生物化学实验--Folin-Wu法定量测定
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中国海洋大学资料生物化学课件实验生物化学实验教案 (2)
–CH2OH； –CHOH；-CH2NH2等基团的存在，甚至过量铵盐也干扰本实 验。
操作： 1、双缩脲的反应：取少量尿素晶体放在干
燥的试管中，微火加热使其熔化成液体， 此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验， 至液体重新结晶出现白色固体时， 停止加 热，冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀， 再加2-4滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无 紫色出现。 2、蛋白反应：取蛋白液 1ml，加10%NaOH溶 液 1ml ，摇匀，再加 2-4 滴 1% CuSO4 溶液， 混匀，观察有无紫色出现。
（四）
茚三酮反应
原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚 三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共 有。亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色， 含有氨基的其他物质（氨、β-Ala和许多一级胺）亦呈此 反应。反应灵敏度达1:1500000(pH5-7)，广泛用于氨基酸 定量测定。
匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备： •用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂—草酸钠）1ml,缓缓
放入50ml 锥形瓶中，加蒸馏水 7ml ，摇匀，溶血后（血
液 变 为 红 色 透 明 ） 加 10% 钨 酸 钠 1ml ， 摇 匀 。 再 加 0.33mol/LH2SO41ml ，边加边摇，加毕充分摇匀，防止
温下乙醇、丙酮、中性盐硫酸胺等。
不可逆的沉淀反应：内部结构、空间构象遭到破坏，失去天然特性， 不能恢复溶解状态。重金属、生物碱试剂、过酸碱、加热、超声波、
有机溶剂等。
二、实验仪器
1、移液管 2、吸管 3、试管 4、电炉
三、实验试剂
1 、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释 10-20 倍，3-4 层纱布过滤，滤液 放在冰箱里冷藏备用。 2、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。 3、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。 4、95%乙醇。 5、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。 6、硫酸铜溶液：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml。 7、氯化钠晶体。 8、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml。 9、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 10、1%醋酸溶液。
操作： 1、双缩脲的反应：取少量尿素晶体放在干
燥的试管中，微火加热使其熔化成液体， 此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验， 至液体重新结晶出现白色固体时， 停止加 热，冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀， 再加2-4滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无 紫色出现。 2、蛋白反应：取蛋白液 1ml，加10%NaOH溶 液 1ml ，摇匀，再加 2-4 滴 1% CuSO4 溶液， 混匀，观察有无紫色出现。
（四）
茚三酮反应
原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚 三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共 有。亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色， 含有氨基的其他物质（氨、β-Ala和许多一级胺）亦呈此 反应。反应灵敏度达1:1500000(pH5-7)，广泛用于氨基酸 定量测定。
匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备： •用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂—草酸钠）1ml,缓缓
放入50ml 锥形瓶中，加蒸馏水 7ml ，摇匀，溶血后（血
液 变 为 红 色 透 明 ） 加 10% 钨 酸 钠 1ml ， 摇 匀 。 再 加 0.33mol/LH2SO41ml ，边加边摇，加毕充分摇匀，防止
温下乙醇、丙酮、中性盐硫酸胺等。
不可逆的沉淀反应：内部结构、空间构象遭到破坏，失去天然特性， 不能恢复溶解状态。重金属、生物碱试剂、过酸碱、加热、超声波、
有机溶剂等。
二、实验仪器
1、移液管 2、吸管 3、试管 4、电炉
三、实验试剂
1 、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释 10-20 倍，3-4 层纱布过滤，滤液 放在冰箱里冷藏备用。 2、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。 3、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。 4、95%乙醇。 5、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。 6、硫酸铜溶液：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml。 7、氯化钠晶体。 8、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml。 9、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 10、1%醋酸溶液。
