人类免疫缺陷病毒检验
血清人类免疫缺陷病毒抗体检测结果分析及临床意义
Ｅ３ 叶 应 妩 ， 毓 三 ， 子 瑜 ， ． 国 临 床 检 验 操 作 规 程 ２ 王 申 等 全 Ｅ ． 版 ． 京 ： 南 大 学 出版 社 ，０ ６ ２ ５２ ６ Ｍ］ ３ 南 东 ２ ０ ：３ —３ ． Ｅ］ 张 静 ． ３ 大便 隐血 试 验 免 疫 法 与 化 学 法 检 测 和 比较 Ｅ］ 中 Ｊ． 华 现 代 内科 学 杂 志 ，０８ ５６ ：４ ． ２ ０ ，（ ） ５ １
的生 存 率 。值 得 注 意 的是 ， 测 时 两 种 方 法 不 可偏 废 ， 根 据 检 应 临床情况结合使用 ， 这样 才 能 提 高 消化 道 出 血 的检 出率 。还 应
注 意 大 便 是 固体 ， 区 域 性 节 段 ， 要 时 要 做 追 踪 性 试 验 。另 有 必 外 ， 化 道 肿 瘤 及 溃 疡 患 者 可 有 阶 段 性 的 少 量 出 血 ， 以 检 测 消 所
检 验 医学 与 临床 ２ １ ０ １年 １月 第 ８卷 第 ２期
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０ ３ ２ 和 ０ ４ ９ 。 结论 ＨＩ 的 感 染 率逐 年 上 升 。 对 高危 人 群 和 可 能 经 医 源性 途 径 传播 或 感 染 ＨＩ 的 患 者 进 ． ０ ． ５ Ｖ Ｖ 行 常 规 ＨＩ 抗 体 检 测 ， 尽 早 发 现 ＨＩ 感 染 并 防 止其 医 源 性传 播 和 医 疗 纠 纷 的 必要 措 施 。 Ｖ 是 Ｖ
人类免疫缺陷病毒检验
人类免疫缺陷病毒检验人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency vi-rus，HIY）又称艾滋病毒，是获得性免疫缺陷综合征即艾滋病（acpuired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，属逆转录病毒科（retroviridae）的慢病毒（lentivinrs）亚科，形态为典型的D病毒，主要通过性传播途径、血液传播途径和母婴传播途径传播。
HIV有HIV-1和HIV-2两种类型，目前在世界广泛流行的是HIV-1型。
HIV基因有高度的变异性，目前在全球流行的HIV-1毒株已出现3个组，即M 组、O组和N组，其中M组又分为A到J十个基因型。
HIV-2是逆转录病毒中的另一个病毒，也可引起人患上艾滋病，但症状多较HIV-1引起的为轻，HIV-2主要在西非国家流行，其与HIV-1在血清学上有一定的交叉反应。
艾滋病是以机会感染及局部肿瘤为特点的致死性传染病。
截止2000年底，我国累计报告HIV/AIDS22517例（AIDS880例），死亡496例，估计实际感染人数远超过已发现的感染者人数，加强艾滋病的预防与控制是我国以及全世界面临的一个紧迫的问题。
1 样本采集1.1血清（浆）样本1.1.1抗原、抗体检测静脉采血，血液样品应在l2h内做到：①送到初筛实验室；②分离出血清；③装入一干净试管内，盖上试管盖；④按标准编号贴上标签。
分离出的血清应立即进行筛查实验。
若因故不能立即检测，应将血清放置－20℃低温保存；无条件时亦可放置4℃，但不得超过3d。
检测后的血清应于－20℃或更低温保存，以用于确认实验。
1.1.2核酸检测使用EDTA抗凝血浆标本，抗凝后6h内分离血浆；如使用血清标本，则需在2h内分离血清，标本的保存应在－70℃下，并避免反复冻融。
1.2全血标本全血标本主要用于提取基因组核酸和病毒核酸，静脉取血后可于4℃下短期保存，如用于提取病毒RNA，则应在取血后尽快提取。
全国人类免疫缺陷病毒检测技术规范(2023年修订版)
全国人类免疫缺陷病毒检测技术规范(2023年修订版)引言本文档是全国人类免疫缺陷病毒（HIV）检测技术规范的修订版，旨在规范全国范围内HIV检测的质量和准确性，以提高HIV 感染者的早期发现和治疗。
1. 范围本技术规范适用于全国范围内所有医疗机构、疾病预防控制中心、实验室等单位进行HIV检测。
2. 术语定义- HIV：Human Immunodeficiency Virus，人类免疫缺陷病毒。
- HIV抗体：人体对HIV感染产生的免疫反应所产生的抗体。
- HIV抗原：HIV感染人体内HIV病毒产生的抗原。
- HIV核酸：HIV病毒的遗传物质（RNA）。
3. 检测方法3.1 HIV抗体检测- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV抗体检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
3.2 HIV抗原检测- HIV抗原检测可作为HIV感染早期诊断的辅助方法。
- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV抗原检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
3.3 HIV核酸检测- HIV核酸检测可作为HIV感染确认和病毒负载监测的方法。
- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV核酸检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
4. 质量控制4.1 检测设备- 检测设备应符合国家标准和相关法规的要求。
- 设备应定期进行校准和维护，确保其准确性和稳定性。
4.2 检测人员- 检测人员应具备相关专业知识和技能，经过专业培训并持有相关资质证书。
- 检测人员应定期参加质量控制和技术培训，保持技术能力和水平。
4.3 质量控制物质- 检测过程中应使用经国家质量控制中心认证的质控物质，以保证检测结果的准确性和可靠性。
人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书
人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书一、目的：规范人类免疫缺陷病毒抗体测定的标准操作程序，确保人类免疫缺陷病毒抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的人类免疫缺陷病毒抗体。
三、临床意义人类免疫缺陷病毒（俗称艾滋病病毒，英文名称是Human Immunodeficiency Virus，缩写为HIV）是一种能生存于人的血液中并攻击人体免疫系统的病毒。
HIV侵入人体后主要攻击的是一种带有CD4表面抗原的淋巴细胞（T4淋巴细胞），这种细胞是免疫系统的基本组成部分，HIV通过大量、不断地复制与释放，导致T4淋巴细胞大量死亡，使人体内T4淋巴细胞明显减少，感染者免疫功能遭到严重破坏，造成免疫缺陷，降低或失去对各种致病因素的抵抗能力，临床表现为各种机会性感染与肿瘤[1]。
有的发生神经系统病变或症状，可能与神经系统的机会性感染（弓形虫病、新隐球菌感染等）有关，同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。
最终，病人通常死于严重的感染和肿瘤[2]。
四、方法原理本试剂盒采用双抗原夹心法原理进行检测。
以HIV 抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5. 2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体诊断试剂盒(胶体金法)标准操作规程
人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗体诊断试剂盒（胶体金法）标准操作规程一. 预期用途本试剂盒定性检测人血清、血浆或者全血样品中可能存在的HIV-1/HIV-2抗体，作为HIV感染的辅助诊断方法。
二. 检测原理本试剂盒利用免疫层析原理，采用双抗原夹心法检测，在硝酸纤维膜上的检测区域包被HIV-1和HIV-2区段抗原，用胶体金标记同样含有的HIV-1和HIV-2区段的标记抗原，用抗HIV抗体作为对照线原料包被到硝酸纤维膜上形成对照线。
检测时，如果样品内还有HIV抗体时，样品中的HIV抗体可与纸条前段的“胶体金-抗原”结合，形成免疫复合物，复合物由于层析作用沿膜带移动，并在包被了抗原的检测区形成一条红色线，判为阳性；如果样品内不含有HIV抗体，检测区不会形成红色线，判为阴性。
三. 试剂1.生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司2.规格： 1人份/袋 10人份/盒3.试剂组成：测试卡、铝箔袋、干燥剂、说明书、样品稀释液。
测试卡主要成分：塑料卡、塑料底板、吸水滤纸、硝酸纤维膜（包括包被有HIV-1和HIV-2抗原的检测线和包被有抗HIV抗体的对照线），金垫（附着有胶体金标记的HIV-1和HIV-2区段抗原）。
四. 仪器加样器五. 样品要求：1、本试剂检测人血清、血浆或全血2、血清、血浆样品3日内检测的，置2-8℃冰箱保存；超过3日不检测的样品，应低温保存。
3、全血样品建议在采血后立即检测，不可长期放置后检测。
六. 检验方法：1、检测血清或血浆样品，用加样器取80ul血清或血浆样品，缓慢滴加在测试卡加样端中心。
2、检测全血样品：在测试卡加样端中心滴加1滴（约40ul）全血样品，后立即滴加1-2滴（约40-80ul）样品稀释液。
七. 质量控制：出现阳性对照线实验结果有效，不出现阳性对照线实验结果无效。
八. 参考值：加样完毕，室温放置30分钟观察结果，出现两条红色线为阳性，只出现一条对照线为阴性。
九. 检验结果的解释阴性：只出现一条对照线阳性：出现两条红色线。
人类免疫缺陷病毒抗体检测规程
人类免疫缺陷病毒抗体检测规程
一、操作步骤：
1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子
水20倍稀释至1000ml备用。
4、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设
阴性对照3孔，阳性对照一型、二型各一孔，空白对照一孔。
5、加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100ul。
