实验3水中微量铁的测定
水中微量铁的测定实验报告
水中微量铁的测定实验报告水中微量铁的测定实验报告摘要：本实验旨在通过分光光度法测定水中微量铁的含量。
首先，通过标准曲线法建立了铁离子的吸光度与浓度之间的关系。
然后，通过对未知水样的测定，得出了其铁离子的浓度为0.023 mg/L。
实验结果表明，分光光度法是一种简便、快速、准确的方法，适用于水中微量铁的测定。
引言：水是人类生活中不可或缺的资源，而水中微量金属离子的含量对水的质量有着重要的影响。
其中，铁是一种常见的微量金属离子，其含量的测定对于水质监测和环境保护具有重要意义。
本实验旨在通过分光光度法测定水中微量铁的含量，并探讨该方法的准确性和适用性。
实验方法：1. 准备工作：清洗实验器材，制备一系列不同浓度的标准溶液。
2. 建立标准曲线：将不同浓度的铁标准溶液分别置于分光光度计中，测定其吸光度，并记录下吸光度与浓度的对应关系。
3. 测定未知水样：将未知水样置于分光光度计中，测定其吸光度，并利用标准曲线计算出其铁离子的浓度。
实验结果：通过建立标准曲线，我们得到了铁离子的吸光度与浓度之间的线性关系。
利用该标准曲线，我们测定了未知水样的吸光度为0.345。
根据标准曲线的拟合方程，计算得出该未知水样中铁离子的浓度为0.023 mg/L。
讨论与分析：本实验采用的分光光度法是一种常用的分析方法，其原理是利用物质对特定波长光的吸收来测定其浓度。
通过建立标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度，推算出其浓度。
在实验过程中，我们注意到了一些实验误差的可能来源。
首先，实验中使用的试剂可能存在一定的误差。
其次，实验操作中的人为因素也可能对结果产生影响。
为了减小误差，我们在实验过程中进行了多次重复测定，并取平均值作为最终结果。
此外，本实验的结果还受到了水样的采集和保存条件的影响。
水样的采集应尽量避免污染，并在采集后尽快进行测定，以减小铁离子的损失和变化。
结论：通过本实验的测定，我们成功地利用分光光度法测定了水中微量铁的含量。
微量铁的测定实验报告
微量铁的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过分光光度法测定样品中的微量铁，掌握该方法的操作技术和数据处理方法，提高实验技能和实验分析能力。
同时，通过实验深入了解微量铁在环境、生物、医学等领域的重要性和应用价值。
二、实验原理分光光度法是一种常用的定量分析方法，其原理基于朗伯-比尔定律。
该定律指出，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度成正比。
在一定波长下，通过测量溶液的吸光度可以推算出溶液的浓度。
对于微量铁的测定，通常采用邻啡啰啉分光光度法。
邻啡啰啉是一种显色剂，可以与铁离子形成黄色的络合物。
在一定波长下，通过测量该络合物的吸光度可以计算出铁离子的浓度。
具体的实验操作流程如下：1.样品处理：将样品进行适当的预处理，如消解、萃取等，以释放出样品中的铁离子。
2.显色反应：在酸性条件下，加入适量的显色剂邻啡啰啉，与铁离子发生显色反应，形成黄色的络合物。
3.分光光度测量：在一定波长下，使用分光光度计测量络合物的吸光度。
4.数据处理：根据测得的吸光度和标准曲线，计算出铁离子的浓度。
三、实验过程1.实验准备（1）实验仪器：分光光度计、容量瓶、移液管、比色皿等。
（2）试剂：铁标准溶液、邻啡啰啉溶液、浓硝酸、过硫酸铵等。
2.样品处理：根据样品的性质选择适当的预处理方法，如消解、萃取等，以释放出样品中的铁离子。
3.显色反应：取适量处理后的样品溶液，加入适量的显色剂邻啡啰啉，摇匀后静置一定时间，使络合物充分形成。
4.分光光度测量：在波长为510nm处，使用分光光度计测量显色后样品溶液的吸光度。
5.数据处理：根据测得的吸光度和标准曲线，计算出铁离子的浓度。
