lgr5荧光表达位置
细胞龛的空间位置是干细胞命运的一个决定因素
Spatial organization within a niche as adeterminant of stem cell fateSummary哺乳动物组织中的干细胞龛往往是异质的，并且是有划分的，但是截然不同的龛位置是否会决定不同的细胞命运呢？这一点尚不清楚。
为了验证这一假设，我们采用了小鼠毛囊龛，并设计出一种新的方法：将活体内显微观察与基因谱系追踪联合起来，to re-visit the same stem cell lineages, from their exact place of origin, throughout regeneration in live mice. 利用这一方法，我们直接展示了通过毛囊龛内干细胞的位置可以预估其是否会保持未定型状态，是产生前体细胞还是定型到某个分化命运中去。
甚至，利用激光烧灼，我们揭示了毛囊干细胞对再生是可有可无的，而一般来说不参与毛发生长的表皮细胞，可以重新填充失去的干细胞群区室（compartment）并维持毛发再生。
本研究提供了关于成年组织中龛诱导性命运决定的一个总体思维模式。
在成熟组织中，干细胞龛构成了一个在空间上截然不同的微环境，包括邻近细胞，信号分子以及胞外物质（1，2）。
在哺乳动物不同组织之间的干细胞龛都表现出了解剖上的异质性和分子上的异质性（3~6）。
但是尚不清楚一个定居在龛内的干细胞，其特殊的位置是否能影响其功能。
造血干细胞在造血过程中和病理生理过程中起不同的作用，这被认为与不同的龛区室有关，比如说中央骨髓中的内皮，或脉管系统；这可能会影响它们的功能，还可能影响其长期的细胞命运（7~13）。
此外，在小肠腺中，短周期干细胞以及静止期的祖细胞群分别位于腺底部的完全不同的位置，而腺的壁上衬着前体细胞的短期扩增池，随着这些细胞到达（小肠）绒毛的表面，它们逐渐分化（14~17）。
有人提出了一个小肠龛长期动态平衡的中性竞争模型（18，19）；但是，小肠腺底部不同位置干细胞个体的短期行为尚未被确定。
Bio-Rad荧光定量PCR-iQ5说明书
1. iQ™5多重实时荧光定量PCR仪简介在现代分子生物学的发展过程中，核酸放大技术的出现及与之相关的检测技术的成熟起到了至关重要的作用，而实时荧光定量PCR技术可以说是两者完美的结晶。
它通过加入能与DNA结合的荧光染料或在引物/探针上标记荧光基团等方法，在PCR过程中，随着产物的量不断增加，荧光信号也随之发生相关性的变化，再通过数学处理，算出原始靶DNA的含量。
实时荧光定量PCR技术可以在较大的动力学范围内实现精确定量，其灵敏度也达到相当高的程度。
随着这项技术的发展，其专用的实时荧光定量PCR仪也应运而生。
我们伯乐公司这次推出的iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪是在iCycler荧光定量PCR仪的基础上强化而成，以求性能达到最优。
iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪所装配的光源（钨卤素灯）拥有更宽的光谱范围，给予用户在其选择上最大限度的灵活性。
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实时的数据显示可以大大提高反应孔与孔之间数据比较的可靠性，iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪则可以方便地实现数据实时显示，有利于及时反馈试验状况。
以上介绍的各项特性保证了iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪在使用过程中具有更强的可靠性和灵活性。
iQ™5 多重实时荧光定量PCR仪所配备的运行、分析软件设计得十分人性化，且功能强大。
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当用户把光标放在软件的功能键上时，其下方还会出现相应说明文字。
此外，按键盘的“F1”键还可以启动在线帮助指南。
当用户设定完结果分析参数后，点一键即可得到最终分析结果。
2. iQ™5使用快速指南2.1 如何用iQ™5运行一次实验2.1.1 综述1. 创建、选择或修改一个反应程序文件（Protocol file）2. 创建、选择或修改一个反应板设置文件（Plate Setup file）。
第三章模拟X线成像(医学影像成像原理)
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摄影的影像称为负像
特点： 肺：黑灰色 骨骼：白灰色
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摄影按照X线能量的不同，可分： （1）普通X线摄影：是指使用管电压在40kV 100kV产生 的X线进行的摄影技术。 （2）软X线摄影：是指使用管电压在25kV 40 kV产生的 软X线进行摄影技术，也称软组织摄影。适用于组织器官较 薄，不与骨骼重叠且有效原子序数较低的软组织。 （3）高千伏摄影：是指120kV～150kV的高电压产生X线 进行的摄影技术。可以获得在较小密度值范围内显示层次 丰富的X线照片影像。
