蛋白质含量测定法考马斯亮蓝法
考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量：分光光度的使用
2．校正 （1）打开吸收池暗室盖，调节[0% T]旋钮， 使数字显示为“00.0”，将参比溶液置于光路， 盖上吸收池盖，调节透光率[100% T] 旋钮， 数字显示为“100.0”。 （2）如果显示不到“100”，则可适当增加电 流放大器灵敏度档数，当改变灵敏度 后必须重 新校正“0”和“100”。 （3）按（1）连续几次调整“00.0”和 “100.0”后，将选择开关置于“A”，调节吸光 度调零旋钮，使数字显示为“.000”，即可进行 吸光度A的测量.
考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋 白质含量：分光光度的使用
【实验目的】
1. 掌握考马斯亮蓝染色法定量测
定蛋白质的原理与方法。 2. 熟练分光光度计的使用和操作
方法。
【实验原理】 考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量 属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝 G250在酸性溶液中呈棕红色，最大吸 收峰在465nm；当它与蛋白质通过范 德华键结合成复合物时变为蓝色，其 最大吸收峰移至595nm，而且消光系 数更大。
灵敏度
0
100
暗盒盖
调波长旋钮
比色皿拉杆
1．调整
（1） 接通电源。 （2） 调波长调节器至所需波长。 （3） 开启电源开关，指示灯亮，选择开关置
于“T”，将灵敏度旋钮调至”1”档位，调节透 光率[100%T]。预热20min . 预热仪器应在不测定时，将比色皿暗箱盖打开， 使光路切断。
液。残渣用2.0ml蒸馏水悬浮，
4000rpm离心10min，合并上清液并含量测定:
取3支试管，各吸取样品提取液0.1ml，
加入考马斯亮蓝G250试剂3.0ml，充分振荡
混合,放置5min后，测 A595值。
3. 根据A595值，在标准曲线上求出样品中蛋 白含量。
实验8考马斯亮蓝法测蛋白质的含量
对实验条件进行优化，如调整PH值、反应时间、温度等，以提高实验
结果的稳定性。
03
应用拓展
进一步研究考马斯亮蓝法在特殊蛋白质或不同来源蛋白质测定中的应用，
拓展其应用范围。同时，可以探索与其他蛋白质测定方法的比较研究，
为蛋白质定量分析提供更多选择。
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标准曲线的绘制
加样
将标准蛋白溶液分 别加入相应的试管 中。
测定光密度值
在特定波长下测定 各试管的光密度值， 记录数据。
准备标准蛋白溶液
制备一系列不同浓 度的标准蛋白溶液。
显色反应
向每个试管中加入 适量的考马斯亮蓝 溶液，混合均匀。
绘制标准曲线
根据测得的光密度 值与标准蛋白浓度 绘制标准曲线。
加样
样品稀释
根据实验需求，将蛋白质 样品进行适当稀释，以便 后续测量。
样品标记
对每个样品进行标记，以 便后续结果分析时能够准 确对应。
考马斯亮蓝溶液的配制
准备试剂
储存与使用
按照实验要求准备考马斯亮蓝溶液所 需的试剂。
将配制好的考马斯亮蓝溶液储存于棕 色瓶中，避免光照，使用前摇匀。
配制溶液
将各试剂按比例混合，制备出考马斯 亮蓝溶液。
影响因素
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时，PH值、反应时间、温度等因素 可能影响实验结果。
适用范围
考马斯亮蓝法适用于大多数蛋白质的定量测定，但对于某些特殊蛋 白质或不同来源的蛋白质可能存在一定误差。
对实验的改进建议与展望
01
标准化操作
为提高实验准确性，建议对实验操作进行标准化，减少人为误差。
02
优化条件
考马斯亮蓝与蛋白质结合的机制
蛋白质含量的测定考马斯亮蓝染色法
➢ 蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合2min左右达到平衡，完成反应
十分迅速，其结合物在室温1h内保持稳定
➢ 考马斯亮蓝G-250染色法简单迅速，灵敏度高，一些阳离子如
K些+去、污Na剂+、如MTgri2t+o、nXN-H104+0以、及SD乙S等醇严等重物干质扰都测不定干，扰且测样定品，测但定一 后不能回收
度计的光源
➢ 单色器 把混合光波分解为单一波长光的装置 在分光光度计中多用棱镜或光栅作为色散元件 ✓ 棱镜：是根据光的折射原理而进行的分光系统，当一束平行光进入棱镜散
射器后就会按波长顺序分解成单一波长的单色光
✓ 光栅：是利用光的衍射和干涉原理进行的分光系统
转动棱镜或光栅的波长盘，可以改变单色器出射光束的波长，调节出入射
狭缝隙的宽度，可以改变出射光束的带宽和单色光的纯度
纯粹的单色光只是一种理想情况，实际上只是具有一定波长范围的谱带，
对于单色光纯度来说，狭缝是越窄越好，但光的强度也就越弱
➢ 吸收池
亦称样品室、比色池或吸收池，由透明材料（有机玻璃、石英或蓝宝石等）
制成
在紫外光波区检测选用石英、蓝宝石比色杯；在可见光波区检测可选用有机
➢血清蛋白质含量的计算：利用标准曲线，根据血清蛋白测定的 吸光值求出相应的蛋白含量，注意稀释倍数
