紫杉醇质量标准
紫杉醇PEG-PBLG冻干粉针剂对2种癌细胞的体外细胞毒性
紫杉醇/PEG-PBLG冻干粉针剂对2种癌细胞的体外细胞毒性紫杉醇( Paclitaxel) 是从红豆杉属植物中提取出来的一种具有高效抗肿瘤活性的天然物质.紫杉醇水溶解性较差,临床应用主要是紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂,即由乳浮EL( Cremophor EL,含增溶剂聚氧乙烯蓖麻油) /无水乙醇( 50∶ 50) 配制成的无色黏稠状溶液.有研究显示增溶剂聚氧乙烯蓖麻油在体内可促使大量组织胺释放因而产生过敏反应;还可溶解聚氯乙烯输液器中的二乙烯己基邻苯二甲酸盐导致严重的毒性反应[1].目前纳米胶束载药系统有众多研究[2],并已研制出不含有增溶剂的紫杉醇载药纳米胶束新剂型[3-4].在首度报道合成可生物降解的聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯( polyethylene glycol- polybenzyl-L-glutamate,PEG-PBLG) 两亲型嵌段共聚物,并可作药物的纳米载药系统之后[5],其作为载药纳米胶束平台的研究取得较多成果[6 -9].在紫杉醇/PEG-PBLG 纳米胶束的研究基础上[10],制备紫杉醇/PEG-PBLG 纳米胶束冻干粉针剂[11].本研究合成表征PEG-PBLG 测定其高分子嵌段共聚物的细胞毒性,评估紫杉醇/PEG-PBLG 冻干粉针剂对 2 种癌细胞的体外细胞毒性,并与临床所用的紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂进行比较.1 材料与方法1. 1 材料与仪器紫杉醇/PEG-PBLG 冻干粉针剂,采用膜透析法制备紫杉醇载药纳米胶束溶液,加入 3%甘露醇冷冻干燥获得粉针剂( 紫杉醇含量 8. 13%) ; 紫杉醇,福建南方生物技术股份有限公司,批号 JP050901,纯度 99. 2%;紫杉醇注射剂( 6 mg/mL × 5 mL) ,北京四环医药科技股份有限公司; 透析袋( 截留 Mw3500 ~ 5000) ,上海绿鸟科技发展有限公司进口分装;RPMI1640 培养基、小牛血清、胰蛋白酶,美国 Gibco 公司; 25 cm2培养瓶、96孔培养板,美国 Corning 公司; 其他试剂均为分析纯;HeLa 人子宫黏膜上皮细胞、HO-8910 人卵巢癌细胞、A549 人肺小细胞腺癌细胞,中山大学实验动物中心提供.Mercury-Plus 300 核磁共振波谱仪,美国 VAR-IAN 公司; 1 - 4 / LSC 冷冻干燥机,德国 CHRIST AL-PHA; CKX41 倒置相差显微镜,日本 Olympus; Bio-RADMode 1450 酶联免疫检测仪,美国 Microplate Read-er; CO2培养箱,英国 Galaxy R.1. 2 PEG-PBLG 嵌段共聚物的合成及核磁表征采用文献[12]方法合成 PEG-PBLG: 谷氨酸在 60%硫酸催化下先进行γ-苄酯化、再与二( 三氯甲基) 碳酸酯作用生成谷氨酸苄酯羧酸酐( A) ,最后在端氨基聚乙二醇单甲醚( I) 的引发阴离子聚合反应.在不同 ( A/I) 的摩尔比下聚合反应,可生成不同分子量的PEG-PBLG 嵌段共聚物.利用1HNMR 获得 PEG-PBLG 氢核磁谱图,并根据共聚物的嵌段比,计算出 PEG-PBLG 的分子量.1. 