pLVX-DsRed-Monomer-N1慢病毒载体使用说明
慢病毒载体使用手册
LentiCRISPRv2 and lentiGuide-Puro: lentiviral CRISPR/Cas9 and single guide RNA CRISPR (C lustered R egularly I nterspaced S hort P alindromic R epeats) is a microbial nuclease system involved in defense against invading phages and plasmids. CRISPR loci in microbial hosts contain a combination of CRISPR-associated (Cas) genes as well as non-coding RNA elements capable of programming the specificity of the CRISPR-mediated nucleic acid cleavage. Lentiviral CRISPR/Cas can infect a broad variety of mammalian cells by co-expressing a mammalian codon-optimized Cas9 nuclease along with a single guide RNA (sgRNA) to facilitate genome editing (Shalem*, Sanjana*, et al., Science 2014). Protocols for cloning into the lentiviral transfer plasmid and general considerations for producing lentivirus are described below. Separate protocols are available for amplifying the genome-scale CRISPR knock-out (GeCKO) libraries. This protocol is for creating individual lentiviral CRISPR plasmids targeting a single genomic locus.lentiCRISPRv2 (one vector system): This plasmid contains two expression cassettes, hSpCas9 and the chimeric guide RNA. The vector can be digested using BsmB I, and a pair of annealed oligos can be cloned into the single guide RNA scaffold. The oligos are designed based on the target site sequence (20bp) and needs to be flanked on the 3' end by a 3bp NGG PAM sequence, as shown on the next page.lentiGuide-Puro (two vector system): This plasmid expressed only the chimeric guide RNA. It does not contain Cas9. Please use lentiCas9-Blast (a separate lentiviral construct that delivers hSpCas9 and blasticidin resistance) to first integrate Cas9 into your cell line. The lentiGuide-Puro vector can be digested using BsmB I, and a pair of annealed oligos can be cloned into the single guide RNA scaffold. The oligos are designed based on the target site sequence (20bp) and needs to be flanked on the 3' end by a 3bp NGG PAM sequence, as shown on the next page.Which vector to use: lentiCRISPRv2 is identical to the original lentiCRISPRv1 but produces nearly 10X higher titer virus. lentiGuide-Puro produces >100X higher titer virus over lentiCRISPRv1 and should be used in cell lines where Cas9 has already been integrated in (e.g. using the separate lentiCas9-Blast lentivirus). For applications where Cas9 cannot first be introduced (e.g. primary cells), lentiCRISPRv2 is recommended. After transduction, use puromycin to select for cells with lentiCRISPRv2 or lentiGuide-Puro.Lentiviral production: Before starting any lentiviral work, please ensure compliance with your Environmental Health and Safety office and government/organization/university. Briefly, to make lentivirus, a transfer plasmid (e.g. lentiCRISPRv2 or lentiGuide-Puro) must be co-transfected into HEK293(F)T cells with the packaging plasmids pVSVg (AddGene 8454) and psPAX2 (AddGene 12260). As a positive control for viral production, we often use a CMV-EGFP lentiviral transfer plasmid (eg. AddGene 19319).Target design notes and online resources: For application of Cas9 for site-specific genome editing in eukaryotic cells and organisms, we have computationally identified suitable target sites for the S. pyogenes Cas9 and calculated most likely off-targets within the genome. Please visit to access these Cas9 target design tools. Complete plasmid sequences, protocols, a discussion forum and additional information can be found at the Zhang Lab GeCKO website: /gecko/ . Citation: Please reference the following publications for the use of this material.Improved lentiviral vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Sanjana NE*, Shalem O*, Zhang F. Nature Methods (2014).Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells. Shalem O*, Sanjana NE*, Hartenian E, Shi X, Scott DA, Mikkelsen T, Heckl D, Ebert BL, Root DE, Doench JG, Zhang F (2014). Science, 343, 83-7. DOI: 10.1126/science.1247005Target Guide Sequence Cloning ProtocolIn order to clone the target sequence into the lentiCRISPRv2 or lentiGuide-Puro backbone, synthesize two oligos of the following form. All plasmids have the same overhangs after BsmBI digestion and the same oligos can be used for cloning into lentiCRISPRv2, lentiGuide-Puro or lentiCRISPRv1.Example oligo design : Note that the NGG PAM is not included in the designed oligos. Oligonucleotide ordering tips : Standard de-salted oligos (usually the most inexpensive synthesis) are sufficient forcloning. If not already resuspended, dilute each oligo to 100 µM in sterile water or TE.* * * * *Lentiviral vector digestion, oligo annealing and cloning into digested vector:1. Digest and dephosphorylate 5ug of the lentiviral CRISPR plasmid with BsmB I for 30 min at 37C: 5 ug lentiCRISPRv2 or lentiGuide-Puro 3 ul FastDigest BsmB I (Fermentas) 3 ul FastAP (Fermentas) 6 ul 10X FastDigest Buffer 0.6 ul 100 mM DTT (freshly prepared) X ul ddH 2O 60 ul total2. Gel purify digested plasmid using QIAquick Gel Extraction Kit and elute in EB. If BsmBI digested, a ~2kb filler piece should be present on the gel. Only gel purify the larger band . Leave the 2kb band.3. Phosphorylate and anneal each pair of oligos: 1 ul Oligo 1 (100 µM) 1 ul Oligo 2 (100 µM) 1 ul 10X T4 Ligation Buffer (NEB) 6.5 ul ddH 2O 0.5 ul T4 PNK (NEB M0201S) 10 ul total Please use the T4 Ligation Buffer since the buffer supplied with the T4 PNK enzyme does not include ATP (or supplement to 1mM ATP).Put the phosphorylation/annealing reaction in a thermocycler using the following parameters: 37o C 30 min 95o C 5 min and then ramp down to 25o C at 5o C/min4. Dilute annealed oligos from Step 3 at a 1:200 dilution into sterile water or EB.5. Set up ligation reaction and incubate at room temperature for 10 min:X ul BsmB I digested plasmidfrom Step 2 (50ng)1 ul diluted oligo duplex from Step 4 5 ul 2X Quick Ligase Buffer (NEB) X ul ddH 2O 10 ul subtotal1 ul Quick Ligase (NEB M2200S) 11 ul total Also perform a negative control ligation (vector-only with water in place of oligos) and transformation.6.Transformation into Stbl3 bacteria . Lentiviral transfer plasmids contain Long-Terminal Repeats (LTRs) and must be transformed into recombination-deficient bacteria. We use homemade Stbl3 (propagated from Invitrogen C7373-03) and get excellent plasmid yields. Although other RecA- strains may work, we have found the most consistent transformations and yields using Stbl3.。
慢病毒使用操作手册
慢病毒使用操作手册：1 慢病毒使用操作2 慢病毒安全使用规范3 悬浮细胞感染方法概要4 相关专业术语(详情可参考公司网站FAQ)5 细胞培养器皿的相关参数1、慢病毒使用操作手册1.1 慢病毒的储存与稀释:1.1.1 病毒的储存：用户收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）A．病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前需要重新滴定病毒滴度B．反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融我们强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
1.1.2 病毒的稀释：用户需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
1.2 慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞1.2.1 慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，用户使用Invabio提供的慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）1.2.2 慢病毒感染目的细胞预实验1.2.2.1 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项A．测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
B．在进行慢病毒感染实验时,可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
C． Invabio提供的病毒单位为TU/ml, 即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
慢病毒生产及使用操作手册
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地址：上海市徐汇区斜土路 1175 号景泰大厦 1503 实验室：上海市张江高科技园区蔡伦路 150 号 1 号楼 2 楼 邮箱：service@
