动物细胞融合与单克隆抗体
2.2 动物细胞工程(第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体)
2.2 动物细胞工程第2课时动物细胞融合技术与单克隆抗体一、单选题1.下图为某生物技术的操作过程，有关叙述错误的是（）A. 甲细胞可来自经免疫处理小鼠的脾脏中B. ①中可加入乙二醇以促进细胞融合过程C. ④可置于CO2培养箱中进行培养D. 该技术可用于研发相应的诊断试剂盒2.下图为某生物技术的操作过程，有关叙述错误．．的是（）A. 甲细胞为经免疫处理小鼠的脾细胞B. ①中可加入甘露醇以促进细胞融合过程C. ④应置于CO2培养箱中以提高细胞克隆形成率D. 该技术可研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能3.下列有关生物工程的说法正确的是（）A. 单克隆抗体制备中使用的细胞是小鼠骨髓瘤细胞和卵细胞。
融合后得到的杂种细胞的特点是既能够无限分裂，又能产生专一性抗体。
B. 基因工程所用的工具有限制性内切酶、DNA连接酶、运载体。
C. 动物细胞培养时，如果缺少氨基酸供应，细胞一般会停留在细胞周期的分裂期。
D. 胚胎干细胞在功能上的最大特点是具有专能性，能分化为成年动物体内任何一种组织细胞4.下列有关制备单克隆抗体的叙述中，错误的是（）A. 采用的细胞工程技术包括细胞培养和细胞融合B. 两次筛选的目的分别是筛选出杂交瘤细胞和筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞C. 要先用胃蛋白酶处理得到单个细胞，然后用诱导剂处理得到杂交瘤细胞D. 运用的生物学原理包括细胞分裂和细胞膜具有一定的流动性5.下列关于细胞工程的叙述，正确的是（）A. 培养人的浆细胞能产生单克隆抗体B. 将动物组织分散成单个细胞需用胃蛋白酶处理C. 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理不同D. 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞6.制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（）①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植A. ①②B. ①③C. ②③D. ③④7.某同学在学习“细胞工程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为有几处是不正确的（）植物细胞工程动物细胞工程技术手段植物组织培养，植物体细胞杂交动物细胞培养融合，单克隆抗体的制备特殊处理机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理，制成细胞悬液融合方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、生物方法典型应用人工种子、杂种植株单克隆抗体的制备培养液区别生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化动物血清不可缺少A. 1B. 2C. 3D. 48.下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（）A. 生物导弹是用癌细胞的单克隆抗体杀死癌细胞B. 乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养C. 细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行D. 灭活病毒可使细胞相互凝聚并让细胞膜上的分子重新排布9.请据如图判断，下列说法不正确的是（）A. 若a、b分别对应骨髓瘤细胞和B淋巴细胞，则d能产生单克隆抗体是b的遗传物质选择性表达的结果B. 若d形成有性杂交后代，则a和b融合形成d的过程叫受精作用C. 若d形成无性杂种植株，则采用了细胞工程中的核移植技术D. 若d形成无性杂种植株，由于杂种细胞具有双亲叶绿体，则可能培育出比有性杂交品种光合作用性能更好的植株10.如图为杂交瘤细胞制备示意图。
动物细胞融合和单克隆抗体(终极版)
癌细胞
3、你认为有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？
细胞融合
２、实验原理：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
柯勒
单克隆 动物细胞培养技术 杂种细胞 动物细胞融合 抗体 既能产生特异性抗 体，又能大量繁殖 创始人：米尔斯坦
⑵.诱导方式：
二醇（PEG）
生物法： 灭活的病毒 例如：仙台病毒
3.意义和应用：
打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；
重要用途：制备单克隆抗体。
知识回顾
1、抗体是由何种细胞产生的？
三、单克隆抗体 浆细胞（效应B细胞）
2、抗体是如何产生的？
B淋巴细胞 抗原 增殖分化成浆细胞
浆 细胞 骨髓瘤细胞 选出能产生 特定抗体的 细胞群继续 培养
