3M 判读手册 PCC大肠菌群快速检测测试片
3M PetrifilmTM 肠杆菌科测试片法
Microbiology
3M PetrfilmTM 肠杆菌科测试片法
检样 25g(ml)样品＋225ml 稀释液
10倍系列稀释
选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，接种Petrifilm测试片
371°C, 24 2h
菌落计数
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结果报告
Microbiology
好氧或兼性厌氧发酵型G-杆菌
氧化酶阴性
氧化酶阳性
肠杆菌科
乳糖发酵
非乳糖发酵
埃希氏菌 克雷伯氏菌 柠檬酸杆菌 等
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沙门氏菌 志贺氏杆菌 耶尔森氏菌 普罗威登斯菌等
Microbiology
什么是肠杆菌科？
革兰氏阴性 无芽孢杆菌 氧化酶阴性 发酵葡萄糖产酸或产酸产气 习惯生长于肠道、土壤、水和蔬菜 在干燥环境中存活性差 对热敏感 部分对人体有致病性
Microbiology
操作时的注意点
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Microbiology
操作时的注意点
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Microbiology
食品与环境中 肠杆菌科和大肠菌群检测的对比试验
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Microbiology
Microbiology
3MTM PetrifilmTM 霉菌酵母测试片
标准培养基 抗生素抑制细菌生长 叠放片数小于20片 磷酸酶指示剂 3-5天，21-25°C AOAC官方方法
997.02
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Microbiology
大肠菌群快检纸片
大肠菌群快检纸片法的结果判定
其结果可有如下5种情况： ①纸片保持青紫色，无论有无红色斑点或红晕均为阴性。 ②纸片上出现红点或红晕且其周围变黄，为典型阳性。 ③整个纸片全变黄色，却无红色斑点或红晕出现，为不典 型阳性，造成此结果的因素很多，见“影响因素” 。 ④纸片中某部分变黄色，或有或无红斑（红晕），为不典 型阳性。 ⑤纸片加样后立即或较短时间内出现黄色或褪色，此情况 应对样品进行中和处理。
组成和性状：每份2张5×5cm纸片，干燥纸片 为灰白色或淡绿色，加中性水湿润后为青紫色。 ±1 使用方法： 将纸片用适量无菌蒸馏水浸湿（无 多余水分），贴于食饮具内侧表面或其他待测 物体表面规定位置，压实，使纸片与物体面充 分接触，30秒后取下，放于无菌袋内，37℃培 养16-18h观察结果。
大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法
大肠菌群快检纸片法的检测原理
众所周知，酶是一种蛋白质，其活性随 温度和pH等变化而改变，在高温和极端 酸性或碱性情况下，可完全丧失活性而 失去脱氢的能力。受氢体的作用也可能 受pH的影响，因此影响酶活性和导致pH 异常的任何因素均可影响检测结果。
大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法
1 餐饮具和待测物体表面用纸片：
大肠菌群和粪大肠菌群的定义
总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自 然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在 自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度 为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如 将培养温度再升高至44．5℃，则不再生长， 而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃ 左右生长，如将培养温度升高至44．5℃仍可 继续生长。
1.0 毫 升 水 样 0.1 毫 升 水 样
3M大肠菌群的测定
实验目的
学习并掌握国标GB/T 4789.38—2008标准中 规定食品中大肠菌群的测定方法。
大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气。需氧 和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源 于人畜粪便，故此作为粪便污染指标来评价食品的卫 生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否 被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌 污染的可能性。
计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一 个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成 单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的 菌落数（圆形生长面积为20 cm2）。食品中最终菌 落浓度的单位以“cfu/g (mL)”表示，表面上菌落数以 “cfu/cm2”表示。
