实验二 凯氏定氮法测定牛奶中蛋白质的含量知识讲解
牛奶中蛋白质含量的测定---- 凯氏定氮法
牛奶中蛋白质含量的测定---- 凯氏定氮法一：实验目的：掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理学会凯氏定氮法的操作技术二：实验原理：◆蛋白质的含氮量较恒定，一般为16%，上下略有浮动◆N/16%=N*6.25=蛋白质的含量◆样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。
然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收，再以标准盐酸溶液滴定，测出释放的氨含量，并计算氮素含量，再乘以6.25即为蛋白质的含量。
◆整个过程分三步：消化、蒸馏和吸收、滴定1：消化：蛋白质+ H2SO4 →（NH4)2SO4 + SO2↑+ CO2↑+ H2O瓶颈45度角倾斜2：蒸馏：消化液+ 氢氧化钠加热蒸馏，放出氨气2NaOH＋(NH4)2SO4＝2NH3 ↑＋Na2SO4 ＋2H2O3：吸收与滴定（1）用4%硼酸吸收（2）用盐酸标准溶液滴定（3）混合指示剂（甲基红—溴甲基酚绿混合指示剂）指示剂：红色———→绿色———→红色（酸）吸收（碱）滴定（酸）3NH3 + H3BO3→(NH4)3BO3(NH4)3BO3+ 3HCl →3NH4Cl + H3BO3三：实验步骤1、消化：准确量取牛奶0.5mL，移入干燥的凯氏烧瓶中（勿粘附在瓶壁上），加入0.2g硫酸铜、0.3g硫酸钾、10mL浓硫酸，小心摇匀，于通风橱内消化（先小火，待炭化完全后，加大火力至溶液呈蓝绿色），冷却至室温，定容至25mL。
同时消化一份空白试剂为对照。
2、蒸馏、吸收◆取40mL硼酸溶液于锥形瓶中，加2d混合指示剂，置于冷凝管下端，为接受瓶。
◆量取5mL样品消化液由加料口加入反应室，用5mL蒸馏水冲洗加料口，再加入40%NaOH10mL（溶液呈蓝褐色），不要摇动，立即封口。
◆夹紧缓冲管下口，开始蒸馏，当接收瓶溶液颜色变化时，继续蒸馏3-5min，下降接收瓶，使硼酸液面离开冷凝管口，继续蒸馏1min，用蒸馏水淋洗浸入硼酸的管外壁，移出接收瓶，滴定。
实验二_蛋白质含量的测定-凯氏定氮法1
实验二_蛋白质含量的测定-凯氏定氮法1一、实验原理蛋白质是生物体内重要的营养成分，因此测定样品中蛋白质含量是生物学领域中的一项基础性工作。
凯氏定氮法是测定蛋白质含量的一种常用方法。
由于蛋白质中氮元素的含量较高，因此凯氏定氮法以氮元素计算蛋白质含量，具有简便、准确、重现性好等特点，广泛应用于蛋白质含量的测定中。
该法的基本原理是：将待测样品中蛋白质水解后，将产生的氨基酸再通过氧化还原反应以生成气态氨，利用碱性铜离子氧化氨生成蓝色化合物，蓝色化合物的浓度与样品中氮的含量成正比，从而计算出样品中蛋白质的含量。
二、实验仪器和试剂1. 仪器：水浴器、移液器、分析天平。
2. 试剂：包括0.1mol/L NaOH、1% CuSO4、1% KNaC4H4O6、1% Na2SO4、 Na2CO3和测定氯离子的盐酸铵铁Ⅲ溶液等。
三、实验步骤1. 准备样品：首先将待测样品去除水分，将10mg的样品放入烘箱中加热到60℃，持续4h使其干燥。
取出后冷却，称取约10mg-20mg样品，转移到干净、干燥的燃烧器中。
2. 水解：加入3ml的6mol/L HCl，进行加热水解。
将燃烧器放到水浴器中，加入适量的水，然后用酒精灯或燃气灯加热至沸腾。
持续水解1h，注意不要使燃烧器干燥，需要时加入适量的水。
3. 去除氨：过滤水解液，将滤液倒入容量瓶中，并加入足量的NaOH溶液，使pH值达到9-10。
再加入10ml的Na2SO4溶液，混匀。
然后将瓶口拔开，将瓶口放在水浴器中并加入适量的NaOH溶液，使瓶内的氨气完全挥发，待液面稳定后用盖子盖好。
4. 确定还原态铜离子的数量：取一定量的0.1mol/L NaOH溶液，加入CuSO4和KNaC4H4O6，混匀后加入约1g的Na2CO3，加水定容，制成标准CuSO4溶液。
5. 滴定：取出约5ml水解液，放入锥形瓶中加清水至刻度线，加入50μl的盐酸铵铁Ⅲ溶液，混匀。
用标准CuSO4溶液滴定至液体颜色由黄变蓝。
凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项
凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项
凯氏定氮法是一种常用的检测蛋白质含量的方法，也被广泛应用于奶制品行业。
