创新药物及其代谢物浓度测定方法的建立及应注意的问题(精)
代谢组学工作中的困难问题和建议
代谢组学工作中的困难问题和建议1. 引言1.1 概述代谢组学是一种研究生物体在特定条件下产生的代谢物（如蛋白质、小分子有机物等）的组合和变化规律的方法。
它通过高通量技术获取大量的代谢产物数据，并结合统计学和生物信息学方法进行分析和解读，从而揭示生命活动的基本特征和潜在机制。
然而，在实际应用中，代谢组学工作常常面临一些困难问题，例如数据处理与分析困难，样本采集与保存难题以及生物信息学技术的瓶颈。
1.2 文章结构本文将首先介绍代谢组学工作中所面临的困难问题，并对其进行详细探讨。
接着，我们将提出一些建议和解决方案，旨在克服这些困难并改进代谢组学工作效率。
除此之外，我们还将分享一些实践经验和案例分析，以帮助读者更好地理解和应用这些建议。
最后，我们将对当前这一领域进行展望，并讨论未来代谢组学的发展方向。
1.3 目的本文的目标是全面分析代谢组学工作中的困难问题，并提出相应的解决方案。
通过对这些问题的深入讨论和分析，我们希望能够帮助研究者更好地开展代谢组学研究，并为相关领域的人员提供一些实用的指导和参考。
同时，我们也希望引起更多人对代谢组学领域的关注，进一步推动该领域的发展和应用。
2. 代谢组学工作中的困难问题2.1 数据处理与分析困难在代谢组学研究中，数据处理和分析是一个复杂且耗时的过程，面临以下困难问题：首先，原始代谢组学数据通常较为庞大，包含了大量的样本信息和代谢物测量结果。
处理这些数据需要高度的技术和计算能力来进行预处理、质控、特征提取、归一化以及统计分析等步骤。
其次，选择适当的统计方法和算法也是一个挑战。
不同样本间的差异较大，并且代谢物之间可能存在复杂的关联关系，如共变性、互相影响等。
因此，在选择合适的统计模型时需要考虑这些特点并确保其稳定性和可靠性。
另外，缺乏通用的数据标准化和归一化方法也是一个问题。
由于不同实验室、平台或技术所获得的数据存在差异，如峰识别漏报、噪音干扰等，因此建立标准化方法非常重要。
应用TripleTOF系统和MetabolitePilot软件解决代谢物鉴定过程中的瓶颈问题1.1M
应用TripleTOF ®系统和MetabolitePilot™软件解决代谢物鉴定过程中的瓶颈问题具有革新技术，拥有高性能解决方案，同时集成软件， 提高工作效率高分辨精确质量LC/MS/MS 已经成为代谢物鉴定的一项重要技术。
在药物发现阶段，高扫描速度的MS 和MS/MS ，以及强大的全扫描能力非常适用于候选化合物优化阶段主要代谢物的鉴定 。
在药物发展阶段，强大的功能如实时多重质量亏损（MMDF ）触发IDA 和高质量准确度的MS/MS 能在表征体内代谢物的同时进行深入的结构阐明。
随着高分辨仪器功能越来越强大，手工处理和解释大量的数据成为极大的挑战。
为了展示高分辨数据所带来的益处，将集成的专业软件用于检测代谢物，执行MS/MS 解释和结构阐明以及比较不同样品间代谢物的差异是必不可少的。
AB SCIEXTripleTOF ® 4600和5600+系统结合MetabolitePilot™软件提供了一个直观的、完整的硬件和软件整体解决方案。
在本篇文章中，将主要阐明TripleTOF ®系统关键的技术特点及其在药物发现和发展阶段代谢物鉴定的应用。
TripleTOF ®系统和MetabolitePilot™软件的主要特点• 创新的设计，结合成熟的高性能三重四极杆的前端和最先进的精确质量分析器加速飞行时间分析器（Accelerator TOF™Analyzer ），使TripleTOF ®系统具有前所未有的灵敏度、速度、分辨率以及质量准确度。
• 创新的实时多重质量亏损（MMDF ）触发IDA ，将质量亏损运用在实时数据采集过程中，一次进样，保证在复杂的体内基质样品中即使是低浓度的代谢物也能获得其MS/MS 数据。
• MetabolitePilot™软件是一款功能丰富、简单易用的集成软件，其具有多种峰发现策略、结构阐明、MS/MS 碎片解释和多样本间相关性分析等功能。
硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展
硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展硝基呋喃类药物是一类常用的抗癌药物，包括硝苯呋喃、氮芥呋喃、马法兰等。
这类药物在治疗恶性肿瘤方面具有显著的疗效，但也存在一定的副作用，例如骨髓抑制、恶心、呕吐等。
因此，对于这类药物及其代谢物的检测方法研究具有十分重要的实际意义。