3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片
• 含有改良的VRB培养基 • 目标菌落为红色带气泡 • 35±1°C, 24 ±2 h培 养 • AOAC Offical Method 991.14
3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片
样品制备
样品制备
接种
接种
接种
培养
解释
3. 接种 将PetrifilmTM大肠菌群测试片或PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开 上层膜，用吸管吸取1 mL样液垂直滴加在测试片的 中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜 直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中 央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面 积上。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。
在PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片上， 蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡 和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。培养 圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出 现大量气泡形成、不明显的小菌落，培养区呈蓝 色或暗红时，进一步稀释样品可获得准确的读数。
大肠菌群测试片
大肠菌群测试片产品编号： BE211产品规格： 24片/包产品用途：食品、饮用水、原料和食品加工设备表面大肠菌群的检测产品说明1、原理及适用范围大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生检验工作中。
大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。
大肠菌群测试片（Filmplate TM Enumeration of Coliform BE211）含有选择性培养基、大肠菌群特异性半乳糖苷酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品。
本产品适合于食品、饮用水及原料中大肠菌群的计数，也可用于食品加工设备表面的卫生检测。
执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数（GB/T 4789.3—2010）。
2、操作方法2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液。
2.2、接种：一般食品选2～3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固。
每个稀释度接种两片。
同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、计数原则及报告方式3.1、培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15CFU～150CFU之间的纸片进行计数。
3.2、若两个稀释度的菌落数均在15CFU～150CFU之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数报告之，即为每毫升（或每克）样品中的大肠菌群菌落数。
快速测试片法和GB法检测生鲜猪肉中大肠菌群的结果比较
表 １ 生 鲜 猪 肉 ＧＢ法 大 肠 菌 群 ＭＰ Ｎ ／ Ｉ Ｏ Ｏ ｇ计 数 结 果
样 品 稀 释 瘦 汁 数 结 果
百 而 —— ———— １ 设备 。按照 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ １ ０ 要求 ， 实验室的检验设备主要有均 表 ２ 生鲜猪肉测试片法大肠菌群计数结果 质器 ， 振荡器 ， 高压灭菌器 ， 超净工作台 ， 恒温培养箱 ， 天平 ， 酸度计 ， 冰 箱， 恒温水浴箱 ， 微波炉 ， 移液器 。 １ ． ２ 试剂和检测样品。大肠菌群测试片（ 广州绿洲生化 Ｂ Ｅ ２ １ １ ） ， 月 桂基硫酸盐胰蛋 白胨 （ Ｌ Ｓ Ｔ ） 肉汤、 煌绿乳糖胆盐 （ Ｂ Ｇ Ｌ Ｂ ） 肉汤（ 广东环凯 微生物科技有限公司） ， 生理盐水 自制。 玻璃器皿洗刷烘干备用。 测试用 生猪肉（ １ ５ 份） 购买于本地大型超市分割冷鲜 肉、 菜市场案板柜 台、 早市 案板柜台等不同胴体。 １ ． ３ 样 品制备 、 稀释 、 接种 。两种检测方法的样 品制备和稀释 ， 均是 按照 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ ． ＿ ． ２ ０ ｌ ０ 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群 计数 中的第一法大肠菌群 ＭＰ Ｎ计数法进行样品制备和稀释。 国标法选择了 １ ： １ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０ ０ 稀释度 ， 测试片法选择 了 １ ： 大型超市分割冷鲜肉、 壮 ＃ 菜市场案板柜台、 ＃ 社 ＃ 早市案板柜台 １ ０ ０ 、 １ ： １ ０ ０ ０稀释度进行检测 。测试片方法按照产品说明书进行 ， 测试 ＃ 片叠在一起放回原 自封袋中并封 口，透明面朝上水平置于恒温培养箱 食用 。 大肠菌群计数数值的多少是衡量食品安全的一个重要指标 ，可判 内， 堆叠片数不超过 １ ２ 片。 ３ ６ ± ｌ ℃ 培养 １ ５ — ２ ４ ｈ 。 国 标检测方法进行如 下实 验 。 定食品被大肠菌群污染的程度。 Ｇ Ｂ ２ ７ ０ ７ — ２ ０ ０ ５鲜黼 肉卫生标准中 Ｇ Ｂ ２ ７ ２ ６ — ２ ０ ０ ５熟 肉制品卫生标 １ ４初发酵试验 。将 每个样品的 ３个连续稀释度分别接种于 ３管 没有对生鲜肉微生物指标进行限定 ； ２ Ｉ ｕ ２ ４ ４ ２ ４ ４ ¨ ¨ ２ Ｌ ｓ Ｔ肉汤，每管接种 Ｉ ｍＬ ， ３ ６ ℃２ ４ ｈ ± ２ ｈ ，观察倒管 内是否有气泡产 准中对微生物指标进行 了限定， 肉干肉铺类 、 烧烤类 、 酱卤类大肠菌群 Ｐ Ｎ ／ Ｉ Ｏ Ｏ ｇ ＜３ ￣ ０ — １ ５ ０ ； Ｇ Ｂ １ ８ ４ ０ ６ ． ３ — ２ ０ ０ １农产品安全质量无公害畜禽 肉 生， ２ ４ ｈ ±２ ｈ产气者进行复发酵试验， 如未产气则继续培养至 ４ ８ ｈ ±２ Ｍ Ⅲ ㈣ 黜 ㈣ 安全要求 ，大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ Ｏ ０ ０ ； Ｇ Ｂ Ｔ １ ７ ２ ３ ８ — ２ ０ ０ ８鲜冻分割 ｈ ， 产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ￣１ ０ ０ ０ ０ ； Ｇ Ｂ ／ Ｔ ９ ９ ５ ９ ． ２ — ２ ０ ０ ８分割鲜冻猪瘦 １ ． ５ 复发酵试验。用接种环从产气的 Ｌ Ｓ Ｔ肉汤管中分别取培养物 １ 牛肉， 大肠菌群 Ｍ Ｐ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ ０ ０ ０ ； Ｇ Ｂ １ ６ ８ ６ ９ — ２ ０ ０ ５鲜 、 冻禽产品， 鲜禽 环， 移种于 Ｂ Ｇ Ｌ Ｂ管中， ３ ６℃４ ８ ｈ ， 观察产 腾况。产气者 ， 计为大肠菌 肉 ， 群 阳性管 。 大肠菌群 Ｍ Ｐ Ｎ ／ １ ０ ０ ｇ ＜１ ￣ ０ ０ ０ ０ ， 冻禽≤５ ０ ０ ０ 。 我们对检测结果进行了统计学分析 ，表明两种检测方法没有显著 １ ． ６ 大肠菌群最可能数（ ＭＰ Ｎ） 的报告 。 国标检测方法观察倒管内是 ｐ ＞０ ． ０ ５ ） ， 说 明快速测试片可以应用于实际检测 ， 能大大缩短时 否有气泡产生 ， 按１ ． ５确证的大肠菌群 Ｉ ＿ Ｓ Ｔ阳性管数 ， 检索 ＭＰ Ｎ表 ， 报 差异 （ 告每 ｇ （ ｍＬ ） 样品中大肠菌群 的 ＭＰ Ｎ值。测试片检测方法细菌在测试片 间 ， 操作简便 ， 减少实验过程污染环节 ， 提高工作效率 。美 国 ３ Ｍ公司 ｅ ｔ ｒ ｉ ｉ ｆ ｌ ｍ Ｔ Ｍ快速测试片、 国内公司如北京陆桥技术股份有限公司、 广州 上生长后会显示蓝色菌落 ，选择菌落数在 １ ５ — １ ５ ０ Ｃ Ｆ Ｕ之 间进行计数 。 Ｐ 分别计数和记录稀释倍数。 天河绿洲生物化学研究中心等快速检验纸片均适合于食品企业进行 陕 速检测。且国产产品有着很好的价格优势。 ２ 结 果 国标检测方法和测试片检测方法大肠菌群计数结果 ，见表 １ 和表 食品卫生微生物学检验大肠菌群计数 国标经历了多次修订 ，历次 ２。 版本分 别为 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ￣ ３ — １ ９ ８ ４ 、 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — １ ９ ９ ４ 、 Ｇ Ｂ／ Ｔ ４ ７ ８ ￣ ３ — ２ ０ ０ ３ 、 Ｇ Ｂ ｆ ｒ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ ０ ８ 、 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． ３ — ２ ０ １ ０ 。由国家强制食品安全 国家标准 ３ 分 析与讨 论 为 了保障公众健康， 以食品安全风险评估 通过表 １ 和表 ２的实验结果可以看出 ， 针对同样的生鲜猪 肉， 通过 替代了原来的国家推荐标准。 做到科学合理、 公开透明、 安全可靠 ， ２ ０ １ ６ 年１ ２月 ２ ３日国 采用 Ｇ Ｂ法大肠菌群 ＭＰ Ｎ ／ Ｉ Ｏ ０ ｇ 计数和快速测试片法大肠菌群计数结 结果为依据 ， 果的符合率是—致。肉品采样来源于本地大型超市店分割冷鲜肉、 菜市 家卫计委和国家食药监总局联合发布 了 包括 Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ． １ 食品安全国 家 场案板柜台、 早市案板柜 台， 从检验结果可以说明 ， 分割肉在卫生方面 标准 食品微生物学检验 总则等 ｌ ５ 个Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ 系列食品安全国家标 还是有很大 的优势的。 建议食用者购买生鲜肉品后 ， 充分加热熟透后再 准 。
大肠杆菌大肠菌群测试片
大肠杆菌大肠菌群测试片什么是大肠杆菌大肠菌群？大肠杆菌（Escherichia coli）和大肠菌群（Coliform）都是存在于温血动物肠道和粪便的细菌，是条件性致病菌，主要造成水体污染，也可能引起食物中毒的发生。
大肠杆菌大肠菌群测试片（FilmplateTM E.coli&coliform count plate BE203）是一种预先制备好的一次性培养基产品，可以同时检测大肠杆菌和大肠菌群，含有大肠菌选择性培养基、冷水可溶性的吸水凝胶和半乳糖苷酶（GAL）和葡萄糖醛酸酶（GUD）指示剂。
大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总的大肠菌群数。
本产品适合于食品及原料中大肠菌群的计数，如消毒牛乳、冷饮和调味品等样品的检测，也可用于表面的卫生检测。
执行标准：食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数——Petrifilm TM 测试片法（GB/T 4789.38）。
使用方法1、样品处理取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，依次往下稀释。
2、样品接种：一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠杆菌大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。
同时做一片空白阴性对照。
3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
4、结果判读培养后大肠杆菌显蓝色，其他大肠菌群显红色，蓝点加上红点为总大肠菌群数。
计数原则及报告方式1、选择菌落数在15～150个之间的纸片进行计数。
Handyplate大肠杆菌 大肠菌群测试片说明书
1大肠杆菌/大肠菌群测试片使用说明书【产品名称】通用名称：大肠杆菌/大肠菌群测试片英文名称：Handy plate TM E.coli &Coliform(ECC)Detetction Plate 【产品编号】HP 004【包装规格】20片/包【产品简介】Handy plate TM 大肠杆菌/大肠菌群测试片为预制备的即用型培养基产品，含有标准的培养基、冷水凝胶和显色指示剂。
本产品可用于食品和饮料中大肠杆菌/大肠菌群的测定。
【使用说明】1.样品制备取样品25g(mL)放入含有225mL 磷酸缓冲液（或生理盐水）的无菌均质杯或均质袋内，均质器混匀1min ～2min 制成1:10的样品匀液，必要时用无菌1mol/L NaOH 或1mol/L HCl 溶液调节样品匀液pH 至6.8～7.2。
用1mL 无菌吸管或移液器吸取1:10均液1mL ，注入含有9mL 稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推制备10倍系列稀释的样品匀液，每次换一支吸管。
2.接种根据对样品污染状况的估计，选择2～3个稀释度进行检测。
将大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL 样品匀液滴加到测试片中央，缓缓盖上上层膜，避免产生气泡，静置3～5min 使样液扩散并重新形成凝胶。
3.培养将测试片正面向上水平放置36℃±1℃，培养18h ～24h 。
24.判读大肠杆菌为蓝绿色菌落，其它大肠菌群为品红色菌落。
合适的计数范围在20CFU ～200CFU 。
若整个培养区域呈蓝绿、蓝紫或品红色，可能是菌浓度过高，需对样品进一步稀释以获得确切的计数。
如需分离菌落进行进一步分析，揭开上层膜用接种针将菌落挑出使用即可。
【操作图解】1.用剪刀沿虚线剪开，2.将测试片放在水平台面上，3.缓慢盖上覆膜，取出测试片盒揭开覆膜，将1mL 样品液静置3-5分钟。
滴加在纸片中心。
4.将测试片正面朝上，放置于5.根据判读手册判读测试片恒温培养箱中，36±1℃培上是否有目标菌生长，或养24±2h。
大肠菌群快速纸片检测试剂盒 使用说明
【结果判断】
1、 纸片上出现紫红色菌落，其周围有黄圈者为阳性。
2、 纸片为一种颜色，无菌落生长者为阴性。
3、 纸片呈紫色，有紫红色菌落，其周围无黄圈者为阴性。
4、 酸性食品接种后，纸片变黄，经培养后无紫红色菌落为阴性。
4、 确认试验的方法：进行确认试验，用灭菌摄子无菌操作将可疑纸片移种到乳糖发酵管里，置37℃24小时培养后，对其产酸产气者判为大肠菌群阳性，否则判为阴性。
大肠菌群量的多少与结果的显示密切相关，可出现3种不同现象：⑴菌量较晕)；⑵菌量适中(102～103 cfu/ml)，整个纸片也变黄，但有小而密集的红色斑点；⑶菌量较少(≤102cfu/ml)，纸片可呈紫蓝色，并有散在或较密集的红色斑点，其周围变黄。因此菌量较大时，可能出现可疑现象。此时应通过加大样品稀释度或进一步做复发酵进行证实。其它可疑现象也可通过发酵实验进行确认。
【标本处理】
1、样品处理：液体样品按国标方法进行；固体样品，取25g样品，研碎加入25ml灭菌盐水混匀。
2、接种：液体样品吸取三个1mL分别涂布于三疑于三张纸片，再吸取1︰10、1︰100稀释液各三个1ml，分别涂布于三张纸片。固体样品，吸取1︰1混悬液三个1mL(1g)分别涂布于三张纸片，再吸取1︰10、1︰100稀释液各三个1ml，分别涂布于三张纸片，而后用手轻轻压平，置36±1℃温箱，培养15小时观察结果。
【检验原理】应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC(红四碳唑)还原成不可逆的Formazane产生红色色素，即大肠菌在纸片培养上呈红菌落，菌落周围产生黄圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。