3 观察 PEG-PBLG 嵌段共聚物的体外细胞毒性将处于指数生长期的 HeLa 细胞消化,用 RP-MI1640 培养液调整细胞密度6 × 104个/mL,实验前一天接种于24 孔板中,每孔1 mL.5% CO2、37 ℃培养箱培养 24 h,吸取各孔内培养液弃去,加入各实验组的培养液 1 mL.苯酚阳性对照组,用 RPMI1640 培养液调整苯酚浓度为 6. 4 μL/mL; 阴性对照组用新鲜 RPMI1640 培养液; 溶剂对照组加入增溶剂聚氧乙烯化蓖麻油的 RP-MI1640 分散液,浓度为 2 μL / mL; 实验组加入 PEG-PBLG 胶束冻干样品 RPMI1640 培养液分散溶液,胶束浓度为 200 μg/mL.各组设平行样品 4 个.置细胞恒温培养箱中培养 24 h,通过倒置显微镜观察细胞形态和生长情况.1. 4 冻干粉针剂对癌细胞的细胞毒性试验分别将处于指数生长期的 HO-8910、A549 细胞消化,用 RPMI1640 培养液调整细胞密度1. 5 ×104个/mL,实验前一天接种于 96 孔板中,每孔 200 μL.阴性对照组用新鲜RPMI1640 培养液交换; 阳性对照组加入用 RP-MI1640 培养液稀释市售紫杉醇 / 聚氧乙烯化蓖麻油注射剂,紫杉醇浓度分别为 50、20、10、5 μL/mL 溶液( 内含增溶剂聚氧乙烯化蓖麻油分别为 10、4、2、1 μL/mL) ;增溶剂对照组加入用 RPMI1640 培养液稀释聚氧乙烯化蓖麻油,浓度分别为 10、4、2、1 μL/mL 溶液; 冻干粉治疗组加入用 RPMI1640 培养液分散紫杉醇/PEG-PBLG 冻干粉针剂样品,配制成紫杉醇含量为 50、20、10、5 μg / mL 溶液,每个试样复种 4 孔.用 PBS 漂洗细胞 2 次后,将上述各组的培养液覆盖在培养细胞上,5% CO2、37 ℃培养箱培养 24 h 后,于每孔加入 5 mg/mL 的 MTT 20 μL,继续培养 4 h,吸尽上液,用 PBS 清洗 2 遍后,每孔加入 DMSO 溶液 150μL,室温放置 15 ~20 min,振摇15 min 均匀染色,用酶标仪测定 570 nm 处吸光度值( OD) .根据( 1) 式计算细胞相对增殖百分率( relative growth rate,RGR) ,评定细胞毒性级别[13].RGR = ( 试样组 OD 值) / ( 阴性对照组 OD 值) × 100%( 1)1. 5 统计学方法.所有数据采用均数± 标准差( x珋± s) 表示,计量资料分析采用 t 检验,检验水准α =0. 05,P <0. 05 具有统计学意义.2 结果.2. 1 PEG-PBLG 嵌段共聚物的合成.PEG-PBLG 的1H-NMR 如图 1 所示: a 峰,δ7. 25( 苯环 5H) ; b 峰,δ5. 04( 苄基2H) ; c 峰,δ3. 66( 乙氧基峰4H) ,以上氢核磁谱图证实了 PEG-PBLG 共聚物的合成形成.1HNMR 可测定共聚物的嵌段比,由 PEG 嵌段的单位乙氧基质子峰面积( c 峰,δ3. 66) 和 PBLG 嵌段的单位苄基质子峰面积比( b 峰,δ5. 04) 获得,由于 PEG分子量已知,因此可计算出 PEG-PBLG 的分子量.本实验采用文献[12]方法合成 PEG-PBLG,经测定其分子量Mw =1. 86 ×104.2. 2 PEG-PBLG 共聚物对 HeLa 细胞形态的影响000.HeLa 细胞培养 24 h 后在倒置显微镜下观察: PEG-PBLG 组和阴性组,见图 2( a) 、2( c) ,细胞成长梭形或多角形,折光性强,细胞排列密集,连接成片,可见圆形分裂细胞,其周围有明亮的晕,表明细胞生长旺盛; 而溶剂组,见图2( b) ,细胞生长状态不好,没有连接成片而且部分细胞死亡破裂,表现出明显的细胞毒性; 阳性组( 苯酚) ,见图2( d) ,细胞大量死亡,呈重度细胞毒性.