传统的硝基呋喃类药物检测方法主要是基于色谱-质谱联用技术（GC-MS或LC-MS）实现的。
通过分离样品中的药物和代谢物，并利用不同的分子量、分子结构和极性来进行分析和鉴定。
近年来，随着分析技术的进一步发展、生物材料的可获得性、分析灵敏度的提高以及样品制备技术的改进，新的检测方法也在不断涌现。
首先，基于液质联用技术的检测方法不断完善。
液质联用技术包括HPLC-MS/MS、UPLC-MS/MS等。
这些技术相比传统的GC-MS和LC-MS可以更加准确地识别和定量目标物和代谢物。
例如，一些研究者利用基于UPLC-MS/MS的方法研究了硝苯呋喃的代谢物在人体中的排泄规律，为药物的代谢和毒性研究提供了有效的借鉴。
其次，新型的分析方法不断推出。
温度梯度色谱分析（TG-GC-MS）方法可以提供有关氮芥呋喃代谢产物的定性和定量信息，包括确定氮芥呋喃代谢产物异构体的配置、测定不同样品中的代谢产物、研究代谢产物的缩合反应等。
与此同时，新型的色谱技术，例如气相色谱-时间飞行质谱（GC-TOF-MS），也被广泛应用于氮芥呋喃和硝苯呋喃的药物分析中。
此外，生物传感器技术的应用也在不断拓展。
生物传感器主要建立在生物材料和生物分子的互作基础之上，可以用于检测药物和代谢产物的浓度、毒性和反应动力学等方面的信息。
针对硝苯呋喃代谢产物的检测，大多数研究者一般会利用荧光传感器、表面增强拉曼光谱、电化学传感器等手段快速检测其浓度。
以上就是目前硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展。
虽然已有多种药物分析方法可用于分析该类药物及其代谢物，但仍存在一些挑战，包括分析灵敏度不足、样品制备困难等。
血浆中药物的浓度检测方法
血浆中药物的浓度检测方法一、引言血浆中药物的浓度检测是临床药学和药物研究的重要内容之一。
通过测定血浆中药物的浓度，可以评估药物的吸收、分布、代谢和排泄情况，从而指导药物的使用和剂量调整。
本文将介绍血浆中药物浓度检测的方法及其应用。
二、常用的血浆中药物浓度检测方法2.1 高效液相色谱法（HPLC）HPLC是目前应用最广泛的血浆中药物浓度检测方法之一。
它基于样品中药物与色谱柱固定相之间的相互作用，通过控制流动相的性质和流速，使药物在柱上以不同速度传输，从而实现药物的分离和定量测定。
2.2 气相色谱法（GC）GC是一种基于样品中药物在气相中的分配行为进行分离和测定的方法。
它适用于易于挥发的药物的检测，具有高分辨率和灵敏度高的优点。
然而，GC需要样品预处理的步骤较多，对仪器的要求也较高。
2.3 质谱法（MS）质谱法结合了质谱仪和色谱仪的优势，可以实现对样品中药物的高灵敏度和高选择性的检测。
质谱法广泛应用于药物代谢动力学研究和药物相互作用的研究中。
2.4 免疫测定法免疫测定法是利用抗体与药物结合的特异性来测定样品中药物浓度的方法。
常用的免疫测定法包括放射免疫测定法、酶联免疫测定法和荧光免疫测定法等。
免疫测定法具有操作简便、快速、灵敏度高的特点，但对抗体的选择和制备要求较高。
三、血浆中药物浓度检测方法的应用3.1 临床药学血浆中药物浓度检测在临床药学中起到了重要的作用。
通过监测患者血浆中药物的浓度，可以评估药物的疗效和安全性，指导药物的使用和剂量调整。
例如，对于某些具有副作用的药物，如抗癫痫药物，通过监测血浆中药物浓度，可以避免药物过量引起的不良反应。
3.2 药物研究血浆中药物浓度检测在药物研究中也有广泛的应用。
药物的吸收、分布、代谢和排泄过程可以通过检测血浆中药物浓度来研究。
这对于药物的药代动力学和药效学研究具有重要意义。
同时，血浆中药物浓度的检测也可以用于药物相互作用的研究，评估不同药物在体内的相互影响。
药代动力学实验流程
下面是一般药代动力学实验的流程：
1. 实验设计：确定研究目的、选择合适的动物模型、设计给药方案（包括剂量、途径和时间）以及采样时间点。
2. 动物准备：选择合适的动物种类和性别，根据实验要求对动物进行分组，并在实验前适应环境。
3. 给药：按照设计的给药方案给动物施以药物，可以通过口服、静脉注射、皮下注射等方式进行。
4. 样品采集：在设定的时间点采集血液、尿液、粪便等生物样本，用于分析药物的浓度。
5. 样品处理：将采集的生物样本进行处理，如离心、萃取、净化等，以准备进行药物浓度分析。
6. 药物浓度分析：采用适当的分析方法，如高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱法（MS）等，测定生物样本中的药物浓度。