细胞融合 筛选
杂交 瘤细胞
细胞培养
体外培养
从培养液或小 鼠腹水中取出 单克隆抗体
体内培养
练习：
1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较， 在动物细胞融合中有特殊性的是（ A、融合的原理 C、融合的诱导手段 ）
B、融合的优点 D、融合的过程
2.制备过程：
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交 瘤细胞有何优点 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法
1.在制备单克隆抗体的过程中，选用 哪两种细胞进行融合？为什么选择这 两种细胞？ 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体，但不能无限 增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不 能产生单一抗体。
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)第一章：动物细胞融合概述1.1 动物细胞融合的定义与意义1.2 动物细胞融合的方法1.3 动物细胞融合的应用第二章：细胞融合的诱导方法2.1 物理方法2.1.1 电融合法2.1.2 超声波融合法2.2 化学方法2.2.1 聚乙二醇(PEG)融合法2.2.2 灭活病毒融合法2.3 生物方法2.3.1 细胞表面分子的诱导2.3.2 细胞内信号传导途径的诱导第三章：单克隆抗体的制备与鉴定3.1 杂交瘤技术的原理及流程3.1.1 杂交瘤技术的原理3.1.2 杂交瘤细胞的筛选与克隆化3.1.3 单克隆抗体的生产与纯化3.2 单克隆抗体的性质鉴定3.2.1 抗体特异性鉴定3.2.2 抗体亲和力鉴定3.2.3 抗体效价测定第四章：单克隆抗体的应用4.1 诊断方面4.1.1 酶联免疫吸附试验(ELISA)4.1.2 免疫荧光技术4.1.3 免疫组化技术4.2 治疗方面4.2.1 抗体药物4.2.2 抗体介导的免疫治疗4.2.3 抗体工程第五章：动物细胞融合与单克隆抗体的研究进展5.1 重组抗体技术5.1.1 重组抗体的制备方法5.1.2 重组抗体的应用5.2 抗体的人源化5.2.1 人源化抗体的制备方法5.2.2 人源化抗体的优势及应用5.3 抗体生物制药的发展趋势5.3.1 抗体药物的联合应用5.3.2 纳米抗体技术5.3.3 抗体药物的个性化治疗第六章：细胞融合的效率与优化6.1 影响细胞融合效率的因素6.1.1 细胞类型与状态6.1.2 诱导方法的选择与优化6.1.3 融合条件与时间的控制6.2 提高细胞融合效率的策略6.2.1 细胞预处理技术6.2.2 融合诱导剂的浓度与处理时间6.2.3 融合过程中的物理和化学条件控制第七章：杂交瘤细胞的筛选与克隆化7.1 筛选杂交瘤细胞的方法7.1.1 选择性培养基的筛选7.1.2 HAT选择性培养基的原理与应用7.1.3 筛选过程中的计数与纯度评估7.2 克隆化培养技术7.2.1 有限稀释法7.2.2 显微镜手工分离法7.2.3 自动化克隆化技术第八章：单克隆抗体的生产与纯化8.1 单克隆抗体的生产8.1.1 体外培养体系的设计8.1.2 培养条件的优化8.1.3 细胞株的生产能力评估8.2 单克隆抗体的纯化8.2.1 纯化方法的选择8.2.2 蛋白质A/G纯化法8.2.3 离子交换色谱和凝胶过滤色谱第九章：单克隆抗体的特性分析与质量控制9.1 抗体特异性分析9.1.1 抗原结合实验9.1.2 交叉反应分析9.1.3 抗体竞争实验9.2 抗体亲和力测定9.2.1 生物素-亲和力实验9.2.2 酶联免疫吸附实验(ELISA)9.2.3 表面等离子共振(SPR)技术9.3 抗体质量控制9.3.1 抗体产量与纯度的控制9.3.2 抗体稳定性的评估9.3.3 抗体生物安全性检测第十章：实验操作指南与常见问题解析10.1 实验操作指南10.1.1 实验材料与设备准备10.1.2 实验步骤与操作流程10.1.3 实验结果记录与分析10.2 常见问题解析10.2.1 细胞融合失败的原因10.2.2 杂交瘤细胞筛选困难的原因10.2.3 单克隆抗体产量低的原因10.2.4 抗体质量问题的排查与解决第十一章：动物细胞融合与单克隆抗体的实验设计11.1 实验目的与意义的确定11.2 实验步骤的设计与优化11.3 实验条件的控制与调整11.4 实验数据的采集与分析第十二章：动物细胞融合与单克隆抗体的研究案例分析12.1 案例一：治疗性抗体的研发与应用12.1.1 案例背景与问题陈述12.1.2 实验设计与方法12.1.3 结果分析与讨论12.2 案例二：诊断用单克隆抗体的开发12.2.1 案例背景与问题陈述12.2.2 实验设计与方法12.2.3 结果分析与讨论第十三章：动物细胞融合与单克隆抗体技术的拓展应用13.1 抗体偶联药物(ADCs)13.1.1 ADCs的制备与性质13.1.2 ADCs的应用与挑战13.2 免疫调节剂的研究13.2.1 免疫调节剂的类型与作用机制13.2.2 免疫调节剂的应用前景13.3 疫苗研发与免疫预防13.3.1 疫苗设计与制备13.3.2 