基因工程课程小结
生物选修三基因工程知识点总结

生物选修三基因工程知识点总结随着现代科技的飞速发展,生物技术一直处于不断创新和进步的状态。
而基因工程作为一项重要的技术手段,已经成为了当今社会不可或缺的一部分。
在生物学选修三中,我们学习了基因工程的相关知识,下面将对其中的重点知识做一个总结。
1. 基因工程的概念基因工程是在DNA技术的基础上,通过改造DNA序列,使其具有某种特定的性状或功能的技术。
基因工程技术的应用包括基因克隆、基因修饰和基因转移等。
通过基因工程技术,可以在不同生物体之间进行基因互换,或是将外源基因组合到原有基因中,使生物体产生某种特定的性状或功能。
2. 基因克隆技术基因克隆技术是基于DNA重组技术,通过分离、扩增和定位目标基因,将其插入到接受体中,从而实现外源基因的人工插入和复制。
基因克隆技术使用的重要工具包括PCR、限制性内切酶、DNA序列分析和DNA重组技术。
3. 基因修饰技术基因修饰技术是通过改变DNA序列,使生物体产生某种新的表型或功能的技术。
在基因修饰技术中,常用的方法包括点突变、分子修剪和CRISPR-Cas9技术等。
通过基因修饰技术,科学家可以精准地改变某些基因的表达和功能,进而实现人造种子生产、基因治疗等一系列应用。
4. 基因转移技术基因转移技术是将特定基因从一种生物体转移到另一种生物体中的技术。
基因转移技术可以用于创建转基因生物,也可作为基因治疗的手段。
其中,主要的技术包括基因枪法和电穿透法等。
5. 转基因生物的应用转基因生物作为一种新生物体,具有一系列特定的基因和表型特征,被广泛应用于生物医学研究、农业生产和环境保护等领域。
转基因生物包括转基因作物、转基因动物和基因治疗等,这些应用使人类可以更好地掌握生命科学的知识和应用价值,为人类的生存和发展带来了更多的可能。
6. 基因编辑技术基因编辑技术是一种新型基因工程技术,其通过切除、增加或修复目标基因序列的方法,改变生物体基因组结构和功能的技术。
其中,CRISPR-Cas9是目前应用最广泛的基因编辑技术。
基因工程学学习总结了解基因结构与调控掌握基因工程技术与应用

基因工程学学习总结了解基因结构与调控掌握基因工程技术与应用在生物科学领域中,基因工程技术是一项重要而又前沿的研究领域,它不仅对于人类健康和生物科技的发展有着重大的影响,也为解决人类面临的许多难题提供了新的方向。
对于基因工程技术的学习,我深感兴趣,并受益匪浅。
在本文中,我将对我在学习基因工程学中了解的基因结构与调控以及掌握的基因工程技术与应用进行总结。
首先,我们必须了解基因的结构与调控。
基因是生物体内存储遗传信息的基本单位,它是由DNA分子组成的,DNA分子中的碱基顺序决定了基因的信息。
基因分为编码基因和非编码基因两类。
编码基因可以通过蛋白质合成信息被具体表达,而非编码基因则具有调控基因表达的功能。
基因调控是指在细胞中,通过特定的分子网络来控制基因的表达水平。
这些调控分子可以是蛋白质或非编码RNA等。
通过研究基因的结构与调控,我们可以了解到基因在生物体内的功能及其调控机制。
基因工程技术作为一种重要的生物技术手段,可以对基因进行改造与应用。
其中最基本的技术包括基因的克隆、基因的敲除和基因的转导等。
基因克隆是指将特定的DNA片段复制多份,以便进行研究和应用。
基因敲除则是利用RNA干扰技术或CRISPR-Cas9等工具对特定基因进行靶向敲除,从而观察其对生物体的影响。
而基因转导技术则是通过载体将外源基因导入生物体内,使其表达并产生相应的效应。
在基因工程技术的应用中,医学领域的基因治疗是一个重要的研究方向。
基因治疗通过将正常的基因导入患者体内,修复或替代异常基因,以达到治疗疾病的目的。
例如,通过基因工程技术,人们已经成功地治疗了一些遗传性疾病,如囊性纤维化、血液病等。
此外,基因工程技术在农业领域也有广泛的应用。
通过转基因技术,科学家们可以改良农作物的性状,使其更耐旱、抗病虫害或提高产量等。
