烤片对染色体G显带标本质量的影响分析
人体外周血染色体G显带制备的影响因素
人体外周血染色体G显带制备的影响因素【摘要】染色体G显带技术是研究染色体数目和结构畸变的基础，整个制片过程繁琐，接种、收获、制片、显带等因素都可影响染色体标本的最终效果。
【Abstract】Chromosome G banding technique is the study of chromosome number and structural abnormalities of the base, The entire production procedure,includinginoculation, harvesting, production, banding and other factors can affect the chromosome specimen of the final results.【Key words】Chromosome G banding；Factors；Remedial measures1染色体G显带玻片的制作1.1取血与接种时间一次性真空采血肝素抗凝管(3 ml规格)，常规消毒肘部皮肤及抗凝管的进针处，抽取静脉血2～3 ml，轻轻摇匀，防止凝固，待接种培养。
当天不能培养的标本应及时置于4℃冰箱存放以免影响细胞的活力，一般在采血后1～3 d内可进行培养。
在4℃冰箱保存6 d的标本我们也曾培养，且染色体质量也不错。
由于存放时间长，有活性的淋巴细胞少，此时应1000 r/min离心10 min后取白细胞层接种。
1.2细胞培养基与接种全血量人体血液中的淋巴细胞是一种分化细胞,它的细胞质很少,RNA 和蛋白质的6合成速度也很慢，淋巴细胞几乎都是处在G0期或G1期，一般情况下是不分裂的。
当在培养基中加入植物血凝素(phytohemagglutininPHA)时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进行有丝分裂，进入淋巴细胞生长周期。
细胞经过68～76 h的培养，处于分裂期的细胞可达20%以上(我们曾做过此类的实验)，此时加入秋水仙素便可获得大量的中期分裂相细胞。
实验四 X染色质、人类染色体G显带标本的制备及观察(“染色”相关文档)共10张
一、实验目的
学习X染色质的标本制作。 观察X染色质、形态特点。 了解人类染色体G显带技术方法
二、实验原理
在间期，女性体细胞中两条X染色体中的一条异染色质
化。用Giemsa染色法可使其着色，本方法的优点是只有
Giemsa染液中染色约5min。
染02色%：胰G蛋ie白m酶细sa溶染液胞液中（，p核H并7不.清断摆晰动，着2. 色，胞浆不着色，因此细胞核背景清晰， 利于对位于核膜边缘的X染色质的辨认。 4 磷酸缓冲液 5ml + Giemsa原液 11滴（毛细滴管）染色8～10min，流水冲洗。
G显带区的DNA有较丰富的A-T对，有相当一部分中度重复序列DNA 可能在G带区，Giemsa染料在G带区的结合与其相应的DNA 和非组 蛋白有关。
三、实验方法与步骤
1, 制备： G-带胰酶消化法
胰酶温度➢和处外理时周间血需控培制好养，一常般胰规酶法处理制时间作不少染于色30S体标本，置60℃烘箱烘8h～10h，或
➢ 玻片晾干后置入固定液(甲醇：冰醋酸 3:1)中10min。 ➢ 晾干，置入5mol/L HCl中，室温下水解20min。 ➢ 在新鲜的蒸馏水中涮洗四次，以充分去HCl，以免影响染色液的
pH。 ➢ Giemsa染液中染色约5min。
➢ 先后用蒸馏水冲洗，晾干。
观察
四、实验结果
（毛细滴管）染色8～10min，流水冲洗。
02% 胰蛋白酶溶液入染色缸，加入0.