在奶粉生产中，蛋白质的含量是影响奶粉品质的重要因素之一。
因此，采用凯氏定氮法对奶粉中蛋白质含量进行检测和质量控制非常必要。
本文将介绍凯氏定氮法在奶粉中检测蛋白质的应用以及注意事项。
一、凯氏定氮法原理
凯氏定氮法是以蛋白质中的亮氨酸和脯氨酸为基础，通过催化剂作用使蛋白质中的氮原子被氧化成氨，进而转化为氨基氮，再以铜离子为催化剂，将氨基氮还原成亚铜离子。
通过比色法或电位滴定法测定亚铜离子的含量，计算出蛋白质含量。
该方法具有准确、简单、灵敏等特点，被广泛应用于生物化学、食品科学等领域。
二、凯氏定氮法在奶粉中的应用
1. 样品处理要彻底。
奶粉在生产过程中易受到各种污染，应保持样品卫生和细心处理样品。
2. 操作要规范。
操作过程中要注意按操作规程处理，仪器设备要经过严格的校准。
3. 标准品的准备要充分。
标准品的准备要求较高，必须通过标准品验证后再进行蛋白质含量分析。
4. 良好的实验室管理。
合理的实验室布局、管理及仪器设备养护、维护是保持精度可靠性的前提。
5. 实验操作人员要熟练掌握相关技术，具备一定的实验经验和操作技能。
总之，凯氏定氮法是目前奶粉制造工业中广泛采用的一种检测蛋白质含量的方法。
在奶粉制造和质量控制中，准确、快速、准确的测定奶粉中蛋白质含量是保证产品质量的一个重要环节。
同时，操作规范、维护仪器设备、常规检验、标准品准备以及实验室管理都是确保实验结果准确可靠的必要前提。
凯氏定氮法测蛋白质
凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量一、目的与要求1.学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理2.掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。
二、实验原理蛋白质是含氮的化合物。
食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。
因为食品中除蛋白质外，还含有其他含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。
三、仪器与试剂1.仪器微量定氮蒸馏装置2.试剂硫酸铜；硫酸钾；硫酸；硼酸溶液（20g/L）；氢氧化钠溶液(400g/L)；0.01mol/L 盐酸标准溶液；混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合；黄豆粉四、实验步骤1.样品消化称取大豆粉约1.0g，加入0.2g硫酸铜和3g硫酸钾，移入干燥的100ml凯氏烧瓶中，稍摇匀加入20ml浓硫酸，将瓶置于石棉网上使用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20ml水，放冷后，无损地转移到100ml容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。
2.定氮装置的检查与洗涤检查微量定氮装置是否装好。
在蒸汽发生瓶内装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠或沸石以防止暴沸。
测定前定氮装置洗涤2~3次：从样品进入口加水适量通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭上方的螺旋夹，使反应管中的废液倒吸流到反应室外层，打开下方的夹子由橡皮管排除，如此数次，即可使用。
3.碱化蒸馏量取硼酸试剂20ml于锥形瓶，加入混合指示剂2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在上方螺旋夹关闭，下方夹子开启的状态下，准确吸取10.0ml样品消化液，由小漏斗流入反应室，并以1适量蒸馏水洗涤样口流入反应室，塞紧棒状玻璃塞。
凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项
凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项凯氏定氮法是一种常用于检测食品中蛋白质含量的方法，它的原理是通过测定样品中的氮含量来间接推断样品中的蛋白质含量。
以下是凯氏定氮法在奶粉中蛋白质质量控制及注意事项方面的相关内容。
奶粉是常见的婴幼儿奶制品，其中的蛋白质含量对于婴儿的健康发育至关重要。
通过凯氏定氮法检测奶粉中的蛋白质含量，可以有效控制奶粉的质量，确保其符合国家标准和婴儿的营养需求。
