HPLC测定复方苦参注射液中苦参碱_槐定碱和氧化苦参碱的含量_田娟

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HPLC检测苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量

43二○○九年·第五期研究报告HPLC 检测苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量黄华树 1 叶能胜 1 郝晓丽 1 刘妮 1 谷学新 1* 范国强 2(1.首都师范大学化学系北京 100048(2.北京同仁堂股份有限公司科学研究所北京 100011摘要建立 HPLC 法测定苦参中苦参碱和氧化苦参碱含量。

色谱柱采用Aichrom NH 2 (250×4.6mm,5μm ,流动相为乙腈 -乙醇 -3%磷酸溶液 (80∶ 10∶ 10 ,流速 :1.0 mL/min,检测波长 :210nm ,进样量为10μL ,柱温 :30℃。

苦参碱在0.5~10μg/mL范围内有良好的线性关系 (r=0.9998,氧化苦参碱在0.5~10μg/mL范围内有良好的线性关系 (r=0.9997。

苦参碱平均加标回收率为 100.42%(n=5, RSD 为1.91%; 氧化苦参碱平均加标回收率为 100.26%(n=5, RSD 为 2.03%。

该方法操作简单、重现性好、检测灵敏度、准确度高, 且样品分离效果好。

本方法适用于苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定。

关键词高效液相色谱法苦参苦参碱氧化苦参碱苦参是常用中药之一,具有清热燥湿、祛风杀虫、利尿之功效,为临床常用中药,用于热痢,便血,黄疸尿闭,赤白带下,阴肿阴痒,湿疹,皮肤瘙痒疥癣麻风 ; 外治滴虫性阴道炎。

苦参植物中主要含有生物碱、挥发油、黄酮类化合物和脂肪酸。

其中生物碱类的主要药效成分苦参碱和氧化苦参碱具有抗肿瘤、抗肝纤维化、抗乙肝病毒、对异常肝细胞凋亡的阻断、平喘和抑菌作用 [1,2]。

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chroma-tography , HPLC 是中药质量控制研究中的常用方法[3,4],应用 HPLC 法测定苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量已有报道,田娟 [5]等和汪文来 [6]等分别用高效液相色谱法测定不同产地的苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量,灵敏度较高,操作简单,但是杂质干扰较大。

HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量

HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(5)一671一HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱和槐果碱的含量耿革霞一,孙英华,向柏,何仲贵(1.沈阳药科大学药学院,沈阳110016;2.石家庄制药集团中诺药业,石家庄050051) 摘要目的:建立同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱及槐果碱含量的HPLC测定法.方法:色谱柱为Hypemil—NH柱(4.6mm×200mm,5in),流动相为乙腈一磷酸缓冲液(1.0mL磷酸加入到1000mL水中,三乙胺调pH2.5)一无水乙醇(80:10:10),检测波长为220nm,柱温35℃,流速1.0mI?min一,进样量20.结果:槐定碱,苦参碱,槐果碱分别在13.0～108.0ing.L～,11.4～95.2mg?L和4.6～82.1mg?L浓度范围内呈良好的线性关系,r 分别为0.9999,0.9996,0.9999.平均回收率(n:9)分别为99.41%,100.0%,100.6%.结论:可通过HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱和槐果碱的含量,并可用该方法进行苦豆子药材及含苦豆子的成药的质量控制.关键词:苦豆子总碱;槐定碱;苦参碱;槐果碱;HPLC法中图分类号:R917文献标识码:A文章编码:0254—1793(2006)05-0671一o3 HPLCsimultaneousdeterminationofthecontentsofsophoridine, matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecuroidesL.GENGGe—xia一,SUNYing—hua,XIANGBai,HEZhong—gui'(1.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China;2.ShijiazhuangPharmaceuticalGroupZhongnuoPhamaCo.,Ltd.,Shijiazhuang050051,C hina)Abstract0bjective:ToestablishanHPLCmethodforsimultaneousdeterminationoftheconte ntsofsophoridine,matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecuroidesL.Method:Chromatogr aphicconditionincludedHypersilNH2(4.6mm×200mm,5p.m)columnandmobilephaseconsistingofamixtureofacetonitrile—triethyl—aminephosphatebuffer(1.0mLphosphoricacidaddedto1000mLwater,adjustedtopH2.5wi thtriethylamine)一anhydrousalcohol(80:10:10).Thedetectionwavelengthwas220nm.Theflowratewas1.0m L?min～.Result:Themethodhasagoodlinearityandcorrelationcoefficient:thesophoridinewasl3.0—108.0mg?L一,thematrinewas11.4—95.2mg?L—andthesophocarpine4.6—82.1mg?L一.Themeanrecoveries(n=9)wel'~99.41%,100.0%and100.6%respectively.Conclusion:Thismethodissimple,rapidandaccu rateassayforthedeterminationofsophoridine,matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecur oidesL.,andsuitablefor qualitycontrolintheproductionofSophoraalopecuroidesL.Keywords:SophoraalopecuroidesL.;sophoridine;matrine;sophocarpine;HPLC苦豆子(Sophoraalopecuroides)为豆科槐属植物,其味苦,性寒,广泛分布于我国的内蒙古,山西,陕西,甘肃,新疆及西藏等地.我国苦豆子资源蕴藏丰富,药用其根,根茎,全草及种子,具有清热燥湿,止痛,杀虫的功效,在民间其临床应用已很久.苦豆子中富含生物碱,其主要成分为氧化槐果碱,氧化苦参碱,槐定碱,槐果碱,苦参碱,苦豆碱和金雀花碱等20多种生物碱….近年来的多项研究表明其总生物碱或其单体生物碱有多方面的生物活性,大力开发和推广苦豆子生物碱的临床使用有很大的经济价值和社会价值.目前已经有了关于苦豆子中生物碱的种类及其含量分析的报道,但由于苦豆子中各生物碱单体的化学结构和极性较接近,对生物碱单体的分离和含量测定一直是该产品质量标准的难点.本文建立了用HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱,槐果碱(化学结构式见图1)3种主要十通迅作者Tel:(024)23986320,23986321:E—mail:***************..——672--——药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(5)生物碱的方法,该方法分离度好,专属性强,准确度高,可用于苦豆子类产品的质量控制.勰勰勰^BC图1槐定碱(A),苦参碱(B)和槐果碱(C)的化学结构式Fig1Thechemicalstructuresofsophoridine(A),matrine(B)andsoph? ocarpine(C)1仪器与试药苦豆子总碱(批号:030301,030406,030602),槐定碱对照品(批号:2003—01),苦参碱对照品(批号:2003—01),槐果碱对照品(批号:2003—01),氧化苦参碱对照品(批号:2003—01)均由宁夏博尔泰力药业股份有限公司提供,含量均为99.6%.高效液相色谱仪[L一2130泵,AutosamplerL一2200型自动进样器,uV—VISDetectorL一2420紫外分光光度检测器(日本日立公司)];pHS一3C型酸度计(上海雷磁仪器厂).2色谱条件色谱柱:Hypersil—NH2柱(4.6mm×200mm,5m);流动相:乙腈一磷酸缓冲液(1.0mL磷酸加人1000mL水中,三乙胺调pH2.5)一无水乙醇(80:10:10);检测波长:220am;柱温35oC;流速: 1.0mL?min～.3方法与结果3.1线性关系考察精密称取苦豆子总碱0.1050g,置100mL量瓶中,加0.1mol?L盐酸20mL使溶解,并加流动相定容.