空气干燥、镜检。 预处理的方法非常多，可用热、碱、各种蛋白酶、尿素等，其中最常用的是胰蛋白酶进行预处理。
➢ 玻片晾干后置入固定液(甲醇：冰醋酸 3:1)中10min。
在间期，女性体细胞中两条X染色体中的一条异染色质化。 在新鲜的蒸馏水中涮洗四次，以充分去HCl，以免影响染色液的pH。 时间越长，细胞对胰酶处理的抵抗性越强，片龄过长的标本染色后会导致斑点状而非带纹。 实验四 X染色质、人类染色体G显带标本的制备及观察 了解人类染色体G显带技术方法 胰酶温度和处理时间需控制好，一般胰酶处理时间不少于30S 时间越长，细胞对胰酶处理的抵抗性越强，片龄过长的标本染色后会导致斑点状而非带纹。 首先取决于染色体本身的质量，染色体要较长，以早中期为宜，且中期相丰富、分散好，无胞浆背景。 学习X染色质的标本制作。 将烤三天的玻片从37℃烘箱取出，投入0. 外周血培养常规法制作染色体标本，置60℃烘箱烘8h～10h，或80℃烘3h，然后置37℃烘箱烘3d 左右即可予处理。 观察X染色质、形态特点。
人类染色体G显带标本制备与观察
• 班长安排值日的同学 • 不交实验报告 • 下次课带实验指导和习题集
内容与方法（胰蛋白酶法）
1. 在实验课前24-48小时，学生对自已的染色体标本 用二甲苯及固定液除去油和色，56 ℃烤片2小时， 置37 ℃1-2天备用； 2. 取已老化的染色体制片1张置于37℃预温的PH7.0 －7.2的0.125％胰蛋白酶缸中处理90s-120s，根 据前面同学的效果和示教片决定自已的消化时间 （如显带不足则适当延长胰蛋白酶作用时间；如 显带过度则适当缩短胰蛋白酶作用时间； 3. 取出玻片放入0.85％生理盐水中漂洗2次； 4. 将标本浸入37℃预温的Giemsa染液中染色10min 5. 流水冲洗后，晾干，镜检； 6. 根据镜检结果制作第二张标本片； 7. 在G带标本制作过程中，进行一个常规分裂相的核 型分析并提交分析结果。
人类染色体G显带标本 制备与观察
实验目的
• 初步掌握人类染色体G显带标本制 备的方法及各号染色体G带带型
实验原理
• G显带是指Giemsa染液染色后，使每条 染色体上显示出深浅交替横纹的技术 • 胰蛋白酶法制作简便，成本低廉，制作 周期短，显示的带纹清晰，是研究分析 染 色 体 的 主 要 常 规 方 法 之 一
人类外周血染色体标本制备及G带观察及核型分析
实验报告课程名称：分子医学实验 指导老师： 成绩： 实验名称： 人类外周血染色体标本制备G 带观察及核型分析 同组学生姓名：一、实验目的及原理三、实验结果二、操作步骤 四、讨论分析一、 实验目的及原理熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法。
初步掌握人类染色体标本培养和制备的基本方法。
通过实验掌握Ｇ带标本制备的基本方法，学会在显微镜下直接观察G 带分裂相。
在细胞周期的不同阶段，染色体的结构不同，在细胞分裂间期，染色体呈现细长的丝状结构，分散于细胞核中，且交织成网状，难以识别其数目和每个染色体特有的结构；在细胞有丝分裂中期,染色体凝缩形成短的棒状结构，排列在赤道板上，此时染色体的形态、数目最清楚，所以一般选择有丝分裂中期的细胞来观察染色体的形态、数目。
在人类遗传分析中，普遍采用外周血培养的方法制备染色体标本。
但是在正常情况下，外周血中的淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，因而外周血细胞中是没有分裂相的。
在细胞培养过程中加入植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA) ，可以刺激外周血淋巴细胞转变为淋巴母细胞，进行有丝分裂，再通过秋水仙素处理，将细胞阻断在有丝分离中期。
再通过离心、低渗、固定和滴片，就可以获得大量有丝分裂相。
最后通过染色就可以观察染色体的结构和数目。
本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。
有许多显示Ｇ带的方法，最常用的是将已经过老化的染色体制片放到37℃胰酶中进行处理，然后用Giemsa 染色。
胰酶可以从染色体上抽取蛋白特定的组成部分。
通过胰酶处理使Ｇ带区的疏水蛋白被除去或使它们构型变为更疏水状态。
由此可见在Ｇ带区中抽取的蛋白往往是疏水蛋白。
关于显带机理有多种论点，总的来说，还不能完全解释显带的机理问题。
