ELISA酶联免疫分析
酶联免疫分析的基本类型和原理
酶联免疫分析的基本类型和原理酶联免疫分析（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种灵敏的免疫学分析方法，广泛应用于生物医学领域，包括基础研究、临床诊断、药物筛选等。
该方法基于抗原-抗体的特异性结合反应，将酶与抗体或抗原的结合，通过酶促反应的放大效应，实现对蛋白质的灵敏检测。
一、酶联免疫分析的基本类型根据实验设计的不同，酶联免疫分析可以分为直接法和间接法两大类。
1.直接法：将酶标记的抗体直接与抗原反应，通过检测抗原-抗体-酶复合物的吸光度来定量抗原。
这种方法适用于检测抗原含量较高的样品，如病毒、细菌等。
2.间接法：将酶标记的抗抗体与特异性抗体反应，通过检测抗抗体-抗体-酶复合物的吸光度来定量特异性抗体。
这种方法适用于检测特异性抗体含量较高的样品，如血清、血浆等。
二、酶联免疫分析的原理酶联免疫分析的原理是利用抗原-抗体的特异性结合反应，将酶与抗体或抗原的结合，通过酶促反应的放大效应，实现对蛋白质的灵敏检测。
具体步骤如下：1.包被：将抗原或抗体包被在固相载体（如聚苯乙烯酶标板孔）上，使其与样品中的抗原或抗体结合。
2.温育：将包被后的样品放入温育箱中，保持一定温度和湿度，使抗原-抗体结合反应充分进行。
3.洗涤：洗涤未结合的游离抗原或抗体，去除未结合的物质，使后续步骤中的酶促反应更加特异。
4.加入酶标抗体或酶标抗原：将酶标记的抗体或抗原加入到洗涤后的样品中，使其与已结合的抗原或抗体特异性结合。
5.温育：将样品再次放入温育箱中，保持一定温度和湿度，使酶促反应充分进行。
6.洗涤：洗涤未结合的游离酶标抗体或酶标抗原，去除未结合的物质，使后续步骤中的显色反应更加特异。
7.显色：加入底物溶液，使其与已结合的酶标抗体或酶标抗原中的酶发生显色反应，生成有色产物。
8.终止反应：加入终止液，停止显色反应，使有色产物不再生成。
9.检测：用酶标仪测定各孔的光密度值，通过与标准曲线比较，计算出样品中待测抗原或抗体的浓度。
酶联免疫吸附测定法
酶联免疫吸附测定法（ELISA）1.定义 (3)2.原理 (3)2.1抗原抗体反应 (3)2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5)3.ELISA的类型 (5)3.1双抗体夹心法测抗原： (6)3.2双抗原夹心法测抗体 (6)3.3间接法测抗体 (6)3.4竞争法测抗体 (7)3.5竞争性测抗原 (7)3.6捕获包被法测抗体 (7)3.7ABS-ELISA法 (8)4.ELISA试剂的组成 (9)4.1固相载体： (9)4.2包被的方式 (9)4.3包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。
(10)4.4包被的条件： (10)4.5洗涤液： (10)4.7酶的催化性； (11)4.8结合物的制备 (11)4.9结合物的保存 (12)4.10酶的底物 (12)4.11酶反应终止液 (12)4.12参考标准品 (13)4.13加样： (13)4.14保温 (13)4.15保温方式： (13)4.16室温温育的反应 (13)4.17洗涤 (14)4.18显色 (14)4.19比色 (14)4.20酶标比色仪 (15)4.21结果判定 (15)4.22定量测定 (16)4.23ELISA的操作要点 (16)1.定义酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。
2.原理采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，可对受检物质的定性或定量分析。
2.1抗原抗体反应2.1.1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab 的解离程度与K值有关。
ELISA的数据分析
ELISA的数据分析引言概述：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体在样本中的存在量。
ELISA的数据分析是评估实验结果的关键步骤，它能提供准确的定量测量和可靠的结果。
本文将介绍ELISA数据分析的五个部分，包括样本浓度计算、标准曲线绘制、样本浓度插值、数据质量控制和结果解读。
一、样本浓度计算：1.1 样本浓度计算是ELISA数据分析的关键步骤之一。
首先，需要根据实验设计和样本的特性选择适当的计算方法。
