S014交叉配血试验标准化操作规程(聚凝胺法)

交叉配血试验标准化操作规程(聚凝胺法)

一、目得

为保证临床输血得相容性,确保临床输血安全,对全血、红细胞悬液、洗涤红细胞、浓缩红细胞、少白细胞红细胞、冰冻红细胞、机采浓缩白细胞悬液等血液成分进行交叉配血试验。

二、方法

采用聚凝胺介质试管法;

三、原理

聚凝胺法第一步采用低离子强度溶液降低红细胞与抗体反应介质得离子强度,从而减少了红细胞周围得阳离子云,促进带正电荷得IgG抗体与带负电荷得红细胞发生反应,这样大大加快了抗原与抗体反应得速率。第二步通过加入聚凝胺来促使红细胞产生可逆性得非特异性凝聚、聚凝胺就是一种多价阳离子溴化己二甲胺多聚物,可以中与红细胞表面得负电荷,使红细胞得Zetａ电位降低,从而产生红细胞可逆性得聚集,缩短红细胞之间得距离,让IgG抗体可直接引起红细胞凝聚、第三步加入重悬液,重悬液可中与聚凝胺得作用。可区分由聚凝胺诱发得红细胞之间得非特异性凝聚与由抗原抗体反应所致得特异性凝聚。

四、适用范围

适用于输血前需进行交叉配血试验得血液及血液成分。

五、仪器设备

普通离心机;血型专用离心机;

六、试剂

1、试剂名称:快速聚凝胺试剂盒

2、试剂生产厂家:珠海贝索生物技术有限公司;

３、批准文号:国食药监械(准)字2009第3400076号;

4、包装规格(盒):

4。１低离子强度溶液(ＬＩM) 49ml×2;

4、2聚凝胺溶液(Pｏlybreｎe Ｓoｌutｉon) 15ｍl×1;

4、3重悬液(Resｕｓpendｉng Ｓolutiｏn) 15ml×１;

4、贮藏条件;2－8℃避光保存。

5、有效期:自检定合格之日起2年;

七、检测样本要求

1、标本类型:静脉血(ＥDＴA抗凝剂:血液=1:１0)。

2、标本采集:见输血科标本管理标准化操作规程。

3、标本储存与运输:新鲜血2~８℃贮存时间不超过72小时、

4、标本拒收状态:标识不准确、标本稀释、细菌污染,严重溶血等不能测定。

八、操作步骤

1、收集标本,严格进行查对无误后,分离血清(浆)、

2、取1０mｍx60mm洁净小试管2支,分别标明主(次)侧管。

3、主(次)侧管加入受(供)血者血清(浆)1滴,加供(受)血者3-5%红细胞悬液１滴、

4、向各管加低离子强度溶液0、7ML,混匀,静置３0－60秒;

5、向各管加聚凝胺溶液1滴,混匀,3０00r/min离心15秒,轻轻摇均,肉眼可见明显得凝集状(如无凝集须重做);

6、向各管中加重悬液1滴于管底,轻轻摇起观察结果。１分钟内凝集消失呈均匀混悬液,如反应很弱,应镜下观察并与阴性对照比较。镜下无凝集红细胞为阴性, １分钟内凝集不消失,既为阳性,

7、阴性结果表明受血者与献血者血型相合;阳性结果表明受血者与献血者血型不相合

九、质量控制

1、此检测项目应参加卫生部临床检验中心组织得室间质评,且成绩合格;

2、每日做室内质量控制,且要求在控。

3、严格执行查对制度,判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误等引起得差错、

4、交叉配血标本应在2~8℃保存留一周,以备复查。

十、生物参考区间

相合,不相合、

十一、注意事项与干扰因素

１、本方法可结合盐水介质交叉配血相合后进行临床发血。

２、交叉配血标本必须正确有标识,其血液量、红细胞或血浆得质量符合实验要求与受血者当前得免疫学状态;

3、交叉配血试验血样要求就是输血前３天内得血样(预防受血者在输血前得3个月之内可能有妊娠或输血等免疫史而可能产生不规则抗

体)。

4、标本血液离体后要求尽快送检,至检测完毕最长不能超过３d,每次检测后受血者与供血者得血标本应在2℃～8℃保存7天;

5、试剂使用前应仔细检查试剂得贮存条件就是否符合要求、就是否变质失效;

6、患者使用得药物影响得处理:如果使用右旋糖酐、PVP等治疗,应注意将红细胞洗涤;如果受者使用肝素治疗,则应用硫酸鱼精蛋白对抗,使样本凝结;

7、交叉配血试验不相合时应注意红细胞缗钱状得假阳性鉴别,可结合盐水介质交叉配血试验镜下观察或离心去上清液后重悬观察。

８、抗体筛选试验阴性,而交叉配血结果阳性,提示有未检测明得同种抗体存在、

９、交叉配血结果不相合提示有未查明得同种抗体存在、

10、注意交叉配血试验过程中离心力、温度、红细胞浓度、抗原抗体得比例;

1１、血清或血浆中如含有溶血性抗体,则相应红细胞被溶解而不凝集,交叉配血结果阳性,如排除标本中补体干扰因素得影响,可来活后重新试验、

12、注意在室温反应中或抗球蛋白试验中显示有自身抗体,应加做自身对照试验或直接抗人球蛋白试验加以鉴别。

十二、参考文献

１、胡丽华主编,临床输血检验,第1版。中国医药科技出版社,2０04;

2、叶应妩,等主编,全国临床检验操作规程,第3版。东南大学出版社,2０0６,1１;

3、安万新主编,输血技术学,第１版.科学技术文献出版社,２006,9;

4、聚凝胺试剂盒说明书。