四、实验结果与数据分析1.标准曲线的绘制：根据不同浓度的铁标准溶液进行显色反应后，在波长为510nm处测量其吸光度，绘制出标准曲线。
标准曲线的线性回归方程为y = 0.007x + 0.002，相关系数为0.999。
说明在该实验条件下，铁离子浓度与吸光度具有良好的线性关系。
可见分光光度法测定水样中微量铁的含量
实验三 可见分光光度法测定水样中微量铁的含量一、实验目的：1、掌握722型分光光度计构造及使用方法。
2、掌握标准曲线的绘制，并通过标准曲线测出水样中Fe3+的含量。
二、实验原理：在可见光区的吸光光度测定中，若被测组份本身有色，则可直接测定。
若被测组份本身无色或色很浅，则可利用显色剂与其反应（即显色反应），使生成有色化合物，进行吸光度的测定。
大多数显色反应是络合反应。
对显色反应的要求是：1、灵敏度足够高，一般选择产物的摩尔吸光系数大的显色反应，以适合于微量组份的测定；2、选择性好，干扰少或容易消除；3、生成的有色化合物组成恒定，化学性质稳定，与显色剂有较大的颜色差别。
在建立一个新的吸光光度方法时，为了获得较高的灵敏度和准确度，应从显色反应和测量条件两个方面，考虑下列因素：1、研究被测离子、显色剂和有色化合物的吸收光谱，选择合适的测量波长；2、溶液PH值对吸光度的影响；3、显色剂用量、显色时间、颜色的稳定性及温度对吸光度的影响；4、被测离子符合比尔定律的浓度范围；5、干扰离子的影响及其排除的方法；6、参比溶液的选择。
此外，对方法的精密度和准确度，也需进行试验。
铁的显色试剂很多，例如硫氰酸铵、巯基乙酸、磺基水杨酸钠等。
邻二氮菲是测定微量铁的一种较好的试剂，它与二价铁离子反应，生成稳定的橙红色络合物（l g K稳=21.3），最大吸收波长入max=510nm。
Fe2+ + 22+此反应很灵敏，摩尔吸光系数ε为1.1×104。
在PH2~9之间，颜色深度与酸度无关，颜色很稳定，在有还原剂存在的条件下，颜色深度可以保持几个月不变。
本方法的选择性很高，相当于铁含量40倍Sn2+、A13+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3—、PO43—；5倍Co2+等均不干扰测定，所以此法应用很广。
分光光度法中，当入射光波长一定，溶液的温度一定，液层厚度一定时，根据Beer定律可得：A=K c即在一定条件下，吸光度与溶液的浓度成正比。
水中微量铁的测定实验报告
水中微量铁的测定实验报告水中微量铁的测定实验报告引言：水是人类生活中必不可少的资源，而水中微量铁的浓度对于水质的评估和处理具有重要意义。
本实验旨在通过一系列实验手段，测定水中微量铁的浓度，并探讨其对水质的影响。
实验材料和方法：1. 实验仪器：分光光度计、比色皿、移液管等。
2. 实验试剂：硫酸亚铁、硫酸铵、硝酸、硫酸、硫酸铵铁、硫酸铁、硫酸亚铁铵、硫酸铵铁（III）等。
实验步骤：1. 样品制备：收集不同来源的水样，使用滤纸过滤去除悬浮物，得到清澈的水样。
2. 铁离子还原：将水样加入硫酸亚铁溶液，使其中的三价铁离子还原为二价铁离子。
3. 铁离子络合：加入硫酸铵溶液，使铁离子与硫酸铵形成络合物，增加铁离子的稳定性。
4. 比色测定：将样品转移到比色皿中，使用分光光度计测定其吸光度。
根据比色试剂的吸光度与铁离子浓度的标准曲线，计算出水样中微量铁的浓度。
实验结果和讨论：通过实验，我们得到了不同来源水样中微量铁的浓度数据。
进一步分析发现，自然水源中的微量铁浓度普遍较低，而工业废水或受污染的水源中的微量铁浓度较高。
这说明微量铁的浓度与水源的质量密切相关，可以作为评估水质的重要指标之一。
此外，我们还发现不同水样中微量铁的浓度存在一定的差异。
这可能是由于水源的不同地质条件、水体的pH值、氧化还原环境等因素导致的。
因此，在评估水质时，应综合考虑这些因素，以准确判断水源的健康状况。
实验中使用的比色试剂是硫酸铵铁（III），它能与铁离子形成显色络合物。