总结起来,基因工程学的学习使我对基因结构与调控有了更深入的了解,并掌握了基因工程技术的原理和应用。
基因工程技术的广泛应用将为人类带来更多的福祉,改善人们的生活。
基因工程教学的心得体会

一、引言随着生物科学的不断发展,基因工程已经成为一门重要的学科。
在我国,基因工程教学也得到了越来越多的重视。
作为一名从事基因工程教学的教师,我有幸见证了这门学科在我国的发展历程,并在教学过程中积累了丰富的经验。
本文将结合自己的教学实践,谈谈基因工程教学的心得体会。
二、教学目标与内容1. 教学目标(1)知识目标:使学生掌握基因工程的基本原理、技术手段和应用领域。
(2)能力目标:培养学生独立思考、分析问题和解决问题的能力,提高学生的实验操作技能。
(3)素质目标:培养学生的科学素养、创新精神和团队协作能力。
2. 教学内容(1)基因工程的基本概念、原理和发展历程。
(2)基因克隆、基因表达、基因编辑等关键技术。
(3)基因工程在农业、医学、环境保护等领域的应用。
(4)基因工程伦理和安全性问题。
三、教学策略与方法1. 注重理论与实践相结合基因工程是一门实践性很强的学科,因此在教学过程中,我注重将理论知识与实验操作相结合。
通过引导学生参与实验,使学生在实践中掌握基因工程的基本操作技能,加深对理论知识的理解。
2. 采用多种教学方法(1)讲授法:系统讲解基因工程的基本概念、原理和关键技术。
(2)讨论法:引导学生针对实际问题进行讨论,培养学生的思维能力和表达能力。
(3)案例分析法:通过分析典型案例,使学生了解基因工程在实际应用中的优势和局限性。
(4)实验教学法:让学生亲自操作实验,掌握基因工程的基本操作技能。
3. 加强师生互动在教学过程中,我注重与学生进行互动,关注学生的需求和困惑。
通过提问、答疑等方式,激发学生的学习兴趣,提高教学效果。
四、教学心得1. 深入研究教材,把握教学重点为了提高教学质量,我深入研究教材,把握教学重点。
在教学中,有针对性地讲解关键知识点,帮助学生构建完整的知识体系。
2. 注重实验教学,提高学生动手能力实验教学是基因工程教学的重要组成部分。
通过实验,学生可以直观地了解基因工程的基本操作,提高动手能力。
高中生物教学备课基因工程与转基因技术总结

高中生物教学备课基因工程与转基因技术总结在当今科技发展迅猛的社会中,基因工程和转基因技术成为了生物学领域中备受关注的话题。
本文将对高中生物教学备课中基因工程与转基因技术进行总结,以期能够帮助教师们更好地教授相关知识。
一、基因工程与转基因技术的基本概念基因工程是一门利用生物技术手段对生物体内的基因进行修改、重新组合和转移的学科。
而转基因技术则是基因工程的一种重要应用,通过将外源基因导入到目标生物体中,使其获得新的性状或者改善原有性状。
二、基因工程与转基因技术的应用领域1. 农业领域:转基因作物的研发和种植,例如抗虫、耐旱、耐盐、提高产量等。
2. 食品工业:转基因食品的生产和加工,例如转基因调味品、转基因食用油等。
3. 医学领域:转基因药物的开发和临床应用,例如基因治疗、基因诊断等。
三、基因工程与转基因技术的优缺点1. 优点:a. 提高作物产量和品质:转基因作物能够增加作物的耐逆性,提高产量和抗病能力。
b. 减少农药使用:转基因作物具有抗虫性,降低了农田对农药的需求量。
c. 提高食品的营养价值:通过转基因技术可以增加食品的营养成分,满足人们对健康食品的需求。
2. 缺点:a. 潜在的生态风险:转基因作物的杂交可能导致生态系统的不稳定,对生物多样性产生负面影响。
b. 道德和伦理问题:对人类或动物进行基因改造可能引发道德和伦理上的争议。
c. 信息不对称:转基因食品的标识和信息披露存在不足,可能影响消费者的知情权。
四、基因工程与转基因技术在课堂中的教学手段1. 实验教学:通过组织实验和观察,让学生亲自进行转基因技术相关实验,培养学生的操作能力和科学精神。