疫苗的临床试验与评价第十四章：动物细胞融合与单克隆抗体技术的未来趋势14.1 基因编辑技术在抗体研究中的应用14.1.1 CRISPR/Cas9技术在抗体基因克隆中的应用14.1.2 基因编辑技术在抗体亲和力增强中的应用14.2 与高通量技术在抗体发现中的应用14.2.1 在抗体设计中的应用14.2.2 高通量筛选技术在抗体筛选中的应用14.3 细胞治疗与组织工程中的应用14.3.1 利用抗体技术促进细胞治疗的发展14.3.2 抗体技术在组织工程中的应用第十五章：教学总结与评价15.1 教学目标的回顾与评估15.2 学生反馈与教学改进15.3 教学资源的整合与优化15.4 课程考核与评价标准重点和难点解析本文主要介绍了动物细胞融合与单克隆抗体的相关知识，重点包括细胞融合的方法、诱导手段、单克隆抗体的制备与鉴定、应用以及研究进展。
2020-2021学年生物人教版选修3学案：2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体
2．2.2 动物细胞融合与单克隆抗体知识点一 动物细胞融合1．概念：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。
2．结果：形成单核杂交细胞。
3．原理：细胞膜的流动性。
4．过程：不同动物的两个或多个细胞――→灭活的病毒或PEG杂交细胞5．诱导方法物理法——离心、振动、电激；化学法——聚乙二醇(PEG)；生物方法——灭活的病毒。
注意：灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。
6．灭活病毒诱导细胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
这一过程既能反映出糖蛋白在细胞识别中的重要作用，又能反映出细胞膜结构的流动性特点。
7．动物细胞融合的优点与应用(1)优点：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
目前，已有种间、属间、科间，甚至动物与植物之间的细胞融合获得了成功。
(2)应用：是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。
特别是利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性和植物细胞的全能性细胞膜的流动性步骤酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种体细胞，再经过植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合诱导方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、灭活病毒结果形成杂种植株形成杂种细胞【典题精练1】下列有关植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较，正确的是()A．两者应用的原理都是高度分化的细胞具有全能性B．两者都可用聚乙二醇(PEG)诱导细胞融合C．两者细胞融合成功的标志都是形成融合细胞核D．两者的目的都是用于大量生产分泌蛋白【解析】植物体细胞杂交的原理是细胞膜具有流动性和植物细胞具有全能性，动物细胞融合的原理是细胞膜具有流动性，A错误；聚乙二醇(PEG)既可诱导动物细胞融合，又可诱导植物原生质体融合，B正确；植物体细胞融合成功的标志是杂种细胞再生出细胞壁，动物细胞融合成功的标志是形成融合细胞核，C错误；植物体细胞杂交的目的是产生杂种植株，动物细胞融合可用于大量生产分泌蛋白，D错误。
动物细胞融合技术与单克隆抗体(课件)高二生物(人教版2019选择性必修3)
A. B. C. 和17 D.无法确定
都有。已知只有同时具有 酶和 酶的融合细胞才可在 培养液中长期存活与繁殖，从图示结果来看，可以确定人的 酶基因位于( )号染色体上。
[解析] 从培养结果可以看出，培养获得的细胞中均具有小鼠的全部染色体，但是只有含人的17号染色体的细胞存活下来，由此可知，人的 酶基因位于17号染色体上，B符合题意。
应用
培育植物新品种
主要用于制备单克隆抗体
意义
突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合
相同点
原生质体融合的原理相同，原生质体融合的方法相似
续表
例1 [2022·连云港期中] 下图为动物细胞融合技术过程图，相关叙述<zzd>错误</zzd>的是( )。
B
A.图中 为灭活的病毒，此外还可用 融合法诱导动物细胞融合B.图中①过程发生了细胞膜的融合，体现了细胞膜的选择透过性C.图中②过程表示细胞核融合形成杂种细胞D.动物细胞融合技术可用于制备单克隆抗体
4.单克隆抗体的应用
（1）作为⑩__________，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
（2）用于运载药物和⑪__________。
诊断试剂
治疗疾病
任务 了解动物细胞融合技术及其应用
活动1 比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、植物细胞的全能性