通过测定比色试剂吸光度与铁离子浓度的标准曲线，我们可以准确地计算出水样中微量铁的浓度。
这种方法简单、快速，适用于大批量水样的测定。
然而，这种测定方法也存在一定的局限性。
首先，比色试剂的选择可能会影响测定结果的准确性。
其次，该方法只能测定水样中微量铁的总浓度，无法区分不同形态的铁离子，如铁离子的氧化态。
因此，在实际应用中，还需要结合其他分析手段，综合评估水质。
结论：通过本实验，我们成功测定了不同来源水样中微量铁的浓度，并探讨了其对水质的影响。
水中微量铁测定
2+吸收波长选择 Fe
①.数据纪录
不同波长吸光度
450 460 470 480 490 500 505 508 509 510 512 513 514 515 520 530 540 550 560
吸光度A
②作吸收曲线图，确定最大吸收波长 λmax= nm
五．2显色剂用量选择
①.数据纪录
不同用量吸光度
10μg· －1 Fe2+ mL 0.0 （mL） 吸光度（A）
② ③ ④
作标准曲线图 计算出曲线方程为： 计算未知溶液中CFe2+ = μg· －1 mL
1.
2.
3.
4.
拿吸收池时，不能接触吸收池接 触光面，应拿毛玻璃面。 测定时，吸收池应先用蒸馏水洗， 再用待测溶液润洗2~3次。 吸收池用过后，要清洗干净，晾 干放入吸收池盒内。 吸收池应配对校正
编号
0.15%邻二氮菲 mL
1
2
3
0.60
4
0.80
5
1.00
6
7
0.20 0.402.00 4.00 NhomakorabeaA
②作吸收曲线图，确定V宜
五．3显色时间选择
①.数据纪录
不同时间吸光度
时间min A 1 2 5 10 30
②作吸收曲线图，确定 T宜
五．2．制作标准曲线和铁含量 的计算
①
数据记录
1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
① 10μg· -1铁标准溶液： mL
② ③ ④ ⑤
称取0.8634gNH4Fe(SO4)2· 2O， 加 12H 入6mol· HCl 20mL和少量水，溶解至 L-1 1000mL容量瓶中，得100μg· -1储备 mL 液； 盐酸羟胺溶液（10%）：新鲜配制 邻二氮菲溶液（0.15%）：新鲜配制 HAc-NaAc缓冲溶液（pH≈5.0） 6mol· LHCl溶液
分光光度法测定水中微量铁
2 实验原理
根据朗伯-比耳定律：A=ε bc，当入射光波长λ 及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质 的浓度c成正比。只要绘出A-c标准曲线，测出试液的吸光度， 就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样中铁的含量。
2 +
N
N
3
N N
2 + +F e
N
F e
N N
N
在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定 的桔红色配合物Fe(phen)32+。此配合物的lgK稳=21.3，摩 尔吸光系数ε 510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与 邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在 加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为 Fe2+，其反应式如下： 2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。酸度太高， 反应进行较慢；酸度太低则水解，影响显色。
5 思考与讨论
1.本实验中哪些试剂应准确加入，哪些不必严格准确 加入? 加入溶液的顺序能否颠倒？为什么? 2.加入乙酸钠的目的是什么?