2. 讨论与辩论:引导学生进行小组讨论和辩论,探讨基因工程与转基因技术的利与弊,培养学生的批判性思维和团队合作精神。
3. 视听教学:利用多媒体教学工具,播放与基因工程和转基因技术相关的视频和音频材料,加深学生对知识的理解和记忆。
五、教学上需要注意的问题1. 安全意识:在进行实验教学时,要保证学生的实验操作安全,避免产生危险情况。
观基因工程学实验心得

观基因工程学实验心得第一篇:观基因工程学实验心得观基因工程学实验心得经过这一学期观看的基因工程学实验录像,让我对这门学科有了更深入、更全面的了解。
实验是对文化课程的延伸,文化课教授我们原理,实验课才是让我们真正去运用原理,生产成果。
前几个学期我们也做过许多实验,感觉掌握了不少实验的操作技术,但是经过这学期的录像观看,才发现自己还存在许多的不足与错误之处。
实验是一门严谨的课程,每一个操作步骤都需全神贯注,每一处细节都不能疏漏,这样才能保证实验结果的真实和可靠性。
对于基因工程实验,我总结了几点心得体会:首先,无论做什么实验,都需要拥有一个明确的实验目的,在实验目的的引导下,整个实验才有清晰的思路和研究方向。
如利用PCR 技术大量生产目的基因,整个实验就是朝着生产所需基因的方向做一系列的实验操作,得到了实验结果,实验便是成功且有意义的。
其次,实验原理也是必不可少的条件,每一个实验都是在可靠的实验原理下才得以进行的。
各类生化反应都有特定的底物、条件,才能得到相应产物,掌握最简单可行的实验原理,实际操作时便能快速准确的获得实验结果。
就像有了牢固的支架才能撑起整个帐篷,实验原理就是整个实验的骨架,支撑着实验顺利进行。
实验准备也是必须的一部分,包括仪器、材料等。
实验前需做好每个仪器的消毒,装置摆放好所需仪器,实验材料按序摆放,并需贴好标签,防止混淆和污染。
当涉及有毒物质或小鼠解剖等实验时,必须佩带好口罩、手套,穿着防护服,以防感染。
实验内容是整个实验的主体,其中包括的每一步骤都考验操作者的实验技能。
进行细胞等培养、接种的过程,都需在酒精灯火焰附近操作,试验中的接种环,移液管等都需在火焰上消毒灭菌后才能接种,防止杂菌污染,影响实验结果。
同时,每一步操作都需按照事先计划的步骤进行,时间、温度等都要控制好。
如做电泳等实验时,装置的装配需排出气泡;菌落培养过夜时需在震荡仪中恒温震荡培养。
此外还有许多基本实验技能,都需在不断的实验摸索中获得,做实验是一个享受的过程,收获是一种巨大的乐趣。
基因工程研究实习总结

基因工程研究实习总结在经历了一段时间的基因工程研究实习后,我收获了很多宝贵的经验和知识。
通过此次实习,我深刻理解了基因工程的概念、原理和应用,并且将这些理论知识与实践操作相结合。
下面是我对这次实习的总结和体会。
首先,在实习期间,我对基因工程的定义有了更清晰的认识。
基因工程是通过人为干预改变生物体遗传物质DNA的结构和功能,从而获取新的基因型和表现型的技术。
基因工程的发展给人类社会带来了革命性的变化,不仅可以改良农作物和畜禽,提高产量和抗病能力,还可以开发新药、治疗疾病,改善人类生活质量。
其次,实习中我学习了基因工程的基本原理和常用技术。
常见的基因工程技术包括限制酶切割、DNA片段连接、转化和克隆等。
通过实际操作,我学会了DNA的提取、PCR扩增、凝胶电泳等实验步骤和技术操作。
这些技术的应用使得我们可以对基因进行改良和调控,进一步了解不同基因在生物体中的功能和作用。
在实习的过程中,我参与了一个基因工程项目。
项目的主要目标是通过转基因技术改良水稻,使其能够抵抗寒冷环境并提高产量。
我与团队成员合作,分工协作,共同完成了一系列的实验和数据分析。
我们成功地将抗寒基因导入水稻中,并通过PCR和凝胶电泳验证了目标基因的插入。
经过长时间的培养和观察,我们发现转基因水稻的耐寒性明显提高,并且在产量上也有明显的改善。
这个项目的成功让我深刻感受到基因工程技术的巨大潜力和应用前景。