400-092-0065 021-54121689
慢病毒生产及使用操作手册
当细胞生长到汇合率达到 80%~90%时需要对细胞进行传代操作，以扩大细 胞数量，维持细胞良好的生长状态。
（三）做脂转 complex DMEM 需在 37 度水浴中预热，LipFiterTM 转染试剂需恢复至室温方可使用，
使用前需摇匀。
转染每瓶 T75 的 complex 成分如下：
pspax
10μg
PMD2G pHBLVTM 系列载体
10μg 10μg
转染后 6h 换新鲜培液。
注：LipoFiterTM 转染试剂为汉恒生物产品，使用说明参考 LipoFiterTM 说明书。 LipoFiterTM 转染最适的细胞密度为 50%-70%。
慢病毒生产及使用操作手册
慢病毒生产及使用操作手册
一、实验流程 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体 分别进行高
纯度无内毒素抽提，共转染 293T 细胞，转染后 6 h 更换为完全培养基，培养 48 和 72h 后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩 病毒。
2） 包装质粒信息如下： PSPAX2 及 PMD2G 载体图谱和序列信息 (购自 addgene)
2、细胞株 293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养 基为 DMEM(含 10% FBS)。贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。 3、菌株 大肠杆菌菌株 DH5α。用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。
（二）传 293T 细胞
慢病毒感染敲低细胞-傅锦林
慢病毒感染敲低流程
一、慢病毒包装
1．复苏293T细胞于10cm皿中，传至第3-4代。
2．转染病毒包装质粒（PEI转染）：
（1）转染前2小时换无血清培养基。
（2）质粒DNA稀释至1mlDMEM中，枪头吹匀（8μg shRNA 和各4μg pMDLg/pRRE, RSV-Rev, CMV-VSVG）。
（3）20μL PEI稀释至1mlDMEM中，用枪头缓慢吹匀，室温放置5min。
（4）DNA稀释液加到PEI稀释液中，缓慢吹匀,室温放置5min。
（5）DNA和PEI混合液加入到10cm皿293T细胞中，摇匀后于培养箱培养。
（6）4h后换有血清培养基。
3. 48h 和72h收集病毒液，保存于4度冰箱。
合并病毒液，3000rpm 离心10min取上清，0.45μm滤膜过滤，收集滤液。
二、病毒感染筛选
1．复苏HELA细胞于10cm皿中，传至2-3代。
2．细胞大约70%汇合度时，换8μg/ml polybrene的新鲜培养基，加2ml病毒液。
3．培养12h后继续感染（同2）。
4．感染后48h加puromycin至终浓度为3μg/ml。
5．感染后72h传代，继续使用puromycin筛选一代。
6．进行Western检验及其他试验。
傅锦林11.4。
慢病毒包装操作方案
慢病毒包装操作流程一、材料1 细胞培养试剂试剂名称终浓度试剂品牌胎牛血清10%Invitrogen/Gibco丙酮酸钠1mM Invitrogen2 慢病毒包装试剂PEG6000溶液50%Wako3 耗材●50 mL离心管●15 mL离心管●10 cm细胞培养皿●0.45μm过滤器● 2 mL EP管二、操作流程1细胞培养1.1293T/293FT细胞的复苏1)将完全培养液从4°C中取出放置到室温预热30 min左右。
在超净台内，用吸管吸取6~7mL完全培养液至15 mL离心管中；2)快速将冻存的细胞从液氮中取出，并迅速用镊子夹住盖子放入37°C 水浴中快速晃动（水不要没到盖子），使其在1~2分钟内完全融化；3)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，用吸管吸取所有融化的细胞悬液至装准备好的完全培养液中，轻轻吹打混匀，使冻存液分散开（目的是让DMSO分散，降低恢复室温的DMSO对细胞造成的毒性作用）。
4)在室温条件下，250 g离心4分钟。
5)离心后，在超净台内小心倒去上清，用吸管吸取2 mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移已经加好培养基的培养瓶/培养皿中，写上细胞名称、日期，放置37°C、5% CO2饱和湿度培养箱内培养。
（首次复苏细胞时，离心重悬后需取样计数，根据细胞数选择面积合适的培养容器。
）6)复苏翌日，给复苏的293T细胞更换新鲜的完全培养基。
1.2293T/293FT细胞传代1)待细胞长至60%-70%融合度即可传代。
将培养瓶里的所有培养液全部移去，用1×PBS洗涤细胞两次（洗涤速度要快，避免细胞干涸时间过长），以去除残余的培养液和血清（血清含有胰酶的抑制因子）；2)加入适当的胰酶溶液，能使其完全浸过细胞即可，室温孵育1-2分钟。
在显微镜下观察，可看到大部分细胞变圆不贴壁，拍打培养瓶两侧会有大量细胞脱离，此时应立即终止消化，若细胞仍然有大部分贴壁，可适当延长孵育时间；3)加入等体积完全培养液终止消化，并用吸管吹打培养瓶底2-3次使所有细胞彻底脱壁。
汉恒生物-慢病毒生产及使用操作手册第二版
2. 感染细胞最佳 MOI 的测定 MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒
数，通常 MOI 越高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。 对于分裂活跃的细胞，比如 Hela、293 细胞，MOI=1～3 时，80%以上的细胞均表 达目的基因。而对于非分裂细胞，比如原代细胞，感染效率较低。需要进行 MOI 梯度摸索实验，选择适合的 MOI 进行实验。
四、慢病毒包装和浓缩 （一）质粒扩增
构建好的慢病毒载体和辅助质粒需经过大量抽提，浓度大于 1ug/ul,A260/280 在 1.7-1.8 间方可用以包毒。推荐使用 Qiagen 大抽试剂盒进 行质粒的大量去内毒素抽提。 （二）传 293T 细胞
将培养 293T 细胞 T75 瓶中的培养基吸净，加入 2mL 4 度冰箱取出的 0.25% 胰酶，使其均匀覆盖瓶底，置于 37 度培养箱中 3-5min，取出，摇晃可发现细胞 于底部脱离，将其全部晃下，加入 3mL 37 度水浴中预热的 10％ DMEM，移液枪 用 10mL 移液管进行吹打，较大力吹打 6-8 次即可，不留死角，瓶口处较难吹打 可将移液管对准培口，小力将培养基打出即可覆盖到接近瓶口的细胞。之后，将 所有细胞吸出，置于 15mL 离心管中，取 50ul 混匀后的细胞于 1.5mL eppendorf
当细胞传代次数过多，细胞状态变差时，或者细胞出现污染事故时，需要丢 弃并对最初冻存的细胞进行复苏。
1、设置温度为 37~42℃的水浴。 2、查看细胞库记录，根据记录从液氮罐中取出冻存的细胞（需戴上棉手套， 防止被冻伤），迅速丢入水浴锅中并快速晃动，尽量在 1~2min 内使细胞溶液完全 溶解。 3、将细胞溶液转移到 15ml 离心管中，并在其中加上 1ml 新鲜的完全培养 基，混匀后离心，1000rpm，5min。 4、去掉上清，加入 5ml 新鲜的完全培养基，混匀沉淀后，转入 6cm 培养皿。 5、将培养皿平稳放入 37℃、5%CO2 和 95%相对湿度的培养箱中培养。 6、第二天观察细胞存活率。给细胞换一下培养基。以后每天观察细胞生长 情况。
慢病毒(Lentivirus)载体构步骤和方法
一、简介慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达.二、实验流程（大致的简单过程）慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。
慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。