7. 数据分析：将测得的药物浓度数据进行处理和分析，计算药物的药代动力学参数，如消除半衰期、血药浓度-时间曲线下面积（AUC）、清除率等。
8. 结果解释：根据药代动力学参数，评估药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，以及药物的有效性和安全性。
9. 报告撰写：撰写实验报告，包括实验目的、方法、结果、结论等内容，并对实验结果进行讨论和解释。
型的不同而有所调整。
在进行实验前，应仔细设计实验方案，并确保实验操作的科学性和准确性。
药用植物次生代谢产物积累规律的研究概况
药用植物次生代谢产物积累规律的研究概况一、本文概述随着现代医药学的发展，药用植物作为天然药物的重要来源，其研究价值日益凸显。
药用植物的次生代谢产物，作为其主要活性成分，具有广泛的生物活性和药理作用，对于人类疾病的防治具有重要意义。
本文旨在探讨药用植物次生代谢产物的积累规律，以期为药用植物资源的合理开发和利用提供理论支撑。
本文首先介绍了药用植物次生代谢产物的概念和种类，阐述了次生代谢产物在药用植物中的重要性和作用。
接着，从生物合成途径、环境因素和遗传调控等方面，分析了次生代谢产物积累的影响因素，探讨了次生代谢产物积累的一般规律。
在此基础上，本文综述了近年来国内外在药用植物次生代谢产物积累规律研究方面的主要成果和进展，包括次生代谢产物积累与植物生长发育的关系、次生代谢产物积累与环境因子的关系、次生代谢产物积累的遗传调控机制等方面的研究。
通过对药用植物次生代谢产物积累规律的研究概况进行梳理和总结，本文旨在为药用植物资源的合理开发和利用提供理论支持和实践指导，推动药用植物次生代谢产物的研究向更深层次、更广领域发展，为人类的健康事业作出更大的贡献。
二、药用植物次生代谢产物的合成途径与调控机制次生代谢产物是药用植物在生长发育过程中，为适应环境压力或完成特定生理功能而合成的一类非必需小分子化合物。
这些化合物通常具有显著的生物活性，如抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等，是许多中药材的主要药效成分。
因此，研究药用植物次生代谢产物的合成途径与调控机制，对于深入理解其药用价值和提高药材质量具有重要意义。
次生代谢产物的合成途径通常包括初生代谢产物的转化和专门的次生代谢途径。
初生代谢产物，如糖、氨基酸和脂肪酸等，通过一系列酶促反应转化为次生代谢产物。
这些反应可能涉及多个生物合成途径，如苯丙烷途径、黄酮途径、萜类途径等。
这些途径中的关键酶和调控因子在次生代谢产物的合成中发挥着重要作用。
调控机制方面，药用植物次生代谢产物的合成受到多种内外因素的调控。
硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展
硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展1. 引言1.1 硝基呋喃类药物及其代谢物检测方法的研究进展硝基呋喃类药物是一类常用的治疗心血管疾病的药物，具有广泛的临床应用。
由于其代谢物具有较大的生物活性，因此对硝基呋喃类药物及其代谢物的检测方法研究一直备受关注。
硝基呋喃类药物的药理作用研究是了解其代谢规律的关键环节。
通过对硝基呋喃类药物的作用机制、药效学特性等方面的研究，可以更好地理解其代谢途径。
对硝基呋喃类药物代谢途径的分析有助于揭示其代谢产物的种类和含量，为后续的检测方法奠定基础。
目前常用的硝基呋喃类药物代谢产物检测方法主要包括质谱分析、色谱法等。
这些方法具有较高的检测灵敏度和准确性，但仍存在一定局限性。
新型硝基呋喃类药物代谢物检测方法的探索变得尤为重要。
随着科学技术的不断进步，硝基呋喃类药物代谢物检测方法也在不断发展。
未来的研究将面临挑战，但也将迎来更多的机遇。
硝基呋喃类药物代谢物检测方法的重要性和应用前景仍然十分广阔，值得进一步深入研究。
2. 正文2.1 硝基呋喃类药物的药理作用研究硝基呋喃类药物是一类常用的抗菌药物，广泛应用于临床治疗中。
其药理作用主要是通过抑制细菌的生长和繁殖，从而达到治疗感染的目的。
硝基呋喃类药物常用于治疗呼吸道感染、泌尿道感染、皮肤软组织感染等。
其作用机制是通过抑制细菌的核酸合成，破坏其细胞壁结构，并影响其蛋白质合成，从而导致细菌死亡。
研究表明，硝基呋喃类药物对不同类型的细菌具有不同的抗菌活性，部分硝基呋喃类药物还具有抗炎和抗真菌作用。
硝基呋喃类药物还对一些寄生虫和原虫具有一定的抗性。
近年来，随着对硝基呋喃类药物药理作用研究的深入，科学家们发现了其对细菌耐药性的影响以及与人体免疫系统的相互作用等新的发现，这些研究成果为进一步优化硝基呋喃类药物的临床应用提供了重要参考依据。
在未来的研究中，可以进一步探索硝基呋喃类药物的药理作用机制，以更好地指导其在临床治疗中的应用。
2.2 硝基呋喃类药物代谢途径分析硝基呋喃类药物是一类广泛应用于临床的药物，其代谢途径复杂多样，需要深入研究和分析。
药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则
/.附录三药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则生物利用度是指剂型中的药物被吸进入血液的速率和程度。
生物等效性是指一种药物的不一样制剂在同样的试验条件下，给予同样的剂量，反应其汲取速率和程度的主要动力学参数没有显然的统计学差异。
口服或其余非脉管内给药的制剂，其活性成分的汲取受多种要素的影响，包含制剂工艺、药物粒径、晶型或多晶型，处方中的赋形剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、包衣资料、溶剂、助悬剂等。
生物利用度是保证药品内在质量的重要指标，而生物等效性则是保证含同一药物的不一样制剂质量一致性的主要依照。
生物利用度与生物等效性观点虽不完好同样，但试验方法基本一致。
为了控制药质量量，保证药品的有效性和安全性，特拟订本指导原则。
何种药物制剂需要进行生物等效性或生物利用度试验，可依占有关部门公布的法例要求进行。
进行药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验的临床实验室和剖析实验室，应供给机构名称以及医学、科学或剖析负责人的姓名、职称和简历。
一、生物样品剖析方法的基本要求生物样品中药物及其代谢产物定量剖析方法的专属性和敏捷度，是生物利用度和生物等效性试验成功的要点。
首选色谱法，如 HPLC 、GC 以及 GC-MS、LC-MS 、LC-MS-MS 联用技术，一般应采纳内标法定量。
必需时也可采纳生物学方法或生物化学方法。
因为生物样品取样量少、药物浓度低、内源性物质（如无机盐、脂质、蛋白质、代谢物）及个体差异等多种要素影响生物样品测定，因此一定依据待测物的构造、生物介质和预期的浓度范围，成立适合的生物样品剖析方法，并对方法进行考证。
1．专属性一定证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，内源性物质和相应的代谢物不得扰乱样品的测定。
对于色谱法起码要供给空白生物样品色谱图、空白生物样品外加比较物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图。
对于复方制剂应特别增强专属性研究，以清除可能的扰乱。
对于LC-MS 和 LC-MS-MS 方法，应着重观察基质效应。
药物分析技术的新趋势
药物分析技术的新趋势药物分析技术是制药领域的核心部分，它直接影响着药物的开发和质量控制。
随着科技的不断发展，药物分析技术也在不断进步，这些新趋势不仅提高了分析的准确性和效率，还在某种程度上推动了制药行业的变革。
本文将探讨药物分析技术的新趋势以及其对制药行业的深远影响。
一、现代仪器的发展现代仪器技术的飞速发展为药物分析提供了强有力的支持。
高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）以及质谱（MS）等先进仪器已经成为实验室中不可或缺的工具。
这些仪器不仅可以进行定性分析，还能进行定量测定，极大地提升了分析速度和准确度。
其中，质谱结合色谱技术（如LC-MS和GC-MS）的发展为复杂样品提供了更高的灵敏度和分辨率。
这使得研究者能够检测到极微量的成分，并开展更为精细的结构鉴定与定量分析。
例如，在药物代谢研究中，结合质谱的技术能够帮助科学家们准确描绘出药物在体内的代谢路径。
二、绿色化学与环境友好的分析方法随着环保意识的提高，制药行业也在逐步向绿色化方向发展。
绿色化学原则强调使用更少的有害化学品、减少能源消耗并促进资源再利用。
在药物分析领域，这一理念同样适用。
例如，采用超声波辅助提取（UAE）和微波辅助提取（MAE）等绿色提取方法，不仅减少了溶剂的使用，还提高了提取效率。
此外，许多实验室正在逐步替换传统溶剂，转向使用更环保的溶剂，比如水或可再生溶剂。
这种转变使得药物分析过程更加安全，同时也符合国家和国际上的环境法规。