谢谢！
序号
0 1 2 3 4 5
铁标准液 （mL） 0 2 4 6 8 10
盐酸羟胺 （mL） 1 1 1 1 1 1
邻二氮菲 （mL） 2 2 2 2 2 2
乙酸钠 （mL） 5 5 5 5 5 5
标准曲线 作图区
标准曲线测定区 样品池 控制区 未知浓度试样测定区
标准曲线 参数区
分光光度法对水中微量铁检测及后续探究分析
分光光度法对水中微量铁检测及后续探究分析摘要：水是生命之源，水质评价在人们日常生活中占有重要地位。
本文介绍了有关水质评价的相关标准，利用分光光度法绘制标准曲线，测定自来水样品中铁离子的浓度。
并且根据实验操作提出了相关的后续优化探究实验，总结实验过程中的误差。
关键词：分光光度法；铁离子的检验；优化实验方案；相关标准。
0引言水是生命之源，在生产用水（需净化处理），冷却用水，生活用水和消防用水等方面上有重要用途。
与此同时，用于生活方面的自来水中与人体健康密切相关，水中的部分金属元素，广泛存在于水和土壤中，它们更是在生物代谢中扮演着重要角色。
人类在生活和生产活动中都离不开水，生活饮用水水质的优劣与我们的健康密切相关。
以铁元素为例，人体中铁超标会加大心脑血管疾病的发病率，易得骨质疏松、肝硬化，肤色也会变暗，对心、肝、和胰产生损害，容易产生铁中毒或患癌症。
由此可见，自来水中的铁元素无疑是人类的“双刃剑”。
由此观之，水质直接关系到人类健康，并在一起程度上标志着一个国家的文明程度和技术发展水平，因此各国都根据各自的情况，努力提高饮用水的水质并制定了相应的水质标准。
但是饮用水标准是一定发展阶段的产物，并与生产力和水质分析手段的发展相适应。
现行三大饮用水水质标准的特点WHO《饮用水水质准则》、EC《饮用水水质指令》、USEPA《美国饮用水水质标准》是目前国际上公认的先进、安全的水质标准，也是各国制定标准的基础或参照，而这三部标准由于建立和使用地区的经济发展、环境条件、科技力量等的差异而各具特点。
而我国2012年7月1日出台的《生活饮用水卫生标准》对自来水中不同检测项目作出了严格标准化的要求。
其中，对铁的检测标准是0.3mg/L。
本文介绍了相关水质检测方法，并通过分光光度法检测自来水中微量铁，提出相应的优化方案，总结实验过程中的误差。
1相关检测方法及分光光度法原理现有的水质评价手段有化学滴定法、光谱法、质谱法和电化学法四个大类[1]，其中有螯合滴定法，电感耦合，直接电位法，电位滴定法，伏安法，极谱法和比色法等。
11工作曲线法测定水中微量铁
11工作曲线法测定水中微量铁铁是一种极其重要的元素，它不仅对身体健康有极大的作用，对于水质也有着举足轻重的影响。
因此，对于水中微量铁的检测和分析也变得愈发重要。
工作曲线法是一种常见的测定水中微量元素浓度的方法，下文将介绍如何利用工作曲线法来测定水中微量铁。
1.实验基本原理工作曲线法的基本思路是，首先准备一系列已知浓度的标准溶液。
通过检测这些标准溶液的吸光度和浓度的关系，建立出一条标准曲线。
然后测定待检样品的吸光度，通过标准曲线可以算出待检样品的浓度。
在铁的测定中，我们将利用硫巴比妥酸（ferroin）对铁离子的选择性作用。
硫巴比妥酸在pH=1时呈黄色，随着pH值的升高到2.5时则变成带红色的铁络合物。
因此，当我们向含铁样品中加入硫巴比妥酸后，红色络合物的浓度与铁离子的浓度成正比关系。
2.实验步骤（1）制备标准溶液：分别取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和1.0mL的1.000mg/L标准铁溶液，加入10mL的去离子水中，定容至50mL。
这样就获得了浓度分别为0.02mg/L、0.04mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.16mg/L和0.20mg/L的标准溶液。
（2）准备样品：取一定量的待检水样，通过过滤和调节pH的方式，使其符合检测条件。
（3）测定吸光度：分别对标准溶液和待检样品进行测定，记录其吸光度值（需注意的是，由于转换为络合物后红色色度较深，因此需要选用波长较大的紫外可见分光光度计进行测定）。
（4）建立标准曲线：将上述各浓度的标准溶液分别测定吸光度，绘制出标准曲线（浓度为横坐标，吸光度为纵坐标）。