1. 样品的准备：首先需将奶粉样品充分研磨，以保证样品的均匀性和颗粒的细小化。
2. 氮元素的提取：将研磨后的样品与适量的硫酸和硫酸钠混合，并进行消解（加热），使样品中的有机氮转化为无机氮。
3. 滴定反应：将消解后的样品用硫酸前水稀释稀释，加入硼酸作为缓冲剂，然后滴定加入的标准硝酸钠溶液。
4. 数据计算：用滴定所用标准硝酸钠溶液的体积减去空白对照的滴定体积，得到滴定值。
根据标准曲线或计算公式，将滴定值转化为样品中的蛋白质含量。
1. 样品的选择与保存：应从各个部位采样，以保证样品的代表性。
样品应保存在干燥、密封的容器中，避免阳光直射和潮湿环境。
2. 操作条件的控制：在凯氏定氮法的操作中，控制样品的消解温度、滴定剂的浓度和滴定速度等条件，以免对结果产生干扰。
3. 校准曲线的制备：为了准确反应样品中的蛋白质含量，需要制备标准样品并建立校准曲线。
4. 实验仪器的校准与维护：定期对实验所需的仪器进行校准和维护，以保证仪器的精确度和准确性。
5. 重复测试与结果验证：为了提高结果的可靠性，建议对同一个样品进行多次测试，并与其他方法进行结果验证。
总结：通过凯氏定氮法检测奶粉中的蛋白质含量，可以确保奶粉的质量符合标准和需求。
在进行凯氏定氮法测试时，应注意样品的选择、保存和处理条件的控制，同时要建立校准曲线、校准仪器，并进行结果的重复测试和验证。
凯氏定氮法测定蛋白质的含量
凯氏定氮法测定蛋白质的含量一、原理：有机含氮化合物与浓硫酸共热消化，氮转化为氨，再与硫酸结合成硫酸铵。
硫酸铵与强碱反应，放出氨。
将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中，再用标准碱溶液进行滴定。
根据测得的氨量，计算样品的总氮量。
二、试剂与材料：浓硫酸、硫酸钾－硫酸铜粉末（称取80g硫酸钾和20g硫酸铜（五水），0.3g二氧化硒研细混合）、30％氢氧化钠溶液、2％硼酸溶液、0.01M标准盐酸、混合指示剂（田氏指示剂）储存液（取50ml0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1％甲基红溶液混合，储存于棕色瓶中备用。
此指示剂在PH5.2为紫色；PH为5.4为暗灰色或灰色；PH5.6为绿色；变色点为PH5.4）、硼酸－田氏指示剂混合液（100ml2％硼酸溶液，滴加约1ml田氏指示剂，摇匀后，溶液呈紫红色）、蛋白质样品、容量瓶、吸管、凯氏烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、微量滴定管、电炉浓硫酸500ml硫酸钾200g硫酸铜200g硼酸50g盐酸200ml甲基红0.5g溴甲酚绿0.5g三、操作方法1、样品处理：固体样品，应在105℃干燥至恒重。
液体样品可直接吸取一定量，也可经适当稀释后，吸取一定量进行测定，使每一样品的含氮量在0.2－1.0mg范围内。
2、消化：取一定量样品，于50ml干燥的凯氏烧瓶内。
加入300mg硫酸钾－硫酸铜混合粉末，再加入3ml浓硫酸。
用电炉加热，在通风厨中消化，瓶口加一小漏斗。
先以文火加热，避免泡沫飞溅，不能让泡沫上升到瓶颈，待泡沫停止发生后，加强火保持瓶内液体沸腾。
时常转动烧瓶使样品全部消化完全，直至消化液清澈透明。
另取凯氏瓶一个，不加样品，其它操作相同，作为空白试验，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，以对样品进行校正。
3、蒸馏：将微量凯氏蒸馏装置洗涤（先用水蒸气洗涤）干净。
将凯氏烧瓶中的消化液冷却后，全部转入100ml的容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。
吸取20ml稀释消化液，置于蒸馏装置的反应室中，加入10ml30％氢氧化钠溶液，将玻璃塞塞紧，于漏斗中加一些蒸馏水，作为水封。
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法测定蛋白质含量简介凯氏定氮法（Kjeldahl method）是一种常用的测定蛋白质含量的方法，它通过将样品中的有机氮转化为氨，然后将氨转化为氨基氮，再由氨基氮计算得出蛋白质的含量。
这个方法的优点是稳定可靠，适用于各种类型的样品。
实验原理凯氏定氮法的实验原理如下：1.样品预处理：将待测样品进行预处理，去除样品中的非氮有机物。
这样可以确保凯氏定氮方法只测定到蛋白质中的氮。
2.消化反应：将预处理后的样品与硫酸相结合，加热至沸腾。
在这个过程中，有机氮将被转化为氨。