生化实验：Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度
试剂乙
深蓝色
(Folin试剂)
实验步骤
1．样品的稀释：准确取血清0.1ml (擦 慢 吹) ，置
于50ml容量瓶中，加生理盐水至刻度，倒置摇匀。 2．取玻璃试管7支，
表1 Folin-酚试剂法(Lowry法)测定血清蛋白质含量的测定步骤
3
实验结果
1 各管吸光值记录 2 制作标准曲线（坐标纸做，贴于实验报
Folin-酚试剂法（Lowry法）测 定蛋白质浓度
1
实验目的
1. 掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理及操作。 2. 掌握标准曲线的制作方法。
实验原理
碱性铜试剂 试剂甲
蛋白质（肽键）
铜-蛋白质络合物（双缩脲反应）
-CO-NH-
紫红色
铜-蛋白质络合物（酪氨酸，色氨酸）
磷钼酸-磷钨酸
磷钼蓝 + 磷钨蓝
标注于图中 文字说明：利用标准曲线求得待测蛋白浓度值
3 利用公式法求出待测蛋白浓度
4
实验讨论与分析 实验结论 思考题：绘制标准曲线的意义及制作注
意事项？
5
生物化学实验--Folin-Wu法定量测定
糖尿病典型的症状是“三多一少”，即多饮、 多尿、多食及消瘦
血糖的测定方法
无机化学法： Folin-Wu法，特异性差
测定 方法
有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法 干扰因素多
酶法：（1）己糖激酶法（HK）
（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）
特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
用5ml移液管取全血1ml （已加抗凝剂
20ml锥形瓶 蒸馏水7ml 摇匀
溶血(变为红色透明)
10%钨酸钠1ml 摇匀
0.33mol/L H2SO41ml
边加边摇,加毕充分摇匀
放置5—15分(沉淀变为暗棕色) (如不变色,再加0.33mol/L H2SO41~2滴 )
• 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部 倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤 液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
• 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏 水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸 管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀， 静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入 225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 • 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀， 用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
•
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。09:55:1409:55:1409:5512/17/2020 9:55:14 AM
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血糖的测定方法
无机化学法： Folin-Wu法，特异性差
测定 方法
有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法 干扰因素多
酶法：（1）己糖激酶法（HK）
（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）
特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
用5ml移液管取全血1ml （已加抗凝剂
20ml锥形瓶 蒸馏水7ml 摇匀
溶血(变为红色透明)
10%钨酸钠1ml 摇匀
0.33mol/L H2SO41ml
边加边摇,加毕充分摇匀
放置5—15分(沉淀变为暗棕色) (如不变色,再加0.33mol/L H2SO41~2滴 )
• 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部 倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤 液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
• 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏 水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸 管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀， 静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入 225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 • 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀， 用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
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18生物化学实验吴宪Folin法测定血糖含量
18生物化学实验--吴宪-Folin法测定血糖含量标题：18生物化学实验——吴宪-Folin法测定血糖含量一、实验目的1.掌握吴宪-Folin法测定血糖含量的原理和方法。
2.学习使用分光光度计测量样品吸光度。