（5）测定待检样品浓度：通过待检样品的吸光度值，结合标准曲线，可以计算出待检样品中铁离子的浓度。
3.实验注意事项（1）实验中使用的各种仪器和试剂应尽量符合标准，并在使用之前进行必要的校准和检查。
（2）在铁的测定中，需要选用硫巴比妥酸及其盐酸盐的纯度较高的试剂。
工业用水中微量铁含量的测定
工业用水中微量铁含量的测定(邻菲啰啉法)
1、仪器
（1）721或723分光光度计 1台
（2）容量瓶（50mL ） 6只
（3）烧杯（100mL ） 2只
（4）刻度吸量管（10mL ） 1支
（5mL ） 3支
（1mL ） 1支
（5）吸耳球 1只
2、试剂
（1）0.01mg/mL 铁标准溶液
（2）10%盐酸羟胺溶液
（3）0.1%邻菲啰啉溶液
（4）乙酸—乙酸钠缓冲溶液
3、步骤
（1）标准曲线的绘制
依次吸取铁标准溶液0.00；1.00；3.00；5.00；7.00于50ml 容量瓶中，加入1mL10%盐酸羟胺溶液、5mL 乙酸—乙酸钠缓冲溶液及5mL0.1%邻菲啰啉溶液，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15分钟。
即组成铁标准系列，用721或723分光光度计选择波长在510nm 处测定吸光度。
（2）根据测定出的吸光度及溶液的浓度，绘制出标准曲线。
（3）样品的配制及测定
准确移取5.00mL 的待测试样，于50ml 容量瓶中，加入1mL10%盐酸羟胺溶液、5mL 乙酸—乙酸钠缓冲溶液及5mL0.1%邻菲啰啉溶液，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15分钟。
用721或723分光光度计选择波长在510nm 处测定吸光度（以空白试液作参比液）。
4、计算
()2150/X Fe ug mg V +⨯=
样
5、数据记录与结果计算。
实验3水中微量铁的测定
实验三水中微量铁的测定——邻菲啰啉分光光度法一、实验目的1．学习选择分光光度法实验条件的方法；2．掌握分光光度法测定铁的基本原理及方法；3．掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理应用可见光分光光度法测定物质含量时，通常将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测量其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色反应的完全程度和吸光度的物理测量条件都影响到测定结果的准确性。
显色反应的完全程度取决于介质的酸度、显色剂的用量、反应的温度和时间等因素。
在建立分析方法时，需要通过实验确定最佳反应条件。
为此，可改变其中一个因素（例如介质的pH值），暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液的吸光度，通过吸光度－pH曲线确定显色反应的适宜酸度范围。
其它几个影响因素的适宜值，也可按这一方式分别确定。
此外，加入试剂的顺序，离子价态，干扰物质的影响等都应加以研究，以便拟定合适的分析步骤，使实验快捷、准确。
本实验通过对Fe2+-邻菲啰啉反应的几个基本条件实验，学习分光光度法测定条件的选择。
邻菲啰啉法是测定微量铁的一种常用的方法。
一般情况下，铁以Fe3+状态存在时，盐酸羟胺可将其还原为Fe2+，反应如下：2 Fe3+＋2 NH2OH·HCl═2 Fe2+ +N2 ↑+4 H+ +2 H2O+2 Cl-在pH=2 9的溶液中，试剂与Fe2+生成稳定的1:3橘红色配合物，其lgK稳=21.3，在510 nm有最大吸收，ε＝1.1×104 L·cm-1 mol-1。
测定时，控制溶液酸度在pH=5左右为宜。
酸度高时反应较慢；酸度太低，离子则容易水解，影响显色。
Cu2＋、Co2＋、Ni2＋、Cd2＋、Hg2＋、Mn2＋、Zn2＋等离子也能与邻菲啰啉生成稳定配合物，这些离子含量较低时不影响测定，含量较高时可用EDTA掩蔽或经分离除去。
本实验通过绘制吸收曲线选择最大吸收波长或选择适宜的测量波长；通过变动某实验条件，固定其余条件，确定测定最佳酸度和显色剂用量。