精密吸取上述溶液1mL,置10mL量瓶中, 并加流动相定容,摇匀,用0.45m微孔滤膜滤过, 作为样品溶液.精密称取槐定碱,苦参碱,槐果碱对照品21.6. 19.1,22.8mg,分别置10mL量瓶中,加0.1mol?L的盐酸2mL使溶解,并加流动相定容,摇匀,作为对照品储备液I.精密吸取上述对照品储备液I 各2mL,置10mL量瓶中加流动相定容,作为对照品储备液Ⅱ.精密吸取槐定碱,苦参碱储备液Ⅱ各0.3,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mL,槐果碱储备液110.1,0.2,0.4,0.9,1.3,1.8mL,置10mL量瓶中,加流动相定容,摇匀,以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液20,按上述色谱条件进行分析.以质量浓度为横坐标(),峰面积值为纵坐标(y)进行线性回归,得槐定碱,苦参碱,槐果碱的回归方程分别为:y:8.305×10X一1.004r=0.9999Y:9.519×10X一1.788×10r=0.9996Y:2.062×10X一2.645×10r=0.9999线性范围分别为13.0～108.0mg?L～,11.4～95.2mg?L一和4.6～82.1mg?L～.3.2精密度试验分别精密吸取槐定碱,苦参碱,槐果碱对照品储备液lI1.9,1.8,0.3mL,置10mL量瓶中,加流动相定容得混合对照品溶液.以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液20L,按上述色谱条件重复进样6次,记录峰面积.槐定碱,苦参碱,槐果碱峰面积的RSD分别为1.28%,1.30%, 1.67%.3.3稳定性试验在室温条件下,取苦豆子总碱样品溶液,按0,2,4,6,8,10,12h时间间隔,分别测定色谱峰峰面积.槐定碱,苦参碱,槐果碱峰面积的RSD分别为0.53%,0.42%,0.79%.表明样品溶液在12h内稳定性良好.3.4重复性试验按"3.1"项下方法制备样品溶液5份,按上述色谱条件进行分析,测得苦豆子总碱样品中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含量分别为37.53%,32.72%,6.29%;RSD分另U为1.30%,1.51%,0.94%.3.5回收率试验取已知含量的苦豆子总碱样品9份,每份30IIlg,精密称定.分别精密加人槐定碱, 苦参碱,槐果碱对照品溶液,使对照品的加入量分别为槐定碱5,l0,15mg;苦参碱4,8,12mg;槐果碱1, 2,3mg,按"3.1"项下方法制备含对照品为高,中,低3种浓度的样品溶液,每组样品3份,以0.45微孔滤膜滤过,在上述色谱条件下取续滤液20进样分析,测定回收率.结果槐定碱,苦参碱,槐果碱的平均回收率(,l=9)分别为99.4l%,100.0%, 100.6%.3.6样品测定精密吸取样品溶液,以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液20,按上述色谱条件进样分析;'另取3种对照品适量,按"3.2"项下方法配制成含槐定碱,苦参碱,槐果碱分别为82.08,68.58,l3.68mg?L一的混合对照品溶液,同法测定,色谱图见图2.按外标法以峰面积计算供试品中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含量,结果见表1.药物分析杂志ChinjPharmAnal2006,26(5)一673—025*******ttminAB图2对照品(A)和样品(B)的色谱图Fig2Chromatogramsofreferencesubstances(A)andsample(B)I.槐定碱(sophocarpine)2.苦参碱(nl~'ine)3.槐果碱(帅ph0ridine)表13批样品的含量测定结果(%,n=5)Tab1Determinedresultsofsamples4结果与讨论4.1苦豆子总碱原料药已收载于国家药品标准.4],原标准中采用薄层色谱法对槐定碱,苦参碱和氧化苦参碱加以鉴别,并用高效液相色谱法测定槐定碱的含量.通过高效液相色谱法对苦豆子总碱所含生物碱成分的分离可知该几批样品中氧化苦参碱的含量较少,其对照品色谱图见图3,在苦豆子总碱色谱图相同的位置没有明显的氧化苦参碱色谱峰,测定结果与文献[5]报道一致.4.2色谱条件的选择过程中,曾经试用过ODS—c..色谱柱,采用反相离子对色谱条件进行分离,但由于苦豆子总碱中的几种主要生物碱成分在该色谱条件下峰位较集中,虽然试用过多种离子对试剂并对流动相组成进行了反复摸索,但仍不能达到较好的分离效果.4.3使用氨基柱,以乙腈一磷酸三乙胺缓冲盐一无水乙醇为流动相的色谱系统中,缓冲盐的pH及浓度对分离情况有较大影响.在一定pH范围内,随pH升高保留时间延长,分离效果得以改善.在缓冲盐浓度较低时,增加缓冲盐浓度可以得到较好的分离结果.02550min图3氧化苦参碱对照品的色谱图Fig3Thestandardchromatogramofoxymatrine4.4对苦豆子总碱中单体生物碱的含量测定结果表明,在苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含量较高,分别约为38%,32%,6%,此3种单体生物碱合计约占苦豆子总碱总量的76%.参考文献1QINXue—gong(秦学功),YUANYing—jin(元英进).Studieson extractionofalkaloidsinseedofSophoraalopecuroides(苦豆子种子中生物碱的冷浸提取实验研究).ChinTraditHerbDrl(中草药),2001,32(7):6042SONJZ,XuHX,Tians】,eta1.Determinationofquinolizidinealka- loidsintraditionalChineseherbaldrugsbynonaqueouscapillary eleetrophoresis.JC/womamgrA,1999,857:3033NationalDrugStandard(国家药品标准).StateFoodandDrugAd- ministration,PBChina(国家食品药品监督管理局).WS一10001 (HD一1391)一20034DrugSpecificationPromulgatedbytheStateDrugAdministration,PB China[国家药品监督管理局标准(试行)].StateDrugAdministra. tion,PBChina(国家药品监督管理局),2002ZD一01215ZONGLi(宗莉),LIl<aIlg—le(李康乐),MAY ao—zhong(马耀忠),et.ThedeterminationofmatrinealkaloidsinKexielingtabletsbyHPLC(克泻灵片中苦参碱类生物碱的HPLC分析).., Mod铆zPharm(中国现代应用药学),1998,15(6):38 (本文于2005年5月18日修改回)。