二、操作步骤人类外周血染色体标本制备１、采血２、培养RPMI1640培养液，37℃ 0.5℃恒温中培养72小时。
3、秋水仙素(colchicine)处理在终止培养前２-３小时，加入秋水仙素。
人体外周血染色体G显带制备的影响因素
人体外周血染色体G显带制备的影响因素作者：邱惠国林晖侯喜琴赵军宋秀宇来源：《中国实用医药》2011年第27期【摘要】染色体G显带技术是研究染色体数目和结构畸变的基础，整个制片过程繁琐，接种、收获、制片、显带等因素都可影响染色体标本的最终效果。
【关键词】染色体G显带；影响因素；补救措施uo, LIN Hui, ，et al. The First Affiliated Hospital of Xiamen University,xiamen 361003,China【Abstract】structural abnormalities of the base, The entire production procedure,includinginoculation, harvesting, production, banding and other factors can affect the chromosome specimen of the final results.【Key words】； Factors； Remedial measures作者单位：361003厦门大学附属第一医院检验科通讯作者：邱惠国：qhg20042007@染色体G显带是研究细胞遗传学的基础，被广泛地用于基础医学、临床医学的研究和染色体病的确诊。
整个制片过程繁琐，经历时间较长，任何一个步骤操作不当，均可影响染色体标本制备的最终效果。
经过3500多份标本的制备，我们总结了一些经验。
1染色体G显带玻片的制作1.1取血与接种时间一次性真空采血肝素抗凝管(3 ml规格)，常规消毒肘部皮肤及抗凝管的进针处，抽取静脉血2～3 ml，轻轻摇匀，防止凝固，待接种培养。
当天不能培养的标本应及时置于4℃冰箱存放以免影响细胞的活力，一般在采血后1～3 d内可进行培养。
在4℃冰箱保存6 d的标本我们也曾培养，且染色体质量也不错。
由于存放时间长，有活性的淋巴细胞少，此时应1000 r/min离心10 min后取白细胞层接种。
人类染色体G显带标本的制备
注意事项
良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多， 且染色体分散要好。
染色体长度应能适应显带分析技术的要求。
G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间 之搭配。
实验结果
低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍 镜及油镜下观察，可见23对染色体较为饱 满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可 显出深浅不同的G带横纹。
试剂及器材
试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5% NaHCO3、 Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理 盐水。
器材： 37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴 头。
实验步骤
取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的 染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2 滴，混匀，以5% NaHCO3调节pH为6.6-7.0。
Байду номын сангаас
Giemsa染料是噻嗪--曙红染料，染色体的着色有赖 于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色 首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础 上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环 境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预 处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结 构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的 蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。