通过观察可得: 临床所用紫杉醇注射剂中增溶剂在较低浓度 2 μL/mL 下就具有较强的细胞毒性,而在PEG-PBLG 在 200 μg / mL 较高浓度下,HeLa 细胞生长情况良好.说明嵌段共聚物 PEG-PBLG 作为高分子材料,对 Hela 细胞毒性较低,安全性较好.2. 3 冻干粉针剂对癌细胞的细胞毒性实验.从图 3、图 4 可见,当紫杉醇浓度≥20 μg/mL 时,紫杉醇注射剂的阳性对照组、紫杉醇/PEG-PBLG 的冻干粉治疗组在细胞毒性评分均为 4,表现明显细胞毒性; 而紫杉醇浓度≤10 μg/mL,冻干粉治疗组的体外细胞毒性要远低于紫杉醇注射剂组( P <0. 01) ; 在含有1μL/mL 的聚氧乙烯化蓖麻油时,增溶剂组毒性评分为3,因此增溶剂也具有较强的细胞毒性; 临床所用紫杉醇注射液采用聚氧乙烯化蓖麻油作为难溶药物紫杉醇的增溶剂,因而由紫杉醇、增溶剂共同构成该制剂的细胞毒性.3 讨论载药纳米胶束作为一种新型药物制剂技术,有缓控释药物,靶向长效,降低毒副作用,提高疗效等诸多优点,具有传统普通制剂无法比拟的剂型优势[2].但组成纳米胶束的高分子材料用在人体的安全性,则是需要特别关注的研究问题.我国于 1997 年制定了医疗器械生物学评价标准 GB/T1688. 1,生物材料的相容性及其临床使用的安全性问题越来越受到重视.目前国内外有多种评价细胞毒性的方法,MTT 法是 1983 年被首次报道使用的一种快速评价细胞增殖和细胞毒性的比色分析法.在测定高分子材料的细胞毒性应用较多的细胞是1953 年从人类子宫肿瘤中分离出的子宫黏膜上细胞( HeLa 细胞) ,在 1982 年被美国质量标准协会推荐为细胞毒性试验中的标准细胞[14].PEG-PBLG 具有优良的血液相容性[15 -16]和生物降解性[17],其亲水段为 PEG 已被美国 FDA 批准在人体内使用,不产生毒副作用,无免疫原性[18]; 其疏水段为均聚肽 PBLG,在体内可发生降解成为蛋白质的组分谷氨酸,无蓄积和毒副作用.在本研究中高分子材料 PEG-PBLG 在 200 μg/mL 较高浓度时仍未表现出对HeLa 的细胞毒性,这充分证明该高分子聚合物的安全性良好.在紫杉醇/PEG-PBLG 冻干粉针剂对 2 种人癌细胞的细胞毒性实验中: 当紫杉醇浓度为≥20 μg/mL 时,阳性对照组、冻干粉治疗组均表明具有很强的细胞毒性.这有可能是因为 2 组溶液中游离紫杉醇量已达到饱和浓度,饱和药物浓度对癌细胞抑制杀灭效果是一样; 而低浓度情况下( ≤10 μg/mL) ,冻干粉治疗组对 2种癌细胞的毒性均明显低于相同药物浓度的临床所用紫杉醇注射剂( P < 0. 01) ,是因为紫杉醇/PEG-PBLG载药胶束包埋药物仅释放部分紫杉醇,并且无增溶剂的细胞毒性,因而显著地降低了制剂的细胞毒性.通过本实验研究可以明确: 紫杉醇/PEG-PBLG 载药纳米胶束可显著降低紫杉醇制剂在体外的细胞毒性后,从而有可能减少紫杉醇制剂的毒副作用,具有较好的临床应用价值与前景.但在纳米胶束降低抗肿瘤药物的细胞毒性后,能否保持对肿瘤组织的治疗效果,有待药效学动物实验的进一步验证.参考文献:[1]Gelderblom H,Verweij J,Nooter K,et al. 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多西紫杉醇注射液的稳定性考察