氧化苦参碱和苦参碱含量在苦参生长发育过程中的动态变化

氧化苦参碱和苦参碱含量在苦参生长发育过程中的动态变化张守润;纪瑛;蔺海明【期刊名称】《草业科学》【年(卷),期】2008(025)007【摘要】苦参Sophora flavescens为多年生草本或灌木,其根入药.为了揭示氧化苦参碱(Oxmatrine,OMT)和苦参碱(Matrine,MT)在苦参体内代谢转化规律及两者之间的关系,为人工栽培苦参提供理论依据,运用高效液相色谱(HPLC)技术对苦参根、茎、叶、种子生长发育过程中氧化苦参碱和苦参碱含量动态变化进行了全面的研究.结果表明.根和成熟种子中氧化苦参碱和苦参碱含量最高,苦参碱主要分布在幼嫩的叶和茎中,而在成熟和衰老的叶和茎中苦参碱则转化为较为稳定的氧化苦参碱.在根和种子等贮藏器官中则主要以氧化苦参碱的形式贮存,并且根和种子中氧化苦参碱和苦参碱含量以及相同器官2种生物碱含量变化呈现互补的特点,由此推断,叶中形成的氧化苦参碱和苦参碱在向根和种子运输分配时受其生长竞争的影响,它们之间可以相互转化.【总页数】5页(P41-45)【作者】张守润;纪瑛;蔺海明【作者单位】甘肃农业职业技术学院,甘肃,兰州,730020;甘肃农业职业技术学院,甘肃,兰州,730020;甘肃农业大学农学院,甘肃,兰州,730070【正文语种】中文【中图分类】S541【相关文献】1.HPLC测定苦参配方颗粒中苦参碱与氧化苦参碱含量 [J], 王丽聪;李松2.离子对RP-HPLC同时测定复方苦参注射液中氧化苦参碱和苦参碱含量 [J], 张蕾;陈晓辉;王玺;毕开顺3.苦参不同炮制品中苦参碱和氧化苦参碱含量测定 [J], 江海燕;陈勇;张辉4.离子对RP-HPLC同时测定复方苦参注射液中氧化苦参碱和苦参碱含量 [J], 张蕾; 陈晓辉; 王玺; 毕开顺5.苦参总碱注射液中苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱含量及其在制剂中的均一性[J], 朱沂;谭晓梅;于喜水;刘跃胜;徐光灿;高阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定痒葏洗剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量

