脂肪肝临床研究的几个环节
脂肪肝细胞实训报告
一、实训背景随着社会经济的发展和生活水平的提高，脂肪肝已成为我国最常见的慢性肝病之一。
脂肪肝的发病机制复杂，涉及多个环节。
为了深入了解脂肪肝的发生发展过程，提高脂肪肝的防治水平，本次实训以脂肪肝细胞为研究对象，旨在通过观察脂肪肝细胞的形态学变化、检测相关生化指标等手段，探讨脂肪肝的发病机制。
二、实训目的1. 了解脂肪肝的基本概念、发病机制和临床表现；2. 掌握脂肪肝细胞的培养、观察和检测方法；3. 分析脂肪肝细胞的形态学变化和生化指标，探讨脂肪肝的发病机制；4. 提高实验操作技能和数据分析能力。
三、实训内容1. 脂肪肝细胞培养（1）取人肝细胞株（如HepG2）进行培养，待细胞生长至对数生长期时，用胰蛋白酶消化细胞，制成细胞悬液；（2）将细胞悬液接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养；（3）定期观察细胞生长情况，待细胞融合达到80%左右时，进行实验。
2. 脂肪肝细胞观察（1）取脂肪肝细胞进行苏木精-伊红（HE）染色，观察细胞形态变化；（2）利用光学显微镜观察脂肪肝细胞内脂滴的积累情况；（3）比较脂肪肝细胞与正常肝细胞的形态差异。
3. 脂肪肝细胞生化指标检测（1）检测脂肪肝细胞中的甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等血脂指标；（2）检测脂肪肝细胞中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）等肝功能指标；（3）比较脂肪肝细胞与正常肝细胞的生化指标差异。
四、实训结果与分析1. 脂肪肝细胞观察通过HE染色和光学显微镜观察，发现脂肪肝细胞内脂滴积累明显增多，细胞形态发生变化，细胞体积增大，细胞核偏位。
与正常肝细胞相比，脂肪肝细胞具有明显的形态学差异。
2. 脂肪肝细胞生化指标检测（1）血脂指标：脂肪肝细胞中的TG、TC、LDL-C水平显著高于正常肝细胞，说明脂肪肝细胞内脂滴积累导致血脂代谢紊乱；（2）肝功能指标：脂肪肝细胞中的ALT、AST水平显著高于正常肝细胞，提示脂肪肝细胞存在肝细胞损伤。
中医辨证治疗脂肪肝的临床研究
中医辨证治疗脂肪肝的临床研究目的研究中医辨证法治疗脂肪肝的临床疗效。
方法将40例脂肪肝患者随机分为两组，治疗组在结合合理的饮食和运动的基础上，采用中医辨证治疗法，通过与对照小组进行比较，分析中医辨证治疗法的疗效。
结果治疗小组中采用中医辨证治疗患者的总够效率及痊愈率比对照小组中患者高，有统计学意义。
辩证三型中，治疗有效率最低的是气血瘀阻型，最高的是肝郁脾虚型，充分体现了病理变化越严重，治疗效果越差在脂肪肝到脂肝炎再到脂肪性肝硬化的变化过程。
结论通过中医辨证法治疗脂肪肝一方面完善了辩证治疗法，能够作为各型脂肪肝转化的指标，另一方面体现了中医治疗特色的重要性，有利于临床治疗过程中的用药选择，提高了中医治疗脂肪肝的疗效。
标签：中医辨证治疗；脂肪肝；临床疗效脂肪肝常见发病部位是脾脏及肝脏，是脂肪细胞中沉积着过量如甘油三酯等脂肪，造成肝脏不能正常代谢的功能疾病。
激素治疗或化疗、高脂血症、营养不良和代谢性或内分泌疾病都对脂肪肝的发病机制有很大影响，发病原因为脾脏及肝脏中出现瘀、湿、痰等症状，因此可以通过清热化湿、调和肝脾及祛痰化瘀等的途径来治疗脂肪肝患者[1]。
本研究基于中医辨证治疗原理，结合合理的饮食和运动，采取补脾益肾的一系列方法来患者进行治疗。
1资料与方法1.1一般资料将我院于2008年6月～2012年6月收治的共40例脂肪胺患者作为研究对象，患者年龄范围为25～80岁，平均年龄为（50.6±3.9）岁，男女比例为27：13，平均病史为（6.9±2.4）年。
40例患者有9例中度脂肪肝（Ⅱ型）患者，31例轻度脂肪肝（Ⅰ型）患者。
脂肪肝被中医辨证划分成气血瘀滞型、痰瘀阻络型以及肝郁脾虚型三型，其中患者所占人数分别为8例、14例及18例。