除了实验技术的学习,我还了解到了基因工程的伦理和安全问题。
基因工程的广泛应用给人类带来了无限可能,但同时也带来了一些风险和道德困境。
我们需要谨慎而负责地运用基因工程技术,遵循道德规范和安全标准,确保它的应用不会对环境和人类造成不可逆的伤害。
通过这次基因工程研究实习,我不仅学到了专业知识,还培养了团队合作和问题解决的能力。
实习过程中,我学会了与同事沟通合作,共同攻克实验难题,解决技术问题。
这不仅锻炼了我的实际操作能力,还锻炼了我的沟通和协作能力。
基因工程实训总结

《基因工程实训》总结报告实习总结第一天,我们是进行实验试剂的配置,以备实验过程中大家共同使用。
每组都有自己的任务,我们组是配置最后检测重组蛋白的制备SDS-PAGE电泳胶的试剂。
以及酵母划板培养。
试剂的配置是很关键的一步,如果没有依据要求配制试剂的话,可能会导致实验失败。
比如,最后一天在电泳时,样品一直都没有沉到点样孔底部,而marker却能沉下去,可能是因为sample buffer 的配置出了问题。
最终我们用了老师的buffer,效果有所改善。
却还是有上浮的迹象,也有可能是缓冲液的密度太大。
第二天,我们进行了PCR扩增产物、琼脂糖凝胶电泳检测产物、HindⅢ和Xba I双酶切、含载体的DH5α扩大培养等操作。
从中我学到了PCR仪器程序设置的方法。
以及对其它现有操作技术进行巩固和提升。
第三天,我们从大肠杆菌中提取了质粒载体,并且对其进行双酶切,与同样双酶切的目的基因进行连接,以及挑单克隆酵母过夜培养。
双酶切可以极大的避免载体与目的基因自身环化,提高了连接的效率。
通过实验,我能够更好的理解书本上的理论知识。
第四天,连接产物转化大肠杆菌。
通过热激的方法使带有目的基因的载体进入大肠杆菌细胞中,因为DNA是吸附在细胞表面的,因此在热激过程中避免晃动过大。
同样的在实验过程中,我们会注意到平时书本上不会注明的小点,但这往往也是实验成败的关键因素之一。
第五天,酵母感受态的制备与转化细胞应该处于对数生长期,是感受态细胞制备与成功转化的关键。
我们在实验过程中,OD600一直都无法达到0.4~0.6的范围。
可能是培养基的配置出了问题,也有可能是分光光度计本身的仪器问题。
我们为了达到一定的细胞数量取了两倍体积的菌液。
第六天、第七天,提取重组质粒酶切鉴定与酵母单克隆过夜培养。
真核表达系统有蛋白质的加工修饰系统,可以得到有生物活性的蛋白质。
且酵母是分泌型的表达系统,不仅不易被细胞内蛋白酶降解还可以免去破碎细胞提取蛋白的麻烦。
基因工程社会实践总结参与基因研究探索生命奥秘

基因工程社会实践总结参与基因研究探索生命奥秘基因工程社会实践总结——参与基因研究,探索生命奥秘在过去的几个月里,我有幸参与了一次令人兴奋的基因工程社会实践活动。
通过这个实践项目,我深入了解了基因研究的重要性,同时也对人类生命的奥秘有了更深入的探索。
在本文中,我将对这次实践活动作出总结,分享我在该项目中获得的经验和收获。
首先,在这次基因工程社会实践活动中,我参与了一个研究小组,我们的任务是探索基因编辑技术在农业领域的应用。
我们团队的目标是通过编辑植物基因来提高其耐旱性和抗病性,从而提高作物的产量。
这个实践项目让我深刻认识到基因编辑技术的巨大潜力,它可以为农业领域带来巨大的改变和进步。
在实践过程中,我学习到了许多基因编辑技术的原理和方法。
我们使用了CRISPR-Cas9系统来实现基因编辑,通过敲除或插入特定基因,改变植物的基因组,从而使其具备所需的特性。
我还学习了如何设计合适的引物和寡核苷酸序列,以确保基因编辑的准确性和有效性。
通过实践操作,我更好地理解了基因编辑技术的应用步骤和操作要点。
除了技术知识的学习,我还深入了解了一些关于基因工程的伦理和法律问题。
基因编辑技术的引入在科学和医学领域取得了巨大的突破,但同时也引发了一些伦理争议。