# 240 #
中国临床药学杂志 CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACY 2007 年第 16 卷第 4 期
Stability study of docetaxel injections
YANG Bei, ZHENG Lu2xia, DUAN Geng2li ( Department of P harmaceutical niversity , Shanghai 200032, China )
非淋菌性泌尿生殖道炎是指由淋菌以外的其他
病原体, 主要是沙眼衣原体、尿素分解支原体所引起 的尿道炎( 我们分别采用细胞培养法和酶联免疫吸 附试验检测衣原体和支原体) 。目前我国这类病例 日益增多。
加替沙星是一种新型广谱 8- 甲氧氟喹诺酮抗 生素, 口服 易吸收, 静脉 注射与口服具 有生物等效 性[ 1] 。加替沙星对革兰阴、阳性细菌, 衣原体, 支原 体, 分支 杆菌和厌氧菌等都有强大的杀菌作用[2] 。 其作用机制是通过生成 DNA、拓扑异构酶和氟喹诺 酮类药物三元络合物而稳定拓扑异构酶- DNA 反 应中间体, 从而抑制细菌 DNA 的复制和转录, 达到 抗菌目的[3] 。我们的观察结果也表明加替沙星抗菌 活性突出, 尤其在非淋菌性泌尿生殖道炎的疗效显 著, 另外加替沙星的不良反应较少, 因此加替沙星值 得临床推广。
仪, 记录色谱图, 以多西紫杉醇峰面积( y ) 对质量浓
度( x) 作线性回归, 得标准曲线方程为 y= 7. 009 @ 10- 4x + 1. 027 6( r = 0. 999 8) 。
2. 3 方法专属性 通过将样品放置于不同条件( 高 温、强光、室温和低温) 考察方法的专属性。结果表
明, 在该色谱条件下, 多西紫杉醇和降解产物分离良 好, 多西紫杉醇的保留时间约为 7. 28 min, 见图 1。
紫杉醇注射液制备工艺研究以及质量控制
紫杉醇注射液制备工艺研究以及质量控制作者：闫肃孙晓雪来源：《科学与财富》2018年第02期摘要：目的建立紫杉醇注射液的制备工艺及质量控制标准。
方法将一定量的紫杉醇与PEG 400混合后，得到溶液A；然后将2份的大豆卵磷脂加入水中，接着加入1份泊洛沙姆，搅拌均匀后，形成B溶液，将溶液A缓慢滴加到溶液B中，边滴加边搅拌，搅拌均匀后过滤除菌得到溶液即为紫杉醇溶液。
采用高效液相色谱法对紫杉醇注射液的主要成分紫杉醇的含量进行测定。
结果紫杉醇在0.4～4 μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系，平均回收率为99.54%，RSD值为0.51%。
结论采用本方法制备的紫杉醇溶液，操作简单、工艺稳定可靠，建立的高效液相色谱法检测含量的方法灵敏、准确，可用于紫杉醇注射液的质量控制。
关键词：紫杉醇注射液；质量控制；制备工艺；高效液相色谱法紫杉醇是一种具有抗肿瘤活性的天然产物，最初是从红豆杉的树皮中提取的粗提物，在对获得粗提物进行活性筛选中，科学家发现这种粗提物能明显抑制小鼠肿瘤细胞的生长，通过实验手段，将这种活性物质得到分离，但由于天然产物中含量极低，一直到20世纪，最初这种活性物质的发现者才同美国Duke大学教授应用x-射线技术分析确定了该活性成份的化学结构为一种四环二萜类化合物，并把它命名成为紫杉醇（Paclitaxel）[1]。
紫杉醇已经得到广泛使用，是近十几年来临床治疗恶性肿瘤的重大突破之一[2-3]。