原理
常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各 种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理 再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两 臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰 蛋白酶法。
可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对， 在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之 一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且 与结合DNA的染色质非组蛋白有关。
人类染色体G显带核型技术研究进展
１Ｇ 显带常规方法
外周血３ ７℃培 养 ７ ｈ， 止 以上 ， 色 体 长短 适 中 、 ５ 染 还 可 根 据 需 要 缩 短 培养 时 间 ， 方便 就 诊 。
Ｇ显 带 成 功 的 关 键 取 决 于 胰 蛋 白 酶 的
０ ０ ０ １ ６） ４
摘 要 ： 色体Ｇ显 带是染 色体 遗 传病检查 的重要 手段 ， 种技术 对染 色体核 型的分 析是其 它方 法（ ｘ ＦＳ Ｍ ＩＨ） 染 这 Ｒ － ＩＨ． —Ｆ ｓ 不可替 代的 。 Ｇ显 带操作 过程 中很 多因素都会 影响标本 的质量 ， 如烤 片温度 时间和胰酶浓度 处理 时间等 。 因此 ， 本文对 国 内报道 的染色体 Ｇ 显带 的改良技 术 作 一 综 述 ， 利 于 制备 高 质 量 显 带 标 本 。 以 关键词 ： Ｇ显带 核型分析 Ｇ 带改良技术 显 中图 分 类号 ： １ Ｒ７ ４ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： ６ ４ ０ Ｘ（ ０ ）６ ａ－０ １ －０ １ － ９ ２ １ ０ （） ０ ３ １ ７ ８ ０
！！
Ｑ：
Ｓ ｃｉ ｃｅ ａｎ Ｔ ｅｃｈ ｅｎ ｄ ｎＯｌ Ｏｇｙ ｎ ｌ ｎｏｖ ｉ Ｈｅｒ ｄ ａｔ ｏｎ ａｌ
研 究 报 告
人类染色体Ｇ显带核型技术研 究进展
杨艳 芳’ 王宗霞’ 崔 占前 郭静 秦宗 阳 （， １ 包头 医学 院 医学生物 与细 胞生 物教 研室 ； ２ 包 头医学 院 内蒙古 包头 ．
开 创 了新 方 法 ， 且 对 染 色体 研 究 的 发 展 而
将 标 本 ６ ℃烘 烤 ３ ２ 显带 。 ５ ／ 胰 ５ ｈ， ｄ ２ｇ Ｌ
定 、 殊 绌 胞 株 的 标 记 和 染 色 体 的 识 别 等 清 晰 ， 浅 带 反 差 好 。 小 平 等 ， 片温 度 蛋 白酶 ｌ 特 深 赵 】烤 ｍＬＪ１９ Ｐ （ Ｈ７． ） 染色 缸 ， Ｊ５ ｍＬ ＢＳ ｐ ［ ２入 和 时 间 由常 规 的６ ℃ 或７ ℃ ， ～３ 改 为 ５ ３ ℃水 浴 ； ０ ０ ２ ｈ ０ ７ 将标 本人 此液 处 理２ ｓ Ｇｉｍｓ 染 ５， ｅ ａ
外周血淋巴细胞培养及染色体制备的几点体会
RDW 均增大,属不均一性大细胞贫血,红细胞巨幼样变。
红细胞指标M CV 、M CH 、H CHC 的测定是进行形态学分类的依据,过去把贫血分为大细胞、正细胞正色素、小细胞低色素、单纯小细胞4个类型,此法忽视了红细胞体积的异质性对指标准确性的影响,不能全面反映红细胞的病理变化。
笔者认为,M CV 及R DW 测定结合了红细胞形态学分类,可得到较可靠的初步诊断意见,进而做特殊检查可明确诊断。
M CV 、RDW 对缺铁性贫血与巨幼红细胞性贫血有较好的诊断价值,可作为一种快速、简单、方便、准确的筛选方法。
参考文献[1]丛玉隆.今日临床检验学[M].北京:中国科学技术出版社,1997:9.(收稿日期:2010-12-16)v通讯作者,E -mail:zh anggu oyuan9826@sin 。