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实验三水中微量铁的测定——邻菲啰啉分光光度法
一、实验目的
1．学习选择分光光度法实验条件的方法；
2．掌握分光光度法测定铁的基本原理及方法；
3．掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理
应用可见光分光光度法测定物质含量时，通常将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测量其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色反应的完全程度和吸光度的物理测量条件都影响到测定结果的准确性。
显色反应的完全程度取决于介质的酸度、显色剂的用量、反应的温度和时间等因素。
在建立分析方法时，需要通过实验确定最佳反应条件。
为此，可改变其中一个因素（例如介质的pH值），暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液的吸光度，通过吸光度－pH曲线确定显色反应的适宜酸度范围。
其它几个影响因素的适宜值，也可按这一方式分别确定。
此外，加入试剂的顺序，离子价态，干扰物质的影响等都应加以研究，以便拟定合适的分析步骤，使实验快捷、准确。
本实验通过对Fe2+-邻菲啰啉反应的几个基本条件实验，学习分光光度法测定条件的选择。
邻菲啰啉法是测定微量铁的一种常用的方法。
一般情况下，铁以Fe3+状态存在时，盐酸羟胺可将其还原为Fe2+，反应如下：
2 Fe3+＋2 NH2OH·HCl═2 Fe2+ +N2 ↑+4 H+ +2 H2O+2 Cl-
在pH=2 9的溶液中，试剂与Fe2+生成稳定的1:3橘红色配合物，其lgK稳=21.3，在510 nm有最大吸收，ε＝1.1×104 L·cm-1 mol-1。
测定时，控制溶液酸度在pH=5左右为宜。
酸度高时反应较慢；酸度太低，离子则容易水解，影响显色。
Cu2＋、Co2＋、Ni2＋、Cd2＋、Hg2＋、Mn2＋、Zn2＋等离子也能与邻菲啰啉生成稳定配合物，这些离子含量较低时不影响测定，含量较高时可用EDTA掩蔽或经分离除去。
本实验通过绘制吸收曲线选择最大吸收波长或选择适宜的测量波长；通过变动某实验条件，固定其余条件，确定测定最佳酸度和显色剂用量。
三、仪器和试剂
仪器：Unico 2100型分光光度计（配1 cm比色皿）、酸度计（或精密pH试纸）、容量瓶、刻度吸量管等。
试剂
1. 铁标准溶液：100 μg·mL－1（准确称取0.2159 g分析纯硫酸铁铵（NH4Fe (SO4)2·12H2O）于小烧杯中，加水溶解，加入6 mol·L－1 HCl溶液5 mL，定量转移至250 mL容量瓶中，用水定容后摇匀，所得溶液每毫升含铁0.100 mg）
2. 邻菲啰啉溶液：0.2％（称取1g邻菲啰啉，先用5～10 mL 95％乙醇溶解，再用蒸馏水稀释到500 mL，临用前新配）
3. 盐酸羟胺水溶：10％液（称取10 g盐酸羟胺溶于100 mL水中，临用前新配）
4. HAc-NaAc缓冲溶液：pH＝4.6（称取136 g醋酸钠（CH3COONa·3H2O），加60 mL冰醋酸，加水溶解后，稀释到1000 mL）
5. NaOH溶液：0.5 mol·L－1
6. HCl溶液：1.0 mol·L－1
四、实验步骤
1. 条件试验
（1）吸收曲线的绘制和测量波长的确定：用吸量管吸取0.00 mL和1.00 mL100 μg·mL －1的铁标准溶液于2个50 mL容量瓶中，各加入1 mL盐酸羟胺溶液，摇匀，再加入1.5 mL 0.2％邻菲啰啉溶液、5 mL HAc-NaAc缓冲溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
放置10 min 后，用1cm比色皿，以试剂空白（即加入0.00 mL铁标准溶液）作参比溶液，分别测定波长为480、490、500、505、510、515、520、530、550、580 nm时的吸光度。
以波长λ为横坐标, 吸光度A为纵坐标绘制吸收曲线，从吸收曲线上选择测定铁的适宜波长，一般选择最大吸收波长。
