培养基的配置
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法在实验室中，培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础，正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
不同的微生物对营养物质的需求有所不同，因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基，并掌握正确的配制方法。
接下来，我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。
一、LB 培养基（LuriaBertani 培养基）LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基，其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配制 1L 的 LB 培养基，所需材料如下：胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤：1、称取上述成分，将其放入一个干净的 1L 烧杯中。
2、加入约800ml 的去离子水，用玻璃棒搅拌，直至溶质完全溶解。
3、用去离子水将溶液定容至 1L。
4、调节 pH 值至 70（通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节）。
5、将培养基分装到锥形瓶中，每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。
6、盖上瓶塞，用报纸或牛皮纸包扎瓶口。
7、放入高压灭菌锅中，在 121℃下灭菌 20 分钟。
二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，适用于多种细菌的培养。
配制 1L 该培养基，需要准备以下材料：牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下：1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入干净的烧杯中。
2、加入适量的去离子水，搅拌溶解。
3、定容至 1L，搅拌均匀。
4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。
5、分装、包扎、灭菌，方法同上。
三、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）PDA 培养基常用于培养真菌，尤其是霉菌。
配制 1L 的 PDA 培养基，材料如下：马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程：1、将马铃薯去皮，切成小块，称取 200g，放入锅中，加入约1000ml 去离子水，煮沸 20 30 分钟，直到马铃薯块变软。
培养基的配制
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基配方
1. LB培养基：10 g/L胰蛋白胨(进口)，5 g/L酵母提取物(进口)，10 g/L NaCl。
若配制固体培养基，加入15 g琼脂粉；
2. YPD培养基：22 g/L的一水合葡萄糖，20 g/L胰蛋白胨(进口)，10 g/L酵母提取物(进口)。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
3. SC-Ura培养基：22 g/L含一水合葡萄糖，6.7 g/L YNB（无氨基酸酵母氮源），1.224g/L 氨基酸粉末（除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的），配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。
4. YPX 培养基：蛋白胨，20 g/L；酵母粉，10 g/L；木糖，20 g/L或50 g/L。
5. YPD+G418：G418：1ml/L
Leu（亮氨酸）0.38 g/L，
Ura（尿嘧啶）0.076 g/L，
100xHis（组氨酸）7.6g/L，加入10mL/L
100xTrp（色氨酸）7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde（鸟嘌呤）7.6g/L 加入10mL/L
100xLys（赖氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
100xMet（甲硫氨酸、蛋氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
全部氨基酸：。
培养基配方
1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）：马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 µ g/ml，用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）：牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50µg/ml，用于抑制真菌生长。
115℃，20min 灭菌。
3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 µM，FeCl3 50 µM，ZnCl2 1 µM，VB1 2 µM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 µg/mL，苯丙氨酸50 µg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。
太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。
在糖化过程中，应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。
pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。
培养基配制的过程和注意事项
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备：首先，需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外，还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂：按照配方中的比例，准确地称取所需的试剂。
在称量过程中，应注意保持实验环境的清洁，并使用洁净的称量工具，以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂：将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中，可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后，应检查溶液的透明度和均匀性，确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值：根据具体的培养基配方，使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液，并经过搅拌均匀，逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中，应注意避免过度调节，以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒：将配制好的培养基加热至沸腾，保持沸腾状态持续5-10分钟，以达到消毒的目的。
在加热过程中，应注意避免溢出和烧焦，同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却：将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度，通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中，应避免引入环境中的微生物污染，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存：将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中，并密封保存。
在分装过程中，要注意避免试剂接触到外界空气，以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁，操作过程要注意无菌操作，以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中，应准确称取试剂的质量，并按照配方中的比例进行配比，以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时，应充分搅拌均匀，确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时，应注意控制加热时间和温度，以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中，要避免污染和细菌的侵入，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行，并尽快密封保存，避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
培养基的配制
培养基的配制培养基是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺，服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散淀粉溶解:少量的冷水进粘贴琼脂融化温度为95-97℃，加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤滤纸或棉。
(有时可以省略)5. 分装一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶静态培养时，100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml否则，在灭菌过程中，培养基的煮沸极易污染棉塞，造成细菌污染;如果进行瓶培养，15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装液体培养基通常填充4-5ml，约为试管高度的1 / 4;一般固体斜培养基为3-4ml，约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎包装完毕后，塞好棉塞，用牛皮纸包好棉塞，防止灭菌时湿气进入，弄湿棉塞。
7. 灭菌高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高，营养成分就会被破坏培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜灭菌后，需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置，使其固化成一个斜坡，约占试管长度的1 / 2。