为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体（自己构建）和包装质粒（购入）同时共转染细胞，在293T 细胞(购入)中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组,从而高水平的表达效应分子.大致的实验流程：1. 根据目的基因相关信息（序列,序列号等），构建含有外源基因或siRNA的重组载体；（即质粒构建，已构建好，质粒可以永久保存）2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒；3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒（购入）共转染293T 细胞[1]，进行病毒包装和生产，收集病毒液；4. 浓缩、纯化病毒液；5. 用高质量的病毒液感染细胞(293T细胞)；6。
通过定量PCR精确测定病毒滴度（高精确滴定方法）和Western 分析实验结果；7。
用高质量的病毒液感染宿主细胞；检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用药物进行稳定转染细胞株的筛选，通常状况下，筛选的细胞克隆株具有长期的表达稳定性.病毒液足够用于一般的动物活体实验。
三、重组质粒构建流程1.基因的获得：shRNA寡核苷酸序列的设计和合成（将正确序列克隆入载体中,退火形成双链，PCR扩增）2。
回收A．酶切产物的胶回收：一般做50-100ul 体系,然后跑电泳回收，回收量一般为30ul. B．PCR扩增产物的胶回收原理：首先利用低熔点琼脂糖凝胶电泳DNA片段，分离目的条带DNA，然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块，利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段。
慢病毒载体构建和包装操作手册
慢病毒载体构建及包装操作手册目录慢病毒收到后的注意事项一、整体实验流程二、实验材料三、慢病毒包装和浓缩四、感染目的细胞附1. 汉恒生物慢病毒质粒列表附2. 慢病毒滴度测定方法简介附3. 慢病毒MOI感染参数附4. 汉恒生物各病毒载体感染目的细胞比较慢病毒安全使用和注意事项➢慢病毒安全使用注意事项（*非常重要！！！*）1)慢病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。
2)操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。
3)操作病毒时特别小心病毒溅出。
如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。
接触过病毒的枪头，离心管，培养板，培养液请于84消毒液浸泡后统一处理。
4)如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。
5)病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。
6)实验完毕用香皂清洗双手。
➢慢病毒收到后的注意事项1)慢病毒的储存用户收到病毒液后在短期内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存（尽量一周内用完）；如需长期保存请分装后放置于-80℃。
注：a．反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会降低病毒滴度10%-50%）；在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融，所以我们前期对病毒进行了分装（200 l/tube），收到后直接放置-80℃保存即可。
b．如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前重新测定病毒滴度。
2)慢病毒的稀释用户需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后置于4℃保存(请尽量一周内用完)。
一、整体实验流程二、实验材料（一）慢病毒载体、包装细胞和菌株该病毒包装系统为三质粒系统，组成为psPAX2, pMD2.G, pHBLV TM系列质粒。
1、载体信息（见附表1）2、细胞株：我们采用293T作为慢病毒的包装细胞。
该细胞系为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM+10% FBS+双抗。
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pLVX-DsRed-Monomer-N1pLVX-DsRed-Monomer-N1载体基本信息：pLVX-DsRed-Monomer-N1载体质粒图谱和多克隆位点信息：载体名称: pLVX-DsRed-Monomer-N1质粒类型: 慢病毒表达载体；荧光报告载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝启动子: CMV克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 8751 bp5' 测序引物及序列: CMV-F: CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG (Invitrogen)3' 测序引物及序列: --载体标签: DsRed-Monomer（C-端）载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: 嘌呤霉素(Puromycin)克隆菌株: Stbl3宿主细胞（系）: 常规细胞系，293、CV-1、CHO等备注:pLVX-DsRed-Monomer-N1载体表达C端DsRed-Monomer融合蛋白；DsRed-Monomer是DsRed的单体突变体，与DsRed相比，编码序列经过了人工优化，适用于在哺乳动物细胞中的高水平表达；CMV启动子是过表达启动子。
稳定性: 稳表达组成型: 组成型病毒/非病毒: 慢病毒pLVX-DsRed-Monomer-N1载体简介：DescriptionpLVX-DsRed-Monomer-N1 is an HIV-1-based, lentiviral expression vector that allows you to express your gene of interest fused to DsRed-Monomer, a monomeric mutant of the Discosoma sp. red fluorescent protein. Genes cloned into the multiple cloning site (MCS),located upstream of the DsRed-Monomer coding sequence, are expressed as N-terminal fusions of the DsRed-Monomer protein. Expression of the fusion protein is driven by the constitutively active human cytomegalovirus immediate early promoter (PCMV IE) located just upstream of the MCS. Lentiviral particles derived from the vector allow the expression of DsRed-Monomer fusion proteins in virtually any cell type, including primary cells. The unmodified vector expressesDsRed-Monomer, and may be used to produce marker virus tooptimize infection protocols.pLVX-DsRed-Monomer-N1 contains all of the viral processing elements necessary for the production of replication-incompetent lentivirus, as well as elements to improve viral titer, transgene expression, and overall vector function. The woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element (WPRE) promotes RNA processing events and nhances nuclear export of viral