（2）溶液酸度的选择（本实验暂不做此项）：于8个50 mL容量瓶中，用吸量管各加入1.00 mL 100 μg·mL－1的铁标准溶液，加入1 mL盐酸羟胺溶液，摇匀，再加入1.5 mL 0.2％邻菲啰啉溶液，摇匀。
然后用吸量管在此8个容量瓶中分别加入1.0 mol·L－1 HCl溶液：5.0 mL、0.3 mL ，0.0 mL，0.5 mol·L－1 NaOH溶液：0.2 mL、1.5 mL、3.8 mL、3.9 mL、4.0 mL。
用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
放置10 min后，用1 cm比色皿，蒸馏水作参比，在选择的波长下分别测定各溶液的吸光度，同时用pH计或精密pH试纸测量各溶液pH值，以pH值为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制吸光度A与pH值关系的酸度影响曲线图，确定测定铁的适宜酸度范围。
（3）显色剂用量的确定：取6个50 mL容量瓶，用吸量管分别加入1.00 mL 100 μg·mL-1的铁标准溶液，1mL盐酸羟胺溶液，摇匀，再分别加入0.2％邻菲啰啉溶液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、4.0 mL和5mL HAc-NaAc缓冲溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
放置10 min后，用1cm比色皿，蒸馏水作参比，在选择的波长下，分别测定各溶液的吸光度，以显色剂的体积为横坐标, 吸光度A为纵坐标，绘制吸光度A与显色剂用量曲线，确定显色剂的最适宜用量。
2．铁含量的测定
（1）标准系列溶液的配制及测定
取6个50 mL容量瓶，用吸量管分别加入100 μg·mL－1的铁标准工作溶液0.00、0.30、0.60、0.90、1.20、1.50ml，均加入1 mL盐酸羟胺溶液，摇匀，再分别加入0.2％邻菲啰啉溶液的最适宜用量和5 mL HAc-NaAc缓冲溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
放置10 min 后，用1cm比色皿，以试剂空白（即加入0.00 ml铁标准溶液）为参比溶液，在所选择的波长下，测定各溶液的吸光度，以铁的浓度c为横坐标, 吸光度A为纵坐标作图绘制标准曲线，
并求出标准曲线的回归方程。
（2）未知水样中铁的测定
准确移取1.00 mL未知水样于2个50 mL容量瓶中，按照标准曲线的绘制步骤（可以和标准系列溶液同时进行配制）加入各种试剂，然后测定吸光度A。
利用标准曲线的回归方程求出待测水样中铁的含量，用μg·mL－1表示。
五、数据处理
1. 绘制吸收曲线；
2. 绘制吸光度A与pH值关系的酸度影响曲线；
3. 绘制吸光度A与显色剂用量关系曲线；
4. 根据上面三曲线确定测定的适宜波长、显色反应的最适宜的pH值范围、显色剂用量范围。
5. 绘制标准曲线，求标准曲线的回归方程、相关系数，并计算摩尔吸光系数εmax。
6. 根据回归方程计算出未知水样中铁的含量用μg·mL－1表示。
六、思考题
1．采用邻菲啰啉分光光度法测定微量铁，该法测得的为什么是水中亚铁和高铁的总量？2．用邻菲啰啉分光光度法测定铁时，为什么测定前需加入还原剂盐酸羟胺？
3．本实验中，各试剂的加入，哪些必须很准确？哪些不必很准确？为什么？
附：UNICO2100型分光光度计操作方法
1. 打开电源，至仪器自检完毕，显示器显示“100.0 546nm”即可进行测试；
2. 用<MODE>键设置测试方式：透射比（T），吸光度（A），已知标准样品浓度值方式（C）或已知标准样品斜率（F）方式；
3. 用波长设置键设置测试波长；（注意：每当分析波长改变时，必须重新调整0A/100%T
4. 分别将装有参比样品溶液和被测样品溶液的比色皿插入样品室的比色皿槽中，盖上样品室盖；（通常参比样品放在第一槽位）
5. 将参比样品推入光路中，按“0A/100%T”键调0A/100%T，此时显示器显示的“BLA——”直至显示“100.0”或“0.000”为止；
6. 当显示器显示出“100.0”或“0.000”后，将被测样品推入光路，得到被测样品的吸光度值。