X线胶片接收的光源不是直接来自X线，而是X线经过某一类荧光物质 后转换后产生的荧光。
一般的说，X线胶片产生的感光光谱在420-550nm,对增感屏、荧光屏 所发射的荧光光谱最为敏感，所以X线胶片也称为正色胶片。
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(2)分辨力:X线胶片记录被照物体细节的最大能力称分辨力，以每毫米 线对数表示（LP/mm） ，一般医用X线胶片的极限分辨力为35LP/mm， 乳腺X线胶片的极限分辨力为50 LP/mm。
注意：照片质量进行评价时提及〝灰雾〞与胶片本底灰雾一词不能等同。 照片灰雾是泛指，它包括本底灰雾和由散射线等各种原因所致灰雾的总和。
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2）感光度（S）：是指感光材料对光作用的敏感程度。 产生一幅影像所需的曝光量决定于所用胶片的感光度。用高感光度的
胶片比用低感光度的胶片所需的曝光量少。 医用X线胶片感光度定义为产生密度1.0 所需曝光量的倒数
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一、 医用X线胶片
（一）种类 1.直接摄影用X线胶片：感绿胶片、感蓝胶片 （1）感绿胶片：这是一种配合发绿色荧光增感屏使用的 胶片，吸收光谱的峰值约为550nm。特点是在与发绿色荧光 的稀土增感屏组合下相对感度可高达1200，被照体X线的接 受剂量大幅度减少。
LGR5在宫颈癌发生中的作用及机制初探
LGR5在宫颈癌发生中的作用及机制初探陈庆;李向红;赵金燕;卢晓宁;薛翔【摘要】Objective:To investigate the role and mechanism of LGR5 in cervical carcinogenesis. Meth-ods:The expression of LGR5 and β-catenin in normal cervix, cervical intraepithelial neoplasias and squa-mous cervical cancer were determined by immunohistochemistry and western blot, and analyze the relationship between LGR5 and clinical pathological features of cervical cancer and β-catenin expression. The effect of LGR5 on cervical carcinogenesis was examined using tumorsphere formation. Results: The positive rate of LGR5 and β-catenin in normal cervix, cervical intraepithelial neoplasias and cervical cancer were 17％ ( 5/30), 65％ (11/17), 84％ (54/64) and 13％(4/30),53％(9/17),92％(59/64),respectively. The differ-ence was statistically significant ( P<0.01) . The expression of LGR5 was associated with pathological grade of cervical cancer, but not with patient's age, clinical stage and lymph node metastasis. β-catenin expression in cervical cancer was positively related to LGR5 expression(r=0.69, P<0.01). Moreover, the rate of tumor-sphere formation of LGR5 overexpression SiHa cell was significantly higher than the GFP control group ( P<0. 01) . Conclusion:LGR5 and promoted cervical carcinogenesis and its mechanismmay be assoc iated with high expressio0n of β--catenin%目的:研究富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)在宫颈癌发生中的作用及机制.方法:分别采用免疫组化、Western blot检测LGR5、β-链蛋白(β-catenin)在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达,分析LGR5与宫颈癌临床病理特征、β-catenin的关系;通过肿瘤球形成试验观察LGR5对宫颈癌发生的影响.