பைடு நூலகம்
六、实验思考
➢如何正确使用722型可见光分光光度计？ ➢考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量的原理是什么？ ➢考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量有什么优缺点？
➢人眼可见的光只占电磁波谱的很小一部分（400~760nm）。它是一种频率较 大的电磁波。电磁波按频率大小，从频率最小的无线电波到频率最大的γ-射线 排成一列，即组成电磁波的波谱，如下图所示
蛋白质含量测定法考马斯亮蓝法
蛋白质含量测定法——考马斯亮蓝法[实验目的]学习、掌握考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质含量的方法[实验原理]（蓝色）变为氨基酸芳香族碱性染料考马斯亮蓝磷酸nm G 595250m ax λ−−→−+-[器材与试剂]器材722型可见光分光光度计、漩涡混合器、试管16支 试剂1.标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA ），配制成1.00mg/ml 。
2.考马斯亮蓝G-250染料试剂：称100mg 考马斯亮蓝，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85% 的磷酸，用水稀释至1升。
[实验方法]标准方法1.取10支试管，分别编号后按 表1 剂量依次加入标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮蓝染料。
每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。
2.加完染料20min 后，使用722分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。
3.用标准蛋白浓度（mg/ml ）为横坐标，用A 595为纵坐标，进行直线拟合，得到标准曲线。
根据测得的未知样品的A 595，代入公式即可求得未知样品的蛋白质含量。
根据所测样品的吸光度,在标准曲线上查得相应的蛋白质含量,按下式计算: 样品蛋白质含量(μg/g 鲜重)=）测定时提取液体积（）样品重（）提取液总体积（）查得的蛋白质（ml g ml g g ⨯⨯/μ以蛋白标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
计算出回归方程。
如Y=aX+b让后把待测样品的吸光值代入回归方程，算出待测样品浓度 SDS 干扰实验1.取5支试管，分别编号后按表2剂量依次加入标准蛋白、SDS 、去离子水和考马斯亮蓝染料。
每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。
2.加完染料20min 后，使用753分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。
[实验数据与结果分析]（一）标准方法的数据和图表1 考马斯亮蓝标准法实验表格根据表1，以A595为纵坐标，标准蛋白质量/（μg）为横坐标，作图1。
蛋白质的定量测定---考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度
实验名称：蛋白质的定量测定---考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度【实验原理】考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质-燃料结合的原理。
考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液时呈茶棕色，最大吸收峰在465nm。
当与蛋白质结合后变成深蓝色，最大吸收峰转至595nm，且其光吸收值与蛋白质含量（10~100μg/ml蛋白质浓度）成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
【实验准备】一、材料（1）血清二、试剂（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50ml 95%乙醇中，加入100ml 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000ml。
(2)标准蛋白质溶液：结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根基其纯度用0.15mol/L NaCl配置成1.0mg/ml蛋白溶液。
（3）0.9% NaCl溶液。
三、器材（1）试管和试管架（2）722型分光光度计（3）吸量管（4）移液枪【实验步骤】一、制作标准曲线取6支干燥洁净的试管，编号按下表加入试剂光度值（A595值）。
以吸光度值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘出标准曲线。
二、血清蛋白质浓度测定测定方法同上。
