糖酵解中间产物的鉴定
糖酵解中间产物的鉴定实验报告
糖酵解中间产物的鉴定实验报告
糖酵解是生物体内产生能量的重要途径之一，而在这一过程中产生的中间产物
对于细胞代谢和生物体健康具有重要意义。
本实验旨在通过酵母菌进行糖酵解实验，鉴定其产生的中间产物，以期对糖酵解过程有更深入的了解。
首先，我们选取了酵母菌作为实验材料，因为酵母菌是一种常见的真核生物，
其糖酵解途径与人类细胞的相似度较高，具有代表性。
接着，我们在实验室条件下培养酵母菌，并将其置于含有葡萄糖的培养基中，促使其进行糖酵解过程。
在培养过程中，我们定期取样，并通过色谱质谱联用技术对样品进行分析。
实验结果显示，在酵母菌进行糖酵解的过程中，产生了多种中间产物，其中包
括乳酸、乙醇、丙酮等物质。
乳酸是糖酵解过程中的一个重要中间产物，其生成与细胞内氧化还原状态的变化密切相关。
而乙醇则是另一种常见的糖酵解产物，其生成与酵母菌在缺氧条件下进行酵解过程有关。
此外，丙酮作为糖酵解的重要中间产物，其生成与酵母菌细胞内的酶系统密切相关。
通过对糖酵解中间产物的鉴定，我们深入了解了糖酵解过程中产生的多种中间
产物，这些产物在细胞代谢和生物体健康中起着重要作用。
同时，本实验结果也为研究糖酵解途径提供了重要的实验数据，为进一步探究糖酵解过程提供了参考。
总之，本实验通过对酵母菌进行糖酵解实验，成功鉴定了糖酵解过程中产生的
多种中间产物，为研究糖酵解途径和细胞代谢提供了重要的实验数据和理论依据。
这对于深入了解生物体内能量代谢途径，以及对疾病发生发展的机制具有重要意义。
希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考和借鉴。
第9章 糖代谢(糖酵解中间产物)
6-磷酸葡萄糖
OH HO
+ Pi
OH OH
Glucose-6-
葡萄糖Glucose
phosphate
葡萄糖异生作用的特点：
1）与糖酵解不同的是，葡萄糖异生作用克服 了糖酵解的不可逆过程。
2）由于丙酮酸羧化酶在线粒体，所以葡萄糖 异生作用在两个区域完成。
3）每使2分子丙酮酸逆转生成1分子葡萄糖， 需要消耗6个高能磷酸键和2个NADH.
在低等生物中，糖酵解是呼吸作用的主要 途径，不需要氧参与，因而称为发酵 （fermentation)。
二. 糖酵解途径 Glycolysis pathway
1).
己糖激酶
O
OH H2C
O
OH OH
+ ATP
OH
OH
Glucose
hexokinase
Mg++
O H2C
P OH OH
O
OH OH
+ ADP
第九章 糖代谢
Chapter 9 Saccharide metabolism
呼吸作用(Respiration):是在生活细胞内 进行的氧化有机物质并释放能量的生理生化 过程.
呼吸基质(Respiratory substrate):呼吸作 用所用的氧化底物.
高等生物的呼吸作用是个非常复杂的过 程。整个过程包括糖酵解，三羧酸循环，氧 化磷酸化等过程。
diphosphate
H2C O H
HO CH
phosphodiesterase
第9章 糖代谢(糖酵解中间产物)
2. 糖酵解的调节 regulation of glycolysis
本途径有三个调节部位
1.己糖激酶Hexose kinase: 此酶活性受6-磷酸葡萄糖的抑制.此酶是变构
酶,6-磷酸葡萄糖是它的负调节物. 2.磷酸果糖激酶Fructose phosphate kinase:
此酶是变构酶,其活性受两种物质的调节,ATP 含量高时,抑制此酶活性;柠檬酸含量高时,也抑 制此酶活性.