结果:LGR5、β-catenin在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的阳性率分别为17％(5/30),65％(11/17),84％(54/64)以及13％(4/30),53％(9/17),92％(59/64),差异均具有统计意义(P<0.01).LGR5表达与宫颈癌病理分级相关,而与患者年龄、临床分期及淋巴转移无相关性.宫颈癌组织中β-catenin与LGR5的表达呈显著正相关(r=0.69,P<0.01).LGR5过表达的人宫颈鳞癌细胞(SiHa细胞)肿瘤球形成率高于绿色荧光蛋白(GFP)对照组(P<0.01),差异具有统计学意义.结论:LGR5促进宫颈癌的发生,其机制可能与β-catenin高表达相关.【期刊名称】《河北医学》【年(卷),期】2017(023)009【总页数】5页(P1455-1459)【关键词】LGR5;宫颈癌;β-catenin;免疫组化;Westernblot【作者】陈庆;李向红;赵金燕;卢晓宁;薛翔【作者单位】西安交通大学第二附属医院妇产科, 陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院妇产科, 陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院妇产科, 陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院妇产科, 陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院妇产科, 陕西西安 710004【正文语种】中文宫颈癌是一种严重威胁女性健康的生殖系统恶性疾病，也是导致妇女癌症死亡的主要病因之一。
肠化生相关分子与胃癌的发生和进展研究概况
肠化生相关分子与胃癌的发生和进展研究概况石颖鹏;王敏娟;李程亮【摘要】目前胃癌(GC)的发病机制尚未十分明确,Lauren分型将胃癌按照组织病理学分型分为弥漫型胃癌、肠型胃癌以及混合型胃癌,其中肠型胃癌与胃黏膜肠上皮化生(GIM)密切相关,尽管胃黏膜肠上皮化生中只有少数肠化生患者最终发展为肠型胃腺癌,但肠型胃癌仍是最常见的胃癌形式.近年来,从胃肠化生进展到肠型胃腺癌的相关分子机制已被广泛研究.经研究分析发现从肠化生进展到胃癌,其过程与MYC、GOLPH3、HER2、TP53、FBXW7、ARID1A、hTERT、端粒、DNA甲基化、CD24、AQP3、LGR5、Ki67、SOX2、CDX2等分子因素密切相关,临床试验通过大量前瞻性对照研究等试验监测患者从胃肠化生进展到胃癌过程中其相关分子的改变,从而探究胃癌发生的分子基因学机制.本文将对从胃肠化生到胃癌以及胃癌进展过程中的相关分子变化做简要阐述,通过探讨胃癌的发生、转归,进而对早期胃癌的诊断及预防提供有效价值.【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2019(048)007【总页数】4页(P958-961)【关键词】肠化生;胃黏膜;胃癌;分子;发生;进展【作者】石颖鹏;王敏娟;李程亮【作者单位】西安医学院第一附属医院全科医学科西安710077;西安医学院第一附属医院全科医学科西安710077;西安医学院第一附属医院全科医学科西安710077【正文语种】中文【中图分类】R735.2目前，胃癌(GC)是世界上主要的致死性肿瘤之一[1]，尤其在不发达国家的男性中胃癌发病率与病死率都稳居前列。
大量研究表明GC是由于环境因素和宿主相关因素等相互作用而产生的复杂性疾病，导致GC高病死率的关键因素有早期GC的沉默、晚期GC的临床表现、以及潜在的生物以及遗传异质性，故早期胃癌的发现对患者预后极其重要。
慢性萎缩性胃炎和肠上皮化生(IM)被认为是GC发病机制中的重要步骤[2]，其中，IM是一种公认的GC癌前病变，是指由上皮样肠形态取替正常胃黏膜的形态学改变。
动物肠类器官培养技术
畜牧兽医学报 2023,54(7):2743-2750A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.07.008开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):动物肠类器官培养技术陈奡蕾,黄德如,安娅菲,李守军*(华南农业大学兽医学院,广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室,广州510642)摘 要:类器官被定义为三维(t h r e e -d i m e n s i o n a l ,3D )多细胞体外自组装组织结构,在细胞类型㊁结构和功能方面能模拟还原相应的体内器官,具有明显的组织特异性,可作为新型体外模型㊂随着技术的发展,肠类器官已被应用于器官发育㊁器官功能㊁器官修复与移植㊁疾病诊断和药物筛选等多个研究领域㊂目前除了小鼠肠类器官外,关于其他种属动物肠类器官培养的研究较少㊂但在临床中,其他动物,特别是家畜动物仍存在多种传染性或非传染性的肠道疾病,亟待新型的体外模型用于揭示致病机理或开发新的治疗方案㊂为此,本文对近十年动物肠类器官培养的研究进展进行综述,总结了动物肠类器官培养的优㊁缺点并对动物肠类器官培养进行了小结与展望,以期为动物肠类器官的培养提供参考㊂关键词:动物肠类器官;3D 培养中图分类号:Q 813.13 