[2022·岳阳监测] 2020年诺贝尔生理学或医学奖授予发现丙肝病毒的三位科学家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝癌。为研制丙肝病毒的单克隆抗体，某研究者以小鼠甲为
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
2．2.2动物细胞融合与单克隆抗体理一理判一判1.常用于诱导动物细胞融合的手段有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射。
(×)2．杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎。
(×)3．在动物细胞融合过程中，使用胰蛋白酶处理有利于杂交瘤细胞的形成。
(×)4．将抗原注入小鼠体内，以获得相应的B淋巴细胞。
(√) 5．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，创造出了许多动物、植物的新物种。
(×)6．筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞时，需要运用到抗原—抗体杂交的方法。
(√)7．经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产。
(×)8．生物导弹是指将单克隆抗体与放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合。
(√)悟一悟1.动物细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合。
其中细胞膜融合是细胞融合的先导，细胞核融合是细胞融合的实质。
2．融合处理后的细胞不可以直接用于培养，还需要筛选。
因为诱导融合的手段只是促使细胞间的融合，不能保证所有的细胞都发生融合，形成的融合细胞也有多种，因此需要进行筛选。
3．细胞融合技术与有性杂交不同。
有性杂交有着十分严格的时空关系和物种界限；动物细胞融合则不同，它通过人工的方法克服了存在于物种之间的遗传屏障，从而能够按照人们的意愿，把不同物种的不同组织类型的细胞融合在一起。
4．对动物进行免疫的原因：B淋巴细胞要经过免疫过程，即接触抗原，增殖分化为有特异性免疫功能的B淋巴细胞，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞实际上是浆细胞。
5．融合过程中，有同种细胞间的融合和不同种细胞间的融合，还有未融合的细胞。
6．杂交瘤细胞的特点：既能无限增殖，又能产生专一性抗体。
7．能产生特定抗体的杂交瘤细胞在小鼠腹腔内培养与体外培养相比，优点是不需特定的培养基，不需严格的外界环境条件。
感悟体会：练一练1.[2019·江苏卷](多选)如图为细胞融合的示意图，下列叙述正确的是()A．若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去(脱)分化再诱导融合B．a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现C．c细胞的形成与a、b细胞膜的流动性都有关D．c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因解析：若a细胞和b细胞是植物细胞，应先用酶解法去掉它们的细胞壁再诱导融合，A错误；无论是动物细胞还是植物细胞，两个细胞的融合都需要促融处理后才能实现，B正确；两个细胞融合成一个细胞，利用了细胞膜的流动性，C正确；c细胞同时具备了a细胞和b细胞中的所有基因，但是基因是选择性表达的，因此c细胞中基因不一定都能够表达，D错误。
动物细胞融合与单克隆抗体PPT
跟踪训练
(2011年滦县高二检测)能使动物细胞融 )
合的特有的诱导因素是( A．离心
B．灭活的病毒
C．电激
答案：B
D．振动
单克隆抗体的制备 1．关键思路及操作依据 (1)关键思路
①克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细 胞。 (2)用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因
)
动物细胞工程 动物细胞培养和融合，单 克隆抗体的制备 胰蛋白酶处理，制作细胞 悬液 物理方法、化学方法、生 物方法 单克隆抗体的制备 动物血清不可缺少
A.1 C．3
B．2 D． 4
【尝试解答】
【解析】
B
选B。植物细胞工程常采用的技术手段
有植物组织培养和植物体细胞杂交。动物细胞工程
常采用的技术手段有动物细胞培养、细胞融合、单 克隆抗体的制备，还有胚胎移植、核移植等。动、
细胞。
远缘 杂交的不亲合性，成为研 4．意义：克服了______ 遗传 、_________ 细胞免疫 、肿瘤和生物_______ 新品种 培 究细胞_____
育的重要手段。
二、单克隆抗体
1．传统抗体的获得
抗原 ，使动 (1)方法：①向动物体内反复注射某种_____ 抗体 ；②从动物_____ 血清 中分离所需抗体。 物产生_____ 产量低 、纯度低、_______ 特异性 差。 (2)特点：_______