常用的计算方法包括直接读数法、标准曲线法和回归分析法。
1.2 直接读数法适用于定性分析，即判断样本中是否存在目标抗原或抗体。
通过比较样本的吸光度值与阴性对照的吸光度值，可以确定样本是否阳性。
1.3 标准曲线法适用于定量分析，即确定样本中目标抗原或抗体的浓度。
通过测量一系列已知浓度的标准样品的吸光度值，可以绘制标准曲线，并根据样本的吸光度值在曲线上插值计算样本的浓度。
二、标准曲线绘制：2.1 标准曲线是ELISA数据分析的重要工具，用于将样本的吸光度值转化为浓度值。
首先，准备一系列已知浓度的标准样品，并测量它们的吸光度值。
2.2 将标准样品的吸光度值绘制成曲线图，横坐标为浓度，纵坐标为吸光度值。
可以使用线性或非线性回归分析方法拟合标准曲线，选择最佳拟合模型。
2.3 根据标准曲线的拟合方程，可以将样本的吸光度值转化为浓度值。
通过插值计算，可以准确地确定样本的浓度。
三、样本浓度插值：3.1 样本浓度插值是ELISA数据分析的关键步骤之一，用于确定样本的浓度。
根据标准曲线的拟合方程和样本的吸光度值，可以通过插值计算得出样本的浓度。
3.2 插值计算可以使用线性插值法或非线性插值法。
线性插值法适用于线性标准曲线，通过直线的斜率和截距计算样本的浓度。
非线性插值法适用于非线性标准曲线，通过曲线的方程计算样本的浓度。
3.3 插值计算的准确性与标准曲线的拟合质量密切相关。
elisa实验报告结果分析
Elisa实验报告结果分析1. 引言Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种常用于检测和定量分析生物样本中特定分子的方法。
本文旨在对实验结果进行分析，并根据分析结果得出结论。
2. 实验设计在本次实验中，我们选择了特定的生物分子作为目标，通过Elisa方法来检测样本中的该分子含量。
实验过程中，我们遵循了以下步骤： 1. 准备样本和试剂：收集样本并处理，准备所需的试剂。
2. 涂覆酶标板：将待测样本加入酶标板孔中，使样本中的目标分子与酶标板表面发生特异性结合。
3. 洗涤：去除未结合的物质。
4. 加入检测抗体：加入特异性抗体，与已结合的目标分子发生反应。
5. 加入标记物：加入标记物，用于检测目标分子的存在。
6. 洗涤：去除未结合的物质。
7. 反应底物：加入底物，观察颜色变化。
8. 停止反应：加入停止液停止反应。
9. 测量：使用酶标仪或光谱仪测量吸光度。
3. 结果分析根据实验结果，我们得到了一系列吸光度值。
下面我们将对吸光度值进行分析，并根据实验设计和已有知识得出结论。
3.1. 标准曲线分析实验中通常会使用一系列已知浓度的标准样品来构建标准曲线。
通过测量标准样品的吸光度值，我们可以绘制出标准曲线。
在实验中，我们可以使用标准曲线来确定未知样本中目标分子的浓度。
3.2. 样本浓度分析根据实验设计，我们在酶标板中加入了待测样本，并测量了其吸光度值。
通过标准曲线，我们可以将吸光度值转化为目标分子的浓度。
根据样本中目标分子的浓度，我们可以进行进一步的分析。
3.3. 结果验证为了验证实验结果的准确性和可靠性，我们可以进行重复实验或与其他方法进行比较。
此外，还可以进行质控实验来评估实验的可重复性和准确性。
4. 结论通过对Elisa实验结果的分析，我们得出以下结论： 1. 根据标准曲线分析，我们可以确定未知样本中目标分子的浓度。
2. 样本浓度分析结果显示，样本中目标分子的含量为X单位。
3. 实验结果经过验证，具有较高的准确性和可靠性。
elisa酶联免疫吸附试验报告
.elisa酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化1 / 11.作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
ELISA的数据分析
ELISA的数据分析ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中的抗原或抗体。
本文将详细介绍ELISA的数据分析过程，包括数据处理、结果解读和统计分析。
1. 数据处理ELISA实验产生的原始数据通常以光密度（OD）值的形式记录。
首先，将每个样本的OD值减去背景值，以消除非特异性信号。
然后，根据标准曲线，将OD值转化为抗原或抗体的浓度。
标准曲线是由已知浓度的标准样品制作的，通常是一系列浓度递增的样品。
利用标准曲线，可以通过线性回归分析计算出未知样品的浓度。
2. 结果解读根据ELISA实验的目的，可以得到不同类型的结果。
例如，如果ELISA用于检测抗原，那么结果可能是阳性或阴性。