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)07-2743-08收稿日期:2022-11-28基金项目:广东大学生科技创新培育专项资金资助项目(p d j h 2021b 0083);广州市科学技术局的基础研究计划(S L 2022A 04J 01164)作者简介:陈奡蕾(1989-),女,广东广州人,博士,副教授,主要从事小动物疾病和马病研究,E -m a i l :c h e n o l a y@s c a u .e d u .c n *通信作者:李守军,主要从事动物临床重大疾病防治研究,E -m a i l :S h o u ju n l i @s c a u .e d u .c n A n i m a l I n t e s t i n a l O r ga n o i d s C u l t u r e C H E N A o l e i ,HU A N G D e r u ,A N Y a f e i ,L I S h o u ju n *(C o l l e g e o f V e t e r i n a r y ,S o u t h C h i n a A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,G u a n g d o n g P r o v i n c i a l K e yL a b o r a t o r y o f P r e v e n t i o n a n d C o n t r o l fo r S e v e r e C l i n i c a l A n i m a l D i s e a s e s ,G u a n gz h o u 510642,C h i n a )A b s t r a c t :O r ga n o i d s a r e d e f i n e d a s t h r e e -d i m e n s i o n a l (3D )m u l t i c e l l u l a r s e l f -a s s e mb l e d t i s s u e s t r uc t u r e s i n v i t r o ,w h i c h c o u ld s i m u l a te c o r r e s p o n d i n g o r g a n s i n v i v o i n t e r m s of c e l l t y pe s ,s t r u c t u r a l a r c h i t e c t u r e a n df u n c t i o n .T h e y h a v e o b v i o u s t i s s u e s p e c i f i c i t y an d c a n b e u s e d a s a n o -v e l e x p e r i m e n t a l m o d e l i n v i t r o .W i t h t h e d e v e l o p m e n t o f t e c h n o l o g y ,o r ga n o i d s h a v eb e e n a p p l i e d i n m a n y f i e l d s i nc l ud i n g o r g a n m o r p h o ge n e s i s ,o r g a nf u n c t i o n ,o rg a n r e pa i r a n d t r a n s -p l a n t a t i o n ,d i s e a s e d i a g n o s i s ,d r u g s s c r e e n i n g ,e t c .C u r r e n t l y,o t h e r t h a n m u r i n e i n t e s t i n a l o r -g a n o i d c u l t u r e ,o n l y f e w s t u d i e s o n a n i m a l i n t e s t i n a l o r g a n o i d c u l t u r e w e r e r e p o r t e d .H o w e v e r ,o t h e r a n i m a l s ,e s p e c i a l l y do m e s t i c a n i m a l s ,s t i l l s u f f e r f r o m i n f e c t i o u s a n d n o n -i n f e c t i o u s i n t e s t i -n a l d i s e a s e s t h a t u r g e n t l y n e e d a n e w s t u d y m o d e l f o r p a t h o g e n e s i s o r n e w t h e r a p y.T h e r e f o r e ,t h i s r e s e a r c h p r o g r e s s f o c u s e d o n a n i m a l i n t e s