1mL稀释血清加2.5mL考马斯亮蓝试剂，血清用0.9%NaCl稀释200倍，使其测定值在标准曲线的直线范围内。
用上述0号管调零，测出血清的A595值。
【实验结果】以吸光度A595（2）根据所测血清的值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，乘以稀释倍数，从而计算出血清的蛋白质浓度（mg/ml）0.26 mg/ml【实验讨论】①必须在试剂加入后的5~20min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。
②测定中蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将比色杯洗干净。
③不要将标准蛋白质和待测蛋白质搞混，以免造成实验结果的改变。
④考马斯亮蓝（ＣＢＢ）显色法测定蛋白质含量的主要缺点之一是线性关系差．通过研究显色液组分对线性关系的影响，发现显色液Ｈ＋浓度是影响线性关系的主要因素【1】。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量1. 前言嘿，朋友们，今天咱们聊聊一个有趣的话题——考马斯亮蓝法，听起来挺高大上的吧？其实这玩意儿就是用来测定蛋白质含量的，简单来说，就是看看你的食物里到底有多少“肌肉”的成分。
想象一下，咱们吃的肉、蛋、豆腐，都是富含蛋白质的食物，咱们用这个方法可以精确地知道它们含有多少蛋白质，绝对是个好玩的实验，来吧，跟我一起揭开它的神秘面纱。
2. 什么是考马斯亮蓝法？2.1 简单介绍首先，咱们来聊聊什么是考马斯亮蓝法。
它其实是一种颜色变化的实验，听起来是不是有点像魔法？你只要把样品（比如说一小块肉或者一勺蛋白质粉）放在试管里，加点特殊的染料，这染料就叫考马斯亮蓝，之后再加点酸溶液，哇，你会发现颜色发生了变化。
更厉害的是，颜色的深浅就能告诉你蛋白质的含量，简直像变魔术一样！这就是为什么它受到许多科学家和实验室的青睐。
2.2 原理揭秘那么，这个颜色变化的背后，究竟有什么科学原理呢？嘿，别着急，听我慢慢说。
考马斯亮蓝这种染料会和蛋白质中的氨基酸发生反应，形成一种稳定的复合物。
这就像是小伙伴们在一起聚会，越多人参加，气氛就越热烈。
随着蛋白质的浓度增加，复合物的数量也就随之增加，所以颜色也会越来越深。
只要用仪器测量一下颜色的深度，咱们就能算出蛋白质的含量，真是既简单又方便。
3. 实验步骤3.1 准备工作想要在家里试一试这个方法，当然得先做好准备。
首先，你得准备好一些材料：考马斯亮蓝染料、酸性溶液（一般用盐酸就可以）、待测样品（不妨试试豆腐或者鸡肉），还有一些基本的实验器材，比如试管、比色皿、量筒等。
别小看这些东西，有时候实验的成功与否就看这些小玩意儿了。
3.2 操作步骤接下来，就是真正的实验时刻了！首先，咱们把待测样品处理一下，比如切成小块，然后用水萃取出蛋白质。
接着，把提取液倒入试管，加入考马斯亮蓝染料，搅拌均匀。
再倒入酸性溶液，注意，这里要控制好比例，不然可就要出乱子了。
然后，静置几分钟，让颜色充分反应。
考马斯亮蓝法测蛋白质含量
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量欧阳学文一、标准曲线一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。
因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
二、蛋白质含量测定方法1、凯氏定氮法2、双缩脲法3、Folin酚试剂法4、紫外吸收法5、考马斯亮蓝法三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作（一）、试剂：1、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。
最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2、标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材：1、722S型分光光度计使用及原理（）。
2、移液管使用（）。
（三）、标准曲线制作：1、A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
1）、利用标准曲线查出回归方程。
2）、用公式计算回归方程。
3）、或用origin作图，测出回归线性方程。
即A595nm=a×X( )+6一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。
4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
（四）、蛋白质含量的测定：样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。
（五）、注意事项：1、玻璃仪器要洗涤干净。
2、取量要准确。
3、玻璃仪器要干燥，避免温度变化。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