OH
OH
Glucose-6-phosphate
G-6-P
此反应不可逆. *
O
O
O P OH
O P OH
H2C
OH
O
磷酸己糖异构酶 H2C
HO O
2).
phosphohexose isomerase
CH2 OH
OH
OH
OH
HO OH
OH
HO
Glucose-6-phosphate
Fructose-6-phosphate
CH3
Hydroxyethyl TPP
Lipoate 硫辛酸
硫辛酸乙酰转移酶
Lipoate
transacetylase
SH
O S-C-CH3
CH2-CH2-CH- (CH2 ) 4-COOH
+ TPP
Dihydrolipoate acetyl complex 二氢硫辛酸乙酰复合物
3) O
SH
S-C-CH3
6-磷酸葡萄糖
OH HO
+ Pi
OH OH
Glucose-6-
葡萄糖Glucose
phosphate
葡萄糖异生作用的特点：
1）与糖酵解不同的是，葡萄糖异生作用克服 了糖酵解的不可逆过程。
糖酵解
山东大学实验报告2013年5月19 日姓名陈少坤系年级 2011级生科2班同组者张劲松科目生化实验题目肌糖原酵解一、实验目的1. 学习鉴定糖酵解作用的原理和方法。
2. 了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。
3. 了解有关组织代谢实验应注意的一些问题二、实验原理在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行。
本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。
肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应，最后转变成乳酸的过程。
肌肉组织中的肌糖元首先磷酸化，经过己糖磷酸酯、丙糖磷酸酯、甘油磷酸酯、丙酮酸等一系列中间产物，最后生成乳酸。
该过程可综合成下列反应式：1/n(C6H10O5)n+HO 2CH3CHOHCOOH2肌糖元的酵解作用是糖类供给能量的一种方式。
当机体突然需要大量的能量，而又供氧不足（如剧烈运动时），则糖元的酵解作用可暂时满足能量消耗的需要。
在有氧条件下，组织内糖元的酵解作用受到抑制，而有氧氧化则为糖代谢的主要途径。
糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。
在用肌肉糜时，必须在无氧条件下进行；而用肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。
因为催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用（即三羧酸循环和氧化呼吸链）的酶系统，则集中在线粒体中。
糖元或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成来观测。
在除去蛋白质与糖后，乳酸可以与硫酸共热便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫罗兰色物质，根据颜色的显现加以鉴定。
该法比较灵敏，每毫升溶液含1——5ug乳酸即给出明显的颜色反应。
若有大量糖类和蛋白质等杂质存在，则严重干扰测定，因此实验中应尽量除尽这些物质。
另外，测定时所用的仪器应严格地洗干净。
三、实验用品试剂1. 材料：鸡或兔的肌肉糜。
2. 试剂：1) 0.067mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)；2) 对羟基联苯试剂：称取对羟基联苯1．5g溶于100mL 0.5％NaOH中，配成1．5％的溶液。
实验九糖酵解中间产物的鉴定
生化实验室（11）——糖酵解中间产物的鉴定
实验的原理：利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。
硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。
然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比。
产生糖酵解，当然需要生物了，我们用了酵母。