高效液相色谱法测定痒葏洗剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量罗德啟【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2011(30)1【摘要】目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定痒葏洗剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量.方法固定相为Hypersil ODS柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相:乙腈-0.04 mol·L-1磷酸二氢钾(13:87),流速1 mL·min-1,紫外检测波长220nm.用酸溶碱提法提取样品中的苦参碱和氧化苦参碱.结果苦参碱标准曲线方程为:A=2 158.24C-157.70(r=0.999 8),氧化苦参碱A=1 936.25C-1 137.89(r=0.999 7),线性范围都是25～800μg·mL-1,平均回收率苦参碱为99.06%(RSD=1.69%),氧化苦参碱为100.22%(RSD=1.99%).结论该方法测定痒葏洗剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量,操作简便、快速,结果准确,可用于痒葏洗剂的质量控制.【总页数】2页(P103-104)【作者】罗德啟【作者单位】湖北省新华医院药学部,武汉,430015【正文语种】中文【中图分类】R286;R927.2【相关文献】1.反相高效液相色谱法测定痒安洗剂中苦参碱的含量 [J], 何秋月;江滨;何作文;曾元儿;李子鸿;刘东文2.高效液相色谱法测定癣平洗剂中苦参碱和氧化苦参碱含量 [J], 刘颖3.高效液相色谱法测定醋制消肿止痛液中苦参碱、氧化苦参碱、羟基红花黄色素A 的含量 [J], 彭宏伟;郭丽华4.反相高效液相色谱法测定治糜康栓中苦参碱和氧化苦参碱的含量 [J], 于澎;宋凤媛;钱圳;董坤园;许天阳5.反相高效液相色谱法测定妇炎洗剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量研究 [J], 宋霞林;郭爱枝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法测定苦参素注射液中氧化苦参碱的含量

[导读] 以氧化苦参碱对照品溶液进行紫外光谱扫描，在206nm波长处有最大吸收，220nm处为肩峰。

杨雷黄霞丽(襄樊职业技术学院医学院湖北襄樊441021)【摘要】目的建立苦参素注射液中氧化苦参碱的含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Spherisorb氨基柱（4.6*150mm，5μm），流动相为乙腈-磷酸水溶液（磷酸：三乙胺：水=2:1:97）-乙醇（75:15:10）；流速为2.0ml／min，柱温为30℃，检测波长为220nm，进样量为20μL，理论塔板数按氧化苦参碱计不少于2000。

结果氧化苦参碱浓度在0.4814~101233μg范围内，峰面积与进样量呈良好线性关系，r=0.9999；平均回收率为99.04%（RSD=0.98%，n=9）。

结论该方法简便，快速，准确，可用于苦参素注射液中氧化苦参碱的含量测定。

【关键词】苦参素注射液氧化苦参碱高效液相色谱含量测定【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）09-0396-01 苦参素是从中药苦参中提取分离纯化的混合生物碱，其主要成分为氧化苦参碱。

目前在临床上广泛用于治疗慢性乙型肝炎和肿瘤治疗、化疗引起的白细胞低下和其他原因引起的白细胞减少症等。

本实验参照文献[2]，采用高效液相色谱法测定其含量，该方法快速、稳定性、重现性好。

1 仪器与试药SDP-10AVP-日本岛津高效液相色谱仪，BT25S电子天平；苦参素注射液（市售品，批号分别为20100207、20100208、20100209，规格:6ml:0.6g）,氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110780-200405），乙腈为色谱纯，为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备：紧密称取经P2O5 40℃减压干燥至恒重的氧化苦参碱对照品10.03mg，置25ml的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液；再精密量取储备液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

高效液相色谱法同时测定苦参片中苦参碱和氧化苦参碱的含量

高效液相色谱法同时测定苦参片中苦参碱和氧化苦参碱的含量【关键词】苦参片；，，氧化苦参碱；，，苦参碱；，，高效液相色谱摘要：目的建立苦参片中氧化苦参碱和苦参碱的含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法，使用Thermo色谱柱，以乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.36ｇ，加1 ml三乙胺，加水至1000 ml，用磷酸调节pH5.5）（3∶97）为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为220 nm。