试剂与器材
1.试剂: (1)标准蛋白质溶液，用牛血清蛋白配制成
0.1 mg/ml (2)考马斯亮兰G-250染料试剂：称100 mg
考马斯亮兰G-250，溶于50ml 95%的乙 醇后，再加入120 mL 85 %的磷酸，用水 稀释至1L。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2.器材 (1)紫外可见光分光光度计 (2)试管8支
操作步骤
五种不同蛋白质含量测定方法的比较值得注意的是除凯氏定氮法外其余四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定有可能得出四种不同的结果
考马斯亮蓝法测定 蛋白质含量
蛋白质的含量测定
目前常用的5种经典方法： 凯式定氮法（Kjedahl法） 紫外吸收法 双缩脲法（Biuret法） Folin-酚试剂法（Lorry法） 考马斯亮蓝法（Bradford法）
2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化剂）
➢在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于 H3BO3 溶液中，反应式为: (NH4)3SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
➢用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量 计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量，反 应式为： (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
Bradford 法的优点
(1)灵敏度高 其最低检测蛋白质含量可达1ug/ml,
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蛋白质含量测定法——考马斯亮蓝法
[实验目的]
学习、掌握考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质含量的方法
[实验原理]
（蓝色）变为氨基酸芳香族
碱性
染料考马斯亮蓝磷酸nm G 595250max λ−−→−+
-
[器材与试剂]
器材
722型可见光分光光度计、漩涡混合器、试管16支 试剂
1.标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA ），配制成1.00mg/ml 。
2.考马斯亮蓝G-250染料试剂：称100mg 考马斯亮蓝，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85% 的磷酸，用水稀释至1升。
[实验方法]
标准方法
1.取10支试管，分别编号后按 表1 剂量依次加入标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮蓝染料。
每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。
2.加完染料20min 后，使用722分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。
3.用标准蛋白浓度（mg/ml ）为横坐标，用A 595为纵坐标，进行直线拟合，得到标准曲线。
根据测得的未知样品的A 595，代入公式即可求得未知样品的蛋白质含量。
根据所测样品的吸光度,在标准曲线上查得相应的蛋白质含量,按下式计算: 样品蛋白质含量(μg/g 鲜重) =
）
测定时提取液体积（）样品重（）
提取液总体积（）查得的蛋白质（ml g ml g g ⨯⨯/μ
SDS 干扰实验
1.取5支试管，分别编号后按表2剂量依次加入标准蛋白、SDS 、去离子水和考马斯亮蓝染料。
每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。
2.加完染料20min 后，使用753分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。
[实验数据与结果分析]
（一）标准方法的数据和图
表1 考马斯亮蓝标准法实验表格
根据表1，以A595为纵坐标，标准蛋白质量/（μg）为横坐标，作图1。
图1 考马斯亮蓝标准法
根据线性拟合公式y=a x+b计算所测溶液的蛋白质的含量。
（二）SDS干扰数据和图
表2 考马斯亮蓝SDS干扰实验表格
根据表2，以A595为纵坐标，SDS浓度为横坐标，作图2。
图2 考马斯亮蓝SDS干扰实验
理论上，十二烷基硫酸钠(SDS)对考马斯亮蓝法测蛋白质含量有干扰，随着SDS浓度的增加，其混合液的595nm处的吸收峰逐渐降低，而后有一小段回升，最后趋于渐近线。
[结论]：
1．考马斯亮蓝标准法测得未知溶液中蛋白质含量为x mg/ml。
2．干扰考马斯亮蓝方法的物质中，SDS的干扰分析情况。
[干扰实验结果分析]：
当溶液中存在一定量的SDS后所测得的吸光度比正常值相对减小。