三支试管，1号管：加入了三氯醋酸，破坏了全部的酶，所以不可进行糖酵解；2号管，放进碘乙酸，对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的起抑制作用，3号管，什么都不加。
放进37℃中，然后就可以看到，3号管发酵得最爽。
泡泡是CO。
2
然后为了验证“3-磷酸甘油醛不再向前变化而积累”，所以我们再对2、3号管进行处理。
步骤不说了，看最后的结果，说明了2号管的3-磷酸甘油醛最多，也就是证明了碘乙酸的抑制剂作用。
做这些实验不是为了实验，而是为了学到东西；通过这个实验，我们得到了两个很爽的想法：
1.碘乙酸的抑制剂作用；
2.原来在糖酵解的分解循环中，中间产物有3-磷酸甘油醛；
这对于我们学习与研究糖酵解很有益处！。
糖酵解中间产物磷酸丙糖鉴定实验课的研究性教学
糖酵解中间产物磷酸丙糖鉴定实验课的研究性教学作者：杨生妹魏万红陈云来源：《教育教学论坛》2016年第51期摘要：本文研究以学生为主体，促进学生自主学习的教学方式，设计新的实验方案，使学生更细致地观察实验现象，深入了解实验原理，巩固已学基本知识，拓展背景知识。
关键词：糖酵解；磷酸丙糖鉴定；研究性教学中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）51-0265-02糖酵解途是存在于所有生物体中的非常保守的代谢途径，因而该途径成为动态生物化学部分最重要的教学内容。
与此相匹配的实验课教学内容糖酵解中间产物磷酸丙糖的鉴定，因为涉及到有机化学课程中糖的颜色反应、生物化学课程酶的活性中心、必需基团、抑制剂及蛋白质变性剂等内容而成为一个操作相对容易但涉及面很多的实验。
因此选定此实验内容作为研究性教学，既可以巩固很多已学的基础知识，也有利于开阔新的视野。
现将该实验课研究性教学的过程、特点、意义及学生收获总结如下。
一、教学过程及特点1.选定实验内容，学生分派任务。
因为研究性教学强调调动学生的主观能动性[1]，所有学生所做的实验相同，但分别负责不同实验结果及原理的介绍及解释。
2.进行新的实验设计，细化实验现象，深化实验原理。
在原先的讲义中[2]，实验共分三个组（表，原1、原2及原3）。
实验步骤为：取干酵母粉约2g于烧杯中，加10ml去离子水，用玻棒搅匀，使其成为混悬液，并严格依次添加试剂（表）。
充分反应后，用2，4-二硝基苯肼使丙糖显色。
在本次教学过程中，实验进行了新的分组（表，新1-5）。
从表中可以看出，新的实验设计比原先多了两个组，其实就是将原先的第一组（原1）分成了三个组（新1、新2及新3）。
新4同原2，新5同原3。
3.在实验结束后，每组派代表进行汇报，所有同学进行讨论。
二、教学意义及学生收获1.拓展背景知识，了解研究意义。
汇报阶段，第一组代表回顾糖酵解途径的发现史、讲解糖酵解的关键步骤。
糖酵解中间产物的鉴定
糖酵解中间产物的鉴定糖酵解是生物体内一种常见的代谢途径，它将糖分子转化为能量和其他有机物，是维持生命活动所必需的。
在这个过程中，会产生许多中间产物，这些中间产物对于研究糖酵解的机理和调控有着重要的意义。
本文将介绍如何鉴定糖酵解中间产物。
一、什么是糖酵解？糖酵解是一种将葡萄糖或其他六碳糖分子转化为能量和其他有机物的代谢途径。
它包括两个阶段：第一个阶段是磷酸化阶段，也称为前处理反应，它将六碳糖分子转化为两个三碳的中间产物；第二个阶段是氧化还原反应阶段，也称为收获反应，它将三碳中间产物进一步代谢为能量和其他有机物。
二、哪些是糖酵解的中间产物？在磷酸化阶段中，六碳糖分子首先被转化为果糖-1,6-二磷酸（fructose-1,6-bisphosphate，简称F1,6BP），然后被分解为两个三碳的中间产物：磷酸甘油醛（glyceraldehyde-3-phosphate，简称G3P）和二磷酸甘油（dihydroxyacetone phosphate，简称DHAP）。
在氧化还原反应阶段中，G3P被进一步代谢为丙酮酸（pyruvate），丙酮酸是糖酵解的最终产物之一。
三、如何鉴定糖酵解中间产物？1. 比色法毛细管比色法是一种常用的方法，它可以快速、准确地测定磷酸甘油醛和二磷酸甘油。
该方法利用了这两种化合物的吸收光谱特性，在可见光波长范围内有明显的吸收峰。
通过测定样品在不同波长下的吸收值，可以计算出样品中这两种化合物的含量。