1.2方法将40例脂肪肝患者随机分为两组，其中，对照组治疗过程中，从饮食、心理和运动角度对患者进行引导，具体措施为：将患者的饮食调整为低糖、高蛋白、低脂和高纤维素或高维生素的结构；引导患者调整心态，保持心态的平和，此外，还要协助并鼓励患者坚持进行进行有效的锻炼。
脂肪肝临床路径标准
脂肪肝临床路径标准（一）适用对象。
第一诊断为脂肪肝（ICD-10：K79.000）（二）诊断依据。
根据《实用内科学（第14版）》（复旦大学医学院编著，人民卫生出版社）及《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南(2010年修订版)》等临床诊疗指南。
凡具备下列第1～5项和第6或第7项中任何一项者即可诊断为NAFLD。
1.无饮酒史或饮酒折含乙醇量小于140g/wk（女性＜70g/wk）；2.除外病毒性肝炎、药物性肝病、全胃肠外营养、肝豆状核变性等可导致脂肪肝的特定疾病；3.除原发疾病临床表现外，可有乏力、消化不良、肝区隐痛、肝脾肿大等非特异性征象；4.可有体重超重/内脏性肥胖、空腹血糖增高、血脂紊乱、高血压等代谢综合征相关组分；5.血清转氨酶和γ-谷氨酰转肽酶水平可有轻至中度增高（小于5倍正常值上限），通常以丙氨酸转氨酶（ALT）增高为主；6.肝脏影像学表现符合弥漫性脂肪肝的影像学诊断标准；7.肝活检组织学改变符合脂肪性肝病的病理学诊断标准。
（三）进入路径标准。
1.第一诊断必须符合ICD-10：脂肪肝疾病编码(K76.000)。
2.当患者同时具有其他疾病诊断，但在住院期间不需要特殊处理也不影响第一诊断的临床路径流程实施时，可以进入路径。
（四）标准住院日。
7-10天（五）住院期间的检查项目。
1.必需的检查项目除详细采集包括近期体质量和腰围变化、饮酒史、药物与肝脏毒性物质接触史以及糖尿病和冠心病家族史外：（1）人体学指标（身高、体质量、腰围）和动脉血压；（2）血常规、尿常规、大便常规+隐血；（3）肝肾功能、血脂（包括TG、HDL-C、低密度脂蛋白-胆固醇的血脂谱）；（4）空腹血糖（FPG）和糖化血红蛋白，如果FPG≥5.6mmol/L 且无糖尿病史者则做口服75g葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test, OGTT）：（5）肝炎病毒标志物筛查：HBsAg（阳性者检测HBV DNA）、抗-HCV（阳性者检测HCV RNA）：（6）抗核抗体；（7）腹部超声。
脂肪肝病理诊断标准
脂肪肝病理诊断标准
一、肝细胞脂肪变性
肝细胞脂肪变性是指肝脏内肝细胞脂肪蓄积，是脂肪肝的主要病理特征。
在病理学上，肝细胞脂肪变性被视为一种可逆性损伤，可以通过改善生活习惯、治疗原发病等方式逆转。
二、肝细胞损伤
脂肪肝患者常常伴有不同程度的肝细胞损伤，包括肝细胞水肿、炎症细胞浸润、肝细胞凋亡等。
这些损伤进一步加重了脂肪肝的病情，并可能导致肝功能异常。
三、纤维化和肝硬化
长期严重的肝细胞损伤和脂肪变性可导致肝脏纤维化
和肝硬化。
肝脏纤维化是指肝脏内纤维组织增生和沉积，是肝脏对损伤的一种修复反应；肝硬化则是肝脏纤维化的进一步发展，导致肝脏结构和功能发生严重改变。
四、病因学评估
脂肪肝的病因多种多样，包括酗酒、肥胖、糖尿病、高血脂、药物等因素。
在病理诊断中，医生会评估患者的病因，以制定相应的治疗方案。
五、病理学评估
病理学评估是脂肪肝诊断的重要环节，包括肝组织活检、细胞学检查等。
通过病理学评估，医生可以了解肝脏病
变的范围和程度，判断脂肪肝的类型和分期，并对患者预后进行评估。
总之，脂肪肝的病理诊断标准涉及多个方面，包括肝细胞脂肪变性、肝细胞损伤、纤维化和肝硬化、病因学评估以及病理学评估等。
医生需要根据这些标准综合判断患者的病情，制定相应的治疗方案。
第二讲 非酒精性脂肪肝的临床流行病学研究
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脂肪肝的实验研究
脂肪肝的分类
根据病因分类
酒精性脂肪性肝病