t i n a l o r ga n o i d s c u l t u r e i n t h e l a s t t e n y e a r s w i t h t h e a d v a n t a g e s a n d t h e d i s a d v a n t a g e s o f i t w e r eb e i n g s u mm a r i z e d .T h i s r e v i e w m a y p r o v i d e n e w i d e -a s f o r t h e r e l a t e d r e s e a rc h o f a n i m a l i n t e s t i n a l o r ga n o i d s .K e y wo r d s :a n i m a l i n t e s t i n a l o r g a n o i d ;3D c u l t u r e *C o r r e s p o n d i n g au t h o r :L I S h o u j u n ,E -m a i l :S h o u j u n l i @s c a u .e d u .c n畜牧兽医学报54卷肠类器官(i n t e s t i n a l o r g a n o i d)是由离体的干性细胞如成体干细胞(a d u l t s t e m c e l l s,A S C s)㊁胚胎干细胞(e m b r y o n i c s t e m c e l l s,E S C s)及其分化形成的多能干细胞(p l u r i p o t e n t s t e m c e l l s,P S C s)㊁诱导性多能干细胞(i n d u c e d p l u r i p o t e n t s t e m c e l l s,i P S C s)或肠隐窝(i n t e s t i n a l c r y p t s)组织,在基质胶(m a t r i g e l)和特殊生长因子的培养条件下,自发组织增殖和分化且表现明显肠组织特性的空心细胞团块[1]㊂它们高度折叠,呈肠纤毛和隐窝样(图1)㊂图1肠类器官模型F i g.1I n t e s t i n a l o r g a n o i d m o d e l2007年C l e v e r s研究组[2]利用小鼠体内试验证明了L g r5+上皮细胞属于肠道上皮干细胞㊂2009年该研究组成员S a t o等[3]在N a t u r e上展示了团队成功利用单一的L g r5+细胞培养出小肠绒毛状上皮结构㊂这些结构不但具有完整的肠道上皮结构特性,且含肠道内各种分化的功能细胞,包括肠上皮细胞㊁肠内分泌细胞㊁杯状细胞㊁潘氏细胞和L g r5+干细胞[3]㊂随后的多项研究也证明,离体的肠道干细胞和隐窝可以在3D培养条件下形成肠道类器官,也称为 迷你肠 (m i n i-g u t),它们能呈现源组织的典型功能[4-10]㊂目前报道培养人和小鼠的肠类器官的文献比较丰富,但伴侣动物和家畜动物的相关报道较少㊂然而伴侣动物和家畜动物仍存在很多传染性和非传染性的肠道疾病,需要新型的研究模型㊂为此,本文将综述动物肠类器官的培养进展,旨在为构建不同动物的肠类器官提供参考㊂1肠类器官的培养方法目前肠类器官的培养方法主要有两种:S a t o 等[3]在2009年发表的 浸泡培养法 (s u b m e r g e d m e t h o d)和W a n g等[11]在2015年发表的 气液双向培养法 (a i r-l i q u i d m e t h o d)㊂前者是将分离的样品与基质胶混合后,滴加到培养皿正中间使之呈圆滑的 水珠状 ,待基质胶凝固后加入含有特殊生长因子的类器官生长培养基并浸没样品基质胶混合物以实现3D培养;后者是利用T r a n s w e l l小室,在一个培养板中间放置一个底下可以允许生长培养基通过的滤膜皿,在滤膜皿底部先铺一层基质胶,再在上层加入基质胶和样品混合物,最后在培养板中加入完全类器官培养基,构建 大皿套小皿 的方式培养㊂这两种方法都可使肠A S C s在体外培养条件下自发分化成各种成熟细胞,并重现与源组织相同的结构和功能㊂前者单次培育的成熟类器官较少,而后者单次培育的类器官数量更多㊂除了在类器官培育数量上有区别外,更重要的是,后者的培养方式改变了小肠上皮细胞的极性,使单层上皮细胞的小肠绒毛面朝向培养液,便于进行小肠功能探索与评估或宿主与病毒关系的试验[6,12-13]㊂2不同动物的肠类器官培养2.1鼠肠类器官2009年,C l e v e r s团队[3]首次利用E N R培养条件,即利用富含表皮生长因子(E G F)㊁头蛋白(N o g-g i n)和W n t激活剂R-s p o n d i n-3的培养基成功构建鼠小肠类器官㊂2018年,W a n g等[14]从成年小鼠的黏膜下组织和固有层中分离出了肠神经胶质细胞(E G C s),B a g h d a d i和K i m[15]在W a n g等的研究基44727期陈奡蕾等:动物肠类器官培养技术础上将E N R培养基和从E G C s培养中分离的条件培养基相结合,发现该培养系统会显著促进鼠小肠新隐窝的形成,增强干细胞活性,该培养系统可以用于研究鼠小肠类器官和E G C