3.碱化反应：将消化后的样品中的硫酸中和，加入过量的氢氧化钠溶液，使样品呈碱性。
4.蒸馏捕收：将碱化后的样品进行蒸馏，捕集捕集样品中的氨。
5.滴定：将捕集到的氨溶液与酸反应，使用盐酸或硫酸等强酸进行滴定，直至中和反应结束，测定出反应过程中消耗的酸的体积。
6.计算：根据滴定所消耗的酸的体积，计算出样品中的氨的量，再根据氨和蛋白质含氮的摩尔比例，计算出样品中蛋白质的含量。
实验步骤以下是凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验步骤：1.准备样品：根据实验需要，准备待测样品。
样品的选择应根据实验目的和样品的特性进行。
2.样品预处理：将样品经过细碎、研磨等处理，去除样品中的非氮有机物。
3.消化反应：将预处理后的样品与浓硫酸相结合，加热至沸腾。
消化时间一般为2小时。
4.碱化反应：将消化后的样品中的硫酸中和，加入过量的氢氧化钠溶液，使样品呈碱性。
5.蒸馏捕收：将碱化后的样品进行蒸馏，捕集捕集样品中的氨。
6.滴定：将捕集到的氨溶液与酸反应，使用盐酸或硫酸等强酸进行滴定，直至中和反应结束。
7.计算：根据滴定所消耗的酸的体积，计算出样品中的氨的量，再根据氨和蛋白质含氮的摩尔比例，计算出样品中蛋白质的含量。
实验注意事项1.在进行样品消化时，必须控制好加热温度，避免样品的溢出和烧焦。
2.在进行滴定时，应注意控制滴液的速度，避免过量的酸滴入。
3.实验过程中需注意个人安全，避免触及强酸和强碱。
凯氏定氮法测定牛奶中蛋白质的不确定度分析
【读者园地】〔文章编号〕100428685(2004)032373202凯氏定氮法测定牛奶中蛋白质的不确定度分析陈辉,刘振林,张忠义(南京市疾病预防控制中心,江苏 210003)〔中图分类号〕R155.5+7 〔文献标识码〕C 采用凯氏定氮法测定消毒牛奶中蛋白质的含量,其测量不确定度来源于样品称量、消化、定容、蒸馏、稀释标准溶液及滴定等过程。
通过对各个不确定度分量的计算合成,找出影响测量不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估,最终给出样品中蛋白质含量的标准不确定度及扩展不确定度。
1 原理消毒牛奶与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解的氨与硫酸结合成硫酸铵。
然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后,再以盐酸标准溶液滴定,根据盐酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质的含量。
2 测定方法简述取样5g左右消化,消化完全后加入蒸馏水至100m l定容,取5.00m l蒸馏,用0.01m olΠL盐酸标准溶液滴定馏出液至反应终点。
3 测量数学模型 根据公式:X=(V-V0)×C HC L×V10V100×0.014×6.38m×V5V100×100(1)其中:X-样品中蛋白质的含量,gΠ100g;V-样品消耗盐酸标准溶液的体积,ml;V0-试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积,ml;C H L-盐酸标准溶液的浓度,m olΠL;V10-用10ml移液管移取盐酸标准溶液的体积,ml;V100-100ml容量瓶的体积,ml;V5-用5ml移液管移取样品消化液的体积,ml;m-样品的质量,g;0.014-1m olΠL盐酸标准溶液1ml相当于氮的克数;6.38-乳制品由氮转化成蛋白质的系数。
由于各分量相互独立,由(1)式得X的相对合成标准不确定度的估算为:u c(X) X =u(rep)rep2+u(V-V0)V-V02+u(C HC L)C HC L2+u(V10)V102+2u(V100)V1002+u(V5)V52+u(m)m2(2)其中:u c(X)-X的合成标准不确定度,gΠ100g;u(rep)-重复实验的标准不确定度;u(V-V0)-样品扣除试剂空白后消耗盐酸标准溶液带来的标准不确定度,ml;u(C HC L)-盐酸标准溶液浓度的标准不确定度,m olΠL;u(V10)-用10ml移液管移取盐酸标准溶液带来的标准不确定度,ml;u(V100)-用100ml容量瓶定容带来的标准不确定度,ml;2--使用两次100ml容量瓶定容;u(V5)-用5ml移液管移取样品消化液带来的标准不确定度,ml;u(m)-样品称量带来的标准不确定度,g。