阳性结果意味着样品中存在目标抗原，阴性结果则表示样品中不存在目标抗原。
对于定量ELISA，结果通常以浓度值表示。
根据实验设计和样品类型，可以将结果分为不同组别进行比较。
3. 统计分析ELISA的数据分析通常涉及一些统计方法，以确定结果的显著性和可靠性。
以下是一些常用的统计分析方法：a. t检验：用于比较两个组别之间的差异，例如阳性组和阴性组之间的差异。
b. 单因素方差分析（ANOVA）：用于比较三个或多个组别之间的差异，例如不同浓度组别之间的差异。
c. 相关分析：用于确定两个变量之间的相关性，例如抗体浓度与疾病严重程度之间的相关性。
d. 线性回归分析：用于确定两个变量之间的线性关系，例如标准曲线的斜率和截距。
e. 方差分析（ANOVA）：用于比较三个或多个组别之间的差异，例如不同浓度组别之间的差异。
在进行统计分析时，还应注意选择适当的统计检验和显著性水平。
根据实验设计和数据类型，可以选择不同的统计方法进行分析。
总结：ELISA的数据分析过程包括数据处理、结果解读和统计分析。
数据处理涉及背景校正和浓度计算，结果解读根据实验目的可以得到阳性/阴性结果或浓度值。
统计分析可以使用t检验、ANOVA、相关分析和线性回归分析等方法，以确定结果的显著性和可靠性。
酶联免疫吸附试验结果
酶联免疫吸附试验结果酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA），是一种广泛应用于生命科学中的试验技术，主要用于检测生物体内特定蛋白质和抗体的存在和数量。
本文将根据不同类别，介绍ELISA试验结果的分析。
一、直接ELISA试验结果分析直接ELISA试验是指将已知抗原沉淀于微孔板上，再加入待检测物，之后加入特定抗体进行检测的试验方法。
当待检测物含有对应的抗原，则抗原和特定抗体结合，形成固定的复合物。
此时，待检测物在微孔板中残留，被进一步检测。
如果待检测物中含有特定抗体，则会与预先添加的抗原结合。
根据特定抗体标记的物质进行检测。
直接ELISA试验结果为同轴柱，并且呈现梯度性图谱。
二、间接ELISA试验结果分析间接ELISA试验是指使用抗原沉淀于微孔板上，加入待检测物，并再次加入特定抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，患者血清或其他样品中含有抗体，抗体与固定的抗原结合，形成复合物。
之后添加特定抗体，间接ELISA试验的结果为同轴柱，并且呈现梯度性的图谱。
三、竞争ELISA试验结果分析竞争ELISA试验是对样品中的特定物质进行检测的试验方法。
在试管中，抗体与已知抗原结合后，特定抗体标记的物质被加入竞争ELISA反应体系中。
如果合适的特定抗体分子与抗原分子竞争结合，则可抑制特定抗体分子与标记物结合，标记物的含量随之减少。
竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
四、间接竞争ELISA试验结果分析间接竞争ELISA试验是对患者中特定物质的抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，已知抗原沉淀于微孔板上，加入患者样品，之后加入特定抗体。
如果患者样品中含有特定抗体，将与特定抗体竞争结合，导致标记物与它竞争结合量的减少。
间接竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
总之，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于特异性分子识别原理的分析方法，具有操作简单、稳定可靠、敏感度高等特点。
酶联免疫法和化学发光法
酶联免疫法和化学发光法
酶联免疫法（ELISA）和化学发光法（CLIA）是两种常用的免疫分析技术，用于检测和定量生物分子，如蛋白质、抗体、激素等。
它们在实验室和临床诊断中广泛应用。
酶联免疫法是一种基于酶催化反应的免疫分析方法。
其基本原理是将待测物（抗原或抗体）与固相载体（如微孔板）上的抗体或抗原结合，然后加入酶标记的抗体或抗原，形成三明治复合物。
当加入底物时，酶会催化底物发生反应，产生可检测的信号，通常是颜色变化或荧光强度。
通过测量这些信号，可以定量待测物的浓度。
酶联免疫法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，适用于大规模样本的检测。
它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。