本文采用HPLC法以紫杉醇含量为指标对紫杉醇注射液的质量进行控制。
1 实验部分1.1 仪器与试药液相色谱仪（日本岛津），C18色谱柱（150mm×4.6mm，日本岛津）。
乙腈为色谱纯（sigma公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
紫杉醇对照品（购自中国药品生物制品检定所），紫杉醇原料（南京道斯夫生物科技有限公司）。
1.2 紫杉醇注射液的制备将100 mg的紫杉醇与一定量的PEG 400混合后，得到溶液A；然后将2份的大豆卵磷脂加入水中，接着加入1份泊洛沙姆，搅拌均匀后，形成B溶液，将溶液A缓慢滴加到溶液B 中，边滴加边搅拌，搅拌均匀后过滤除菌得到溶液即为紫杉醇溶液，浓度为6mg/ml。
紫杉醇
羟丙基甲基纤维素物理性状：本品为非离子型纤维素醚，外观为白色的粉末，无嗅无味,溶于水及大多数极性有机溶剂和适当比例的乙醇/水、丙醇/水、二氯乙烷等，在乙醚、丙酮、无水乙醇不溶，在冷水中溶胀成澄清或微浊的胶体溶液。
水溶液具有表面活性，透明度高、性能稳定。
HPMC具有热凝胶性质，产品水溶液加热后形成凝胶析出，冷却后又溶解，不同规格的产品凝胶温度不同。
溶解度随粘度而变化，粘度越低，溶解度越大，不同规格的HPMC其性质有一定差异，HPMC在水中溶解不受PH值影响。
颗粒度：100目通过率大于100%。
堆密度：0.25-0.70g/ (通常0.4g/ 左右)，比重1.26-1.31。
变色温度：180-200℃,炭化温度：280-300℃。
HPMC具有增稠能力，排盐性、PH稳定性、保水性、尺寸稳定性、优良的成膜性以及广泛的耐酶性、分散性和粘结性等特点。
用途介绍：1.建筑业：作为水泥沙浆料的保水剂、缓凝剂使沙浆具有泵送性。
在抹灰浆、石膏料、腻子粉或其他的建材作为黏合剂，提高涂抹性和延长可操作时间。
用作粘贴瓷砖、大理石、塑料装饰，粘贴增强剂，还可以减少水泥用量。
HPMC的保水性能使浆料在涂抹后不会因干得太快而龟裂，增强硬化后强度。
2.陶瓷制造业：在陶瓷产品制造中广泛用作黏合剂。
3.涂料业：在涂料业作为增稠剂、分散剂和稳定剂，在水或有机溶剂中都具有良好相溶性。
作为脱漆剂。
4.油墨印刷：在油墨业作为增稠剂、分散剂和稳定剂，在水或有机溶剂中都具有良好相溶性。
5.塑料：作成形脱模剂、软化剂、润滑剂等。
6.聚氯乙烯：聚氯乙烯生产中做分散剂，系悬浮聚合制备PVC的主要助剂。
7.其它：本品还广泛用于皮革、纸制品业、果蔬保鲜和纺织业等。
1羟丙甲纤维素(HPMC) 英文：Hydroxypropyl Methyl Cellulose 简称：HPMC或MHPC 别名：羟丙基甲基纤维素；纤维素羟丙基甲基醚；Hypromellose，Cellulose, 2-hydroxypropyl methyl Cellulose ether. Cellulose hydroxypropyl methyl ether Hyprolose；CAS号：[ 9004-65-3 ] 来源：HPMC为选用高度纯净的棉纤维素作为原料，在碱性条件下经专门醚化而制得，全过程在GMP条件和自动化监控下完成，不含任何动物器官和油脂等活性成分。
紫杉醇的提取制备
紫杉醇的HPLC 检测
色谱条件：流动相为甲醇：水=65∶35，进样量10 μL，流量为 1.0 mL／min，检测波长为227 nm 检测。标准曲线绘制：用甲醇配制
浓度为 0.1 mg／mL 的紫杉醇标准品溶液，分别以10、12、14、16、
18、20 μL 的进样量进行HPLC分析并绘制标准曲线。
实验结果