9. 存储中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好，置于2-8℃冰箱中保存。
常用培养基配制方法
常用培养基配制方法：（1）基础盐培养基（MSM）：(NH4)2SO42.0g，MgSO4·7H2O0.2g，CaCl2·2H2O 0.01g，FeSO4·7H2O0.001g，Na2HPO4·12H2O1.5g，KH2PO41.5g，蒸馏水1000 mL。
（2）LB培养基：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，蒸馏水1000 mL，pH7.5。
（3）高氏合成1号培养基：硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，硫酸亚铁0.01g，可溶性淀粉20g，蒸馏水1000mL。
（4）查彼氏培养基：硝酸钠2g，氯化钾0.5g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，硫酸亚铁0.01g，蔗糖30g，蛋白胨0.5g，蒸馏水1000mL。
（5）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20 g，蒸馏水1000mL。
将无病马铃薯洗净去皮切碎，加蒸馏水1000mL，煮沸0.5 h，纱布过滤，滤液加蒸馏水补足1000mL，再加入葡萄糖，然后分装三角瓶灭菌备用。
（6）铵察氏琼脂培养基：氯化铵2g，氯化钾0.5g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，硫酸亚铁0.01g，蔗糖30g，蛋白胨0.5g，琼脂20g，蒸馏水1000 mL。
（7）克氏合成1号琼脂培养基：磷酸氢二钾1g，碳酸镁0.3g，氯化钠0.2 g，硝酸钾1g，硫酸亚铁0.01g，碳酸钙0.5g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（8）葡萄糖天门冬素琼脂培养基：葡萄糖10g，天门冬素0.5g，磷酸氢二钾0.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（9）葡萄糖酵母膏琼脂培养基：葡萄糖10g，酵母膏10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（10）瓦氏肉汁琼脂培养基：蛋白胨5g，葡萄糖10g，牛肉膏10g，氯化钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（11）淀粉琼脂培养基：可溶性淀粉10g，碳酸镁1g，磷酸氢二钾0.3g，氯化钠0.5g，硝酸钠1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验原理 (continued)
牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、麦芽 汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁培养基 等都是常用的培养基。
牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高 氏一号培养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和 豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡 萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
高氏一号 培养基配方：
可溶性淀粉 20g
NaCl
0.5g
KNO3 1g 1g
K2HPO4·3H2O 0.5g
MgSO4·7H2O 0.5g
FeSO4·7H2O 0.01g
琼脂
15-20g
水
1000ml
pH
7.4-7.6
马铃薯 培养基配方：
◇ 操作步骤详见下一课件
摆斜面：
操作步骤 (continued)
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放
◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
操作步骤 (continued)
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
实验报告
1、培养基配制的原理、方法、步骤及注意事项。 2、思考题
操作步骤
1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面
称量与溶化：
操作步骤 (continued)
注意：
1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量 纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然 后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从 称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。
操作步骤 (continued)
◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛 皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后 也用牛皮纸包扎。
◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。
◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制 人或实验组。
灭菌：
操作步骤 (continued)
◇ 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌
◇ 通常灭菌条件为1.05kg/cm2, 121.3℃灭菌20分 钟；含糖量高的培养基，如马丁氏培养基则为 0.56kg/cm2,112.6℃灭菌30分钟。
1）培养基应具备哪些条件？为什么？ 2）在配制培养基过程中应注意哪些问题？为 什么？ 3）培养基配制好后，为什么要立即灭菌？如 何检查灭菌是否彻底？
2）可溶性淀粉应先用少量冷水调成稀糊状，再加入量杯 的热水中。
操作步骤 (continued)
加琼脂、溶化、定容、（过滤）
琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入不会影响 培养基的pH。 琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易 出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则 琼脂过多。 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应 补充水分至所需量。 可趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察；如 无特殊要求，通常可省略该步。
分装：
操作步骤 (continued)
1）装量： 液体——试管高度的1/4左右 固体——试管高度的1/5 ，灭菌后摆斜面 半固体——一般为试管高度的1/3，灭菌后垂直放置
分装：
2）分装装置：
操作步骤 (continued)
分装：
操作步骤 (continued)
3）注意：
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以 免沾污棉塞而引起污染；若不慎沾在了管口，可用湿纱 布揩净。
实验分组安排
L1 ： 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 500ml 斜面20支，余装三角瓶
L2 ： 高氏一号培养基 500ml 斜面20支，余装三角瓶
R1 ： 马铃薯葡萄糖培养基 500ml 斜面20支，余装三角瓶
R2 ： 豆芽汁培养基 500ml 斜面20支，余装三角瓶
牛肉膏蛋白胨 培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
实验一 培养基的配制
实验目的
1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基 的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握压力蒸汽灭菌方法的原理和方法步骤。
实验原理
培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微 生物生长繁殖或产生积累代谢产物的营养基质。
自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之 实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不 同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳 源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养 要素，且各成分比例应合适。
加塞：
操作步骤 (continued)
棉塞 或 硅胶塞
作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有 良好的通气性能。
操作步骤 (continued)
棉塞制作方法：
操作步骤 (continued)
操作步骤 (continued)
A—配制时纱布塞法 B—灭菌时包牛皮纸 C—培养时纱布翻出
包扎：
马铃薯 蔗糖（或葡萄糖） 琼脂 水 pH
200g 20g 15-20g 1000ml 自然
配法： 马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤 取汁，再加入糖和琼脂，溶化后补足水分。
豆芽汁 培养基配方：
黄豆芽 蔗糖（或葡萄糖） 琼脂 水 pH
100g 50g 15-20g 1000ml 自然
配法： 豆芽加水煮沸半小时，然后过滤取汁，再加入糖 和琼脂，溶化后补足水分。
为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求， 还必须控制培养基合适的pH。
实验原理 (continued)
培养基按成分可分为天然培养基（如麦芽汁培养 基）、合成培养基（如高氏一号培养基、察氏培养基） 和半合成培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡 萄糖培养基）。
按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基和 液体培养基。常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加 量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%0.8%。