培养液的开瓶时间对人类辅助生殖妊娠结局的影响

( 收稿日期: 2008-09-01) ( 本文编辑: 周颖)
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J Clin T ransfus L ab M ed, A pril. 2009, V ol 11, N o . 2
妊娠率达到40% 以上。不孕症的妊娠率与实验室质 量控制密切相关, 因此, 创造一个最佳环境用于培 养卵母细胞和胚胎对妊娠结局起到重要作用[ 1] 。在 IVF 实验室操作过程中对卵细胞、精子、胚胎操作 的每个环节均需要相关的培养液及处理液试剂, 本 文就各种试剂的开瓶时间对妊娠结局的影响进行 分析, 现报道如下。
结 果
对洗精液、受精液、卵裂液和移植液的开瓶时 间与妊娠结局的关系进行统计学分析, 结果显示 4 种 试剂均对妊娠结局的影响无统计学意义( P > 0. 05) , 见表1。4 种试剂中相对重要的是卵裂液, 单 独对卵裂液进行分组统计其与妊娠结局的关系, 结 果显示无统计学意义( P > 0. 05) , 见表 2。
2 Ishikaw a F , Y asukawa M , L yons B, et al. Develo pment of functional human bloo d and immune sy st ems in N OD / SCID/ I L 2 r ecepto r { g amma } chain-( null ) mice [ J] . Bloo d, 2005, 106( 5) : 1565-1573.
3 Ber gmeier W , Burg er PC, P iffath CL , et al. M eta llopro teinase inhibit or s impro ve the r eco ver y and hemo static function o f in vit ro -ag ed or -injur ed mo use plat elets
[ J] . Blo od, 2003, 102( 12) : 4229-4235. 4 L ey tin V , Allen DJ, M ody M , et al. A r abbit mo del fo r
mo nitor ing in v ivo via bility of human platelet co ncentr ates using flo w cyto metr y [ J ] . T r ansfusio n, 2002, 42 ( 7) : 711-718. 5 Piper JT , Gelderman M P , V ostal JG . In viv o r ecover y o f human pla telets in sever e co mbined im muno deficient mice as a measur e o f platelet damag e[ J] . T ransfusion, 2007, 47( 8) : 1540-1549.
表 1 洗精液、受精液、卵裂液和移植液 的开瓶时间( d) 与妊娠结局的关系
试剂开瓶时间( t) 洗精液 受精液
Inf luence of Opened-nutrient Fluid Time and the Outcome of Pregnancy in Human Assisted Reproductive Technology W A N G N ian-nian, L I U Y u-sheng , T ON G X ian-hong, et al . Rep r oductive Center of A nhui Pr ovincial H osp ital, A ff ilated A nhui M edical University , H ef ei 230032 【Abstract】 Objective T o ev aluate t he effect of o pened-nutrient fluid time on human assist ed r epro ductiv e outcom e of pr egnancy. Methods T o choo se the simple tuba l fa ct or on t he infert ility of IV F t reatm ent of 65 cases w ith the use of opened-nutr ient fluid t ime. A nd pr egnancy o utcome w er e analyzed in the center fo r repr oductive hospital fr om december 2006 t o december 2007. Results T he r ang e of opened-nutr ient fluid time had no sig nificant difference with pr egnancy outco mes ( P > 0. 05) . Conclusion T he human a ssisted repro ductiv e techno lo gy o f pr egnancy depends on t he quality co ntro l of labo rat or y. 【Key words】 A ssisted r epro ductiv e techno log y N utrient fluid L abor ator y quality co nt ro l