因此,在基因编辑的过程中,我们必须要遵守严格的道德准则和监管法规,确保基因编辑的安全性和道德性。
在实践过程中,我与团队成员紧密合作,相互协作完成任务。
在每次实验中,我们确保了组内的沟通和配合,共同分工并分享实验结果。
这使得我们能够充分利用每个成员的优势,提高了实验效率。
通过与团队合作,我学会了倾听与交流,更好地理解人际关系在实践活动中的重要性。
此外,这次实践活动还给我提供了一个展示和分享的机会。
我们团队参加了一次学术论坛,向其他参与者展示了我们的实验成果和发现。
这次论坛不仅增加了我的演讲和展示能力,还加深了我对基因编辑技术的理解和运用能力。
通过这次基因工程社会实践活动,我不仅在技术方面得到了提升,还培养了与他人合作的能力,并扩展了专业知识的广度。
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第一章绪论基因工程概念:按照人们的愿望,进行严密的设计,通过体外DNA重组和转基因等技术,有目的地改造生物种性。
,使现有的物种在较短时间内趋于完善,创造出更符合人们需求的新的生物类型。
(又称遗传工程或DNA重组技术)(一)基因工程研究发展史现代分子生物领域理论上的三大发现:1.DNA是遗传物质2揭示了DNA分子的双螺旋结构和半保留复制3遗传密码的破译、遗传信息的传递方式。
现代分子生物领域理论上的三大发明:1.限制性核酸内切酶的发现与DNA的切割2DNA连接酶的发现与DNA片段的连接3基因工程的载体的发现研究。
(二)基因工程研究内容1目的基因的研究获得目的基因的途径很多,主要有通过构建基因组文库或cDNA文库,从中筛选出特殊需要的基因。
2基因工程工具酶的研究基因工程工具酶指体外进行DNA合成、切割、修饰和连接等系列过程中所需要的酶,包括DNA连接酶、限制性核酸内切酶、修饰酶和连接酶等。
现在常用的DNA连接酶只有两种,即大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA 连接酶。
第二章基因工程基本技术路线基因工程基本技术路线图(一)DNA的组成和结构生物体内的DNA绝大部分是以B-DNA形式存在的。
当变性的DNA迅速降温时,两条单链DNA不易复性成双链DNA。
几乎所有真核生物的染色体DNA都是线性DNA,部分原核生物的染色体DNA也是以线形存在。
ocDNA lDNA ccDNA(电泳方向:由上至下)(二)天然DNA的制备1天然DNA的来源:1染色体DNA 2病毒和噬菌体DNA 3质粒DNA 4线绿体和叶绿体DNA2天然DNA的提取:1准备生物材料 2裂解细胞:对于细胞结构简单的原核生物,可用溶菌酶处理,用NaOH和SDS处理,用煮沸处理,用冰冻处理,以及用超声波处理等。
3DNA的纯化:最常用的是方法是乙醇沉淀4 DNA浓缩:5 DNA片段大小的凝胶电泳检测影响电泳的因素:1带点泳颗粒的物理性状2支持物介质3电场强度4缓冲液离心强度凝胶电泳:在PH8..0--8.3的缓冲溶液中,核酸分子带负电,向正极移动。
在浓度适当的凝胶中,由于分子刷选效应,使大小和构想不同的核酸分子迁移率出现差异,从而把它们分开。
6核酸分子杂交(297-312)7DNA序列分析(1)DNA的双脱氧链终止序列(329)(2)化学降解测序列(327)(3)PCR测序(4)DNA自动化测序(5)DNA杂交测序(6)DNA片段序列测序的策略随机克隆策略、引物步移策略和定向缺失克隆策略。
大规模基因测序的两种策略:逐步克隆法和全基因组散弹法第三章基因工程的酶学基础(一)限制性核酸内切酶和DNA片段化1限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
2限制性内切酶识别序列:(1)长度,4--8个碱基,最常见的为6个碱基。
(2)识别序列的结构:大多数为回文结构,切割位点在DNA两条链相对称的位置,也有序列埠对称的,或呈间断对称。