由60g红豆杉枝叶粉末最后获得紫杉醇69.64 μg，纯度 93%。由于在本实验中选取试剂均以无毒、廉价为原则， 所以在环境、经济性上有一定的优势，可以为工业放大提 供参考。
分析与讨论
溶剂对紫杉醇提取率的影响
不同种类的溶剂对红豆杉紫 杉醇醇类化合物的萃取效果不同
溶剂 氯仿 叶末质 量/g 30 30 30 30 浸质量 /g 3.75 5.40 5.21 6.1
提取制备方法
提取纯化工艺
60g红豆杉枝叶、树皮、 树枝杉枝叶、树皮、树枝
干燥与粉碎，乙酸乙酯-丙 酮（1:1）索式提取8h
紫杉醇浸膏, 取5g小试
经50 mL 石油醚固液萃取， 90 mL 乙酸乙酯溶解， 90 mL 1mol/L 的NaOH洗 涤，蒸馏水分两次淋洗
有机相用无水硫酸钠脱 水后浓缩，己烷沉淀后上样层析 （硅胶用量25 g）， 经结晶反应获得纯化的紫杉醇样品
紫杉醇是一种分子量很大，结构很复杂的化学物质。 目前，紫杉醇 的来源主要有以下几种：(1)天然红豆杉植物提取;（2）人工栽培;(3 ）半合成；（4）全合成；（5）生物合成；（6）真菌发酵；（7）植 物组织细胞培养。但更多的还是从天然和栽培红豆杉的树皮或枝叶中 直接提取得到。 其提取物中含有大量的植物腊、色素和树胶等杂质 ，特别是其中共存许多分子结构和理化性质与紫杉醇极其相近的紫杉 烷系列化合物，给分离工作带来很大的困难。 研究表明，紫杉醇有明显的抗肿瘤作用。对人体肿瘤MX-1乳腺癌、 CX-1结肠癌、LX-1肺癌异种移植均有明显的抑制作用。临床上主要用 于卵巢癌、也用于肺癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌等。
标准物质目录
附件1国家标准物质项目表（一级标准物质）附件2：中华人民共和国标准物质目录国家质量监督检验检疫总局中国北京（2011年3月）研制单位：卫生部临床检验中心（北京市）研制单位：卫生部临床检验中心（北京市）研制单位：卫生部北京医院（北京市）研制单位：卫生部北京医院（北京市）研制单位：卫生部北京医院（北京市）研制单位：卫生部北京医院（北京市）研制单位：中国计量科学研究院（北京市）研制单位：中国计量科学研究院（北京市）研制单位：中国计量科学研究院（北京市）*单位为mS/cm研制单位：中国计量科学研究院（北京市）研制单位：国家纳米科学中心（北京市）研制单位：中国计量科学研究院（北京市）研制单位：国家纳米科学中心（北京市）、中国计量科学研究院（北京市）研制单位：济南高新开发区泉东标准物质研究所（济南市）研制单位：武汉维斯科冶标科技有限公司（武汉市）研制单位：上海市农药研究所（上海市）研制单位：大连安瑞森特种气体化工有限公司（大连市）研制单位：南京特种气体厂有限公司（南京市）研制单位：成都金克星气体有限公司（彭州市）研制单位：武汉市天赐气体有限公司（武汉市）研制单位：上海基量标准气体有限公司（上海市）研制单位：济南高新开发区泉东标准物质研究所（济南市）研制单位：武汉维斯科冶标科技有限公司（武汉市）研制单位：常州市计量测试技术研究所（常州市）研制单位：上海市农药研究所（上海市）研制单位：农业部环境质量监督检验测试中心（天津市）研制单位：上海基量标准气体有限公司（上海市）研制单位：北京市医疗器械检验所（北京市）研制单位：北京康彻斯坦生物技术有限公司（北京市）研制单位：上海基量标准气体有限公司（上海市）研制单位：广东省计量科学研究院（广州市）研制单位：广东省计量科学研究院（广州市）* 单位为g/mL研制单位：广东省计量科学研究院（广州市）研制单位：国家纳米科学中心（北京市）研制单位：常州市计量测试技术研究所（常州市）附件3换发制造计量器具许可证目录（国家一级标准物质）换发制造计量器具许可证目录（国家二级标准物质）附件4撤销制造计量器具许可证目录。