#经验交流#外周血淋巴细胞培养及染色体制备的几点体会马 强,刘青松,蔡 燕,邢 艳,张国元v(川北医学院附属医院检验科,四川南充637000)摘 要:目的 总结该室外周血淋巴细胞培养及染色体制备的成功经验,供同行参考与借鉴。
方法 采用外周血淋巴细胞培养基接种外周全血,按照常规方法制作染色体标本,进行镜检。
结果 该室培养的淋巴细胞数量稳定,染色体核型质量佳。
结论 该室制作的染色体标本质量能满足临床染色体核型分析需要。
关键词:染色体; 外周血; 淋巴细胞DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2011.14.061文献标识码:B 文章编号:1673-4130(2011)14-1641-02 染色体检查作为干预出生缺陷、提高人口素质的一个重要内容和措施,对优生优育工作有着重大意义[1]。
然而,染色体制备过程缺乏有效的质量控制,经验在染色体标本制备过程中占有重要的地位。
为了获得良好的制片,在笔者及同事的摸索下,本室制作的染色体标本质量稳定,基本满足临床分析需要。
笔者就这一过程中的要点与大家分享,以供同行参考。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
显带 效果
烤片 （h)
显带 效果
烤片 （h)
显带 效果
60℃
30
差
1~2
好
70℃
30
好
1~2
好
80℃
30
好
1~2
好
100℃ 30 差
3~4
好
5~6
好
3~4
差
5~6
差
3~4
差
5~6
差
2．2 不同烤片温度和时间 标 本 在 显 带 时 胰 酶 消 化 所 需 的 时 间 不同，见表3。
3 讨论
3．1 烤片是染色体G显带中的重要步骤之一：烤片不仅使标本 老化，还可蒸发残留于标本 上固定剂中醇类和酸类物质[3]，有利 于胰蛋白酶消化液pH值 的 稳 定 性 。 烤 片 温 度 的 高 低 和 时 间 的
表3 不同烤片温度和时间标本的胰酶消化时间（x±s）
温 度 (℃)
时间 烤片(min) 显带(s)
时间 烤片(h) 显带(s)
时间 烤片(h) 显带(s)
60
30
15s±5
1~2 35s±10
3~4 2min±20
70
30
1min±10 1~2 2min±20 3~4 3min±30
80
30
2min±20 1~2 3min±30 3~4 4min±30
3~1 80 30min 10 50 3~2 80 1~2h 10 50 3~3 80 3~4h 10 50 3~4 80 5~6h 10 50 4~1 100 30min 10 50
2 结果
2．1 烤片温度：见表2。 表2 不同烤片温度和时间标本的显带效果
温度
烤片 显带 （min) 效果
烤片 （h)
对比各组标本的显带效果。
表1
标本分组情况
烤片温 烤片 标本量 分组 度(℃) 时间 份数 张 数
烤片温 烤片 标本量0min 10 50 1~2 60 1~2h 10 50 1~3 60 3~4h 10 50 1~4 60 5~6h 10 50 2~1 70 30min 10 50 2~2 70 1~2h 10 50 2~3 70 3~4h 10 50 2~4 70 5~6h 10 50
培养、制备染色体标本，按不同的烤片温度和时间分组 ，对比各组标本的显带效果。结果：烤 片 温 度60 ℃ 30 min、70 ℃ 3～6 h、80 ℃
3～6 h和100 ℃时显带效果差；而60 ℃ 1～6 h、70 ℃和80 ℃ 30 min～2 h显带效果好。结论：烤片 温度的高低和时间的长短会影响G显
现代医药卫生 2009 年第 25 卷第 3 期
393
烤片对染色体G显带标本质量的影响分析
赵小平，余 红，黄 燕，税青林 (泸州医学院医学生物学与遗传学教研室，四川 泸州 646000）
【摘要】目的：探讨制备高质量人类染色体G显 带 标 本 的 最 适 烤 片 温 度 和 时 间 。方 法 ：选 择130名 健 康 学 生 外 周 血 淋 巴 细 胞 常 规
收稿日期：2008-10-27 修回日期：2008-11-17
社 ，2004.7. [2] 王修海，刘 雯.医学遗传学实验指导[M].第一版.北京：科学出版
社 ，2001.6. [3] 李 洁，徐文瑜，杨娇英.外周血淋巴细胞培养及染色体G带标本
制备的实验对策[J].中国优生与遗传杂志，2006，14(1)： 51. [4] 彭惠民，赵 刚.医学遗传学实验[M].武汉：武汉大学出版社，1993.29.