动物细胞融合 1．原理：膜的流动性。 2．诱导方法：物理法——离心、振动、电激；化 学法——聚乙二醇；生物方法——灭活的病毒。
3．动物细胞融合的过程
4．优点：动物细胞融合技术突破了有性杂交方法
的局限性，使远缘杂交成为可能。 特别提醒 灭活是指用物理或化学的手段使病毒或细菌失去感 染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。
动物细胞融合技术与单克隆抗体
《第2章细胞工程》第2节动物细胞工程二动物细胞融合技术与单克隆抗体必会知识考点梳理拓展延伸易错警示必会知识一动物细胞融合技术1．动物细胞融合技术：是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
细胞融合的实质是核融合。
2．原理：动物细胞融合的基本原理为细胞膜的流动性。
3．诱导融合的方法(1)化学方法：PEG融合法。
(2)物理方法：电融合法。
(3)生物方法：灭活病毒诱导法。
4．过程：具有不同遗传信息的两个或多个细胞杂交。
5．结果：形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。
6．意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。
这一技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
如利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
必会知识二单克隆抗体及其应用1．传统抗体的获得(1)方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。
(2)缺陷：制备的抗体产量低、纯度低以及特异性差。
2．单克隆抗体的制备：单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体。
(1)制备原理①B淋巴细胞的特点：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖。
②骨髓瘤细胞的特点：在体外能大量增殖，但不能产生抗体。
③杂交瘤细胞的特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。
(2)制备过程①制备产生特定抗体的B淋巴细胞：用特定的抗原对小鼠进行免疫处理，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。
②培养骨髓瘤细胞。
③将小鼠的骨髓瘤细胞与从脾中得到的B淋巴细胞融合。
④用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长。
⑤克隆化培养和抗体检测：对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
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动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细 胞融合中有特殊性的是 C A．融合的原理 B．融合的过程 C．融合的诱导手段 D．融合的结果
下表为动、植物细胞工程的有关内容比较，你认为错 误的有
植物细胞工程
特殊处理 酶解法去除细胞壁 物理方法，化学方 融合方法 法
动物细胞工程
胰蛋白酶处理配制 细胞悬液 物理方法，化学方 法，生物方法
3.单克隆抗体的应用：
①作为诊断试剂
特异性高、灵敏度高等优越性。 ②用于治疗疾病和运载药物
生物导弹
植物、动物细胞融合的比较
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 植物细胞全能性
原理 细胞融合的方法
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合
物理（离心、振动、 物理、化学方法 电刺激） （同左） 化学（聚乙二醇） 灭活的病毒 获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体
一、动物细胞融合
细胞A
物理法
化学法
细胞B
仙台病毒
灭活的病毒
疱疹病毒
新城鸡瘟病毒
杂交细胞
1、动物细胞融合过程
不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合
融合后的细胞 进行有丝分裂
思考题
1、植物体细胞杂交前做何处理？怎么处理？ 去壁 酶解法，如纤维素酶或果胶 酶 2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？
人工种子，种间杂 典型应用 种植物
培养基的 麦芽糖是离体组织 区别 赖以生长的成分 A．0处 B．1处
单克隆抗体的制备
动物血清不可缺少 D．3处
C．2处