s通过分泌因子产生的相互作用㊂尽管小鼠小肠类器官的培养条件已经相对成熟,构建长期稳定的小鼠结肠类器官仍存在培养条件上的挑战㊂为此,S a t o等[16]开始改良E N R培养条件㊂研究发现鼠小肠类器官可持续表达W n t信号,而结肠隐窝在培养开始不久后便失去W n t信号,他们推测结肠类器官缺乏W n t配体,因此不能长期维持结肠干细胞的稳定[16];该课题组在E N R 条件培养基中添加W n t-3A,结果发现结肠隐窝的培养效率增加了10倍,最终成功探索出小鼠结肠类器官的培养条件[16];此外,他们还发现新鲜分离的结肠隐窝上部完全成熟细胞会干扰肠类器官的生长[16]㊂将结肠隐窝轻度消化成小簇细胞再进行培养,会极大提高结肠类器官形成的效率㊂Y i l m a z等[17]发现潘氏细胞能够通过检测肠干细胞代谢状态来调节自身活动㊂S a t o等[18]研究发现无论是在小鼠的体内或体外,L g r5+干细胞的生长维持都与潘氏细胞有密切的联系㊂潘氏细胞能够表达E G F㊁W n t3㊁T G F-α等多种培养干细胞所必须的信号分子,将分选出的L g r5+干细胞与潘氏细胞共培养可显著提高肠类器官培养的成功率㊂2.2猪肠类器官2013年,G o n z a l e z-C o r d e r o等[19]从野生型约克夏仔猪中获取肠道组织,采用免疫荧光法及电镜首次鉴定了猪肠细胞谱系,包括肠道干/祖细胞系,吸收细胞系及分泌细胞系㊂同时,构建了猪肠类器官长期培养体系,成功培养和传代猪肠类器官,为利用猪作为转化医学的动物模型奠定基础[19]㊂为了更好地研究肠道上皮细胞的更新情况,T h o r n e团队[20]成功开发了 单层类器官 的培养方法,并证实 单层类器官 具有增殖和分化区,自我更新,组织极性及分化主要肠道细胞类型的特性㊂v a n d e r H e e 等[21]利用完全酶解法将类器官分离为多细胞系悬液,取代了用机械破碎法获得肠道隐窝或肠道干细胞㊂这样不仅能提高单层类器官培养效率还能减少机械分离对细胞的损伤㊂利用上述培养方法,L i 等[12]成功将3D猪肠类器官制成2D单层类器官,用于研究P E D V感染宿主肠道的致病机制㊂2020年,L i等[22]通过去除猪肠类器官培养系统中的基质胶并利用超低吸附培养板,使原本肠绒毛内置的猪肠类器官在悬浮培养时发生极性反转,培养出了绒毛外置的猪肠类器官,为研究猪肠道病原体与宿主的相互作用提供了适宜的模型㊂2.3犬肠类器官近年来,人们建立并不断探索犬肠类器官的改良培养方案以期提高培养效率[16]㊂P o w e l l和B e-h n k e[23]利用可分泌W n t3a㊁R-s p o n d i n-1和N o g g i n (WR N)的小鼠纤维原细胞系,构建了50%L-WR N (条件培养基),并证明了WR N是犬类器官生长所需要的因子㊂在该培养方案下,犬肠类器官能稳定传代40代以上㊂K r a m e r等[24]采取F u j i i团队[25]的经验策略,通过移除烟酰胺㊁p38-MA P K抑制剂㊁N2和E G F及增添I G F1及F G F2,调制出改良培养系统㊂该培养系统在促进细胞分化的同时还能保持肠道干细胞的增殖㊂此外,由于每个肠段都有特定的解剖结构和生理功能,研究者开始探索更精准的肠段类器官㊂C h a n d r a和同事们[26]在试验中分离健康犬和炎性肠炎病(I B D)及肠道肿瘤病犬的空肠㊁十二指肠㊁回肠组织和结肠,并在改良的人肠类器官培养基(WR N㊁R O C K抑制剂和G S K3β)中培养出了对应的类器官㊂研究发现I B D犬源的类器官和健康犬源的类器官在形态学上无明显差异,且都能稳定传代20代以上㊂与传统截取肠段组织不同,该研究利用内窥镜对不同肠段进行活检采样,所得样本均能顺利形成对应的类器官,扩大了犬肠类器官的供体来源㊂就犬隐窝分离方法而言,P o w e l l和C h a n d r a 团队使用的方法略有差异:前者使用胶原酶消化达到隐窝分离的效果,而后者使用E D T A螯合法[23,26]㊂从分离效果上来看,使用E D T A进行隐窝分离显著提高了隐窝上皮的纯度,并减少了其他细胞类型的污染[26]㊂哺乳类动物肠道干细胞的分离具有种属差异,消化试剂浓度和孵育时间与对应种属肠道绒毛的长度㊁数量和大小相关[3,26-27]㊂与人和小鼠的肠道类器官相似,犬L g r5+肠道干细胞主要集中在肠道类器官及空肠组织的隐窝区域[26]㊂犬肠道类器官与犬全层空肠组织的免疫组化对比结果显示,犬肠道类器官为上皮细胞群组成,不含潘氏细胞㊁间充质细胞及免疫细胞且犬肠道干细胞能分化成杯状细胞㊁小肠内分泌细胞及空肠组织[26]㊂这些细胞的类型及空间定位与源组织一致,证明犬肠道类器官能较好地还原源组织的结构和5472畜牧兽医学报54卷功能[28]㊂2.4猫肠类器官目前,仅有一例报道描述了猫肠类器官的培养,但培养的结果并不理想㊂P o w e l l和B e h n k e[23]利用L-WR N条件培养基养出猫肠类器官,但猫肠类器官在P10代次前后停止扩增,并在P13~P18代次前后开始出现生长停滞㊂与此同时,他们观察到了一种间充质样细胞类型在猫肠类器官生长出现停滞前数量减少且猫肠类器官表达的波形蛋白(V I M)比对照组多,提示这类细胞可能是猫肠类器官生长的必需成分㊂P o w e l l和B e h n k