and transgene RNA (1), leading to increased viral titers from packaging cells, and enhanced expression of your gene of interest in target cells. In addition, the vector includes a Rev-response element (RRE), which further increases viral titers by enhancing the transport of unspliced viral RNA out of the nucleus (2). Finally, pLVX-DsRed-Monomer-N1 also contains a central polypurine tract (cPPT) element that increases nuclear importation of the viral genome during target cell infection, resulting in improved vector integration andmore efficient transduction (3).In addition to lentiviral elements, pLVX-DsRed-Monomer-N1 contains a puromycin resistance gene (Puror) under the control of the murine phosphoglycerate kinase (PGK) promoter (PPGK) for the selection of stable transductants. The vector also contains a pUC origin of replication and an E. coli ampicillin resistance gene (Ampr) for propagation and selection in bacteria.UsepLVX-DsRed-Monomer-N1 constitutively expresses your gene of interest from PCMV IE when transduced into target cells. Before the vector can be transduced into cells, however, it must be transfected into 293T packaging cells with our Lenti-X™ HTX Packaging System (Cat. Nos. 631247 and 631249). This packaging system allows you to safely produce high titer, infectious, replication-incompetent, VSV-G pseudotyped lentiviral particles that can infect a wide range of cell types, including non-dividing and primary cells (4).pLVX-DsRed-Monomer-N1载体序列：ORIGIN1 TGGAAGGGCT AATTCACTCC CAAAGAAGAC AAGATATCCT TGATCTGTGG ATCTACCACA61 CACAAGGCTA CTTCCCTGAT TAGCAGAACT ACACACCAGG GCCAGGGGTC AGATATCCAC121 TGACCTTTGG ATGGTGCTAC AAGCTAGTAC CAGTTGAGCC AGATAAGGTA GAAGAGGCCA181 ATAAAGGAGA GAACACCAGC TTGTTACACC CTGTGAGCCT GCATGGGATG GATGACCCGG241 AGAGAGAAGT GTTAGAGTGG AGGTTTGACA GCCGCCTAGC ATTTCATCAC GTGGCCCGAG301 AGCTGCATCC GGAGTACTTC AAGAACTGCT GATATCGAGC TTGCTACAAG GGACTTTCCG361 CTGGGGACTT TCCAGGGAGG CGTGGCCTGG GCGGGACTGG GGAGTGGCGA GCCCTCAGAT421 CCTGCATATA AGCAGCTGCT TTTTGCCTGT ACTGGGTCTC TCTGGTTAGA CCAGATCTGA481 GCCTGGGAGC TCTCTGGCTA ACTAGGGAAC CCACTGCTTA AGCCTCAATA AAGCTTGCCT541 TGAGTGCTTC AAGTAGTGTG TGCCCGTCTG TTGTGTGACT CTGGTAACTA GAGATCCCTC601 AGACCCTTTT AGTCAGTGTG GAAAATCTCT AGCAGTGGCG CCCGAACAGG GACTTGAAAG661 CGAAAGGGAA ACCAGAGGAG CTCTCTCGAC GCAGGACTCG GCTTGCTGAA GCGCGCACGG721 CAAGAGGCGA GGGGCGGCGA CTGGTGAGTA CGCCAAAAAT TTTGACTAGC GGAGGCTAGA781 AGGAGAGAGA TGGGTGCGAG AGCGTCAGTA TTAAGCGGGG GAGAATTAGA TCGCGATGGG841 AAAAAATTCG GTTAAGGCCA GGGGGAAAGA AAAAATATAA ATTAAAACAT ATAGTATGGG901 CAAGCAGGGA GCTAGAACGA TTCGCAGTTA ATCCTGGCCT GTTAGAAACA TCAGAAGGCT961 GTAGACAAAT ACTGGGACAG CTACAACCAT CCCTTCAGAC AGGATCAGAA GAACTTAGAT1021 CATTATATAA TACAGTAGCA ACCCTCTATT GTGTGCATCA AAGGATAGAG ATAAAAGACA1081 CCAAGGAAGC TTTAGACAAG ATAGAGGAAG AGCAAAACAA AAGTAAGACC ACCGCACAGC1141 AAGCGGCCGG CCGCTGATCT TCAGACCTGG AGGAGGAGAT ATGAGGGACA ATTGGAGAAG1201 TGAATTATAT AAATATAAAG TAGTAAAAAT TGAACCATTA GGAGTAGCAC CCACCAAGGC1261 AAAGAGAAGA GTGGTGCAGA GAGAAAAAAG AGCAGTGGGA ATAGGAGCTT TGTTCCTTGG1321 GTTCTTGGGA GCAGCAGGAA GCACTATGGG CGCAGCGTCA ATGACGCTGA CGGTACAGGC1381 CAGACAATTA TTGTCTGGTA TAGTGCAGCA GCAGAACAAT TTGCTGAGGG CTATTGAGGC1441 GCAACAGCAT CTGTTGCAAC TCACAGTCTG GGGCATCAAG CAGCTCCAGG CAAGAATCCT1501 GGCTGTGGAA AGATACCTAA AGGATCAACA GCTCCTGGGG ATTTGGGGTT GCTCTGGAAA1561 ACTCATTTGC ACCACTGCTG TGCCTTGGAA TGCTAGTTGG AGTAATAAAT CTCTGGAACA1621 GATTTGGAAT CACACGACCT GGATGGAGTG GGACAGAGAA ATTAACAATT ACACAAGCTT 1681 AATACACTCC TTAATTGAAG AATCGCAAAA CCAGCAAGAA AAGAATGAAC AAGAATTATT 1741 GGAATTAGAT AAATGGGCAA GTTTGTGGAA TTGGTTTAAC ATAACAAATT GGCTGTGGTA 1801 TATAAAATTA TTCATAATGA TAGTAGGAGG CTTGGTAGGT TTAAGAATAG TTTTTGCTGT 1861 ACTTTCTATA GTGAATAGAG TTAGGCAGGG ATATTCACCA TTATCGTTTC AGACCCACCT 1921 