（1）若A、B是植物细胞，在细胞融 合之前已用 处理，除去了 ； 由A、B到细胞C的过程中，常用的物 理方法是 。融合完成的标志是 。 （2）若A、B是植物细胞，则形成的D 细胞还要应用 技术把D培养成 植株。（1）纤维素酶和果胶酶 细胞壁 电刺激、振动、离心
D 下列哪—项属于克隆 A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤 细胞 D．将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
试管婴儿、试管苗和克隆羊三者均属于生物工程技术 的杰出成果，下面叙述正确的是 B A.都属于无性生殖能保持母本性状 B.都是细胞工程的技术范围 C.都充分体现了体细胞的全能性 D.都不会发生基因重组和变异
下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是 A.培养基成分不同 A B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株 下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 C A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素 和动物血清 B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞 C．动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质 发生了改变 D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身 健康细胞
生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不 再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易
成功“复生”野驴的方法是
C
A．将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分 化、再分化，培育成新个体 B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新
个体
经孕育培养成新个体 D．将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
CCTV一2于2005年4月7日报道，卫生部4月6日发布 了《苏丹红危险性报告评估》，报道中提到苏丹红一 号是一种人工色素(工业染料)，它在人体内代谢生成相 应的胺类。科研人员欲采用一定的技术手段探究苏丹 红是否对人体有危害。请回答： （1）根据所学的动物细胞工程知识，你认为采取下 列哪种技术手段最合适： A．动物细胞融合 B．动物细胞培养 C．胚胎移植 D．核移植
设计方案：
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
二、单克隆抗体
抗原 ？
2.制备过程：
浆细胞 ？
诱导其融合的 方法有哪些？
细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤
筛选（特定的 选择性培养基） 杂种细胞
整个制备过程要经过几次筛选? （第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤 细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性 抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所 以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单 克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义， 只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）
二、单克隆抗体
提 问
1.抗体是由何种细胞产生的？ 2. 如何得到抗体？
？
二、单克隆抗体
1、抗原
刺激
动物体内
浆细胞
抗体
2、特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏
抗原 抗原不纯
刺激
动物体内
浆细胞
抗体 抗体不纯
筛选单一浆细胞 不能增殖产生大量抗体
二、单克隆抗体
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞， 那么，在获得此细胞之前，小鼠已经被注射了 射后小鼠身体发生了相应的免疫反应，生成了 。注
_________，图中B为 程中，所形成的C有
是
。 种，用来培养的D细胞应该
培养，获 。
（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过 。从中选择出它的方法是
通过长期的实验，科 学家们采用体细胞杂交 技术获得了“番茄—马 铃薯”植株。
“番茄—马铃薯”理想图
植物体细胞杂交技术过程