三、自动化和高通量筛选技术随着科技的发展，自动化设备在药物分析中的应用越来越广泛。
自动化系统能够减少人为操作带来的误差，提高实验重复性，同时加快数据处理速度。
此外，高通量筛选技术的运用使得研究人员能够在较短时间内筛选出多种化合物，迅速评估其生物活性和毒性。
例如，在新药研发过程中，科学家可以利用高通量液相色谱与质谱联用的方法一次性获取多个样品的数据，大大节省了时间和人力成本。
这种变革性的进展使得药物研发周期显著缩短，有助于企业在激烈的市场竞争中占据优势。
代谢物鉴定 质荷比 鉴定
代谢物鉴定质荷比鉴定-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述：代谢物鉴定是一项重要的研究领域，它可以帮助科学家们了解生物体内的化学变化和代谢过程。
通过对代谢物的鉴定，我们可以深入了解生物体的生理和病理状态，为药物研发和疾病诊断提供重要的依据。
本文将重点介绍代谢物鉴定中的质荷比技术以及其在鉴定过程中的应用。
通过本文的学习，读者将对代谢物鉴定有更深入的理解，并能够更好地应用这一技术进行科学研究。
1.2 文章结构本文将分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将对代谢物鉴定、质荷比和鉴定的概念进行概述，解释本文的目的和意义。
正文部分将详细探讨代谢物鉴定的方法和步骤，介绍质荷比在代谢物研究中的作用，以及如何进行鉴定的过程和技术。
在结论部分，将对本文所述内容进行总结，并探讨代谢物鉴定对相关领域的影响，展望未来的研究方向和发展趋势。
通过这样的结构安排，读者能够清晰地了解本文的内容和主题，从而更好地理解和应用相关知识。
1.3 目的本文的目的是探讨代谢物鉴定中的质荷比技术及其在化学、生物和药学等领域的应用。
具体而言，我们将重点介绍质荷比技术在代谢物鉴定中的原理和方法，并探讨其在新药研发、毒理学研究和疾病诊断中的潜在应用。
通过深入了解质荷比技术的特点和优势，我们旨在为相关研究人员提供相关知识和技术支持，促进代谢物鉴定领域的发展和创新。
同时，本文也旨在引起对质荷比技术在科学研究和临床应用中的重要性和影响的深入思考，并为未来的研究和实践提供有益的启示。
2.正文2.1 代谢物鉴定代谢物鉴定是指通过分析生物体内代谢产物的化学结构和特性来确定其身份和数量。
在代谢组学研究中，代谢物鉴定是一个至关重要的步骤，它可以帮助科研人员深入了解生物体内代谢通路的变化和代谢产物的生物学功能。
代谢物鉴定的方法通常包括质谱分析和核磁共振(NMR)分析。
质谱分析是通过质谱仪对代谢产物进行离子化，然后根据质荷比对离子进行检测和鉴定。
而NMR分析则是通过测量代谢产物核的共振信号来确定其结构和化学环境。
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中国科学院上海药物研究所
生物样品分析方法的应用
未知浓度样品的测试
应在生物样品分析方法确证完成之后，开始测试未 知浓度的样品
由独立的人员配制不同浓度的标准样品，对分析方 法进行考核 每个未知样品一般测定一次，必要时进行复测 生物等效性试验中，来自同一个体的生物样品最好 在同一批中测定
储备液的稳定性
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分析方法的确证
提取回收率
样品提取过程前、后，分析物含量百分比
注意扣除基质效应和体积改变 应考察低、中、高3个浓度的提取回收率 其结果应当基本一致、精密和可重现
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分析方法的确证
基质效应
液相色谱-质谱分析时，内源性物质使待测物的离子化效 率降低或增强
分析数据的记录与报告提交
综合信息
项目编号
分析方法编号、分析方法类型、分析方法确证简化 的理由 相应的项目计划编号 项目标题
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分析数据的记录与报告提交
方法建立过程
分析方法的详细描述：该方法所用对照品（被测药物、 代谢物、内标物）的纯度和来源
稳定性实验描述和相关数据 描述考察选择性、准确度、精密度、回收率、定量限、 标准曲线的实验，并给出获得的主要数据 列出批内、批间精密度和准确度的详细结果 根据具体情况，提供代表性的色谱图、质谱图，并加以 说明
分析方法
色谱学方法、免疫学方法、微生物学方法
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基本概念
