实验二、骨髓细胞染色体制片与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
作业与思考题
• 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
• 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
一、中心体（4×10）
• 马蛔虫子宫横切片全貌
中心体（10×10）
中心体（40×10）
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片
高尔基体（10×10）
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
• 器材与试剂
• 内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
• 3、简述实验中应注意那些关键问题？
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
40
10
（100×10）
高尔基体（40×10）
骨髓实验报告
实验名称：小鼠骨髓细胞染色体制备与观察实验时间：2023年10月25日实验地点：生物实验室一、实验目的1. 学习骨髓细胞染色体制备的基本方法。
2. 观察并分析小鼠骨髓细胞的染色体形态和结构。
3. 掌握显微镜观察细胞染色体的技能。
二、实验原理骨髓是人体造血的重要器官，骨髓细胞具有丰富的染色体。
通过染色体制备技术，可以将骨髓细胞的染色体进行染色和制片，便于在显微镜下观察和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠骨髓细胞、秋水仙素、甲醇、醋酸、Giemsa染液等。
2. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子等。
四、实验步骤1. 取小鼠骨髓细胞，用秋水仙素处理，使细胞染色体浓缩。
2. 收集处理后的细胞，加入甲醇和醋酸固定，进行低渗处理。
3. 将低渗细胞进行离心，制成细胞悬液。
4. 将细胞悬液滴在载玻片上，用盖玻片覆盖。
5. 将载玻片放入烤箱，进行空气干燥。
6. 将干燥后的载玻片放入Giemsa染液中染色。
7. 将染色后的载玻片取出，用蒸馏水冲洗，晾干。
8. 使用显微镜观察染色后的骨髓细胞染色体。
五、实验结果与分析1. 观察到小鼠骨髓细胞染色体呈条状，具有明显的着丝粒。
2. 染色体长度不一，有的较短，有的较长。
3. 部分染色体存在交叉现象，表明存在同源染色体。
4. 部分染色体出现断裂，可能是由于秋水仙素处理不当导致。
六、实验讨论1. 秋水仙素是一种诱导细胞有丝分裂的药物，能够使细胞染色体浓缩，便于观察。
2. 甲醇和醋酸固定能够使细胞染色体固定在一定的形态，有利于染色。
3. 低渗处理能够使细胞染色体膨胀，便于观察。
4. 染色体制备过程中，应注意操作规范，避免染色体断裂和交叉现象。
七、实验总结本次实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体，并进行了观察和分析。
通过实验，掌握了骨髓细胞染色体制备的基本方法，提高了显微镜观察细胞染色体的技能。
在实验过程中，应注意操作规范，避免染色体断裂和交叉现象。
同时，还需加强对实验原理和操作技巧的学习，为今后的实验研究打下坚实基础。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告实验目的：本次实验的目的是通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握常规细胞检测技术。
实验原理：细胞核持有着生物体的遗传信息，而染色质可以分为染色体和非染色体两种，其中染色体是由DNA及其辅助蛋白组成的。
通过细胞分裂过程中，染色体会缩短、厚度增加、染色带可清晰分辨等特点来进行分类和编号。
利用这些特点可以制备出动物骨髓细胞染色体标本。
实验步骤：1. 首先准备动物骨髓细胞样品，可通过小鼠骨髓涂片或静脉血（受试者需要同意），将样品转移到已经预处理好的无菌平板上。
2. 在离心管中加入10ug/ml的柱前荧光素-ethidium bromide(PI)，再将细胞样品加入离心管中，轻轻摇晃片刻，稍微放置几分钟。
3. 用宽口的滴管取少许制片液，滴在已经处理好的载玻片上，尽量保证滴管斜着滴落制片液，避免气泡出现，将载玻片浸泡于制片液中。
4. 轻轻捞取离心管中的细胞样品，均匀地滴在制片液的中心处，然后放置在湿度大于80%，温度为37°C的恒温箱内1-2h。
5. 制片完成后，对载玻片进行显微镜检查，选择细胞密度适当、染色较清晰的染色体标本进行下一步操作。
6. 将载玻片放置在冷却的媒体溶液（0.075mol/L KCl及0.9%NaCl）中，冷冻10-20min。
7. 取出载玻片，使用正差相干显微镜观察着染色体的分布和形态，并进行拍照记录。
8. 得到的染色体标本可用于常规染色体学诊断。