受精和胚胎移植( IVF -ET ) 、单精子卵细胞质内注 射( int racell ular sperm inject ion, ICSI) 。近年来随 着分子生物学技术的进步, 使单细胞水平进行人类 基因诊断成为可能。在辅助生育的显微操作基础上 结合现代分子生物学, 发展为人类胚胎植前遗传学 诊断( preim plantat ion genet ic diag no sis, PGD) 的 优生辅助生育技术。在现阶段人们通过改进超排卵 方案、提高卵子质量、发展实验室培养系统、开拓分 子生物学技术等, 已达到提高辅助生育的目的。目 前国内外已报道妊娠率平均为30% , 而本中心临床
临床输血与检验 2009 年 4 月第 11 卷第 2 期
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培养液的开瓶时间对人类辅助生殖妊娠结局的影响
王念念 刘雨生 童先宏 金仁桃 吴丽敏
【摘要】 目的 评价培养液的开瓶 时间对人类辅助生殖妊娠结局的影响。方法 对 2006 年 12 月～2007 年 12 月在本 院生殖中心因单纯性输卵管因素行体外 受精和胚胎移植( in v itr o fer tilizatio n and embry o t ransfer , IV F -ET ) 助孕的不 孕症 患者 65 例所使用的培养液的开 瓶时间和妊娠结局进行统计分析。结果 各种培养液的开瓶时间与妊娠结 局的关联无统计 学意义( P > 0. 05) 。结论 人类辅助生 殖技术的妊娠率有赖于实验室的质量控制。 【关键词】 辅助生育技术 培养液 实 验室质量控制 【中图分类号】 R 321-33 R 19 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-2587( 2009) 02-0135-03
试管婴儿的问世, 为人类生殖学树立了一个里 程碑。目前多使用辅助生育技术辅助生育, 如体外
DO I: 10. 3969/ j. iss n. 1671-2587. 2009. 02. 12 作者单位: 230001 合肥, 安徽 医科大学附属省立医院生殖中 心 作 者简介: 王念 念( 1982- ) , 女, 回族, 安 徽颍上人, 在读硕士 研 究生, 主要从事妇 产科研究, ( Tel) 0551-2283402-4( E-mail ) lorral xi@ 163. com。 通讯 作 者: 刘 雨 生, 男, 教 授, 主任 医 师, 硕 士 生 导师, ( T el) 0551-2283402-3( E-mail) sh engz hizhongx in@ 126. com。
在四孔板中按照1～2 万条精子/ 1 枚卵子的浓度在 放置卵子的受精液中加入精子, 放入培养箱中行体 外受精, 12～18 h 后观察受精情况, 受精后转入卵 裂液中, 37℃、5% CO2、6% 浓度和饱和湿度下继续 培养。卵细胞受精后, 每间隔24 h 观察胚胎发育情 况, 48 h 后挑出优质胚胎( 4 或 8 细胞, 卵裂球大小 均等, 胞质碎片< 10% ) , 使用移植液进行胚胎移植 手术。 移植后第 14 天检测血液 B-HCG, 血液阳性者 移植后第 30 天 B 超检查见有胚芽组织和胎心搏动 者, 认定为临床妊娠; 而没有见到胚芽组织及胎心 搏动者, 认为生化妊娠。移植后第14 天检测血液BHCG 为阴性者, 认为未妊娠。将未妊娠者及生化妊 娠者分为未妊娠组, 临床妊娠者为妊娠组。 洗精液开瓶时间是指: 洗精液开瓶的当日时间 与该试剂在取卵日使用的时间之差。受精液时间是 指: 受精液开瓶当日时间与该试剂在取卵日使用的 时间之差。卵裂液开瓶时间是指: 卵裂液开瓶当日 时间与该试剂在取卵日后 12～18 h 使用的时间之 差。移植液开瓶时间是指: 移植液开瓶当日时间与 该试剂使用在移植日的时间之差。 3 统计学处理 应用 SSPS 15. 0 统计软件。计算 每位患者的洗精液开瓶时间、受精液开瓶时间、卵 裂液开瓶时间、移植液开瓶时间与该试剂使用日期 的时间差, 分别对各个时间差值进行 t 检验和 V2 检 验。
材料与方法
1 材料 收集2006 年12 月～2007 年12 月在本院 生 殖中心因单纯性输卵管因素行 IVF 助孕的不孕 患者65 例, 要求患者年龄≤34 周岁, HCG 日( 注射 人绒毛膜促性腺激素) 子宫内膜厚度要求≥7 m m, 且形态为A 型。移植日移植的2 枚胚胎的质量均为 一级胚胎( 胚胎分级标准按参考文献[ 2] ) 。 2 方法 按照实验室常规进行 IVF 操作。 2. 1 改良上游法处理精液: 将处理前精液吸入试 管底部, 在精液上方轻轻覆盖 1～2 m l 洗精液, 放 入37℃培养箱上游40～60 m in。吸取上层培养液置 于刻度离心管中, 1 500 r / min, 离心10 m in。弃上清 液, 将精子团混匀, 在混匀液上层轻轻加入培养液 0. 5～1 ml, 置入 37℃、5% CO 2 培养箱中上游30～ 60 min。 2. 2 捡卵: 用已预热的 l0 ml 试管( Falcon 2001) 收集卵泡液后, 迅速将其倒入已预热的培养皿 ( Falcon 3003) , 置实体解剖镜下( 15×) , 先用肉眼 观察, 可看到一个灰色透亮的粘液团块, 被称为卵 一冠一丘复合物, 再在解剖镜下观察, 确认是否有 卵母细胞存在。将收集到的卵- 冠- 丘复合体 ( OCCC) 在M -HT F 洗涤培养液内, 冲洗 2 次, 去除 周 围的红细胞, 并转移至平衡好 HT F 受精培养基 四孔板中, 每孔5～7 枚卵子, 置5% CO 2、37℃培养 箱内培养3～6 h, 使卵母细胞进一步成熟。 2. 3 授精、培养及胚胎移植: 使用洗精液利用改良 上游法处理精子后, 调配精子密度至 10×106/ ml,