生物介质
生物来源物质 能够以可重复方式采集和处理 包括全血、血浆、血清、尿、粪、各种组织
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基本概念
分析批
包括待测样品、适当数目的标准样品和质控样品的 完整系列：相同实验条件和时间区段 一天内可以完成几个分析批 一个分析批也可以持续几天完成 通常一天完成一个分析批
与色谱条件的匹配
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生物样品分析方法的建立
（8）各种条件和参数的进一步优化
考察选择性 考察灵敏度 考察线性关系 考察重现性
（9）实际样品预实验
最终确定浓度测定范围
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生物样品分析方法的建立
（10）其他因素
血浆蛋白结合 生物样品测试的安全防护
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基质效应
由样品中存在的干扰物质，对响应造成的直接或间 接的影响
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基本概念
重现性
分析方法在相同条件下，间隔一段短时间后测定结 果的分散程度 不同实验室间采用同一分析方法，测定结果的分散 程度
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基本概念
标准样品
在生物介质中加入已知量分析物配制的样品
中国科学院上海药物研究所
生物样品分析方法的应用
未知浓度样品的测试
质控样品测定结果的偏差一般应小于15%，低浓度 点偏差一般应小于20%
最多允许1/3不在同一浓度的质控样品测定结果超限 如果QC样品测定结果不符合上述要求，则该分析批 样品测试结果作废 浓度高于定量上限的样品，应采用相应的空白介质稀 释后重新测定；对于浓度低于定量下限的样品，应以 零值计算
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分析方法的确证
全面确证
首次建立的生物样品分析方法 增加新的定量组份(如代谢物)
对以前的方法进行较大的改进
如：改变仪器、检测器等
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分析方法的确证
部分确证
生物分析方法在实验室间的转移 定量浓度范围改变 生物介质改变
相同生物基质内种属的改变（例如大鼠血浆和小鼠血浆）
pH值和缓冲盐
流速
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生物样品分析方法的建立
（6）内标选择
与待测药物色谱行为相近 与待测药物检测器响应相近
与待测药物提取回收率相近
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生物样品分析方法的建立
（7）质谱条件选择
准分子离子和碎片离子 碰撞诱导解离条件
考察生物样品的基质效应
中国科学院上海药物研究所
分析数据的记录与报告提交
基本要素
建立一般性和特殊性的标准操作规程
保存完整的实验记录：分析方法建立、确证和未知 样品测试过程中产生的测试原始图谱和数据，包括 QC样品测试 提交完成试验工作的相关资料：综合信息、方法建 立过程、日常样品分析中的基本资料、其他相关信 息
中国科学院上海药物研究所
中国科学院上海药物研究所
基本概念
定量范围
包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的 连续的浓度范围 采用浓度-响应关系能进行可靠的、可重现的定量 其准确度和精密度可以接受
中国科学院上海药物研究所
生物样品分析方法的建立
Development
Optimization
Pre-Validation Validation Implementation
• 代谢物, 影响药物的安全性和有效性 药动学研究 测定母体药物和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定母体药物和代谢物的浓度,等效性评价时以母体药物浓度 作为主要判断指标 • 主要代谢物，活性不清楚
药动学研究 测定母体药物和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定母体药物浓度