(3)切割位点:磷酸二酯键断开的位置。
3限制性内切酶内切产生的末端:(1)匹配末端:识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后产生的末端,亦即黏性末端。
(2)平末端:在回文对称轴上同时切割DNA的两条链则产生的末端。
(3)非对称突出末端:识别序列为非对称性时。
4影响限制性内切酶活性的因素:(1)DNA纯度:存在pro、乙醇、EDTA、SDS 等等会降低活性,可增加酶的用量。
(2)DNA样品的甲基化程度。
甲基化对酶切得影响:a修饰酶切位点b产生新的酶切位点c对基因组作图的影响。
(3)限制性内切酶缓冲液的性质:高盐、中盐和低盐。
(4)DNA的分子结构:线形>超螺旋和环状。
(5)酶切温度T:37°5一些限制性核酸内切酶虽然来源不同,但是具有相同的识别序列,这样的限制性核酸内切酶被称为同裂酶。
同裂酶可以是具有不同的切割位点,也可以是具有相同的切割为点。
6 Star活性:某些限制性核酸内切酶在特定条件下,可以在不是原来的识别序列处切割DNA。
Star活性出现的频率因采用的限制性核酸内切酶、底物DNA和反应条件的不同而不同。
几乎所有的限制性核酸内切酶都具有Star活性。
7 DNA分子片段化:(1)单酶切法(最常用的方法)(2)双酶切法(3)部分酶切8 DNA分子的限制性图谱:(1)双酶切法(2)部分酶切法(3)Bal 31 逐步切割片段法(二)DNA连接酶1 DNA连接酶是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。
但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。
2 DNA连接酶包括大肠杆菌DNA连接酶和T4噬菌体DNA连接酶。
3 T4噬菌体DNA连接酶更广泛的应用:(1)修复双链DNA上的单链缺口(2)连接RNA-DNA杂交双链上的DNA链缺口或RNA链缺口,后者反应速度较慢。
(3)连接酶完全断开的两个平头双链DNA分子,属于分子间连接,但速度慢,需高浓度的底物和酶。
4 DNA片段的连接:(1)具互补黏性末端片段之间的连接(注意连接前后识别序列的变化)(2)具平末端DNA片段的连接(3)DNA片段末端修饰后再进行连接(4)DNA片段加连杆后连接。
(三)甲基化酶Dam甲基化酶:修饰GATC序列中的腺嘌呤残基成为5’-甲基腺嘌呤。
Dcm甲基化酶:修饰CC(A/T)GG序列中的胞嘧啶残基成为5’-甲基胞嘧啶。
(四)其他酶1 磷性磷酸酯酶2 DNA聚合酶(1)大肠杆菌聚合酶(2)T4噬菌体DNA聚合酶(3)Tt噬菌体DNA 聚合酶(4)耐高温DNA聚合酶:主要用于多聚酶链式反应(PCR)(5)反转录酶:依赖于RNA的DNA聚合酶。
(6)末端脱氧核苷酸转移酶第四章基因工程载体(一)载体的功能与特征1 概念:载体是在基因工程中,把外源DNA或基因携带入宿主细胞的工具称为载体。
2 功能:(1)运送外源基因高效转入受体细胞(2)为外源基因提供复制能力或整合能力(3)为外源基因扩增和表达提供条件3 载体蓝本:天然存在的质粒,噬菌体,病毒DNA,对其再进行修饰、改造、构建成多种功能的载体DNA分子。
4 载体具备的条件:具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点具有较高的外源DNA装载能力具有多种单一的限制性内切酶的识别位点、切割位点具有合适的刷选标记载体的安全性载体的本质是DNA与外源基因连接导入的受体细胞并能复制进行表达。
5 载体的分类:根据来源和性质分类:质粒载体、噬菌体载体、粘粒载体、噬菌粒载体、病毒载体、人工染色体载体。
根据功能和用途分类:克隆载体、表达、测序、转化、穿梭、多功能载体(二)质粒载体1质粒的基本特征:自主复制、不相容性、可扩增、可转移和不相容性。