在我们的实验中，虽然60 ℃ 1～6 h、70 ℃ 30 min～2 h、80 ℃30 min～2 h小时的显带效果都较好， 但随着烤片温度的升 高 和 时 间的延长，胰酶对标本的消化时间也随之增加，这既影响工作 效率，也影响标本的显带质量，使显带达不到最佳效果。我们认 为，在做人类染色体显带时，烤片最适宜选择60 ℃ 1～2 h或70 ℃ 30 min～1 h。使 胰 酶 消 化 的 时 间 段 在30 s～1 min。这 样 ，烤 片 的 温度不高、时间不长，既能充分蒸发固定液，也能使标本老化适 中，胰酶消化时间易于掌握，显带后染色体带纹清晰，深浅带反 差好，能达到最佳显带效果。 参考文献： [1] 李 钰.医学遗传学实验指导[M].第一版.北京：北京大学医学出版
带标本的质量，掌握好适宜的烤片温度和时间，才能制备高质量的显带标本。
【关 键 词 】染 色 体 ；G显 带 ；烤 片 ；温 度 ；时 间
文 章 编 号 ：1009-5519 （2009 ）03-0393-01
中 图 分 类 号 ：R446
文 献 标 识 码 ：A
染色体G显带技术是细胞遗传学研究和染色体疾病诊断最 常用的技术。而在G显带技术中常用的方法是胰蛋白酶处理法。 该方法简便易行，带型清晰，标本可以长期保存。但在操作过程 中很多因素都会对显带标本的质量造成影响，比如，烤片温度、 时间、胰酶浓度和处理时间等。本文主要通过对人类染色体G显 带中不同的烤片温度和时间进行对比分析，以总结出制片的最 适温度和时间，有利于制备高质量显带标本。
1 材料与方法
1．1 材料：130名健康学 生 外 周 血 淋 巴 细 胞 常 规 培 养 制 备 的 染
色体标本。
1．2 方法：每份标本滴片5张。按 不 同 的 烤 片 温 度 和 时 间 分 组 ，
每 组10份 ，共50张 标 本 （见 表1）。操 作 按 胰 酶 消 化 法 常 规 进 行 ，
100
30
5min±30
长短会直接影响胰蛋白酶消化标本的时间和质量。 实 验 表 明 ，烤 片 温 度 低 、时 间 短 如 ：60 ℃ 30 min时 染 色 体
显带效果差。这是由于烤片温度低、时间短，一方面使标本上的 固定液未蒸发干净，醇类、酸类试剂会带进胰蛋白酶消化液和 吉 姆 萨 染 液 中 ，影 响pH值 ，使 标 本 不 易 上 色 ，染 色 体 带 纹 模 糊 不清。另一方面，这也使标本老化程度不够，胰酶消化时间不易 掌握，容易使标本消化过度，染色体边缘和带纹发毛，出现空泡 现象，影响带纹的观察。烤片温度高、时间长时如：70 ℃ 3～6 h， 80 ℃ 3～6 h，100 ℃ 30 min染 色 体 显 带 效 果 亦 差 ， 其 原 因 是 在 胰 酶 消 化 时 ，染 色 体 上 与 DAN 结 合 疏 松 的 组 蛋 白 易 被 胰 蛋 酶 分 解 掉 ，染 色 后 这 些 区 段 成 为 浅 带 ，而 那 些 组 蛋 白 和DAN结 合 牢 固 的 区 段 可 被 染 成 深 带 [4]。经 过 高 温 或 长 时 间 烤 片 后 ， 染 色 体 标 本老化过度，组蛋白不容易被胰酶消化干净，显带时浅带仍然 被吉姆萨染液染色，染色体带型不能被显现出来。若延长胰酶 的消化时间，则染色体带型模糊，出现深带不深、浅带不浅的状 况，甚至可使染色体呈现一种“幻影”，什么都看不见。