结果氧化苦参碱在0.005 5～0.088 mg/ml之间与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.999 8），平均加样回收率99.41％，RSD为1.28％；苦参碱在0.106～0.170 mg/ml之间与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均加样回收率99.35%，RSD= 1.25%。

结论该法灵敏、准确、专属性强，重现性好，可作为苦参片的质量控制方法。

关键词：苦参片；氧化苦参碱；苦参碱；高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo establish a method for simultaneous determination of the content of matrine and oxymatrine in Kushen Tablets. MethodsHPLC method was carried out through Thermo C18 column， using acetontrile- phosphate buffer solution (contained 1.36 g potassium dihydrogen phosphate and 1 ml triethylarmine， add water to 1000 ml，adjusted to pH 5.5 with phosphate acid)（3∶97） as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min with detective wavelength of 220 nm. ResultsThe calibration curve of oxymatrine content was linear within the range of 0.0055～0.088 mg/ml (r=0.999 8)，the average recovery of oxymatrine was 99.41%， RSD was 1.28%；the calibration curve of matrine content was linear within the range of 0.170～0.0106 mg/ml (r=0.999 9)，the average recovery of Matrine was 99.35%， RSD was 1.25%. ConclusionThe method is simple， fast and accurate， it can increase the quality control indexof Kushen Tablets.Key words：Kushen Tablets； Oxymatrine； Matrine； HPLC苦参片是由苦参经加工制成的纯中药制剂。

HPLC法同时检测苦参碱杀虫剂中生物碱含量

HPLC法同时检测苦参碱杀虫剂中生物碱含量吕美;王利涛;许欣欣;韩冠媛;王豪帅;于爽【摘要】目的建立高效液相色谱法同时测定苦参碱杀虫剂中苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱和槐果碱含量的方法.方法高效液相色谱法测定生物碱,色谱条件:色谱柱,Wondasil C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相,乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液(三乙胺2％,15∶85,v/v);流速,1.0ml/min,检测波长:205nm.结果苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱和槐果碱分别在0.076～0.5,0.084～0.4,0.12～0.44,0.20～0.49μg/ml浓度范围内呈良好线性关系(R2>0.998),含量分别为:0.70％,0.28％,0.60％,0.01％.结论本实验建立的HPLC法能快速同时测定苦参碱杀虫剂中4种生物碱的含量,可用于快速测定药品或环境中的生物碱.【期刊名称】《济宁医学院学报》【年(卷),期】2017(040)004【总页数】3页(P268-270)【关键词】苦参碱杀虫剂;生物碱;高效液相色谱法;含量测定【作者】吕美;王利涛;许欣欣;韩冠媛;王豪帅;于爽【作者单位】济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826【正文语种】中文【中图分类】R917苦豆子[学名Sophora alopecuroides L]，为豆科(Leguminosae sp.)槐属(Sophora)，草本植物，主要分布于中国北方的荒漠、半荒漠地区[1-5]，主要成分有蛋白质、糖类、有机酸、黄酮类、色素和生物碱[6]。

生物碱属于喹诺里西啶(Quinolizidine)生物碱，包括苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱等多种生物碱，以苦参碱和氧化苦参碱含量最高，并且苦豆子生物碱具有清热解毒，抗菌消炎、止痛及杀虫等作用[7-8]。

HPLC-ELSD法测定复方苦参洗剂中苦参碱的含量

ｔａｒｅＨｐｒｉＮ２ｏｍ（５ｍ × ．ｈｍｔｎ．ｙｅｓＨｌｎ２０ｍｅｉｌｃｕ４６ｍｍ，ｍ）ａｕｅｓｈｈｏａｇａｈｃｃｌｍｎａｅｎｔｌ－．％ｔｅｙａｎ５ｔｗｓｓｄａｔｅｃｒｍｔｒｐｉｏｘｏｕ，ｅｔｉｉＯ１ｒｔｌｏｒｅｉｈｍｉｅ
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２方法与结果
注入色谱仪，测得信噪比（／为１．。将该对照品溶液稀ＳＮ）０２色谱柱：ｐｒｌＨ柱（５４６ｍＨｙｅｉＮ２２０ｍｍｘ．ｍ，ｓ