质粒载体的三种共同成分:复制起点、刷选标记和克隆位点(一般人工构建的质粒是单复制子)2质粒载体的改造与构建:天然质粒的局限性质粒载体必备条件:具有复制起始位点、抗性基因、多克隆位点和较小的分子量(易于操作)和较高的拷贝数(可以获得大量的克隆基因)质粒载体改造与构建的指导思想常见质粒载体类型:克隆质粒载体、表达质粒载体、多功能质粒载体和穿梭质粒载体。
蓝白斑刷选原理3 质粒DNA的提取4 质粒载体的稳定性(三)λ噬菌体载体1 λ噬菌体的生物学特性2 λ噬菌体的构建(1)野生型λ噬菌体的局限性(2)λ噬菌体的构建3 λ噬菌体的主要类型:插入型取代型4 λ-DNA的提取5 λ噬菌体载体的应用:基因文库与cDNA文库的构建6 λ噬菌体作为载体的优点:刷选方便提取方便7 基因工程克隆策略:分、切、接、转、刷、增8 λ噬菌体载体的克隆步骤:(1)通过裂解过程增值载体(2)载体与外源DNA的酶切(挑选目的基因)(3)载体与外源DNA的连接(4)重组噬菌体的体外包装(5)包装噬菌体颗粒的感染(6)刷选(四)粘性载体(柯斯质粒载体,cosmid载体)1cosmid载体的构建:1978发明了柯斯质粒载体,具有cos位点的质粒概念:是一类有人工构建的含有DNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体(复制起点、抗性标记、cos位点)具有λ噬菌体的高效感染能力和质粒易于克隆的优点,有31-45kb的装载能力。
而且能够被包装成具有感染性能力的噬菌体颗粒。
2cosmid载体的特点:(1)具有λ噬菌体的特征,不形成溶菌周期(以大肠杆菌形式表现而不是噬菌斑)(2)具有质粒载体的特性(3)具有高容量的克隆能力3使用cosmid 克隆载体的基本程序Cosmid 载体的缺点:(1)载体片段自我连接(2)外源DNA 的自我连接(3)多个本来不在一起的外源DNA 连接起来,同时插入与载体上。
(五)单链丝状噬菌体载体1生物学特性(1)外形呈丝状(2)由外壳蛋白和正DNA 组成(3)全长6407个核苷酸(4)至少有10个基因2 构建:p116(六)人工染色体载体146-147(七)噬菌体载体及其他病毒载体第五章 目的基因的获取1目的基因:需要研究的基因2目的基因的制备:(1)直接分离法:限制性核酸内切酶酶切分离法基因分离的物理化学法双抗体免疫发分离编码蛋白的基因利用酶促反转录法直接从特定的mRNA 分离基因(2)构建基因组文库分离法DNA 文库:消减杂交文库、表达库、cDNA 文库基因组文库的概念:某种生物的基因组的全部遗传信息,通过克隆载体贮存在一个受体细胞的群体之中,这个群体即为这种生物的基因组文库。
若这个群体含贮存某种生物的基因组部分遗传信息,称为部分基因组文库。
建库的基本步骤:基因组文库的大小:基因组文库的克隆数目=基因组DNA总长/DNA插入片段的平均长构建基因组文库:基因组DNA的分离制备基因组DNA的片段化载体制备重组连接噬菌体体外包装转化宿主文库扩增、保存刷选(3)cDNA文库的构建及目的基因的分离某种生物基因组转录的全部mRNA经反转录产生的cDNA片段分别与克隆载体重组,并将其引入到相应的宿主细胞中(一般为E.coli.)繁殖和扩增,理论上此群体就包含有该物种的全部mRNA信息,称该生物基因组的cDNA文库。
cDNA文库与基因组文库的区别:①基因组文库克隆的是任何基因,它包括未知功能的DNA序列cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因,包括调节基因②基因组文库中的编码基因是真实基因,含有内含子和启动子cDNA文库克隆的是不含内含子的基因③基因组文库克隆的是全部遗传信息,不受时空限制cDNA文库克隆的是不完全编码的DNA序列,受发育和调控因子的影响④基因组文库中分离得到的基因片段很难直接用于体外的研究表达,但是它们对于真核细胞基因结核的分析。