e[23]根据间充质/基质成分与肠隐窝共培养的要求,尝试了添加多种用于诱导人和小鼠的肠类器官生长或由隐窝间充质/基质细胞分泌的因子,但培养结果依然没有太大的改善,说明猫肠类器官的培养条件仍需要更多探索㊂2.5禽肠类器官目前,关于禽肠道类器官的报道较少㊂P i e r z c h a l s k a等[29]首次利用鸡胚的上皮组织成功建立禽肠道类器官,并发现前列腺素E2(P G E2)可替代WR N培养体系中的R-s p o n d i n1和N o g g i n而不影响类器官球的生长㊂与哺乳类动物的肠类器官不同,禽肠类器官较少出现出芽样的隐窝[29-30]㊂近期,Z h a o等[30]采用L-WR N条件培养基,利用鸡胚的小肠组织和肉鸡或蛋鸡的盲肠成功构建了可传代㊁可冻存的禽肠类器官,并用R T-P C R和W e s t e r n b l o t证实了禽小肠类器官不仅有干细胞还有成熟的分化细胞,包括上皮细胞㊁肠内分泌细胞㊁潘氏细胞和杯状细胞㊂而外源添加物的浓度和种类可改变禽肠类器官的数量㊁表面积和干细胞标记物的表达量[30-32]㊂为了提高构建禽肠类器官的可重复性,除了培养体系方面的改良,P a n e k等[33]还应用悬滴法培养以鸡胚为材料的禽肠类器官,不但提升了培养效率而且还降低实验成本㊂2.6反刍动物及草食动物的肠类器官由于反刍动物(牛㊁羊)及草食动物(马㊁兔)的饮食特性,其消化道进化为与之适应的特殊解剖结构㊂例如牛和羊具有四个胃,马和兔子的盲肠和结肠发达㊂尽管反刍动物及草食动物的肠道与人和小鼠的肠道不同,但利用改良的人或小鼠肠道类器官培养系统如L-WR N㊁B E M或商品化培养基I n t e s t i-C u l t T M仍能培养出相应的反刍动物及草食动物的3D肠类器官,而M u s s a r d等发现利用化学抑制剂的2K i培养基更适用于增殖兔肠类器官,而低浓度(5%)的L-WR N更适合诱导分化兔肠类器官[23,34-38]㊂3动物肠类器官的优点与缺点3.1优点动物肠类器官是功能介于2D细胞系模型和动物模型之间的体外模型㊂它既具有某些2D细胞系模型或活体动物模型的优势,又能弥补他们在某些研究上的不足㊂C a c o-2细胞单层模型是药物研究常用的2D细胞系模型,但该模型无法模拟肠道真实结构和肠道细胞间的互作[39-40]㊂而与广泛使用的癌细胞系和永生细胞系构建的2D单层细胞系模型不同,3D肠类器官模型能更好地再现细胞的结构和功能,以及原始组织的遗传和表观遗传特征,是更加真实可靠的模型[4,41-44]㊂与活体动物模型相比,类器官不仅能模拟疾病在体内发生和发展的情况,还能更容易地进行基因操作,使之更好地研究特定细胞之间的联系和形态结构[45-46]㊂除此以外,类器官培养所需的原代细胞来源广泛,可从外科切除的组织㊁活检样品和屠宰组织中获得,极高效地利用组织,减少使用活体动物,符合实验3R原则[26,47-49]㊂由于类器官能很好地反映样本个体特征,因此也可服务于病患个体的精准医疗[35,50]㊂3.2缺点和所有正在发展的技术一样,类器官培养技术也有其短板㊂肠类器官的3D培养体系所用的基质胶是来自小鼠的肉瘤,而这些动物来源的基质胶成分复杂,组分无法标准化,具有传播动物源病原的风险㊂此外,这种肿瘤源基质不能有效地模拟天然肠道的微环境㊂上述缺点可能会限制肠类器官广泛地应用在机制研究和临床试验中[50]㊂G j o r e v s k i等[51]首次提出人造水凝胶替代基质胶,但由于类器官生长的不同阶段需要不同硬度的细胞外基质,因此人造水凝胶的培养效果不如动物源基质胶㊂随后人们开始尝试不同的非肿瘤源生物基质胶,并发现其培养性质与基质胶相当,甚至更优,如蛋白㊁肠道细胞外间质水凝胶和去细胞化的猪消化道[52-54]㊂这些尝试为以后生产标准化基质胶提供了理论基础[54]㊂当前类器官主要指上皮源性的类器官㊂而这些类器官几乎只含干细胞/足细胞及其分化的特异性上皮细胞,不含有成纤维细胞㊁免疫细胞㊁血管细胞64727期陈奡蕾等:动物肠类器官培养技术等间基质细胞[26]㊂这限制了类器官技术在模拟炎症反应㊁免疫细胞调控机制和模拟体内微环境等方面的研究[50]㊂当试验需要更复杂,更接近生理的研究模型时,单个类器官或简单的共培养系统则不能满足此要求㊂为此,科学家开发了类器官芯片(o r-g a n o i d-o n-c h i p s),以更好地模拟生理微环境[55-56]㊂肠上皮细胞具分泌物质㊁消化大分子㊁吸收营养㊁抵抗病原体和自我更新的功能,其特殊细胞亚结构绒毛和微绒毛面向肠腔,具有极性[57]㊂研究肠类器官上皮细胞与其他物质或病原体之间的关系需要通过微注射方法[58]㊂这种高要求的操作技术限制了相关研究的发展㊂因此,探索培养绒毛外翻的肠类器官具有迫切性㊂2D类器官很好地解决了上述的难题㊂首先在培养皿中铺上基质胶薄层,待基质胶凝固后加入含基质胶的肠隐窝或肠干细胞与混合物,然后加入E N R培养液,即可构建出细胞基底面朝向基质胶,细胞顶端面朝向培养液的单层肠类器官[12,20-21,59]㊂此外,N a s h等[60]利用悬浮法培养建立了肠绒毛外翻的禽肠类器官㊂4小结与展望C l e v e r s实验室开创性地发现L g