CCCAACCCCG AGGGGACCCG ACAGGCCCGA AGGAATAGAA GAAGAAGGTG GAGAGAGAGA 1981 CAGAGACAGA TCCATTCGAT TAGTGAACGG ATCTCGACGG TATCGCCTTT AAAAGAAAAG 2041 GGGGGATTGG GGGGTACAGT GCAGGGGAAA GAATAGTAGA CATAATAGCA ACAGACATAC 2101 AAACTAAAGA ATTACAAAAA CAAATTACAA AAATTCAAAA TTTTCGGGTT TATTACAGGG 2161 ACAGCAGAGA TCCAGTTTAT CGATAAGCTT GGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA 2221 ATGGCCCGCC TGGCTGACCG CCCAACGACC CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG 2281 TTCCCATAGT AACGCCAATA GGGACTTTCC ATTGACGTCA ATGGGTGGAG TATTTACGGT 2341 AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT ATCATATGCC AAGTACGCCC CCTATTGACG 2401 TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT ATGCCCAGTA CATGACCTTA TGGGACTTTC 2461 CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC 2521 AGTACATCAA TGGGCGTGGA TAGCGGTTTG ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA 2581 TTGACGTCAA TGGGAGTTTG TTTTGGCACC AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA 2641 ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG GTCTATATAA 2701 GCAGAGCTCG TTTAGTGAAC CGTCAGATCG CCTGGAGACG CCATCCACGC TGTTTTGACC 2761 TCCATAGAAG ACACCGACTC TACTAGAGGA TCGCTAGCGC TACCGGACTC AGATCTCGAG 2821 CTCAAGCTTC GAATTCTGCA GTCGACGGTA CCGCGGGCCC GGGATCCACC GGTCGCCACC 2881 ATGGACAACA CCGAGGACGT CATCAAGGAG TTCATGCAGT TCAAGGTGCG CATGGAGGGC 2941 TCCGTGAACG GCCACTACTT CGAGATCGAG GGCGAGGGCG AGGGCAAGCC CTACGAGGGC 3001 ACCCAGACCG CCAAGCTGCA GGTGACCAAG GGCGGCCCCC TGCCCTTCGC CTGGGACATC 3061 CTGTCCCCCC AGTTCCAGTA CGGCTCCAAG GCCTACGTGA AGCACCCCGC CGACATCCCC 3121 GACTACATGA AGCTGTCCTT CCCCGAGGGC TTCACCTGGG AGCGCTCCAT GAACTTCGAG 3181 GACGGCGGCG TGGTGGAGGT GCAGCAGGAC TCCTCCCTGC AGGACGGCAC CTTCATCTAC 3241 AAGGTGAAGT TCAAGGGCGT GAACTTCCCC GCCGACGGCC CCGTAATGCA GAAGAAGACT 3301 GCCGGCTGGG AGCCCTCCAC CGAGAAGCTG TACCCCCAGG ACGGCGTGCT GAAGGGCGAG 3361 ATCTCCCACG CCCTGAAGCT GAAGGACGGC GGCCACTACA CCTGCGACTT CAAGACCGTG 3421 TACAAGGCCA AGAAGCCCGT GCAGCTGCCC GGCAACCACT ACGTGGACTC CAAGCTGGAC 3481 ATCACCAACC ACAACGAGGA CTACACCGTG GTGGAGCAGT ACGAGCACGC CGAGGCCCGC 3541 CACTCCGGCT CCCAGTAGAG CGGCCGCGAC TCTAGATAAT TCTACCGGGT AGGGGAGGCG 3601 CTTTTCCCAA GGCAGTCTGG AGCATGCGCT TTAGCAGCCC CGCTGGGCAC TTGGCGCTAC 3661 ACAAGTGGCC TCTGGCCTCG CACACATTCC ACATCCACCG GTAGGCGCCA ACCGGCTCCG 3721 TTCTTTGGTG GCCCCTTCGC GCCACCTTCT ACTCCTCCCC TAGTCAGGAA GTTCCCCCCC 3781 GCCCCGCAGC TCGCGTCGTG CAGGACGTGA CAAATGGAAG TAGCACGTCT CACTAGTCTC 3841 GTGCAGATGG ACAGCACCGC TGAGCAATGG AAGCGGGTAG GCCTTTGGGG CAGCGGCCAA 3901 TAGCAGCTTT GCTCCTTCGC TTTCTGGGCT CAGAGGCTGG GAAGGGGTGG GTCCGGGGGC 3961 GGGCTCAGGG GCGGGCTCAG GGGCGGGGCG GGCGCCCGAA GGTCCTCCGG AGGCCCGGCA 4021 TTCTGCACGC TTCAAAAGCG CACGTCTGCC GCGCTGTTCT CCTCTTCCTC ATCTCCGGGC 4081 CTTTCGACCT GCAGCCCAAG CTTACCATGA CCGAGTACAA GCCCACGGTG CGCCTCGCCA 4141 CCCGCGACGA CGTCCCCAGG GCCGTACGCA CCCTCGCCGC CGCGTTCGCC GACTACCCCG 4201 CCACGCGCCA CACCGTCGAT CCGGACCGCC ACATCGAGCG GGTCACCGAG CTGCAAGAAC4261 TCTTCCTCAC GCGCGTCGGG CTCGACATCG GCAAGGTGTG GGTCGCGGAC GACGGCGCCG 4321 CGGTGGCGGT CTGGACCACG CCGGAGAGCG TCGAAGCGGG GGCGGTGTTC GCCGAGATCG 4381 GCCCGCGCAT GGCCGAGTTG AGCGGTTCCC GGCTGGCCGC GCAGCAACAG ATGGAAGGCC 4441 TCCTGGCGCC GCACCGGCCC AAGGAGCCCG CGTGGTTCCT GGCCACCGTC GGCGTCTCGC 4501 CCGACCACCA GGGCAAGGGT CTGGGCAGCG CCGTCGTGCT CCCCGGAGTG GAGGCGGCCG 4561 AGCGCGCCGG GGTGCCCGCC TTCCTGGAGA CCTCCGCGCC CCGCAACCTC CCCTTCTACG 4621 AGCGGCTCGG CTTCACCGTC ACCGCCGACG TCGAGGTGCC CGAAGGACCG CGCACCTGGT 4681 GCATGACCCG CAAGCCCGGT GCCTGACCGC GTCTGGAACA ATCAACCTCT GGATTACAAA 4741 ATTTGTGAAA GATTGACTGG TATTCTTAAC TATGTTGCTC CTTTTACGCT ATGTGGATAC 4801 GCTGCTTTAA TGCCTTTGTA TCATGCTATT GCTTCCCGTA TGGCTTTCAT TTTCTCCTCC 4861 TTGTATAAAT CCTGGTTGCT GTCTCTTTAT GAGGAGTTGT GGCCCGTTGT CAGGCAACGT 4921 GGCGTGGTGT GCACTGTGTT TGCTGACGCA ACCCCCACTG