细胞工程-紫杉醇
• （2）将拥有至少二十年临床应用时间——市场潜力无限 • 进入二十一世纪，癌症仍然是导致人类死亡的主要疾病之一。WHO
报告，1996年全球58亿人口中，因癌症死亡的有600余万，占总死亡 人数的近12%。新诊断的癌症患者约1000余万，估计现有癌症患者约 4000万。卫生部统计资料表明，我国每年新增恶性肿瘤患者约160万 人以上，因恶性肿瘤死亡的人数占全国总死亡人数的17.9%。 • 从以上数据可以看出，无论是国外的还是国内，肿瘤任然是威胁人们 生命和生活质量的主要病种之一。各国政府、研究机构和制药公司均 对五十余种，其中大部分抗癌谱窄、疗效低，不能有效满足国内医疗 和癌症患者的需求。紫杉醇具有独特的作用机制和新颖的化学结构， 它的抗癌谱广、抗肿瘤作用强，对难治性的乳腺癌、非小细胞肺癌、 头颈部肿瘤等的疗效突出，是目前在临床用量最大、疗效最好的抗癌 药之一。
• 作为抗癌药物，紫杉醇的分子 结构非常复杂，有11个立体中 心和一个17碳的四环骨架结构 ，因此对紫杉醇分子的全合成 和半合成引起世界上许多有机 合成小组的兴趣。
• 性状：白色无臭无味的结晶或 粉末，不溶于水，易溶于丙酮 、氯仿、乙醚等有机溶剂。
功能与主治
• 卵巢癌和乳腺癌及非 小细胞肺癌（NSCLC） 的一线和二线治疗。 以及头颈癌、食管癌 ，精原细胞瘤，复发 非何金氏淋巴瘤等的 治疗。
（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留 时间和对照品溶液峰的保留时间一致。
（3）红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。
• 【检 查】
溶液的澄清度与颜色 取本品10mg，加甲醇10ml溶解后，溶液应澄清 无色。
有关物质：照高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录ⅤD）试验。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈一 水为流动相，检测波长为227nm，流速为1.5ml/min，进行梯度洗脱。初 始比例为40%的乙腈和60%的水，洗脱至主峰完（35分钟），然后以每分 钟1.6%的速度增加乙腈的比例，25分钟后乙腈增至80%。再以每分钟4% 的速度降低乙腈的比例，10分钟后乙腈降至40%，保持此比例10分钟。
注射用紫杉醇脂质体质量标准
注射用紫杉醇脂质体质量标准
注射用紫杉醇脂质体的质量标准包括以下几个方面：
1. 外观：应为均一、悬浮液状，无结块、分层或沉淀现象。
2. 颜色和透明度：应为均匀的乳白色悬浮液，透明度应符合注射用制剂的要求。
3. 粒径分布：脂质体中紫杉醇的粒径应在一定范围内，一般要求粒径分布均匀，单一峰或两个峰。
4. 紫杉醇含量：应通过有效方法进行测定，并符合规定的紫杉醇含量要求。
5. pH值：应在一定范围内，通常要求pH值在5.0-9.0之间。
6. 稳定性：应进行稳定性研究，验证脂质体的储存稳定性、温度稳定性等。
7. 细菌和真菌污染：应符合注射用制剂的微生物限度要求。
8. 其他有关的物理、化学、生物学指标：如溶解度、含水量、残留溶剂、重金属含量、生物相容性等。
以上标准是根据制药行业的相关规定和指南，以及紫杉醇脂质体的特性和用途来确定的，具体的标准要根据产品的特性和目标市场的要求来确定。