常见的酶联免疫法包括间接法、夹心法和竞争法等。
化学发光法是一种基于化学发光反应的免疫分析方法。
其基本原理是将待测物与固相载体上的抗体或抗原结合，然后加入标记有发光物质的抗体或抗原，形成三明治复合物。
当加入触发剂时，发光物质会被激发并产生光信号。
通过测量光信号的强度，可以定量待测物的浓度。
化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽、快速等优点，适用于微量和痕量分析。
它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。
常见的化学发光法包括间接法、夹心法和竞争法等。
总的来说，酶联免疫法和化学发光法都是常用的免疫分析技术，它们各有优缺点，适用于不同的应用场景。
选择哪种方法取决于待测物的特性、检测要求以及实验室的设备和技术水平。
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试剂盒的组成
TMB H2O2
试剂基本成分
洗涤缓冲液（pH7.4 PBS）： KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl、KCl、0.05% Tween-20 稀释缓冲液 洗涤缓冲液+1%的牛血清蛋白 终止液 强酸/强碱
其他酶联免疫分析方法
化学发光酶联免疫分析 以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过测定发光反应光强度 的敏感性检测标本中抗原或抗体的含量。
常用酶
酶 辣根过氧化物酶 碱性磷酸酯酶 β-D-半乳糖苷酶
底物
邻苯二胺 OPD
四甲联苯胺 TMB
对硝基磷酸苯酯 PNP
邻硝基苯-β-D半 乳糖苷 ONPG
显色反应 橘红色
测定波长 /nm
492
黄色
450
黄色（对硝基 苯酚）
405
黄色（邻硝基 苯酚）
405
双抗夹心法
固
封
相
板
载
蛋பைடு நூலகம்
体
白
抗
抗
体
原
酶
标
底
抗
荧光酶联免疫分析 在酶联免疫中引入荧光底物，此类底物被酶分解后，其产物 可产生荧光。
电化学酶联免疫分析 酶催化底物发生相应的水解、氧化、或还原反应，产生或消 耗一种电化学活性物质，再用适当的电化学技术进行检测。
Thanks for your attention
物
体
间接法
固
封
相
板
载
蛋
体
白
抗
抗
体
原
酶
标
底
抗
物
抗
体
竞争法
固
封
相
板
载
蛋
体
白
抗
抗
体
原
酶 标
底
抗
物
原
三抗夹心法
固
封
相
板
载
蛋
体
白
抗
抗
体
原
酶
标 抗 抗
底 物
体
抗酶抗体法
固封 相板 载蛋 体白
第
第
第
抗
一
原
抗
三 抗
二 抗
酶
底 物
体
体
体
A种动物
B种动物
ELISA的应用
临床医学、动植物检验检疫、出入境检验检疫、 食品科学、转基因产品、药物残留、病虫害防治
固相载体
吸附性能好，空白值低，板底透明度高 ，各板之间、同一板各孔之间性能相近 聚苯乙烯 微量反应板（8 × 12/96孔）、小珠 包被&封闭
包被：pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释 封闭：0.05%—0.5%牛血清蛋白
戊二醛交联法
4-40℃范围，pH6.0-8.0
过碘酸盐氧化法
只适用与含糖量较高的酶——辣根过氧化物酶（HRP）
Schematic representation of the cascaded hybridization chain reaction for amplified miRNA sensing
ELISA原理
必要试剂： ① 免疫吸附剂：固相的抗原或抗体 ② 结合物：酶标记的抗原或抗体 ③ 酶反应的底物
酶
酶的要求： ① 纯度高，专一性强，催化反应效率高 ② 具有足够多的偶联用标记基团，用各种化学方法与抗原、抗
体偶联结合后，仍保持较高的催化活性 ③ 使用稳定性和保存稳定性好 ④ 待测液中不存在与标记酶相同的酶、底物、反应抑制剂等干
扰物质 ⑤ 测定酶活性的方法简便、灵敏、快速 ⑥ 酶的来源、纯化和供应较方便
光度酶联免疫吸附分析 ELISA
邹腊娜
2016.11.30
概述
ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）法 ，即酶联免疫吸附分析，是由Engvall和Perlmann 及van Weeman 和Schuurs同时建立起来的。
抗原&抗体
完全抗原 半抗原
特异性 可逆性