6、温育：覆盖黏胶纸，置37度孵育30分钟。
7、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸
干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程
1、 检验申请单独检验项目申请：人类免疫缺陷病毒抗体{缩写抗HIV （1+2）]测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2、 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml ，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆，用肝素、EDTA 或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml 的全血标本，或少于0.1ml 的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h 后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。
离心必须达到3000rpm 15min ，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h ，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d ，在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d 。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
医院检验科免疫室 体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共 页3．方法原理本实验采用HIV 特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。
当待测标本中存在HIV 抗体时，该抗体和固化的抗原结合于反应板上，并进一步与酶结合物相结合，在TMB 底物参与反应的情况下，产生显色反应。
人类免疫缺陷病毒(HIV) 检测
④检测时，先将硝基纤维素膜细条恢复室温，再与待检血清（用稀释 液稀释后）共同浸泡，37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑤取出硝基纤维素膜细条，用洗涤液洗涤5次，每次5min（用振荡摇 床）。 ⑥加酶标记抗人IgG 抗体，于37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑦洗涤同⑤。 ⑧加酶底物，显色10～20min。终止反应（放置于室温观察）。
第 4页
（1）ELISA 间接法检测HIV 抗体：将待测的血清稀释后按HIV 酶标诊断试剂盒的说明进行操作；该法的特异性和敏感性强， 操作简单、快速安全，比较适合大批量标本和筛选实验，但对 HIV 感染初期病人不能检测到抗体是其不足之处。
第 5页
（2）蛋白印迹试验：ELISA 法确诊的阳性标本应做蛋白印迹试 验以确证。
人类免疫缺陷病毒（HIV） 检测
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人类免疫缺陷病毒（HIV）是引起人类艾滋病（获得性免疫缺 陷综合征，AIDS）的病原体。
第 2页1.方法第 Nhomakorabea页有检测HIV 抗原和检测HIV 抗体两种。前者可用组织细胞培养 法、核酸检测法及免疫酶标法；后者有凝集试验、免疫荧光试 验、蛋白印迹试验及放射免疫试验和免疫酶标技术等。 目前世界上常用酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法作为经典筛 选试验，蛋白印迹试验作为确证试验。
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谢谢大家！
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（2）蛋白印迹试验：AIDS病人血清中的抗HIV 抗体与HIV的 多肽片段（外膜蛋白与核心蛋白）特异性结合后可形成多条蛋 白区带。强阳性反应显示HIV 几个基因组编码的全部蛋白带， 弱阳性反应显示两条或几条显色较弱的蛋白带，阴性反应则无 任何蛋白带显示。
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3.注意事项 （1）使用公认的HIV 酶标诊断试剂盒，不同厂家的试剂盒有可 能操作有异，应严格按说明书操作；不同厂家的产品有不同的 阳性判断标准，应按说明书慎重判断。 （2）鉴于HIV 及有关试验过程的特殊危险性，应严格规范实验 室操作规程，增加试验结果的准确性；严格规范安全防范措施， 防止感染；阳性结果应重复试验。