3.了解血糖的生理意义及其调节机制。
二、实验原理吴宪-Folin法是一种利用邻甲苯胺和硫酸铜反应生成紫红色络合物的原理，通过测量该络合物在特定波长下的吸光度来测定血糖含量的方法。
由于葡萄糖分子中含有醛基，因此可以利用这一特性进行测定。
本实验采用吴宪-Folin法进行血糖含量的测定。
三、实验步骤1.样品准备：收集受试者在禁食12小时后的静脉血，分离血清备用。
2.试剂准备：将邻甲苯胺、硫酸铜、碳酸钠等试剂按照配方准确称量，溶解定容，现配现用。
3.测定步骤：将试剂和样品按照规定比例混合，在规定温度下静置一段时间，用分光光度计在特定波长下测量吸光度，记录数据。
4.数据处理：根据吸光度和标准曲线计算血糖浓度。
四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录受试者血糖吸光度数据（表1）。
表1：血糖吸光度数据记录表表2：血糖浓度计算表3.数据统计：对所有受试者的血糖浓度进行平均值和标准差统计（表3）。
表3：血糖浓度统计表平均值：x̄= ΣC/n (mg/dl) 标准差：s= [Σ(C-x̄)²/n]½五、结论总结与讨论根据实验数据，我们得出以下结论：1.所有受试者的血糖浓度均处于正常范围内。
这表明受试者在禁食12小时后的血糖水平处于生理正常范围。
这一结果与我们所知的人体在禁食状态下的血糖调节机制相符。
当人体处于禁食状态时，胰高血糖素分泌增加，促进肝糖原分解，使血糖水平维持在正常范围。
2.实验结果存在一定差异。
这可能与个体差异、采血时间、实验操作等因素有关。
为了获得更为准确的数据，需要进一步改进实验方法，提高操作精度和标准化程度。
此外，对于不同个体之间的比较，应考虑个体差异对实验结果的影响。
3.吴宪-Folin法是一种灵敏度高、操作简便的血糖测定方法。
2 血糖的定量测定(Folin-Wu法)
中国海洋大学实验报告姓名庞裕智专业年级生命基地班2011 题目血糖的定量测定(Folin-Wu法)学号************科目生物化学实验时间周一90节同组者田特一、实验目的1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
Cu2+(CuSO4) + 葡萄糖 Cu+ （Cu2O）无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物——钼蓝。
Cu2O+酸性钼酸试剂蓝色钼化合物 OD420比色血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。
可用比色法定量的测定。
三、实验仪器1、25mL血糖管×3支；2、血糖管橡胶塞×3个；3、1mL胖肚吸管×1支；4、100mL锥形瓶×2个；5、漏斗架×1个；6、普通漏斗×2个；7、水浴锅×1个；8、电炉×1个；9、移液管1mL×2支；2mL×3支；5mL×2支；10mL×1支；10、滤纸×1盒；11、吸耳球×2个；12、7200型分光光度计×1台；13、表面皿×1个。
四、实验试剂1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
3、0.33mol/L H2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
生化实验：Folin-酚试剂法测定血清总蛋白含量
三、实验步骤
1、待测血清样品稀释：
0.1ml 血清，置于50ml 容量瓶， 加生理盐水至离刻度1-2cm处，以胶 头滴管补充至刻度， 倒置摇匀。此为 血清待测液样品。
2、Folin-酚试剂法测蛋白质溶度
取玻璃试管3支，按下表操作：
3、722分光光度计使用
开机预热10分钟 调波长 空白、标准与待测液体加入比色杯 开盖调“0”，关盖调“100”------T 转至A档，测吸光度------A 记录，重复测三次
原理：当一束强度为I0的单色光垂直照 射某物质的溶液后,由于一部分光被体系 吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的 透光率T为: T=I/ I0 A=-lgT
朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律: A=KLC
(式中A为吸光度，L为溶液层厚度,C为溶液的浓度， K为吸光系数) C测= A测*C标/A标
Folin-酚试剂法原理
第二步：Folin-酚显色反应 Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，
其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物还原 而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由 于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸(Tyr) ， 故有此显色反应。
即蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸 或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷 钨酸，生成蓝色的化合物。
干扰物质多、费时、 操作严格计时
（1）双缩脲法测定蛋白质
H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2
双缩脲反应：
在碱性条件下，双缩 脲可与铜离子结合生成 紫红色化合物。
H2N-CO-NH-CO-NH2 ＋NH3
双缩脲
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩 脲反应，颜色深浅与其浓度成正比，可用比色 法进行测定。
血糖的测定Folin吴法
Folin-吴法
吴宪：我国著名生物化学家和营养学家 1912 年 美国麻省理工学院 学习化学 1917 年 哈佛大学医学院 师从美国著 名生物化学家福林(Otto Folin）教授 进行血液化学研究
Folin-吴法
研究期间改进血糖定量分析方法 吴宪改进的血糖测定法，为后来的胰岛 素发现奠定了基础
原理
无蛋白血滤液 碱性铜试剂 磷钼酸试剂 葡萄糖 Cu(OH) 磷钼酸
2
原理
葡萄糖 ＋ Cu(OH)2 Cu2O↓
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱCu2O
＋
磷钼酸
钼兰
原理
钼兰的蓝色深浅与葡萄糖的含量成正比 用比色法可测定血糖的含量
操作