2. 色谱法色谱法是一种高效、灵敏的分离技术，可以将混合物分离成单个组分。
对于糖酵解中间产物的检测，常用气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）。
GC法可以测定丙酮酸、磷酸甘油醛和二磷酸甘油的含量，而HPLC法则更适用于测定F1,6BP的含量。
3. 质谱法质谱法是一种高分辨率、高灵敏度的分析技术，可以实现对糖酵解中间产物的精确测定。
利用质谱仪对样品进行离子化和碎片化，然后通过测定离子质量比来确定样品中各成分的含量。
实验四-离心技术及物质代谢实验
最大额定转速—— 一定的使用限度，使用一定次数或一
定时间后递减10%。
离心管
不锈钢和塑料离心管，管帽防止样品溢出。
离心操作的注意事项
使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡
离心管和其内容物，转头中绝对不能装载单数的管 子，当转头只是部分装载时，管子必须互相对称地 放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。
?将酵母液含有葡萄糖及糖酵解的全部酶在一定的介质中适宜的ph必要的金属离子等进行保温在酵母液中酶体系的作用下酵母液中原来含有的糖就进行酵解反应当反应进行到生成二分子磷酸丙糖进一步变化是在33磷酸甘油醛脱氢酶催化下进行的sh为33磷酸甘油醛脱氢酶的必需基团加入一碘醋酸可与此酶的sh起反应从而使酶失去活性酵解反应就停留在磷酸丙糖阶段
每个转头各有其最高允许转速和使用累计期限，使
用转头时要查阅说明书，不得过速使用。
装载溶液时，要根据各种离心机的具体操作说明进行， 根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管，有 的离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩出， 造成转头不平衡、生锈或被腐蚀;而制备性超速离心机 的离心管，则常常要求必须将液体装满，以免离心时 塑料离心管的上部凹陷变形。
糖酵解的反应过程见下图：
磷酸二 羟丙酮 ATP ADP F-1,6-BP F-6-P G-6-P G 醛缩酶 PFK-1 异构酶 己糖激酶 ATP ADP 磷酸甘油 酸激酶 ATP H2O ADP NADH+H ADP ATP LDH 乳酸
+
异构酶
3-磷酸 甘油酸 变位酶
1,3-二磷酸甘油酸
3-磷酸甘油 醛脱氢酶 Pi NAD
加入物（ul）
血清 甘油三酯标 准液
测定管Leabharlann 10 -标准管10
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二．教案与讲稿一、教案
二、讲稿
[实验目的]
1.通过本实验对糖酵解过程进一步加深理解。
2.初步了解一碘醋酸对酶的抑制作用。
3.通过一碘醋酸和硫酸肼的作用，了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢的意义。
[实验原理]
[实验步骤]
1.肝匀浆的制备
取兔肝3g剪碎，在研钵中先加Krebs-Ringer缓冲液2ml，待研匀后再加5ml缓冲液。
[讨论]
第1管中，水浴之前已加有三氯醋酸，可使参与糖酵解酶变性。
但三氯醋酸与肝匀浆比例不当，不能使所有的酶变性，糖酵解过程中各种酶有少量活性，故必然有各种中间代谢物的生成，其中包括磷酸二羟丙酮与3-磷酸甘油醛。
由于加有一碘醋酸与硫酸肼，故这二种中间代谢物堆积。
故本管中有成腙反应，参与成腙反应的磷酸丙糖少量堆积。
第2管中，水浴之前未加有三氯醋酸，各种酶处在适宜条件下。
但水浴之前加有一碘醋酸与硫酸肼，故糖原及磷酸丙糖之前步骤的中间代谢物将在实验过程中进行不完全的糖酵解，使磷酸丙糖堆积。
故本管中有成腙反应，参与成腙反应的磷酸丙糖堆积。
第3管中，水浴之前未加有三氯醋酸、一碘醋酸、硫酸肼，各种酶处在适宜条件下，糖原及各中间代谢物均在实验过程中发生彻底的糖酵解，转变成终产物。
故本管无成腙反应。
[结论]
3-磷酸甘油醛与磷酸二羟丙酮是糖酵解的中间产物。
[注意事项]
1.操作中应严格按表加样，避免溶液的错加、多加、漏加。
2.用吸量管及吸管加样多种不同液体时，应在每次加样另一种液体之前用清水
洗净。
3.每次水浴前必须摇匀。
4.过滤的方法。