r5+干细胞标记物,自此引起了探索人和动物的肠类器官构建㊁鉴定与改良的热潮㊂得益于肠类器官的立体结构及细胞异质性等特性,人们对这种新型的㊁更好模拟体内肠道生理结构和功能的体外模型产生巨大需求㊂为此,研究者纷纷开始探索和改良的类器官培养体系,以期望提高肠类器官的培养效率并根据研究需要开发出不同肠段的肠类器官㊂目前的培养体系和培养技术能快速成熟地培养出人㊁小鼠和犬不同肠段的肠类器官㊂利用改良的人和鼠肠类器官培养体系,也能顺利培养出反刍动物和草食动物的肠类器官;然而相似的培养体系在猫肠道类器官中的培养效率却较低㊂相反,由于没有太多研究和文献报道,禽肠类器官的培养体系没有其他物种的肠类器官培养体系丰富,仍有待继续优化㊂无论是3D肠类器官抑或是2D单层肠类器官,这些研究平台都能高度还原源组织的表型和功能㊂因此在不久的将来,当类器官培养体系能更标准化时,结合如C R I S P R/C a s9基因编辑㊁细胞共培养㊁大数据和人工智能等技术,动物肠类器官能进一步服务于疾病诊断㊁药物筛选㊁器官修复或移植等研究领域,推动精准医学的发展㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] M E N E S E S A M C,S C HN E E B E R G E R K,K R U I TWA G E N H S,e t a l.I n t e s t i n a l o r g a n o i d s-c u r r e n t a nd f u t u re a p p 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生物学中的5′
生物学中的5′
生物学中的5'端通常指的是一个化合物的碳链的第五个碳的位置，即碳链的起始端。
这个位置在生物学中非常重要，因为它涉及到DNA和RNA分子的复制、转录和翻译等过程。
在DNA分子中，5'端是链的起始端，也是磷酸基团所在的位置。
在DNA复制过程中，DNA聚合酶会沿着模板链从5'向3'方向移动，合成新的子链。
因此，5'端是DNA 复制的起点。
在RNA分子中，5'端是三磷酸基团所在的位置，也是转录的起始位置。
RNA聚合酶会在5'端添加一个新的核苷酸，然后沿着模板链从5'向3'方向移动，合成新的RNA 链。
总之，生物学中的5'端是一个重要的位置，涉及到许多生物学过程。
利用GEO数据库寻找结直肠癌肝转移生物标志物
利用GEO数据库寻找结直肠癌肝转移生物标志物金鑫亮;王一休;薛清凯;薛伟杰;宫之奇;牛兆建;朱呈瞻【摘要】目的利用生物信息学分析方法寻找结直肠癌(CRC)肝转移生物标志物。
方法在公共基因芯片数据库(GEO)下载CRC数据,获得2个数据集共261个样本,其中包含167个非转移样本和94个转移样本,对两批样本混合后随机拆分成训练集195个样本(75%)和验证集66个样本(25%)。
对两批数据芯片中提供的原始数据进行Robust Multi-chip Average (RMA)归一化处理,然后利用R-package Combat去除批次效应。
筛选在转移组和非转移组 t 检验 P <0.05的基因(426个基因)进行CRC转移相关标志物筛选。
结果利用Lasso回归算法对426个基因进行重要性排序,按重要性排序筛选出了CD163L1、FAM210B、LGR5、LRRC16A、PIK3R3、PLEKHA6、PROSER2、RBBP9、SEMA6D、STOM、THBS1、ZNF544前12个基因作为潜在的CRC转移相关标志物。
结论通过生物信息学对基因芯片数据的分析,筛选出了CRC肝转移的相关生物标志物,可为后续研究提供参考。
【期刊名称】《精准医学杂志》【年(卷),期】2018(033)006【总页数】5页(P546-549)【关键词】计算生物学;数据库,遗传学;结直肠肿瘤;肿瘤转移;肝肿瘤;生物标记,肿瘤【作者】金鑫亮;王一休;薛清凯;薛伟杰;宫之奇;牛兆建;朱呈瞻【作者单位】[1]青岛大学附属医院胃肠外科,山东青岛266003;[1]青岛大学附属医院胃肠外科,山东青岛266003;[1]青岛大学附属医院胃肠外科,山东青岛266003;[1]青岛大学附属医院胃肠外科,山东青岛266003;[1]青岛大学附属医院胃肠外科,山东青岛266003;[1]青岛大学附属医院胃肠外科,山东青岛266003;[1]青岛大学附属医院胃肠外科,山东青岛266003;【正文语种】中文【中图分类】R735.3结直肠癌(CRC)作为最常见的消化道肿瘤之一，近年来在发展中国家的发病率快速增高[1]。
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lgr5荧光表达位置
LGR5是一种蛋白质，常常被用作一种干细胞标志物，它主要分布在某些组织中的基底层干细胞和祖细胞中。
在许多组织中，LGR5都被发现具有重要的维持干细胞自我更新和分化的作用。
LGR5在不同组织中的表达位置如下：
肠道：在肠道中，LGR5主要表达于小肠和结肠的干细胞和祖细胞中，以及负责分泌黏液和粘液的肠道表皮细胞。
皮肤：在皮肤中，LGR5表达于毛发和皮肤的基底层干细胞中。
胃肠道：在胃肠道中，LGR5表达于干细胞和祖细胞，参与维持上皮组织结构和功能。
前列腺：在前列腺中，LGR5主要表达于干细胞和前列腺癌细胞中。
肝脏：在肝脏中，LGR5主要表达于肝细胞中的胆管上皮细胞和胆管干细胞中。
需要注意的是，LGR5的表达位置在不同组织中可能存在差异，且研究也在不断地更新和完善，因此上述信息仅供参考。