标 准 管 测 定 管 空 白 管
已知浓度葡 萄糖溶液 0.025mg/ ml
未知浓度 无蛋白血 滤液
蒸馏水
临床意义
（mg/dl） 空腹血糖
餐后两小时血糖 服糖后两小时糖
正常 ＜110
＜140 ＜140
怀疑 110-139
140-199 140-199
糠尿病 ≥140
≥200 ≥200
注意事项
测定结果比实际血糖含量高，因为 无蛋白血滤液中，除含有葡萄糖外， 尚有微量的其他还原物质 ,如Vit C、 尿酸等。
吴宪：我国著名生物化学家和营养学家 1912 年 美国麻省理工学院 学习化学 1917 年 哈佛大学医学院 师从美国著 名生物化学家福林(Otto Folin）教授 进行血液化学研究
Folin-吴法
研究期间改进血糖定量分析方法 吴宪改进的血糖测定法，为后来的胰岛 素发现奠定了基础
原理
无蛋白血滤液 碱性铜试剂 磷钼酸试剂 葡萄糖 Cu(OH) 磷钼酸
2
原理
葡萄糖 ＋ Cu(OH)2 Cu2O↓
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱCu2O
＋
磷钼酸
钼兰
原理
钼兰的蓝色深浅与葡萄糖的含量成正比 用比色法可测定血糖的含量
操作
标 准 管 测 定 管 空 白 管
已知浓度葡 萄糖溶液 0.025mg/ ml
未知浓度 无蛋白血 滤液
蒸馏水
临床意义
（mg/dl） 空腹血糖
餐后两小时血糖 服糖后两小时糖
正常 ＜110
＜140 ＜140
怀疑 110-139
140-199 140-199
糠尿病 ≥140
≥200 ≥200
注意事项
测定结果比实际血糖含量高，因为 无蛋白血滤液中，除含有葡萄糖外， 尚有微量的其他还原物质 ,如Vit C、 尿酸等。
生化大实验实验五 Folin–酚试剂法测定蛋白质含量
2.样品测定：取1.0mL样品溶液（约含20 ～250µg 2.样品测定：取1.0mL样品溶液（约含20 多肽或蛋白质）于试管中，加入5mL试剂甲，混 多肽或蛋白质）于试管中，加入5mL试剂甲，混 匀后同标准溶液测定。（本次实验样品取0.1加 匀后同标准溶液测定。（本次实验样品取0.1加 0.9ml蒸馏水再测定） 0.9ml蒸馏水再测定） 3.结果与计算：根据测定管吸光度查标准曲线，由 3.结果与计算：根据测定管吸光度查标准曲线，由 标准曲线计算样品蛋白含量。
这个测定法较双缩脲法灵敏得多，但要费较长时间。 对双缩脲反应发生干扰的离子同样容易干扰Lowry反应，而 对双缩脲反应发生干扰的离子同样容易干扰Lowry反应，而 且对后者的影响还要大得多。所测蛋白质样品中若含酚类及 柠檬酸均有干扰作用。浓度较低的尿素（约0.5％左右）、 柠檬酸均有干扰作用。浓度较低的尿素（约0.5％左右）、 胍（0.5％左右）、硫酸钠（1％）、硝酸钠（1 胍（0.5％左右）、硫酸钠（1％）、硝酸钠（1％）、三氯 乙酸（0.5％）、乙醇（5％）、乙醚（5％）、丙酮（0 乙酸（0.5％）、乙醇（5％）、乙醚（5％）、丙酮（0．5 ％）等溶液对显色无影响，这些物质浓度高时必须做校正曲 线。含硫酸铵的溶液只须加浓碳酸钠 - 氢氧化钠溶液即可显 色测定。若样品酸度较高，显色后色浅，则必须提高碳酸 钠 — 氢氧化钠溶液的浓度1～2倍。 氢氧化钠溶液的浓度1 进行测定时，加 Folin氏试剂要特别小心，因为 Folin氏 Folin氏试剂要特别小心，因为 Folin氏 试剂仅在酸性 pH条件下稳定，但上述还原反应只是在pH 10 pH条件下稳定，但上述还原反应只是在pH 的情况下发生，故当Folin氏试剂加到碱性的铜 的情况下发生，故当Folin氏试剂加到碱性的铜 - 蛋白质溶液 中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸 - 磷钨酸试剂被破坏之 前，还原反应即能发生。
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五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
• 用5ml移液管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入 100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血 液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
• 再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀 ，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可 再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀， 静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入 225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 • 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀， 用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
三、实验仪器
1、25mL血糖管×3支； 3、沸水浴小锅×1个； 5、电炉×1个； 7、吸耳球×2个；
2、血糖管橡胶塞×3个； 4、100mL锥形瓶×2个； 6、滤纸×1盒； 8、7200型分光光度计×1台;
血糖管
7200型分光光度计
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml） •(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。 •(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。 2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。 3、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。 4、碱性硫酸铜溶液
• 然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液， 同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇 动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