但是随着SDS 浓度的增加，吸光度的减小量应没有呈现出很明显的规律。
从SDS与蛋白质的作用机理来看，SDS可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构。
SDS 和蛋白质结合后使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，平均每两个氨基酸结合一个SDS分子，这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖。
由于SDS 的存在，阻碍了染料与碱性氨基酸和芳香族氨基酸的结合，使得吸光度减小。
由于SDS与染料分子对蛋白质的竞争结合，使得显色减弱，吸光度值降低，因此在曲线前段呈下降趋势；
但由于SDS破坏氢键，使得蛋白质的空间结构更加伸展，一些原来包裹在结构中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸暴露出来，所以会有少量的吸光度回升；但最终SDS与蛋白质的结合达到所处溶液条件下的“饱和”时，过量的SDS就不起作用了，曲线是最后为平缓段。
要去除SDS的干扰，可以利用它与K+结合生成沉淀的性质将其去除。
K+对考马斯亮蓝方法不产生干扰。
[思考与讨论]
1.用考马斯亮蓝法G-250测定蛋白质含量有何特点，操作过程中应注意什么？
答：Bradford 法的优点是（1）灵敏度高，其最低蛋白质检测量可达1μg。
这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化很大。
（2）测定快速、简便、只需要加一种试剂。
完成一个样品的测定，只需要5min左右，颜色在5min至20min之间稳定性也很好。
（3）干扰物质相对其它方法少。
缺点是（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差。
（2）仍有些物质干扰此法测定：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1mol/L的NaOH。
（3）标准曲线也有轻微的非线性。
操作注意事项：不可使用石英比色皿，可用塑料或者玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。
塑料比色皿决不可以用乙醇或丙酮长时间浸泡。
2.考马斯亮蓝G-250和R-250各有何特点，在电泳染色方面有何异同？
答：考马斯亮蓝G-250和R-250的结构式不同，配方不同，染色方法也适合于不同性质的蛋白。
考马斯亮蓝R-250即三苯基甲烷。
每个分子含有两个-SO3H，偏酸性，与蛋白质的碱性集团结合。
在一定pH时，染料—蛋白复合物可以被完全解聚。
与不同蛋白结合呈现基本相同的颜色，并且在比较宽的范围内(15-20μg)，扫描峰的面积与蛋白量有线性关系。
通常用先固定，再进行染色和脱色的方法。
考马斯亮蓝G-250即二甲花青亮蓝，其染色方法经常是对蛋白质同时进行固定和染色。
这种方法的特点是快而简便，有时甚至不需脱色。
但灵敏度略逊于R-250。
同时考马斯亮蓝G-250对小肽染色效果很好。
3.试述几种主要干扰物质对考马斯亮蓝G-250蛋白测定法测定结果的影响及其作用机理。
答：SDS的存在会使相同条件下的吸光度值减小，其作用机理为：断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构。
SDS和蛋白质结合后使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，平均每两个氨基酸结合一个SDS分子，这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖。
由于SDS与染料分子与蛋白质的竞争结合，会使显色减弱，所以吸光度值减小。
Tris，乙酸，2-巯基乙醇，蔗糖，甘油，EDTA及微量的去污剂如TritonX-100，玻璃去污剂有少量颜色干扰，用适当的缓冲液对照很容易除掉。
4.说明各种蛋白质含量测定法中哪几种可以测出蛋白质的绝对含量，哪几种只能测定其相对含量，为什么？
答：严格地讲，只有凯氏定氮法可以测定蛋白质的绝对含量，因为每6.25蛋白质含1g氮，所以，通过氮含量的测定，可以得到蛋白质的绝对含量。
其他的几种方法，由于都使用了标准蛋白制作标准曲线，所以，所测得的未知蛋白的含量，都是相对于标准蛋白含量而言的。
参考资料：
[1] 王德利等.食品中蛋白质的快速消化简便测定法.黑龙江八一农垦大学学报. 15（4）：80～82
[2]余冰宾.生物化学实验指导.清华大学出版社.2004
[3] 南亚,李宏高.考马斯亮蓝G-250法快速测定牛乳中的蛋白质.检测与分析.2007.10(12)：42～42
[4]黄婉玉等.考马斯亮蓝法测定果汁中蛋白质的含量.食品与发酵工业.2009.35(5) ：160～163
[5] 郭敏亮,姜涌明.考马斯亮蓝显色液组分对蛋白质测定的影响. 生物化学与生物物理进展.1996.23(6) ：558～561
[6]中国知网
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