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实验二凯氏定氮法测蛋奶定牛白质的含中量
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实验二凯氏定氮法测定牛奶中蛋白质的含量
一、实验目的与要求
1. 掌握半微量凯氏定氮法的原理。
2. 熟悉利用半微量凯氏定氮法测定干酵母片中蛋白质含量的操作方法。
二、实验原理
蛋白质是含一定量氮的有机化合物，蛋白质样品在凯氏烧瓶中经过浓HSO消化后，有机物炭化生成碳，碳将硫酸还原为SO，本身则变成CO，2422SO使N还原为NH，本身则氧化为SO而消化过程中生成H，又加速了NH332232O和SO溢出，而NH则与HSO结合成H的形成。
在反应过程中，生成的432223）SO存在溶液中，加入NaOH并蒸馏，使NH溢出，用HPO吸收NH（334423后，以标准酸溶
液滴定，根据标准酸溶液消耗的量计算样品中的含氮量，从而可以折算出蛋白质含量。
三、实验材料、试剂与仪器
1. 材料与试剂
SO、KSO、CuSO·5HO、NaOH、HCl、HPO、甲基红、乙醇、H浓44244232溴甲酚绿、牛奶、定量滤纸等。
40 %NaOH 溶液：40 g NaOH 溶于100 mL水中；
0.05 mol/LHCl标准液：4.2 mL HCl 溶于1000 mL 水中，碳酸钠法标定盐酸；
2 % HBO溶液：HBO 2 mL 溶于100 mL 水中；3333SO 150 g ，CuSO·5HO 10 g 仔细混匀研磨。
K加速剂：2442甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：甲基红溶于乙醇配成0.1 % 乙醇溶液，溴甲酚绿溶于乙醇配成0.5 % 乙醇溶液，两种溶液等体积混合，阴凉处保存（保存期三个月以内）。
2. 仪器
消化管、小漏斗、研钵、玻璃珠、酸式滴定管、锥形瓶、天平、凯氏定氮仪等。
四、实验方法与步骤
1. 样品消化
1）牛奶5 mL置于消化管内，加入加速剂5 g，并沿烧瓶壁缓缓加入20 mL浓硫酸，加入玻璃珠2~3粒，摇动烧瓶使全部样品浸没于硫酸。
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2）消化管放在消化炉支架上，套上毒气罩，压下毒气罩锁住二面拉钩。
3）把支架连同装有试样的消化管一起移至电热炉上保持消化管在电炉中心，设定温度在420 ℃保持消化管中液体连续沸腾，沸酸在瓶颈部下冷凝回流。
待溶液消煮至无微小碳粒、呈蓝绿色时继续消煮5 min左右。
4）消化结束，将支架连同消化管一同移回消化管托底上，冷却至室温。
注意，在冷却过程中，毒气罩必须保持吸气状态（切忌放入冷水中冷却）放置，防止废气溢出。
2. 样品蒸馏
1）打开自来水给水龙头，使自来水经过给水口进入冷凝管。
注意水流量以保证冷凝管起到冷却作用为止。
2）开总电源开关，待红色指示灯亮起，按一下汽按钮待蒸汽导出管放出蒸汽，按消除按钮停止加热。
3）在蒸馏导出管托架上，放上已经加入适量（15 mL左右）的接受液（硼酸和混合指示剂）的锥形瓶。
抬起锥形瓶支架使蒸馏导出管的末端浸入接受液内。
4）在消化完全冷却后的消化管内，逐个加入10 mL左右蒸馏水稀释样品。
5）向下压左侧手柄，将消化管套在防溅管密封圈上，稍加旋转使其保持接口密封，拉下防护罩。
6）按一下蒸汽按钮，开始蒸馏，到时或到量时自动停止。
用洗瓶将蒸馏水冲洗接收，取下锥形瓶。
7）加碱：按一下碱按钮，NaOH溶液量必须至蒸馏液碱性颜色变黑为止。
3. 滴定与计算
吸收氨后的吸收液，用标定后的盐酸溶液进行滴定，溶液由蓝绿色变为灰紫
色为滴定终点。
(V?V)?C?0.014?K12粗蛋白质%=?%100'V?W?V
——样品时消耗酸标准溶液的体积，mL；V式中：2V——滴定空白时消耗酸标准溶液的体积，mL；1V'——试样消解液蒸馏用体积，mL；
V——样品分解液总体积，mL；
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C——酸标准溶液浓度，mol/L；
K——氮换算成粗蛋白质的系数，牛奶为；
W——样品质量，g；
0.0140——氮的毫克当量数。
五、思考题
1. 能否使用碱溶液进行滴定，应如何设计实验？
2. 凯氏定氮法是否适用于所有含氮化合物的测定？
3. 何谓样品消化？在定氮仪的反应室内将发生什么化学反应？
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