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生物样品中代谢物浓度测定
中国科学院上海药物研究所
Revalidation
生物样品分析方法的建立
生物样品分析常用方法
色谱法
HPLC, GC, LC/MS, LC/MS/MS, GC/MS
微生物法 免疫分析法 选择依据
药物的化学结构、待测物浓度范围、实验室条件
中国科学院上海药物研究所
生物样品分析方法的建立
（1）查阅相关文献
生物样品分析方法的确证
Specificity/Selectivity
Accuracy
Precision
Method Validation Limit of Detection Limit of Quantitation Linearity and Range Ruggedness/Robustness System Suitability
用于建立标准曲线、计算质控样品和未知样品中分 析物浓度
质控样品（QC样品）
在生物介质中加入已知量分析物配制的样品 用于监测分析方法的重现性、评价每一分析批中未 知样品分析结果的完整性和正确性
中国科学院上海药物研究所
基本概念
标准曲线
实验响应值与分析物浓度间的关系 应采用适当的加权和统计检验，用简单的数学模型 来最适当地描述 应以各浓度点回归计算结果的百分偏差最小为基础
钟大放 zhongdf@ Unknown User:
创新药物及其代谢物浓度测定方法
ห้องสมุดไป่ตู้
的建立及应注意的问题
中国科学院上海药物研究所
生物样品中药物及代谢物浓度测定
临床前 吸收试验 组织分布试验 代谢 排泄 毒代 临床 临床药动学 制剂生物利用度及生物等效性
中国科学院上海药物研究所
生物样品中代谢物浓度测定
–20C：大部分药物
–80C：阿莫西林等 加稳定剂：卡托普利等 立即测试：维生素C等
中国科学院上海药物研究所
生物样品分析方法的建立
（4）生物样品预处理
液-液提取 液-固提取
沉淀蛋白
在线提取
中国科学院上海药物研究所
生物样品分析方法的建立
（5）色谱条件选择
色谱柱 流动相组成
RSD 15%，低浓度RSD 20%
准确度：质控样品的相对偏差 允许范围85～115%，低浓度80～120%
中国科学院上海药物研究所
分析方法的确证
样品稳定性
文献中关于分析物稳定性的报道
含药生物样品冷冻储存条件下的稳定性 含药生物样品在室温、冻融条件下的稳定性 样品处理过程中的稳定性 样品处理后在溶液中的稳定性
• 母体药物体液浓度很低,代谢物为体内的主要存在形式 药动学研究 测定母体药物和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定代谢物的浓度 • 前体药物 药动学研究 测定母体药物(如果能测到)和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定代谢物的浓度
中国科学院上海药物研究所
生物样品中药物浓度测定方法的建立和确证
基本概念
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分析方法的确证
标准曲线与定量范围
配制标准曲线时所用生物基质必须与实际研究样品 生物基质相同 必须用至少6个非零浓度样品建立标准曲线
根据待测物浓度与响应的相关性，用回归分析法获 得标准曲线
计算标准曲线时不包括空白点
标准曲线高、低浓度范围为定量范围
定量范围要能覆盖全部待测浓度，不允许外推
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基本概念
准确度
在确定的分析条件下，测得值与真实值的接近程度
精密度
在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的 一系列测量值的分散程度
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基本概念
选择性
分析方法测量和区分共存组分中分析物的能力 这些共存组分包括代谢物、杂质、分解产物、介质 组分等
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分析方法的确证
微生物学和免疫学分析
标准曲线是非线性的
采用更多的浓度点建立标准曲线 结果的准确度是关键因素 如果重复测定能改善准确度，则应在方法确证和未知 样品测定中采用同样的步骤