GTTGGGGCAT TGCCACCACC 4981 TGTCAGCTCC TTTCCGGGAC TTTCGCTTTC CCCCTCCCTA TTGCCACGGC GGAACTCATC 5041 GCCGCCTGCC TTGCCCGCTG CTGGACAGGG GCTCGGCTGT TGGGCACTGA CAATTCCGTG 5101 GTGTTGTCGG GGAAGCTGAC GTCCTTTCCA TGGCTGCTCG CCTGTGTTGC CACCTGGATT 5161 CTGCGCGGGA CGTCCTTCTG CTACGTCCCT TCGGCCCTCA ATCCAGCGGA CCTTCCTTCC 5221 CGCGGCCTGC TGCCGGCTCT GCGGCCTCTT CCGCGTCTTC GCCTTCGCCC TCAGACGAGT 5281 CGGATCTCCC TTTGGGCCGC CTCCCCGCCT GGAATTAATT CTGCAGTCGA GACCTAGAAA 5341 AACATGGAGC AATCACAAGT AGCAATACAG CAGCTACCAA TGCTGATTGT GCCTGGCTAG 5401 AAGCACAAGA GGAGGAGGAG GTGGGTTTTC CAGTCACACC TCAGGTACCT TTAAGACCAA 5461 TGACTTACAA GGCAGCTGTA GATCTTAGCC ACTTTTTAAA AGAAAAGAGG GGACTGGAAG 5521 GGCTAATTCA CTCCCAACGA AGACAAGATA TCCTTGATCT GTGGATCTAC CACACACAAG 5581 GCTACTTCCC TGATTAGCAG AACTACACAC CAGGGCCAGG GGTCAGATAT CCACTGACCT 5641 TTGGATGGTG CTACAAGCTA GTACCAGTTG AGCCAGATAA GGTAGAAGAG GCCAATAAAG 5701 GAGAGAACAC CAGCTTGTTA CACCCTGTGA GCCTGCATGG GATGGATGAC CCGGAGAGAG 5761 AAGTGTTAGA GTGGAGGTTT GACAGCCGCC TAGCATTTCA TCACGTGGCC CGAGAGCTGC 5821 ATCCGGAGTA CTTCAAGAAC TGCTGATATC GAGCTTGCTA CAAGGGACTT TCCGCTGGGG 5881 ACTTTCCAGG GAGGCGTGGC CTGGGCGGGA CTGGGGAGTG GCGAGCCCTC AGATCCTGCA 5941 TATAAGCAGC TGCTTTTTGC CTGTACTGGG TCTCTCTGGT TAGACCAGAT CTGAGCCTGG 6001 GAGCTCTCTG GCTAACTAGG GAACCCACTG CTTAAGCCTC AATAAAGCTT GCCTTGAGTG 6061 CTTCAAGTAG TGTGTGCCCG TCTGTTGTGT GACTCTGGTA ACTAGAGATC CCTCAGACCC 6121 TTTTAGTCAG TGTGGAAAAT CTCTAGCAGT AGTAGTTCAT GTCATCTTAT TATTCAGTAT 6181 TTATAACTTG CAAAGAAATG AATATCAGAG AGTGAGAGGC CTTGACATTG CTAGCGTTTA 6241 CCGTCGACCT CTAGCTAGAG CTTGGCGTAA TCATGGTCAT AGCTGTTTCC TGTGTGAAAT 6301 TGTTATCCGC TCACAATTCC ACACAACATA CGAGCCGGAA GCATAAAGTG TAAAGCCTGG 6361 GGTGCCTAAT GAGTGAGCTA ACTCACATTA ATTGCGTTGC GCTCACTGCC CGCTTTCCAG 6421 TCGGGAAACC TGTCGTGCCA GCTGCATTAA TGAATCGGCC AACGCGCGGG GAGAGGCGGT 6481 TTGCGTATTG GGCGCTCTTC CGCTTCCTCG CTCACTGACT CGCTGCGCTC GGTCGTTCGG 6541 CTGCGGCGAG CGGTATCAGC TCACTCAAAG GCGGTAATAC GGTTATCCAC AGAATCAGGG 6601 GATAACGCAG GAAAGAACAT GTGAGCAAAA GGCCAGCAAA AGGCCAGGAA CCGTAAAAAG 6661 GCCGCGTTGC TGGCGTTTTT CCATAGGCTC CGCCCCCCTG ACGAGCATCA CAAAAATCGA 6721 CGCTCAAGTC AGAGGTGGCG AAACCCGACA GGACTATAAA GATACCAGGC GTTTCCCCCT 6781 GGAAGCTCCC TCGTGCGCTC TCCTGTTCCG ACCCTGCCGC TTACCGGATA CCTGTCCGCC 6841 TTTCTCCCTT CGGGAAGCGT GGCGCTTTCT CATAGCTCAC GCTGTAGGTA TCTCAGTTCG6901 GTGTAGGTCG TTCGCTCCAA GCTGGGCTGT GTGCACGAAC CCCCCGTTCA GCCCGACCGC6961 TGCGCCTTAT CCGGTAACTA TCGTCTTGAG TCCAACCCGG TAAGACACGA CTTATCGCCA7021 CTGGCAGCAG CCACTGGTAA CAGGATTAGC AGAGCGAGGT ATGTAGGCGG TGCTACAGAG7081 TTCTTGAAGT GGTGGCCTAA CTACGGCTAC ACTAGAAGAA CAGTATTTGG TATCTGCGCT7141 CTGCTGAAGC CAGTTACCTT CGGAAAAAGA GTTGGTAGCT CTTGATCCGG CAAACAAACC7201 ACCGCTGGTA GCGGTGGTTT TTTTGTTTGC AAGCAGCAGA TTACGCGCAG AAAAAAAGGA7261 TCTCAAGAAG ATCCTTTGAT CTTTTCTACG GGGTCTGACG CTCAGTGGAA CGAAAACTCA7321 CGTTAAGGGA TTTTGGTCAT GAGATTATCA AAAAGGATCT TCACCTAGAT CCTTTTAAAT7381 TAAAAATGAA GTTTTAAATC AATCTAAAGT ATATATGAGT AAACTTGGTC TGACAGTTAC7441 CAATGCTTAA TCAGTGAGGC ACCTATCTCA GCGATCTGTC TATTTCGTTC ATCCATAGTT7501 GCCTGACTCC CCGTCGTGTA GATAACTACG ATACGGGAGG GCTTACCATC TGGCCCCAGT7561 GCTGCAATGA TACCGCGAGA CCCACGCTCA CCGGCTCCAG ATTTATCAGC AATAAACCAG7621 CCAGCCGGAA GGGCCGAGCG CAGAAGTGGT CCTGCAACTT TATCCGCCTC CATCCAGTCT7681 ATTAATTGTT GCCGGGAAGC TAGAGTAAGT AGTTCGCCAG TTAATAGTTT GCGCAACGTT7741 GTTGCCATTG CTACAGGCAT CGTGGTGTCA CGCTCGTCGT TTGGTATGGC TTCATTCAGC7801 TCCGGTTCCC AACGATCAAG GCGAGTTACA TGATCCCCCA TGTTGTGCAA AAAAGCGGTT7861 AGCTCCTTCG GTCCTCCGAT CGTTGTCAGA AGTAAGTTGG CCGCAGTGTT ATCACTCATG7921 GTTATGGCAG CACTGCATAA TTCTCTTACT GTCATGCCAT CCGTAAGATG CTTTTCTGTG7981 ACTGGTGAGT ACTCAACCAA GTCATTCTGA GAATAGTGTA TGCGGCGACC GAGTTGCTCT8041 TGCCCGGCGT CAATACGGGA TAATACCGCG CCACATAGCA GAACTTTAAA AGTGCTCATC8101 ATTGGAAAAC GTTCTTCGGG GCGAAAACTC