主要功能是把细胞内的垃圾、老化的蛋白质等分解成小的蛋白质，供能和新陈代谢需要。
这种结构奇特的细胞降解途径，受到越来越多的关注，它的研究可能会有助于开发新型的治疗方法，例如消除肿瘤细胞，预防脑部退化性疾病，治疗2型糖尿病等。
本文将对于细胞自噬调控机制的研究进展进行一些探讨。
一、细胞自噬的类型细胞自噬有三种类型：巨噬细胞容器介导的自噬( CMA )、微噬细胞介导的自噬 ( microautophagy ) 和膜介导的自噬 (MAC) 。
其中，CMA 是一种特殊的自噬通路。
当需要降解的蛋白质的膜内序列被一个介导分子 HSC70 定位到赤霉素酰化酶的表面时，HSC70 就会招募 LAMP2A。
LAMP2A 会形成开放的孔道使需要降解的蛋白质进入溶酶体。
与 CMA 不同，m icroautophagy 是一种非膜介导的细胞激活自噬，其中大量垃圾为通过内胞质过程在线粒体内聚。
二、细胞自噬的调控机制细胞自噬的调控机制非常复杂，其中核酸药物、蛋白质修饰、小的非编码 RNA、磷酸酸化、CLEC16A、Numb 以及肿瘤抑制因子等因素均可以调节自噬。
下面我们介绍一些关键的细胞自噬调控机制。
1. 基因调控自噬活性的调控有许多大量的基因调控，其中最为重要的是歧化相关基因 8 ( ATG8)。
它可以被脯氨酸酶和 E1 自噬酵素活化，成为后续的自噬反应物，并调节了细胞自噬过程。
2. 感受器调控目前已知的自噬负性调控感受器有 mTORC1、PI3K、Akt、AMPK 和 MAPK 这些自噬蛋白质与ATG 1 功能上最为相似，因为它们部分调节自噬的信号通路，如 AMPK 和 mTORC1 对于自噬的调节作用已经被证实。
3. 信号转导及其过程的调节在细胞自噬过程中，信号传导是一个重要的环节。
PINK1 、PARKIN 、 VPS34 等被证实参与自噬的调节过程中。
肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤中作用的研究进展
肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤中作用的研究进展肿瘤相关巨噬细胞（TAM）主要来源于血液中的单核细胞，在肿瘤中浸润，是构成肿瘤微环境（TME）的重要免疫细胞，参与调控肿瘤的多种复杂免疫反应，其数量与患者的预后密切相关[1],所以靶向作用TAM很有可能成为治疗肿瘤的新策略。
1 TAM的来源与募集TAM有两个主要来源，大部分TAM来源于外周血单核细胞（MDMS）,这些细胞作为未成熟的单核细胞前体从骨髓中释放出来，在血液中循环，并迁移到不同的组织中分化[2];还有很少一部分TAM来源于卵黄囊，并在特定组织定植的巨噬细胞（TRM）,不同来源的TAM在功能和作用上的差别尚未明确[3]。
肿瘤细胞和基质细胞可以分泌多种细胞因子和趋化因子，这些因子可将巨噬细胞募集到肿瘤细胞周围。
巨噬细胞具有高度异质性，当其被招募迁移至肿瘤间充质中后，可以通过改变自身的表型，来适应它们所处的微环境。
现已明确起募集作用的主要因子有CC・趋化因子配体-2（CC1-2）、CC1-3、CC14CC1-5、CC1・7、Ce1-8、CC1-9、CC13、CC1-14、CC1-18、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素4（∣1-4）、I1/O、I1-13、脂多糖、干扰素Y（IFN-γ）、转录生长因子B（TGF-β）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子。
（TNF-α）、血小板源生长因子（PDGF）等。
Hamnton［4］的研究说明，起募集作用的M-CSF,又称集落刺激因子1（CSF-1）,是将巨噬细胞募集并极化成TAM的主要因子。
李颜君等［5］认为，M-CSF 与其受体（M-CSFR）结合，继而启动RAS、MAPK.PI3K、SATA、JAK等信号通路，发挥募集巨噬细胞的作用。
已有研究证实，在多种肿瘤模型中使用针对M-CSF的阻断剂单克隆抗体（MAb）阻断M-CSF/M-CSFR向TAM的信号传递时，TAM 数量显著减少［6］。
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海军军医大学博士学位论文基于自噬调控肿瘤相关巨噬细胞表型极化的金纳米粒抗肿瘤机制研究Study on the Mechanism of AuNPs in Anti-tumor Growth Based on Autophagy Regulating Phenotypic Polarization of Tumor-associated Macrophages研究生姓名：学号：指导教师：学科、专业：学位类型：答辩委员会主席：委员：答辩日期：原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，遵照严肃求实的科学精神，独立进行研究工作所取得的成果。
论文中除已注明引用和致谢的内容外，不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。
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（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：年月日导师签名：年月日目录摘要...................................................................................................... - 1 - Abstract ................................................................................................. - 5 - 缩略词表.............................................................................................. - 11 - 前言.................................................................................................. - 12 - 第一章PEG修饰的金纳米粒的制备、表征和细胞毒性研究....... - 18 -一、仪器与试剂........................................................................... - 18 -二、实验方法............................................................................... - 19 - （一）PEG修饰的金纳米粒的制备.......................................... - 19 - （二）PEG修饰的金纳米粒的表征.......................................... - 19 - （三）PEG修饰的金纳米粒细胞毒性实验.............................. - 20 - 三、结果与讨论........................................................................... - 21 - （一）PEG修饰的金纳米粒的表征.......................................... - 21 - （二）PEG修饰的金纳米粒细胞毒性...................................... - 23 - 四、本章小结............................................................................... - 25 - 第二章金纳米粒体外对肿瘤相关巨噬细胞表型极化的影响....... - 26 -一、仪器与试剂........................................................................... - 27 -二、实验方法............................................................................... - 28 - （一）肿瘤细胞悬液TSN培养巨噬细胞................................. - 28 - （二）金纳米粒对TSN培养条件下的巨噬细胞表型作用的考察-33 -（三）统计学处理....................................................................... - 34 -三、结果与讨论........................................................................... - 34 -（一）TSN培养条件诱导巨噬细胞向M2表型极化............... - 34 - （二）金纳米粒对TSN培养条件下巨噬细胞表型极化作用. - 38 -四、本章小结............................................................................... - 43 - 第三章金纳米粒体内抑制肿瘤相关巨噬细胞表型极化发挥抗肿瘤作用.......................................................................................................... - 44 -一、仪器与试剂........................................................................... - 45 -二、实验方法............................................................................... - 46 -（一）荷瘤小鼠模型的建立、给药和分组............................... - 46 - （二）小鼠肿瘤体积测量........................................................... - 46 - （三）肿瘤组织免疫荧光实验................................................... - 47 - （四）肿瘤组织中巨噬细胞的分离和纯化............................... - 48 - （五）肿瘤相关巨噬细胞表型鉴定流式实验........................... - 50 - （六）肿瘤相关巨噬细胞mRNA的检测（Real-time PCR）. - 50 - （七）统计学处理....................................................................... - 50 -三、结果与讨论........................................................................... - 50 -（一）肿瘤生长曲线及抑制率................................................... - 50 - （二）肿瘤组织中巨噬细胞表型的鉴定................................... - 52 -四、本章小结............................................................................... - 59 -第四章金纳米粒对肿瘤相关巨噬细胞自噬的作用....................... - 60 -一、仪器与试剂........................................................................... - 60 -二、实验方法............................................................................... - 62 - （一）细胞培养和金纳米粒孵育............................................... - 62 - （二）Western检测巨噬细胞自噬相关蛋白的表达................. - 62 - （三）mRFP-GFP-LC3双荧光检测自噬流............................... - 64 - （四）溶酶体酸性测定............................................................... - 65 - （五）吖啶橙(Acridine Orange, AO)测定溶酶体稳定性.......... - 65 - （六）统计学处理....................................................................... - 66 - 三、结果和讨论........................................................................... - 66 - （一）肿瘤相关巨噬细胞自噬相关蛋白的表达变化............... - 66 - （二）mRFP-GFP-LC3双荧光检测肿瘤相关巨噬细胞自噬流水平....................................................................................................... - 67 - （三）肿瘤相关巨噬细胞溶酶体功能的考察........................... - 70 - 四、本章小结............................................................................... - 73 - 第五章调节自噬对肿瘤相关巨噬细胞表型的影响....................... - 74 -一、仪器与试剂........................................................................... - 74 -二、实验方法............................................................................... - 75 - （一）细胞培养........................................................................... - 75 - （二）含mRFP-GFP-LC3质粒的腺病毒转染细胞.................. - 76 -（三）Atg5siRNA转染巨噬细胞.............................................. - 76 - （四）Atg5siRNA转染效果的检测.......................................... - 76 - （五）氯喹（CQ）和雷帕霉素（Rapa）的配制及细胞孵育. - 77 - （六）统计学处理....................................................................... - 78 - 三、结果和讨论........................................................................... - 78 -（一）TSN培养条件下巨噬细胞自噬水平的变化.................. - 78 - （二）自噬抑制剂对TSN培养条件下巨噬细胞M2表型极化的作用............................................................................................... - 80 - （三）自噬诱导剂对TSN培养条件下巨噬细胞M2表型极化的作用............................................................................................... - 85 - 四、本章小结............................................................................... - 86 - 全文总结.............................................................................................. - 87 - 参考文献.............................................................................................. - 89 - 纳米载体靶向肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤新策略（综述）... - 94 - 在读期间科研成果........................................................................... - 102 - 致谢................................................................................................................................. - 103 -基于自噬调控肿瘤相关巨噬细胞表型极化的金纳米粒抗肿瘤机制研究摘要【研究背景及目的】巨噬细胞（MΦ）在体内受到不同因素的影响可以向两种方向极化：一种是经典途径活化的M1型，能够分泌的IL-12、iNOS和TNFα等炎症因子，发挥抑制和杀伤肿瘤细胞的作用。