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[ 收稿日期 ] 2005-07-25 [ 通讯作者 ] * 王智民 , Tel:(010)84014128, E-m ai l:zhmw 123 @ 263. net
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图 1 对照品和样品 HPLC 图 A. 对照品;B. 样品 ;1. 苦参碱 ;2. 槐定碱 ;3. 氧化苦参碱
2. 4 阴性供试品的考察取阴性溶液 0.5 mL, 按
供试品溶液的制备中曾采用将注射剂直接稀释
表 1 3种成分的加样回收率 (n =6)
样品中含量加入量测得量回收率平均值 RSD
测定成分
/m g
/m g
/m g
/%
/% /%
苦参碱
槐定碱
氧化苦参碱
0. 395 0. 395 0. 395 0. 395 0. 395 0. 395 0. 086 0. 086 0. 086 0. 086 0. 086 0. 086 1. 858 1. 858 1. 858 1. 858 1. 858 1. 858
0. 375 0. 375 0. 302 0. 302 0. 480 0. 480 0. 085 0. 085 0. 070 0. 070 0. 110 0. 110 1. 840 1. 840 1. 380 1. 380 2. 320 2. 320
0.763 0.766 0.699 0.695 0.867 0.885 0.172 0.170 0.156 0.155 0.194 0.198 3.708 3.748 3.257 3.206 4.415 4.194
的含量 [ J] . 药物分析杂志 , 2000, 20(6):408. [ 4] 曹红 , 魏萍. 高效液相色谱法测定磷酸苦参碱注射液中苦
参碱的含量 [ J] . 解放军药学学报 , 2000, 16(6):325.
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第 32 卷第 3期 2007 年 2月
中国
T IAN Juan1, 2, WANG W ei-hao1, GAO Hu i-m in1, W ANG Zhi-m in1 (1. Institute of Chinese Materia Med ica, China Academy of Ch inese M edical S ciences, B eijing 100700, China; 2. College of L ife Science, N orthw est Sci-Tech University of Agriculture and Forestry, Yangling 712100, China)
A lltech 426型高效液相泵 , A lltech UV IS 200检测器 , A llchrom 化学工作站 ;苦参碱 (批号 0805200005)、槐定碱 (批号 0784-9702)及氧化苦参碱对照品 (批号 0780-200004)购于中国药品生物制品检定所 , 乙腈、无水乙醇为色谱纯 , 水为高纯水 , 其余试剂均为分析纯 ;复方苦参注射液由山西振东金晶制药有限公司提供 (批号 20040406, 20040407, 20040409, 20040411, 20040412, 20040413, 20041002, 20041003, 20041001-1, 20041001-2)。
准采用酸碱滴定法测定复方苦参注射液中总生物碱含量[ 1] , 而目前关于苦参及其制剂中生物碱类成分含量测定仅见薄层色谱扫描法 [ 2] 、H PLC 测定苦参碱的报道[ 3, 4] 。本研究建立了同时测定制剂中 3种主要生物碱含量的 HPLC 分析方法 , 该法操作简便、灵敏度高、分离度好 , 可用于复方苦参注射液的质量控制。 1 仪器和试药
表 2 复方苦参注射液中 3种成分含量 (n =10)
m g mL-1
批号
20040406 20040407 20040409 20040411 20040412 20040413 20041002 20041003 20041001-1 20041001-2
苦参碱
1. 800 2. 347 1. 628 1. 504 1. 658 1. 568 1. 443 1. 354 1. 086 1. 148
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供试品溶液的制备方法制备样品 , 分别精密吸取一定体积的样品溶液和对照品溶液进样测定。结果表明阴性供试品溶液对样品溶液的测定无干扰。 2. 5 线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液各 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 μL注入高效液相色谱仪 , 测定。以进样量为横坐标 (X ), 峰面积平均积分值为纵坐标 (Y ), 绘制标准曲线 , 计算回归方程。