TCAAGGATCT TACCGCTGTT GAGATCCAGT8161 TCGATGTAAC CCACTCGTGC ACCCAACTGA TCTTCAGCAT CTTTTACTTT CACCAGCGTT8221 TCTGGGTGAG CAAAAACAGG AAGGCAAAAT GCCGCAAAAA AGGGAATAAG GGCGACACGG8281 AAATGTTGAA TACTCATACT CTTCCTTTTT CAATATTATT GAAGCATTTA TCAGGGTTAT8341 TGTCTCATGA GCGGATACAT ATTTGAATGT ATTTAGAAAA ATAAACAAAT AGGGGTTCCG8401 CGCACATTTC CCCGAAAAGT GCCACCTGAC GTCGACGGAT CGGGAGATCA ACTTGTTTAT8461 TGCAGCTTAT AATGGTTACA AATAAAGCAA TAGCATCACA AATTTCACAA ATAAAGCATT8521 TTTTTCACTG CATTCTAGTT GTGGTTTGTC CAAACTCATC AATGTATCTT ATCATGTCTG8581 GATCAACTGG ATAACTCAAG CTAACCAAAA TCATCCCAAA CTTCCCACCC CATACCCTAT8641 TACCACTGCC AATTACCTGT GGTTTCATTT ACTCTAAACC TGTGATTCCT CTGAATTATT8701 TTCATTTTAA AGAAATTGTA TTTGTTAAAT ATGTACTACA AACTTAGTAG T//pLVX-DsRed-Monomer-N1其他相关慢病毒载体：Tet-pLKO-neo Tet-pLKO-puro pPACKH1-GAGpMD2.G pCMV-dR8.2-dvpr pLKO.1-GFP-shRNA pLKO.1-TRC control pLKO.1-hygro pLKO.1-TRCpCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro FUW-tetO-hOKMS FUW-tetO-hOCT4 FUW-tetO-hSOX2 FUW-tetO-hKLF4FUW pLVX-AcGFP1-N1 pLVX-AcGFP1-C1pLVX-AmCyan1-N1 pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-N1 pLVX-DsRed-Monomer-N1 pLVX-PAmCherry-C1 pLVX-PAmCherry-N1 pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 pLVX-IRES-mCherry pLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-N1 pLVX-tdTomato-C1 pLKO.1-puro pLentilox 3.7 pLVX-Tet-On-AdvancedpLVX-IRES-Puro pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-HygpLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-N1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-mCherry-C1 pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-MetLuc Control pLVX-MetLuc pLVX-Hom-Mem1pLVX-Het-2 pLVX-DD-AcGFP1-Actin pPRIME-TET-GFP-FF3pSIH1-H1-CopGFP pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pLOX-CWBmi1 pLOX-CW-CREpRSV-rev pMDLg-pRRE pLL3.7pLVX-DD-AmCyan1 Control pLVX-DD-AmCyan1 Reporter pLVX-DD-tdTomato Reporter pLVX-DD-tdTomato Control pLVX-PTuner-Green pLVX-CherryPicker2pLVX-TetOne-Puro-Luc pLVX-TetOne pLVX-TetOne-PuropLVX-TetOne-Luc pLVX-rHom-Nuc1 pLVX-rHom-Sec1pLVX-rHom-1 pLVX-Hom-Nuc1 pLVX-Het-Nuc1pLVX-PTuner pLVX-PTuner2 pLVX-DD-ZsGreen1 Reporter pLVX-Het-1 pLVX-CherryPicker Control pLVX-Tet3GpCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV pCDH1-MCS2-EF1-copGFP pCDF1-MCS2-EF1-Puro pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP pWPXL pLVX-TRE3G-ZsGreen1 pLVX-TRE3G-mCherry pLenti6.3-EmGFP-BveI miR pLenti6/V5-GW/lacZpLenti6.3/V5-GW/EmGFP pLenti6.3-MCS pLenti6.3-DsRed2-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP pLVX-shRNA2 psPAX2VSV-G pSico PGK Puro pcDNA6.2-DsRed2-MCS1 miR pcDNA6.3-EmGFP-NC- II pcDNA6.2-EmGFP-NC- I pcDNA6.2-EmGFP-BsaI miR pLenti6.3-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-DsRed2 pLEX-MCSpGIPZ pLP2 pLP1FUGW pFUGW pLOX-Ttag-iresTKpMDLg/pRRE pLentG-KOSM pCMV-dR8.91pLVX-TRE3G-Luc Control pLVX-TRE3G-IRES pCgpvpSico pSicoR pLVTHMpGensil-1 pLVX-EF1α-IRES-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pPACKH1-REV pLVX-Het-Mem1 pLVX-shRNA1pLKO.1-puro-GFP-siRNA pPRIME-TREX-GFP-FF3 pcDNA6.2-DsRed2-BsmBI miR pCDH-MSCV-MCS-EF1-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP pLVX-TRE3GFUW-tetO-hMYC pLOX-TERT-iresTK pLP/VSVGFUW-M2rtTA pCDH-EF1-MCS-(PGK-Puro) pcDNA6.2-EmGFP-MCS1 miR pLVX-AmCyan1-C1 pLVX-Hom-1 pcDNA6.2-BsaI miRpLVX-DsRed-Monomer-C1 pLVX-mCherry-Actin pTRIPZpLVX-ZsGreen1-C1 pLVX-CherryPicker1 LeGO-iC2pLVX-IRES-tdTomato pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro pLKO.3GpLVX-tdTomato-N1 pLVX-PTuner2-C pLVX-PuropLVX-Tight-Puro pLVX-DD-ZsGreen1 Control pSicoR PGK PuropLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pCDH-UbC-MCS-EF1-Hygro pLVTHpLVX-EF1α-mCherry-N1 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP。