2020高考生物一轮复习课件：第13单元 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序
①能在宿主细胞内稳定存在并大量复 制；
某种特定核苷酸序列；
②在特定位点上切割 ②T4 DNA 连接酶能连 ②有一个至多个限制酶切割位点；
接黏性末端和平末端 ③ 具有特殊的标记基因
常用类型 EcoR Ⅰ限制酶、Sma E·coli DNA连接酶、 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病
Ⅰ 限制酶
T4 DNA 连接酶
毒等
2. 与DNA相关的酶
பைடு நூலகம்
(1)与DNA相关五种酶的比较
限制酶
DNA连接酶
两个(具有相同
含有目的基因的
原料
黏性末端或平末
DNA 端)DNA片段
具有黏性末端或
平末端的目的基
产物
一个DNA片段
因和其他DNA片
段
化学键 破坏磷酸二酯键 形成磷酸二酯键
解旋酶 双螺旋 DNA
部分解旋的 DNA
破坏氢键
DNA聚合酶 DNA(水解)酶
A. 限制酶作用DNA过程中将碱基对之间的氢键切断 B. 目的基因经BamHⅠ切割后形成的黏性末端是—CTAGG C. 经两种酶处理得到的重组质粒不能再被这两种酶所识别 D. 分别用两种限制酶切割，保证了目的基因定向插入质粒
[解析] 限制性核酸内切酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列， 并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，A错误；目的基 因经BamH Ⅰ切割后形成的黏性末端是—CTAG，B错误；经两种酶处理得到的重组 质粒不能再被这两种酶所识别，C正确；分别用两种限制酶切割，由于形成的黏性 末端相同，因此并不能保证目的基因定向插入质粒，D错误。
4. 理解PCR技术 (1)PCR技术原理
(2)RCR技术中所需要的条件
条件
作用
有一段已知目的基因的核苷酸序列
便于合成引物
在一定的缓冲液中进行
提供相对稳定的pH环境
抓核心 ·解疑释 惑
考点一 基因工程的基本工具
核心提炼
1. 基因工程的三种工具
限制酶
DNA连接酶
载体
作用
切割目的基因和载体
拼接DNA片段，形成 重组DNA
携带目的基因进入受体细胞
一条脱氧核苷酸链上的相邻两个核苷酸之间的
作用部位 磷酸二酯键
——
作用特点 (条件)
①识别双链DNA 分子的
①E·coli DNA连接酶 只能连接黏性末端；
栏 目 导 航
过基础 ·自我排查 抓核心 ·解疑释惑 验效果 ·随堂演练
过基础 ·自我排 查
一、 基因工程的概念
项目
内容
主要技术 操作环境 操作水平
体外DNA重组技术和转基因技术 _体___外_
_分___子___水__平_
理论依据
基因重组
供体
提供_目___的___基___因
受体
表达目的基因
基本过程 本质 优点
(3)标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光基因等，其作用是鉴别受体细胞中 是否含有目的基因(目的基因是否导入成功)，从而将含目的基因的细胞筛选出来。
(4)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配 对现象：第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步存 在检测时的分子水平杂交。
方法规律
对限制酶切割位点的三点要求 (1)位置要求：限制酶切割位点所处的位置必须在标记基因外，只有这样才能保 证标记基因的完整性。 (2)数量要求：选择限制酶切割目的基因时，被选择的限制酶在目的基因的两侧 都要有识别序列，这样才能切割出完整的目的基因。
(3)对象要求 ①在获取目的基因和切割载体时通常用同一种限制酶，以获得相同的黏性末 端。但如果用两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同时，在DNA连接酶的作用 下目的基因与载体也可以连接起来。 ②为了防止载体或目的基因的黏性末端自己连接，即所谓“环化”，可用不同 的限制酶分别处理目的基因和载体，使目的基因两侧及载体上具有两个不同的黏性 末端。
模板链和游离的 DNA
4种脱氧核苷酸
分子
游离的脱氧核苷 新的DNA分子
酸 形成磷酸二酯键 破坏磷酸二酯键
(2)限制酶和DNA连接酶的关系图示
(3)DNA连接酶和DNA聚合酶的主要区别 连接的对象不同。DNA连接酶连接两个DNA片段，催化两个DNA片段之间形 成磷酸二酯键；而DNA聚合酶是把游离的脱氧核苷酸连接到引物或者已有的DNA单 链上，催化形成磷酸二酯键。
(2)目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所 以目的基因应插入启动子与终止子之间的部位。
(3)启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子 ①启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端。它是RNA聚合酶 识别、结合的部位。终止子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端，作用 是使转录过程停止。 ②起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译过程的启动和终止。
下列有关基因工程的载体中标记基因的说法，不正确的是( D ) A. 可检测重组DNA分子是否导入了受体细胞 B. 可指示哪些细胞是转化细胞 C. 可指示载体DNA分子中是否插入了外源DNA片段 D. 可检测目的基因在受体细胞中是否成功表达 [解析] 检测目的基因是否转录采用分子杂交技术，检测目的基因是否翻译采 用抗原—抗体杂交法，D错误。
考点二 基因工程的操作程序重点解读 核心提炼
1. 理解基因表达载体的构建 (1)基因表达载体的组成
(2)一般构建过程
2. 目的基因导入受体细胞的比较
生物种类
植物
动物
微生物
农杆菌转化法、基因枪 常用方法
法、花粉管通道法
显微注射技术
感受态细胞法
受体细胞 体细胞或受精卵
受精卵
原核细胞等
将目的基因插入Ti质粒 将含有目的基因的表达 Ca2＋处理细胞→感受
第十三单元 现代生物科技专题
构网络·理清脉络
①_限___制___性__核___酸___内__切___酶___(_限_ 制②酶_D__)N__A__连___接__酶___ ③__目__的___基___因 ④__基___因__表___达___载__体⑤_检__测___与___表_ 达⑥__循__环___再___生⑦_植___物___组___织__培___养 ⑧_单___克__隆___抗_ 体⑨__胚__胎___移___植
3. 载体必须具备的条件分析 条件
稳定并能复制 有一个至多个限制酶切割位点
具有特殊的标记基因
适应性 目的基因稳定存在且数量可扩大
可携带多个或多种外源基因 便于重组DNA的鉴定和选择
4. 最常见的标记基因——抗生素的抗性基因 目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基 因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应 抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受 体细胞，原理如下图所示：
命题研究
_限制酶的选择和利用 (2018·江苏模拟)已知限制性核酸内切酶XmaⅠ和SmaⅠ的识别序列分别 为C↓CCGGG和CCC↓GGG。下列有关这两种酶及应用的叙述，错误的是( B ) A. 这两种酶作用的底物都是双链DNA B. DNA中出现这两种酶识别序列的概率不同 C. XmaⅠ切割DNA形成的黏性末端是—GGCC D. 使用这两种酶时需注意控制反应温度、时间等
第1讲 基因工程的基本工具与操作程序
析考情·明确考向
考查内容 等级要求 五年考情
素养体现
基因工程的
诞生
A
生命观念：熟练说出DNA 重组技术的基本工具及其
作用、特点；
科学思维：简述基因工程
2018年T32； 基本操作程序，以及各步 2017年T33； 骤的一般方法、原理，构
基因工程的
2016年T33； 建出操作流程图；
的T－DNA上→农杆菌 载体提纯→取卵(受精 态细胞→重组表达载体
转化过程 →导入植物细胞→整合 卵)→显微注射→受精 (DNA分子与感受态细
到受体细胞染色体的 卵发育→获得具有新性 胞混合)→感受态细胞
DNA上→表达
状的动物
吸收DNA分子
3. 图解目的基因的检测与鉴定
易错提醒
(1)限制酶剪切目的基因与质粒的次数不同：获取一个目的基因需限制酶剪切2 次，共产生4个黏性末端或平末端，切割质粒则只需要限制酶剪切1次，因为质粒是 环状DNA分子，而目的基因在DNA分子链上。
_基因载体和标记基因 (2018·徐州模拟)质粒是基因工程中最早应用的载体，下列相关叙述正 确的是( B ) A. 质粒只有一个限制酶切割位点 B. 质粒上有特殊的标记基因 C. 质粒不能在受体细胞中自我复制 D. 质粒含有2个游离的磷酸基团 [解析] 质粒有一个或多个限制酶切割位点，A错误；质粒上有特殊的标记基 因，便于鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞，B正确；普通质粒在宿主细胞内也 能进行自我复制，C错误；质粒是环状DNA分子，没有游离的磷酸基团，D错误。
[解析] 限制酶作用的底物是双链DNA分子，A正确；这两种限制酶作用的核 苷酸序列相同，所以识别序列的概率相同，B错误；根据碱基互补配对原则， CCCGGG的互补链是GGGCCC，并根据XmaⅠ的切割位点可知，切割后的黏性末 端是—GTAG，C正确；温度能影响酶的活性，所以使用酶时需要注意控制反应温 度和时间等，D正确。
(5)农杆菌转化法原理：农杆菌易感染植物细胞，并将其Ti质粒上的T－DNA转 移并整合到受体细胞染色体DNA上。
(6)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为 转化。转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。
(7)受体细胞的选择：受体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受 精卵(一般不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性 的胰岛素则必须用真核生物酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)；一般不用 支原体，原因是其营寄生生活；一定不能用哺乳动物成熟的红细胞，原因是其无细 胞核，不能合成蛋白质。
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高考生物一轮复习讲义—基因工程的基本工具和基本操作程序(新人教版)
高考生物一轮复习讲义—基因工程的基本工具和基本操作程序（新人教版）课标要求1.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。
2.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。
3.按照实验操作步骤，进行DNA的粗提取与鉴定实验。
4.利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。
考点一重组DNA技术的基本工具1．基因工程的概念别名重组DNA技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平结果创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品2.基因工程的诞生和发展(1)肺炎链球菌转化实验不仅证明DNA是遗传物质，还证明了DNA可在同种生物不同个体之间转移。
(2)DNA双螺旋结构的提出和半保留复制的证明。
(3)中心法则的确立。
(4)遗传密码的破译。
(5)基因转移载体和限制酶、DNA连接酶和逆转录酶的发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
(6)DNA体外重组的实现。
(7)重组DNA表达实验的成功。
(8)DNA测序和合成技术的发明。
(9)PCR技术的发明。
(10)基因组编辑技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。
3．重组DNA技术的基本工具(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)(2)DNA连接酶(3)载体(1)源于选择性必修3 P71“旁栏思考”：①原核生物中存在限制酶的意义是什么？提示原核生物中限制酶的作用是切割外源DNA以保证自身安全，防止外来病原物的危害。
②限制酶来源于原核生物，为什么不能切割自己的DNA分子？提示原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(2)源于选择性必修3 P72“旁栏思考”：DNA连接酶和DNA聚合酶不是(填“是”或“不是”)一回事。
原因是①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。
(通用版)2020版高考生物一轮复习第1讲基因工程课件(选修3)
选修3 现代生物科技专题
第1讲 基因工程
Contents
NO·1 广度抓基础——生物兼具文科特质，点多面广需记清 NO·2 深度解重难——生物更具理科思维，融会贯通是根本
NO· 广度抓基础
1
——生物兼具文科特质，点多面广需记清
1．基因工程的基本工具
2．基因工程的基本操作程序
3．蛋白质工程
4．DNA 的粗提取与鉴定 1．实验原理
根据基因工程的有关知识，回答下列问题： (1)经 BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被 ________酶切后的产物连接，理由是__________________ ___________________________________________________。 (2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有 目的基因的重组子，如图(c)所示。这三种重组子中，不能在宿 主细胞中表达目的基因产物的有________，不能表达的原因是 __________________________________________________ _______________________________________________。 (3)DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶，常见的有 ________________和________________，其中既能连接黏性末 端又能连接平末端的是______________。
(6)用不同浓度的 NaCl 溶液反复溶解与析出 DNA 可去除蛋白质
(√)
(7)提取 DNA 时，如果没有鸡血材料，可用猪血代替
(×)
(8)在 DNA 的粗提取与鉴定实验中，用菜花替代鸡血作为实验
材料，其实验操作步骤相同
第1讲 基因工程
Contents
NO·1 广度抓基础——生物兼具文科特质，点多面广需记清 NO·2 深度解重难——生物更具理科思维，融会贯通是根本
NO· 广度抓基础
1
——生物兼具文科特质，点多面广需记清
1．基因工程的基本工具
2．基因工程的基本操作程序
3．蛋白质工程
4．DNA 的粗提取与鉴定 1．实验原理
根据基因工程的有关知识，回答下列问题： (1)经 BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被 ________酶切后的产物连接，理由是__________________ ___________________________________________________。 (2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有 目的基因的重组子，如图(c)所示。这三种重组子中，不能在宿 主细胞中表达目的基因产物的有________，不能表达的原因是 __________________________________________________ _______________________________________________。 (3)DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶，常见的有 ________________和________________，其中既能连接黏性末 端又能连接平末端的是______________。
(6)用不同浓度的 NaCl 溶液反复溶解与析出 DNA 可去除蛋白质
(√)
(7)提取 DNA 时，如果没有鸡血材料，可用猪血代替
(×)
(8)在 DNA 的粗提取与鉴定实验中，用菜花替代鸡血作为实验
材料，其实验操作步骤相同
2020版广西高考生物人教一轮复习课件：第13单元 第1讲 基因工程
体系构建·随堂演练
-20-
核心梳理 提能探究 考向感悟 归纳总结
基因工程的基本操作程序 1.目的基因的获取 (1)目的基因:主要是指 编码蛋白质 的基因。 (2)获取目的基因的方法 ①直接分离a.如果基因比较小,核苷酸序列又已知,可以通过 DNA合成仪 用化学方法直接人工合成。 b.以RNA为模板,在 逆转录酶 的作用下人工合成。 (3)扩增目的基因:利用 PCR技术 扩增目的基因。 ①PCR的原理: DNA复制 。
(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制 所需的原料来自 。
核心考点分层突破
-16-
核心梳理 提能探究 考向感悟 归纳总结
答案:(1)能自我复制、具有标记基因 (2)二者均不含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均不生长 含有质粒载体 含有插入了目的基因的重组质粒(或含有重组质粒) 二者均含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长 四环素 (3)受体细胞
答案:(1)自我复制 抗原—抗体杂交 (2)热稳定DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶) 一定的缓冲溶液 温 度 (3)内细胞团 接触抑制 胰蛋白酶
核心考点分层突破
-13-
核心梳理 提能探究 考向感悟 归纳总结
解析:(1)根据题干信息“载体经基因工程改造后,只对细胞实施一 次感染,不能复制”可知,在“今又生”的生产中,为了获得更高的安全 性能,科学家选择性地放弃了具有复制原点的载体。检测目的基因 是否表达产生蛋白质可采用抗原—抗体杂交技术。(2)PCR技术是 在较高温度下进行的,因此该技术中需使用热稳定DNA聚合酶。与 体内DNA复制相比较,PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行, 并且要严格控制温度等条件。(3)胚胎干细胞来源于囊胚的内细胞 团或胎儿的原始性腺;在培养时,细胞充满培养皿底部后停止分裂, 这种现象称为接触抑制。如果想继续培养,需要用胰蛋白酶处理, 然后分瓶继续培养,这样的培养过程通常被称为传代培养。
高三生物一轮复习课件选修基因工程 PPT
三、基因治疗曙光初照
• 基因诊断:
也称为DNA诊断或基因探针技术,即在 DNA水平分析检测某一基因,从而对特定 得疾病进行诊断。
探针制备:放射性同位素(如32P)、荧光 分子等标记得DNA分子;
原理:利用DNA分子杂交原理;
• 基因诊断技术在什么方面发展迅速？
在诊断遗传性疾病方面发展迅速。目前 已经可以对几十种遗传病进行产前诊断。
• 基因探针:
基因探针就就是一段与目得基因或DNA互 补得特异核苷酸序列。她包括整个基因,或 基因得一部分;可以就是DNA本身,也可以 就是由之转录而来得RNA。
1)将细菌用CaCl2处理,以增大细菌细胞壁得通透 性。
2)使含有目得基因得重组质粒进入受体细胞。
3)目得基因在受体细胞内,随其繁殖而复制,由于 细菌繁殖得速度非常快,在很短得时间内就能获得 大量得目得基因。
目得基因与载体得结合过程,实际上就 是不同来源得基因重组得过程。
步骤三:目得基因导入受体细胞
目得基因进入受体细胞内,并且在受体细 胞内维持稳定和表达得过程,称为转化。
什么叫显微注射技术？
用口径为1μm得DNA注射器,将大量得 目得基因片段注入到受精卵得核内,然后 把经过注射得受精卵移植到另一只雌性 动物得子宫内,使受精卵发育为转基因动 物。
1、 限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
限制酶主要就是从原核微生物中分离纯化 出来得。能识别双链DNA得某种特定核苷酸序 列,并且使每一条链中特定部位得两个核苷酸之 间 得磷酸二酯键断开。
特点:特异性。
即一种限制酶只能识别一种特定得核苷酸 序列,并且能在特定得切点上切割DNA分子。
大肠杆菌(EcoRΙ)得一种限制酶能识别 GAATTC序列,并在G和A之间切开。
高三一轮基因工程共27页PPT资料
目的 人工种子；
培育；③检测有毒物质；
④生产药物、杀虫剂等；④生理、病理、药理学
⑤转基因植物的培育 的研究
3．下列有关细胞工程的叙述中，不. 正确的是
( D)
A．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压
(2019·江苏高考，20－A)
B．去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶
处理
植物细胞
动物细胞 微生物细胞
农杆菌转化法、基
常用
显微注射技 感受态细胞法
因枪法、花粉管通
方法
术
(用 Ca2＋处理)
道法
受体 受精卵、体细胞 受精卵
细胞
原核细胞
(4)目的基因的检测与鉴定：
1．下列有关基因工程的叙述中，不．正确的是(双选)( BC ) A．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点
载体。
(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用
未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______________ __未_处__理__的_大__肠__杆_菌__吸__收__质_粒。(外源 DNA)的能力极弱
细胞工程
1．植物体细胞杂交与单克隆抗体的制备过程比较
步骤 植物体细胞杂交过程 原生质体的制
(2011·浙江高考，6－B)
B．应用DNA 探针技术可以检测转基因抗冻番茄植株中
目的基因的存在及其完全表达(2011·四川高考，5－D)
C．用限制性核酸内切酶可以切割烟草花叶病毒的核酸
(2010·浙江高考，2－A)
D．将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得
能产生人干扰素的菌株
(2010·全国卷Ⅱ， 5－B)
基因B
C．利用DNA 聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
高考生物一轮复习：第讲基因工程的基本工具与操作程序教学课件
高考生物一轮复习PPT课件： 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序ppt
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第1讲 基因工程的基本工具与操作程序
高考生物一轮复习PPT课件： 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序ppt
析考情·明确考向
考查内容 等级要求 五年考情
素养体现
基因工程的
诞生
A
生命观念：熟练说出DNA 重组技术的基本工具及其
作用、特点；
科学思维：简述基因工程
2018年T32； 基本操作程序，以及各步 2017年T33； 骤的一般方法、原理，构
二、 基因工程的基本工具
高考生物一轮复习PPT课件： 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序ppt
高考生物一轮复习PPT课件： 第1讲 基因工程的基本工具与操作程序ppt
三、 基因工程的操作程序 1. 基本操作程序
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高三一轮复习：基因工程正式ppt课件
达到治疗疾病的目的。病人细胞中既有缺陷基因，也有
正常基因。
高考总复习.生物
二、 植物基因工程与动物基因工程的成果
外源基因类型及举例
成果举例
抗虫转基 因植物
抗虫基因：Bt毒蛋白基 因、蛋白酶抑制剂基因、 淀粉酶抑制剂基因
抗虫水稻、抗虫棉、 抗虫玉米
抗病转基 因植物
抗病毒基因：病毒外壳 蛋白基因、病毒的复制 酶基因抗真菌基因：几 丁质酶基因
3．PCR技术扩增目的基因
高考总复习.生物
(3)PCR技术扩增目的基因 ①原理：_D_N__A_复__制___。 ②过程 第一步：变性：_D__N_A__解__链__；第二步：复性：引物结合到 互补DNA链；第三步：延伸：在热稳定DNA聚合酶作用下， 从引物起始合成互补链。 2.基因表达运载体的构建 (1)目的：使目的基因在受体细胞中_稳__定__存__在___，并且可以 _遗_传__至__下_一__代_，使目的基因能够__表__达__和_发__挥_。作用 (2) 组 成 ： 目__的__基__因____ ＋ __启__动__子____ ＋ ___终__止__子___ ＋ __标__记__基__因__
三、将目的基因导入受体细胞
生物 种类
植物细胞
动物细胞
常用 农杆菌转化 显微注射技
方法 法
术
受体 细胞
体细胞
受精卵
高考总复习.生物
微生物细胞
感受态细胞 法
原核细胞
转化 过程
将目的基因 插入Ti质粒 的TDNA上→ 农杆菌→导 入植物细胞 →整合到受 体细胞的
将含有目的 基因的表达 载体提纯→ 取卵(受精卵 )→显微注射 →受精卵发 育→获得具 有新性状的
用是（ ）C
2020版高考生物一轮复习第1讲基因工程课件苏教版选修3
2．根据质粒的特点确定限制酶的种类 (1)所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致， 相同的黏性末端。 (2)质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择 量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶 SmaⅠ会破坏标 果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能丢失某些 失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体 自主复制。
图(c) (3)DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶
___________和______________，其中既能连接黏性末端 末端的是________。
解
解析：(1)由题图可知，BamH Ⅰ 和 Sau3A Ⅰ 两种 酶的共同识别序列是错误！，二者切割可以形成相同的黏性 经 BamH Ⅰ酶切得到的目的基因可以与图(b)所示表达载 Ⅰ酶切后的产物连接。(2)在基因表达载体中，启动子应 因的首端，终止子应位于目的基因的尾端，这样基因才 录，再完成翻译过程，即顺利表达。图中甲所示的目的 启动子的上游，丙所示目的基因插入在终止子的下游， 基因均不能被转录，因此目的基因不能表达。(3)常见的 D 有 E·coliDNA 连接酶和 T4DNA 连接酶，其中 T4DNA 连接黏性末端又能连接平末端。
(2)限制酶和 DNA 连接酶的作用部位相同吗？DNA 连 用时，是否需要模板？
提示：相同，都是磷酸二酯键。不需要模板。
1．基因工程技术使用限制酶需注意的四个问题 (1)获取目的基因和切割载体时，经常使用同一种限制 用能切出相同末端的不同限制酶)，目的是产生相同的黏性 末端。 (2)获取一个目的基因需限制酶切割两次，共产生 4 个 或平末端。 (3)限制酶切割位点的选择，必须保证标记基因的完整 于检测。 (4)为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也 同的限制酶切割目的基因和质粒。