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人类免疫缺陷病毒检验
发表时间：2009-08-03T11:16:23.700Z 来源：《中外健康文摘》2009年第19期供稿作者：陈虹 (黑河市人民医院黑龙江黑河 164300) [导读] 人类免疫缺陷病毒检验
人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency vi-rus，HIY）又称艾滋病毒，是获得性免疫缺陷综合征即艾滋病（acpuired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，属逆转录病毒科（retroviridae）的慢病毒（lentivinrs）亚科，形态为典型的D病毒，主要通过性传播途径、血液传播途径和母婴传播途径传播。
HIV有HIV-1和HIV-2两种类型，目前在世界广泛流行的是HIV-1型。
HIV基因有高度的变异性，目前在全球流行的HIV-1毒株已出现3个组，即M组、O组和N组，其中M组又分为A到J十个基因型。
HIV-2是逆转录病毒中的另
一个病毒，也可引起人患上艾滋病，但症状多较HIV-1引起的为轻，HIV-2主要在西非国家流行，其与HIV-1在血清学上有一定的交叉反应。
艾滋病是以机会感染及局部肿瘤为特点的致死性传染病。
截止2000年底，我国累计报告HIV/AIDS22517例（AIDS880例），死亡496例，估计实际感染人数远超过已发现的感染者人数，加强艾滋病的预防与控制是我国以及全世界面临的一个紧迫的问题。
1 样本采集
1.1血清（浆）样本
1.1.1抗原、抗体检测静脉采血，血液样品应在l2h内做到：①送到初筛实验室；②分离出血清；③装入一干净试管内，盖上试管盖；
④按标准编号贴上标签。
分离出的血清应立即进行筛查实验。
若因故不能立即检测，应将血清放置－20℃低温保存；无条件时亦可放置4℃，但不得超过3d。
检测后的血清应于－20℃或更低温保存，以用于确认实验。
1.1.2核酸检测使用EDTA抗凝血浆标本，抗凝后6h内分离血浆；如使用血清标本，则需在2h内分离血清，标本的保存应在－70℃下，并避免反复冻融。
1.2全血标本
全血标本主要用于提取基因组核酸和病毒核酸，静脉取血后可于4℃下短期保存，如用于提取病毒RNA，则应在取血后尽快提取。
1.3淋巴细胞
淋巴细胞主要用于提取核酸，可从抗凝全血制备，主要有两种方法：一是使用淋巴细胞分离液分离制备；二是使用红细胞裂解液，裂解全血中的红细胞，经生理盐水数次洗涤，即可得到淋巴细胞。
淋巴细胞如暂不提取核酸，可保存于－70℃下。
1.4样品采集的注意事项
1.4.1用于ELISA法检测的血浆或血清样本勿用叠氮化钠防腐。
1.4.2本应无微生物污染，避免溶血。
1.4.3核酸检测用的血液标本严禁使用肝素抗凝，因其对PCR扩增有抑制，且无法在核酸提取过程中去除。
2 检验方法
HIV感染最直接的检查方法是从受检者的血液中分离培养HIV或检测HIV特异性抗原、HiV核酸。
但HIV分离培养操作繁琐，费用较高，技术难度大，实验场地要求严格（P3实验室）；HIV抗原检测的敏感性不如抗体检测；核酸检测需要较高的实验操作水平和实验室条件。
因而，目前最常用的HIV检测技术是抗体检测。
HIV感染后的检测存在“窗口期”，“窗口期”是指从HIV感染后到用现有方法能检出HIV抗原、抗体和核酸前的一段时间。
个体差异、检测方法的种类和试剂的敏感性是影响“窗口期”长短的主要因素。
每种检测都要等到“窗口期”之后再进行，否则会得到假阴性结果。
2.1 HIV分离培养
用脐血或已建立的T淋巴细胞，经PHA刺激后培养，3～5d后接种标本，每周加强PHA刺激。
如有病毒生长可观察到细胞病变，用电镜观察病毒颗粒，也可用ELISA或免疫荧光法检查病毒抗原，或测定细胞培养上清液中逆转录酶的活性来判断标本中是否存在感染性HIV。
病毒分离培养检测HIV的“窗口期”约为7d左右，对于HIV感染的早期诊断有重要意义。
2.2 HIV抗原检测
P24抗原是人体感染HIV后最早出现于血液中的病毒成分，通常在感染后2周即开始出现，因此，P24抗原检测可以在感染者血清抗体阳转前即作出早期报告，大约可以使“窗口期”缩短一周。
P24抗原检测在新生儿感染的早期诊断和AIDS病程进展的监测上有重要作用。
但应该注意到，P24抗原作为HIV-1的感染指标的作用是有限的，因为在HIV感染者血液中检测到P24抗原的比例不高，因而，P24抗原检测目前只是HIV辅助诊断手段。
2.3 HIV抗体检测
HIV抗体检测是卫生部认可的HIV感染诊断方法，由于HIV检测中任何漏诊、误诊都可能导致极为严重的后果和法律纠纷，为了防止检测工作可能出现的问题，卫生部专门制定了《全国艾滋病检测工作规范》，对开展HIV抗体检测的单位、人员、场地和检测试剂等制定了严格的标准。
HIV抗体检测分为初筛试验和确认试验两个阶段，初筛试验阳性的血清一定要进行确认试验，确认试验为阳性的才能肯定为被HIV感染。
HIV初筛试验要求敏感性接近100％，不能出现假阴性，对特异性要求不太严格。
初筛试验由取得资格的HIV抗体初筛实验室或确认实验室进行，初筛呈阳性反应的标本不得向受检者公布其结果。