（alcoholic fatty liver
disease,AFLD)
酒精性脂肪肝（AFL）
酒精性肝炎 酒精性肝纤维化 酒精性肝硬化
非酒精性脂肪性肝病 单纯性脂肪肝（NAFL）
（non-alcoholic fatty liver
脂肪性肝炎（NASH）
disease,NAFLD)
关系最密切的是高甘油三酯血症，脂肪肝发病率为 60~80%，常伴有肥胖和糖尿病
3、皮质醇增多症、妊娠等亦可导致脂肪肝
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四、生物性致病因素
肝炎病毒HBV和HCV感染可引起脂肪肝
特别是HCV感染患者中80%伴脂肪肝
五、遗传因素
先天性代谢性肝病：肝豆状核变性、半乳糖血症、
肝糖原贮积病等
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酒精性脂肪肝的发病机制
长期大量摄入酒精是导致ALD的主要原因
酒精对肝脏直接毒性作用 氧化应激和脂质过氧化的作用 细胞因子的作用
第一次打击 第二次打击
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酒精对肝脏直接毒性作用 AFLD发病机制
NAD+
NADH
乙醇
乙醇脱氢酶ADH
微粒体乙醇氧化酶系
细胞因子表达增强tnfil8等脂质过氧化反应生物膜结构功能破坏抑制膜蛋白功能线粒体损伤不饱和脂肪酸logo45nafld的发病机制肝组织脂肪酸ros增多激活kupffer细胞释放大量细胞因子如tnftgf1pdgf等肝细胞炎症坏死肝纤维化logo46nafld的发病机制转化生长因子tgf1肝纤维化主要始动因子之一tgf1肝星状细胞hsc活化增殖肌成纤维细胞并分泌胶原纤维血小板衍生生长因子pdgf目前已知的hsc最强的丝裂原能刺激hsc活化增殖转化为肌成纤维细胞促进肝纤维化的发生logo47酒精性脂肪肝的发病机制细胞因子的作用第一次打击第二次打击logo48afld发病机制乙醇乙醛乙酸乙醇脱氢酶adh微粒体乙醇氧化酶系meosnadnadh乙醛脱氢酶nadnadh促进自由基产生促进膜的脂质过氧化与丙二醛mda等形成加合物损伤肝脏抑制vldl合成肝内tg转运障碍肝tg堆积乙醛nadhnad抑制线粒体三羧酸循环氧化肝内tg堆积logo49afld发病机制酒精含量高时其代谢主要由微粒体乙醇氧化酶系meos起作用meos主要成分为细胞色素p4502e1cyp2e1在酒精诱导下活化产生大量ros引发氧化应激和脂质过氧化造成肝组织炎症细胞损伤logo50afld发病机制ros等激活kupffer细胞释放大量细胞因子如tgf1pdgf等促进肝纤维化tnf在ald中占重要地位长期大量饮酒肠道菌群过度生长肠粘膜屏障通透性肠细菌移位肠源性内毒素血症激活kupffer细胞释放大量tnf组织炎症反应肝细胞凋亡坏死激活中性粒细胞增加ros的生成logo51logo52理想的实验模型造模停止后组织学病变逆转缓慢便于药物干预研究logo53afld特殊品系脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型毒物或药物性脂肪肝动物模型体外诱导模型复合模型急性酒精性肝病动物模型慢性酒精性肝病动物模型体外诱导模型logo54nafld模基因突变或基因敲除1obob小鼠dbdb小鼠或fafa大鼠obob小鼠ob基因自发突变dbdb小鼠db基因自发突变fafa大鼠fa基因自发突变瘦素受体缺乏瘦素抵抗瘦素抵抗瘦素缺乏瘦素缺乏可出现与人类nafld相似的特征
脂肪肝(县医院适用版)
脂肪肝临床路径（2017年县医院适用版）一、脂肪肝临床路径标准住院流程（一）适用对象。
第一诊断为脂肪肝（ICD-10：K79.000）（二）诊断依据。
根据《实用内科学（第14版）》（复旦大学医学院编著，人民卫生出版社）及《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南(2010年修订版)》等临床诊疗指南。