实验结果：通过本次实验制备得到的动物骨髓细胞染色体标本，可以进行常规染色体学分析，观察细胞核中的染色体数目、形态和结构等特征，并可以用于细胞遗传学研究和临床诊断。
实验结论：本次实验通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深了对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握了常规细胞检测技术。
通过观察和分析染色体标本的形态和结构，可以进行细胞遗传学的研究与临床诊断。
骨髓细胞染色体的制备与观察
实验步骤： 实验步骤：
1．秋水仙素注射
称出小白鼠（ 65-90天龄 的体重， 天龄） 称出小白鼠（约65-90天龄）的体重，然后按 4ml/Kg体重的剂量经腹腔注射0.1%秋水仙素0.1ml， 体重的剂量经腹腔注射0.1%秋水仙素0.1ml 4ml/Kg体重的剂量经腹腔注射0.1%秋水仙素0.1ml， 4h后颈椎脱臼法处死 后颈椎脱臼法处死。 3～4h后颈椎脱臼法处死。
染色体技术的应用及其意义
染色体技术应用领域：临床医学、病毒学、药理学、 染色体技术应用领域：临床医学、病毒学、药理学、遗 传毒理学、特殊细胞的标记、杂种细胞的鉴定等。 传毒理学、特殊细胞的标记、杂种细胞的鉴定等。 染色体技术应用意义： 染色体技术应用意义： (1)用于染色体组型分析 用于染色体组型分析； (1)用于染色体组型分析； (2)物种的特征及种属亲缘关系 物种的特征及种属亲缘关系； (2)物种的特征及种属亲缘关系； (3)分析物种的变异和进化过程 分析物种的变异和进化过程； (3)分析物种的变异和进化过程； (4)识别单条染色体及基因定位 识别单条染色体及基因定位； (4)识别单条染色体及基因定位； (5)染色体疾病研究 肿瘤学研究及产前诊断； 染色体疾病研究、 (5)染色体疾病研究、肿瘤学研究及产前诊断； (6)环境毒物 临床药物毒性检测。 环境毒物、 (6)环境毒物、临床药物毒性检测。
常用实验生物和人细胞DNA含量 常用实验生物和人细胞DNA含量 DNA 与染色体数目
物 种 染色体数目 DNA含量（bp）
果蝇 海胆 蛙 小鸡 小鼠 玉米 人
8 52 26 78 42 20 46
1.4×108 1.4× 1.6×109 1.6× 4.5× 4.5×109 2.1× 2.1×109 4.7× 4.7×109 3×109 3.2×109 3.2×
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×40
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
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秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
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三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
实验二动物骨髓细胞染色体畸变分析
实验二动物骨髓细胞染色体畸变分析一、实验目的学习动物骨髓细胞染色体标本制作，了解动物体内染毒及染色体畸变类型。
二、实验原理染色体畸变的产生与微核的形成原理相同，观察终点不同，染色体畸变只能在细胞分裂的中期相进行观察和分析。
为收集足够的中期相细胞，在收获细胞前，用秋水仙碱或乙酰甲基秋水仙碱处理，以阻断微管蛋白的聚合，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使分裂间期和前期的细胞停留在中期相。
细胞通过低渗，使染色体均匀散开，然后固定、染色，可在油镜下观察。
三、器材与试剂1、器材小剪刀、镊子、10ml离心管、滴管、载玻片、离心机、水浴箱、生物显微镜（100物镜）、注射器（5ml）2、试剂500mg/L秋水仙素，0.75mol/L KCl液；固定液甲醇3份冰醋酸1份混匀，临用时配；姬姆萨（Giemsa）储备液取Giemsa染料lg，逐渐加入少许甘油在研钵中研细溶解，共加入甘油60ml混匀。
于60℃水浴中保温2h，冷却后再加66ml甲醇混匀，于室温中静置1～2周，过滤置棕色瓶保存备用；pH6.8磷酸盐缓冲液：取甲液49.5m1，乙液50.5ml混匀即可。
甲液1/15mo1/L Na2HPO4：称取Na2HPO49.48g溶于1000ml蒸馏水中。
乙液1/15mo1/L KH2PO4称取KH2PO49.07g溶于1000ml蒸馏水中，若Na2HPO4或KH2PO4含有结晶水，应重新计算称取量；环磷酰胺或丝裂霉素C；PBS Na2HPO4 1.15g、NaH2PO40.2g、KCl0.2g、NaCl8.0g 溶于1000ml蒸馏水中。
四、实验设计1、动物一般选用成年大、小鼠，每组6～10只，最好雌雄各半。
2、染毒与取样时间一般染毒一次或多次，多次更为合理。
研究证明即使损伤的细胞不会积累，化学物质也需在靶器官蓄积至一定的浓度才有诱变作用。
一般在未次染毒后24h 处死动物，收获细胞。