• 一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度 计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。
六、结果计算：
按下式计算100ml全血中所含血糖的含量 m=A1/A0×C0÷0.1×100
Folin.氧化供能 2.人体的主要组成成分之一
糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；转化成 脂肪和某些非必需氨基酸等 3.糖代谢紊乱→供能障碍→一系列代谢变化
血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平：3.9∽6.7mmol/L
糖尿病典型的症状是“三多一少”，即多饮、 多尿、多食及消瘦
血糖的测定方法
无机化学法： Folin-Wu法，特异性差
测定 方法
有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法 干扰因素多
酶法：（1）己糖激酶法（HK）
（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）
特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵
式中: m=100ml全血中含血糖毫克数 ; C0=标准液葡萄糖含量（ 0.1mg/ml）；A1=样品液光吸收值 ; A0=标准液光吸收值
0.1：1ml无蛋白血溶液相对于0.1ml全血
七、思考题
• 实验过程中那些操作可能影响实验结果的 准确性？
• 实验中，血糖管有什么作用？ • 实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱
• A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释 定容至1000ml. • B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。 • 临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存 （4℃）。
四、实验试剂
5、酸性钼酸盐溶液： • 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸
Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖
Cu+ （Cu2O）
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应,
Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合 物—钼蓝 。
Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量 与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。
• 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部 倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤 液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
• 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏 水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸 管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
性硫酸铜液反应后的血糖管？
注意事项：
1.加硫酸、钨酸钠时，要边加边摇匀 2.沉淀由鲜红变为暗棕色，是因钨酸钠与硫酸生成钨酸，在 适当酸度时，使血红蛋白变性沉淀，如果沉淀不变暗棕色或 重新过滤后仍混浊，是因为血液中所加抗凝剂过多，可以加 入10％硫酸1-2滴，待暗棕色后再过滤。 3.用定量滤纸过滤后应该得到完全澄清无色之无蛋白血滤液 。 如果得到仍带有红色的血滤液则说明蛋白质未被完全去 除。
一、目的要求
• 掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理 和方法。
• 学会制备无蛋白血滤液。 • 掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，
与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧
基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
血糖的来源和去路
血糖测定的目的和意义
临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的 主要依据。 科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些 药物的研究中，也涉及血糖的测定。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高 血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。 ❖血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病； ⑵低血糖
高血糖症：指空腹血糖浓度超过7.3mmol/L,有 生理性和病理性之分，临床上最常见的病理性 高血糖症是糖尿病。
糖尿病：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病, 系胰岛素绝对不足或相对不足，以高血糖症为 基本生化特点。同时伴有糖、脂类、蛋白质、 水、电解质和酸碱平衡紊乱，甚至出现一系列 并发症如眼、肾的微血管病变及神经病变等。
糖尿病的诊断标准
症状＋随机血浆葡萄糖≥ 11.1mmol/L,或空 腹血浆葡萄糖≥ 7.0mmol/L。症状不典型者 需另一天再次证实。随机血糖是指一天中的任 一时间采血测得的血糖浓度。