凡具备下列第1～5项和第6或第7项中任何一项者即可诊断为NAFLD。
1. 无饮酒史或饮酒折含乙醇量小于140 g/wk（女性< 70 g/wk）；2. 除外病毒性肝炎、药物性肝病、全胃肠外营养、肝豆状核变性等可导致脂肪肝的特定疾病；3. 除原发疾病临床表现外，可有乏力、消化不良、肝区隐痛、肝脾肿大等非特异性征象；4. 可有体重超重/内脏性肥胖、空腹血糖增高、血脂紊乱、高血压等代谢综合征相关组分；5. 血清转氨酶和γ-谷氨酰转肽酶水平可有轻至中度增高（小于5倍正常值上限），通常以丙氨酸转氨酶（ALT）增高为主；6. 肝脏影像学表现符合弥漫性脂肪肝的影像学诊断标准；7. 肝活检组织学改变符合脂肪性肝病的病理学诊断标准。
（三）进入路径标准。
1.第一诊断必须符合ICD-10：脂肪肝疾病编码(K76.000)。
2.当患者同时具有其他疾病诊断，但在住院期间不需要特殊处理也不影响第一诊断的临床路径流程实施时，可以进入路径。
（四）标准住院日。
7-10天（五）住院期间的检查项目。
1.必需的检查项目除详细采集包括近期体质量和腰围变化、饮酒史、药物与肝脏毒性物质接触史以及糖尿病和冠心病家族史外：（1）人体学指标（身高、体质量、腰围）和动脉血压；（2）血常规、尿常规、大便常规+隐血；（3）肝肾功能、血脂（包括TG、HDL-C、低密度脂蛋白-胆固醇的血脂谱）；（4）空腹血糖（FPG）和糖化血红蛋白，如果FPG≥5.6mmol/L 且无糖尿病史者则做口服75g葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test, OGTT）：（5）肝炎病毒标志物筛查：HBsAg（阳性者检测HBV DNA）、抗-HCV（阳性者检测HCV RNA）：（6）抗核抗体；（7）腹部超声。
脂肪肝的诊断标准
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脂肪肝的诊断标准
(三)影像学检查及其他检查 1、B型超声、CT、MRI检查对确诊有很大价值。2、肝 活检是确诊脂肪肝的主要方法。在光学显微镜下，肝细胞内、 外脂肪浸润；电子显微镜下观察，实验室脂肪肝的改变可出 现中性脂肪堆积在线粒体或其他细胞器中。
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脂肪肝的诊断标准
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脂肪肝的诊断标准
(二)病史、临床表现 脂肪肝的诊断常不容易确立，有下列病史对诊断有一定帮 助。 1、过去史中有前述引起脂肪肝的原因者。如酒精性脂肪肝 有长期酗酒史，尤其是酒精成分高的白酒。肥胖、糖尿病、静 脉高能营养、使用有关yao物及接触毒物都有各自的临床症状 和体征，容易区别。2、有难以用其他原因解释的上消化道症状 者(应做胃镜检查是否存在慢性胃炎等)及排除胃神经官能症者。 3、肝脏肿大，平，滑，软，边缘钝圆，无明显压痛，且无其他 确定肝病者。4、排除慢性病毒性肝炎、血吸虫肝、肝寄生虫等 肝脏疾病。
脂肪肝的诊断标准2021/4/9分享来：山西疾控肝病诊疗中心1
脂肪肝的诊断标准
“因为平时应酬多，经常要陪领导、客户吃饭喝酒，慢慢的 肚子变大了，人也开始发福了，家人经常调侃说，哎呀，都有 老板肚了，福气啊。有段时间，我发现自己有点精神不振，食 欲也下降了，看到油腻的东西就犯恶心，于是到医院检查，医 生说我患了脂肪肝，已经有点严重了。我当时就被吓倒了，我 很着急。”一家小公司的王老板跟山西疾控肝病诊疗中心的常 教授说着自己的经历。
脂肪肝及时治疗是可有效逆转或控制的，亦可大大提升 脂肪肝的治疗效果及预后。山西疾控肝病诊疗中心专家根据 脂肪肝的各种病因以及综合现代人的工作、生活习惯和环境 等各种因素，建议采用中西医结合特色疗法，抑制脂肪堆积， 促进脂肪代谢，保肝护肝并重，已经为数千例脂肪肝患者解 除了疾病之患。