紫杉醇发酵生产工艺
微生物发酵生产紫杉醇产品介绍及社会价值：紫杉醇是一种二萜类衍生物，是当前公认的广谱、活性强的抗癌药物之一⋯。
紫杉醇最早是wanj等于1971年从短枝红豆杉(7Ikusbreviifolia)树皮中分离得到的。
随后，schiff等证实紫杉醇具有独特的抗癌机制。
随着紫杉醇的临床应用，对其研究也逐渐深入，其主要抗癌机制为抑制肿瘤细胞的微管(Microtllbules)合成，以阻断细胞分裂，致使肿瘤体积逐渐缩小；紫杉醇还可诱导细胞凋亡，另外还有类似脂多糖(IPS)的作用，可调节机体的免疫功能。
目前国际市场上的紫杉醇仍依靠从红豆杉树皮提取及半合成，迄今为止尚未见有第三种形式形成大规模工业化生产的报道。
紫杉醇的工业生产受到了原料和技术两方面的制约，短期内难以突破。
为了解决红豆杉资源短缺与紫杉醇需求量的日益增加的矛盾，人们对生产紫杉醇进行了多方面的研究，包括化学全合成、红豆杉细胞培养及微生物发酵。
微生物发酵法生产紫杉醇因具有明显优势，其研究和开发越来越受到国内外研究学者的广泛关注。
这里提出一种运用基因工程，代谢工程，发酵工程结合的方法生产紫杉醇，该法首先将杉醇纯合成基因克隆至大肠杆菌，让其高产紫杉二烯，再把它流加至高产紫杉醇酵母的发酵罐中，运用代谢工程手段生产紫杉醇。
创新点：运用克隆方法，将合成紫杉二烯的代谢过程酶的结构基因，以及调控系列克隆至大肠杆菌，让其表达，此过程刚被Parayil Kumaran Ajikumar及其同事实现，而运用代谢工程手段让高产紫杉醇酵母利用紫杉二烯这个前体高产紫杉醇，这是没尝试但可行的。
国内外研究：1、分离菌种：最早stierle和strobel等在短叶红豆杉的枝条上分离到一种内生真菌，能够产生紫杉醇，定名为安德列亚霉。
此后，各国学者纷纷开展产紫杉醇内生真菌的分离工作，陆续从西藏红豆杉、云南红豆杉、东北红豆杉、欧洲红豆杉、中国红豆杉中分离到产紫杉醇的内生真菌，其宿主植物几乎涉及红豆杉属的各个种。
提取紫杉醇初分离工艺
提取条件优化实验设计
单因素实验
分别考察溶剂种类、溶剂浓度、提取温度、提取时间等因素对紫杉醇提取效果的影响，确定各因素的最佳水平范 围。
正交实验
在单因素实验的基础上，选择对紫杉醇提取效果影响显著的因素，设计正交实验，进一步优化提取条件，确定最 佳工艺参数组合。
05 初分离工艺研究 与实施
初分离工艺流程设计
外观检查
01
观察预处理后的原料颗粒是否均匀、无杂质，颜色是
否正常，以判断预处理效果。
水分含量测定
02 采用水分测定仪等方法测定预处理后原料的水分含量
，确保其符合提取要求。
紫杉醇含量测定
03
采用高效液相色谱法等方法测定预处理后原料中紫杉
醇的含量，以评估预处理对紫杉醇提取效果的影响。
04 提取方法选择与 优化
03
其他方法
如滴定法、重量法等，可根据实际情况选择合适的方法进行质量检测。
检测方法验证与可行性评估
方法学验证
对所选定的检测方法进行方法学验证，包括线性范围、精密度、准确度、专属性等指标的评价，确保 方法的可靠性和准确性。
可行性评估
通过对实际样品进行检测，评估所选定方法的可行性，如回收率、重复性、稳定性等，为实际生产中 的质量控制提供依据。
提取方法选择依据
紫杉醇原料性质
不同产地的紫杉醇原料中紫杉醇含量和存在形式有所差异，应根据原料性质选择合适的提取方法。
提取效率
在保证紫杉醇纯度和收率的前提下，优先选择提取效率高的方法，以降低成本和提高生产效率。
环保性
在选择提取方法时，应考虑所用溶剂或萃取剂的毒性、可燃性和废弃物处理等问题，选择环保性好的方 法。
07 工艺流程改进与 经济效益评估