结果表明苦参碱在 0.050 ～ 0.605 μg线性关系良好 , 回归方程为 Y =392 424.2X - 968.0(r =0.999 8);槐定碱在 0.049 ～ 0.590 μg 线性关系良好 , 回归方程为 Y =293 681.1X +404.6(r =0.999 8);氧化苦参碱在 0.372 ～ 4.464 μg线性关系良好 , 回归方程为 Y = 384 579.5X - 17 318.6(r =0.999 9)。 2. 6 精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液各 5 μL, 连续进样 6次 , 记录各色谱峰的峰面积 , 计算其相对标准偏差 (RSD)。苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱峰面积的 RSD分别是 1.91%, 0.92%和 1.86%, 结果表明 , 仪器精密度良好。 2. 7 稳定性试验取同一供试品溶液 , 分别在 0, 1, 2, 4, 8, 16 h进样 , 记录各色谱峰的峰面积 , 测定其中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量 , 计算 RSD。结果分别是 0.84%, 1.36%和 1.76%, 表明低温保存下的复方苦参注射液稳定性较好 , 常温下 1 d内也能保持较好的稳定性。 2. 8 重复性试验取同一供试品溶液 5份 , 按上述方法制备样品并进行检测 , 苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的质量浓度分别为 1.580, 0.345, 7.435 m g m L -1 , RSD 分别为 1.82%, 1.38%和 1.65%, 表明供试品溶液的制备方法重复性良好。 2. 9 加样回收率试验精密吸取已知含量的样品溶液 6份 , 精密加入适量的苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱 , 按同样的方法制备供试品溶液 , 测定苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量 , 计算回收率和 RSD, 结果见表 1。 2. 10 样品测定分别精密吸取对照品溶液 5 μL 与供试品溶液 5 ～ 10 μL, 注入高效液相色谱仪 , 测定 , 计算样品中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量 , 结果见表 2。 3 讨论
槐定碱
0.638 0.589 0.346 0.502 0.527 0.276 0.279 0.331 0.953 0.965
氧化苦参碱
12. 372 11. 051
7. 608 8. 495 9. 289 8. 329 15. 948 13. 553 12. 056 12. 056
进样 , 样品溶液在上述色谱条件下杂质干扰较强 , 3 种生物碱无法得到良好分离。故采用浓氨水将注射剂调为碱性 , 使生物碱游离出来后 , 用氯仿少量多次萃取 , 挥干氯仿 , 无水乙醇稀释进样 , 苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱均能得到良好分离。 [参考文献 ]
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HPLC 测定复方苦参注射液中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量
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D eterm ination ofmatrine, sophor id ine and oxymatrine in compound K ushen injection by HPLC
2 方法与结果 2. 1 色谱条件 A lltim a Am ino色谱柱 (4.6 mm × 250 mm , 5 μm );流动相乙腈 -3%磷酸溶液 -无水乙醇 (80∶10∶10);流速 1.0 m L m in- 1 ;检测波长 220 nm ;柱温 30 ℃。 2. 2 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱对照品适量 , 加乙腈 -无水乙醇 (80∶20)溶解 , 制成每 1 mL 含苦参碱 0.050 m g, 槐定碱 0.049 m g, 氧化苦参碱 0.372 m g的混合溶液 , 即得。 2. 3 供试品溶液的制备精密量取复方苦参注射液 0.5 mL, 置分液漏斗中 , 加入浓氨试液约 1 m L, 用 42 m L 氯仿分 3次萃取 (15, 15, 12 m L), 收集氯仿液 , 蒸干 , 残渣加无水乙醇适量使溶解 , 并转移至 10 mL 量瓶中 , 加无水乙醇稀释至刻度 , 摇匀 , 用微孔滤膜 (0.45 μm )滤过 , 取续滤液 , 即得 , 见图 1。
[ 1] 中华人民共和国卫生部药品标准 [ S] . 中药成方制剂. 第 14 册, 1995, W S3-B-2752-97.