植物细胞的融合 植物组织培养
植物细胞A
去壁
方法？
融合 完成 的 标志
原生质体A 原生质体B
去壁
人 工 诱 导
融合的 原生质 体AB
杂种 细胞 脱 再 AB 分
生 出 细 胞 壁
化
无需，因为动物细胞无细胞壁
3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法
思考题
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法？
5、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行 组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种 动物个体吗？ 不能
细胞株 A株 B株
1
人染色体编号 2 3 4 5 6 7
8
＋ ＋ ＋ ＋ － － － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ － －
C株
＋ － ＋ － ＋ － ＋ －
若人基因的作用不受鼠基因影响，则支配a、b、c、d 和e酶合成的基因依次位于人的 号染色体上。
比特尔等在1941年提出了“一个基因一种酶假说”。在 生物体内，各类物质或分子是经过一系列代谢步骤合成 的，每一步都受特定的酶所催化。现假设已分离到某微 生物的5种突变体（1－5），它们都不能合成生长所需 的物质C，但是该微生物在合成途径中，物质A、B、C、 D、E都是必需的，但不知它们的合成顺序；于是分析 了这几种物质对各种突变体生长的影响。结果如下：
愈 伤 组 织
再 分 化
杂 种 植 株
植物细胞B
促进融合 的方法？
成果和未解决的问题
成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 现自然界没有的新品种。 未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。
如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶 牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！ 动物细胞也能融合吗？
得D后，常用的培养方法是培养液中培养和
(4)抗原 效应B细胞 抗体和记忆细胞 骨髓瘤细胞 (5)3 杂交瘤细胞 用特定的选择培养基 小鼠腹，获得A、B、 C三细胞株。各细胞株内含有的人染色体如有表（“+”有， “—”无）测定各细胞株中人体所具有的五种酶的活性。 结果是：①B株有a酶活性；②A、B、C株均有 b酶活性： ③A、B株有c酶活性；④C株有d酶活性；⑤A、B、C株均 无e酶活性。
6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？
2、动物细胞融合的概念
动物细胞融合也称细胞杂交， 是指两个或多个动物细胞形成一 个细胞的过程。
思考题
7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞 8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体
细胞融合与融合诱导细胞融合物质：
产生新的细胞壁 （2）植物组织培养
（3）若A、B是动物细胞，一般取自 ，然后 用 使其分散开来；由A、B到C的过程中，常用 的不同于植物细胞融合的手段是 ，所形成的D称 为 ，A、B融合为C的过程说明了细胞膜具 有 。 (3)动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 胰蛋白酶
灭活的病毒诱导 杂种细胞 一定的流动性
（2）根据上述选择，请你设计一个实验来探究“苏丹 红一号”是否对人体有危害。 [1]该实验的原理是： 。 [2]实验方法步骤： ①材料准备：从医院妇产科获取所需要的原材料组 织，浓度为0.09％“苏丹红一号”试剂，高倍显微镜， 培养瓶若干，配制好的培养液，剪刀，培养箱，所需 要的酶。 ②制备检测细胞： a．配制细胞悬浮液： 。 b．将悬浮液分装到两个以上的培养瓶中，置于培养箱 中培养一段时间。 ③检测过程： 。 ④实验结果观察、分析得出结论。(略)
诱导方法
用途
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤 风杆菌的实验方案 A 骨髓瘤细胞 制备单克隆抗体 1、该实验方案的目的是__________ 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？ B
杂交瘤细胞
C 3、A是从小鼠的脾脏中取得 抗体 _______,该细胞能够产生______ B细胞 细胞融合 足够数量的细胞群 4、图中B为________过程，常用 灭活病毒 _________作为诱导剂，该细胞继 双亲细胞 承___________的遗传特性，既能 体外培养 注射到 分泌抗体 无限增殖 __________,又能___________。 小鼠腹腔 5、C过程指细胞培养，该过程包括 原代 传代 _____培养和_____培养两个阶段。