3、剂量选择最高剂量应达最大耐受剂量或毒物的30％～80％LD50剂量，低毒物质应以最大给药量或大于人使用剂量的50～100倍。
实验动物染色体标本的制备与观察
注射器 解剖器 移液管 载玻片 盖玻片 光学显微镜
四、实验内容
1、注射秋水仙素（按4μg/g的剂量） 2、取骨髓细胞：股骨，剪掉两端，2%柠檬酸钠冲 洗，离心管收集，取下针头，反复吸打 3、低渗： 0.4%Kcl，8~10ml，37±0.5℃， 10min； 1000rpm，8min 4、固定：固定液5ml，注意不要冲动细胞团块 （？），轻轻吸打细胞，静置20min。固定2~3次。 5、滴片：干净、冷、湿的载玻片上，2~3滴，文 火烘干。 6、染色:Giemsa染液,10min。 7、镜检。（绘图） 疑问：有的染成蓝色，有的染成紫红色，为什么？
3、小白鼠染色体的特点：呈“U”型，全部 为端着丝粒染色体； 40条（19对常+1对性）
一些常见动物的染色体数目： 家兔：44 野兔：48 猪：38 黄牛：60 马：64 驴子：62 骡子：63 猩猩：48 金丝猴：44 猫：38 狗：78
三、实验材料与仪器
1、材料：小白鼠 2、试剂：
2%柠檬酸钠、0.1%秋水仙素（现用现 配）、Giemsa染液（pH6.8） 0.4%Kcl溶液
颈椎脱臼法
股骨
取骨髓细胞
滴片
图: 小白鼠染色体
拓展实验
1、实验前不给小白鼠腹腔注射秋水仙素 （每组2只）
2、注射秋水仙素后2h、 4h、 6h、 8h 后再进行试验
五、作业及思考题
1、制备的小白鼠染色体标本，分裂相是否 多，染色体分散程度如何？有什么不足处， 原因何在？
2、如果在实验前不给小白鼠腹腔注射秋水 仙素，所制备的染色体制片会出现怎样的情 况？
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❖ 材料：小鼠。
四、实验步骤
预处理
❖取材前28h背部注射10%的 ❖取材前3-4 h腹腔注射0.02﹪秋
酵母液，每只0.4ml。
水仙素溶液(0.01 ml／g体重)
腹腔内注射秋水仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
滴片：视末次离心后获得细胞的多少留固定液0.2-0.4 ml。用细头滴管轻轻打匀。取冰浴中的载玻片一张， 甩掉载玻片上的冰水后，迅速用吸管吸取细胞悬液， 从35-40cm的高度滴到载玻片上，每张载片滴2-3滴， 滴面不要重复，立即用嘴向一个方向轻轻吹开，使细 胞染色体散开，但避免将细胞吹到一端。在酒精灯上 过火2-3次，自然干燥备用。每只动物滴3-5张标本。
低渗：1000 r／min离心7 min后弃掉上清液， 留下的细胞加人0.075 mol／L KCl低渗液6 ml，用吸管将骨髓细胞吹打成细胞悬液， 37℃恒温水浴锅中低渗30 min。
预固定：加入新配制固定液(甲醇:冰醋酸 3:1) 5-6滴， 轻轻打匀，室温下预固定5 min。
固定：1000 r／min离心7 min，弃上清液，留细胞； 加入4 ml新鲜固定液，轻轻打匀，室温下固定25 min； 离心(条件同上)后弃上清留细胞。此步骤反复2次（时 间紧张可只做一次）。
（注：6为肱骨，14即股骨）
取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断， 否则容易造成骨髓细胞的流失。
滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将 皮肤、肌肉等组织清除干净。
取骨髓细胞：用剪刀剪开股骨的两端使骨髓 露出。用注射器抽取3 ml生理盐水，从一头 插入骨髓腔缓慢冲洗，冲洗液接入10ml离心 管内，洗至骨髓腔变灰白色。
骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效 果差，因此要进行必要的处理：
酵母液诱导增加分裂期的细胞数量； 秋水仙素使细胞处于有丝分裂中期； kcl溶液低渗使细胞膨胀； 甲醇和冰醋酸固定使染色体保持完好的形态。
三、实验用品
❖ 器材：解剖盘、解剖剪、镊子、白纱布 、10ml离心管、滴管、5ml注射器、烧 杯、载玻片、盖玻片、酒精灯、显微镜 、离心机和恒温培养箱等。
预冷的玻片
染色：将玻片平放于桌上，用吉姆萨使用液染色 15-20 分钟后，用蒸馏水或自来水小心冲去染液， 吸干后镜检。
结果显示
05级生物技术，40倍物镜
05级生物技术，100倍物镜
12拔尖班-赵堃
实验报告
❖ 绘图表示动物染色体的典型形态。
❖ 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的 关键步骤。
实验二、骨髓细胞染色体 制片与观察
同济大学生命科学与技术学院
一、实验ห้องสมุดไป่ตู้的
❖ 学习活体小鼠骨髓细胞染色体标本的制 片技术；
❖ 观察小鼠有丝分裂中期的染色体数目、 结构及其特征。
二、实验原理
❖骨髓存在于长骨（肱骨、股骨）的骨 髓腔和扁平骨（如骼骨）的稀松骨质 间的网眼中，是一种海绵状的组织。 骨髓中存在造血多能干细胞，具有高 度自我更新的能力（即有丝分裂）， 并能分化为各血细胞系统的祖细胞 （如淋巴系干细胞、粒系干细胞）。