酶标仪常见技术和应用
酶标仪的应用原理及操作
酶标仪的应用原理及操作1. 引言酶标仪（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，广泛应用于医学、生物学、农学等领域。
它通过检测酶与抗原或抗体的特异性结合来测定样品中的物质含量。
2. 原理酶标仪的应用原理基于酶与抗体或抗原的特异性结合，并利用酶的催化作用来进行定量检测。
2.1 抗原抗体反应酶标仪通常用于检测抗原或抗体的存在和浓度。
首先，将待测样品中的抗原或抗体与特异性的抗体或抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
2.2 酶标记为了使抗原-抗体复合物可观察和测量，通常需要将酶标记与抗原-抗体复合物结合。
常用的酶标记物包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
2.3 底物催化酶标记与抗原-抗体复合物结合后，加入相应的底物进一步进行反应。
底物的选择取决于所使用的酶标记物。
酶通过催化底物的反应，产生可观察的信号，如颜色变化。
3. 操作步骤以下是酶标仪的一般操作步骤，具体步骤可能因不同设备而有所差异。
3.1 样品制备•收集样品，并按照实验要求进行处理，如稀释、预处理等。
3.2 板面涂布•将特异性抗体或抗原溶液均匀涂布在试验板上，然后将其孵育一段时间，使其与孔中的抗原或抗体结合。
3.3 样品加入•加入待测样品到试验板的相应孔中，并进行充分的混合。
3.4 孵育•将试验板放置于恒温箱或酶标仪内进行孵育，使样品中的抗原与抗体结合。
3.5 洗涤•倾倒试验板中的液体，然后用洗涤缓冲液或PBS洗涤试验板，去除未结合的物质。
3.6 酶标记物加入•加入含有酶标记物的溶液到试验板的相应孔中，并进行充分的混合。
3.7 孵育•将试验板再次孵育，使酶标记物与抗原-抗体复合物结合。
3.8 洗涤•重复步骤3.5，去除未结合的酶标记物。
3.9 底物加入•加入含有底物的溶液到试验板的相应孔中，并进行充分的混合。
3.10 信号测定•使用酶标仪测量反应后的信号，如光密度、发光强度等。
酶标仪常见技术和应用
细胞活力检测
细胞活性检测 – MTT、XTT法
• MTT-黄色染料 ↓被活体细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原 • 形成蓝紫色结晶-甲瓒 ↓DMSO溶解 检测OD570(OD630作为背景参照） 细胞质 线粒体 细胞核 cell
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光吸收的基本检测类型
• 特定波长检测: DNA、RNA及蛋白质浓度
• 比色测定: 检测反应的产物产生的颜色变化（450nm） 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 浊度检测: 检测样品中微颗粒产生的光的散射 细菌的生长（600nm）
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21/02/2014
Coቤተ መጻሕፍቲ ባይዱparison of Microplate Readers with Absorbance Detection
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《酶标仪系列》课件
技术创新推动行业发展
未来酶标仪的技术创新将进一步推动行业发展，提高检测效率和精 度。
国际化竞争加剧
随着酶标仪市场的不断扩大，国际化竞争将进一步加剧，国内品牌 需加强技术创新和品牌建设。
05
总结与展望
对酶标仪的总结
技术发展
酶标仪在技术上经历了多次突破 ，从最早的机械式到现在的数字 化和智能化，其检测精度和稳定
酶标仪的发展趋势
技术创新
随着科技的不断进步，酶 标仪在技术上不断创新， 如提高检测精度、降低检 测时间等。
智能化发展
酶标仪正朝着智能化方向 发展，如实现自动进样、 自动检测、自动数据分析 等功能。
定制化服务
针对不同行业和客户需求 ，酶标仪厂商提供定制化 服务和解决方案。
酶标仪的前景展望
市场需求持续增长
究提供有力支持。
医学诊断
用于检测各种疾病标志物，如 肿瘤标志物、心血管疾病标志 物等，为临床诊断提供依据。
食品安全检测
用于检测食品中的有害物质、 农药残留等，保障食品安全。
环境监测
用于检测水体、土壤等环境中 的有害物质，为环境保护提供
数据支持。
02
酶标仪系列介绍
酶标仪系列的产品种类
01
02
03
04
。
清洗反应孔
每次使用后，及时清洗 反应孔，避免残留物影
响检测结果。
检查仪器性能
定期检查仪器各项功能 是否正常，如有异常及
时处理。
存储环境
保持仪器放置在干燥、 无尘的环境中，避免阳
光直射。
酶标仪的常见问题及解决方案
01
02
酶标仪的原理及应用
酶标仪的原理及应用酶标仪（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种基于酶反应原理的生化分析方法。
它广泛应用于医学诊断、生物学研究、环境监测以及食品安全等领域。
下面将从酶标仪的原理、操作步骤以及应用等方面进行详细介绍。
酶标仪的原理酶标仪原理主要基于免疫学的“抗原-抗体”反应。
在酶标仪实验中，首先将待测物（如细菌、病毒、蛋白等）与特异性抗体结合，在固定的试剂盘或板上形成抗原抗体复合物。
然后，通过添加与抗体结合的酶标记物，例如酶标记的辣根过氧化酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP），使抗原抗体复合物与酶标记物进行特异性反应。
最后，通过加入底物使酶标记物发生催化反应，并转化为显色产物。
测量产物的光密度或发光强度，可以获得待测物的定量信息。
酶标仪的操作步骤酶标仪的操作步骤主要包括涂覆试样、孵育、洗涤、添加酶标物、孵育、洗涤和测定结果等几个主要过程。
1. 涂覆试样：将待测物（如蛋白、抗原、抗体等）溶液涂覆到微孔板上，通过静置或离心等方式将试样固定在孔底或表面。
2. 孵育：将标样或样品加入微孔板中，与已固定的待测物结合形成复合物，保温孵育一段时间，使反应充分发生。
3. 洗涤：通过加入缓冲液，用洗涤机或离心等方式清洗微孔板，去除未结合的物质，如杂质、底物残留等。
4. 添加酶标物：将酶标记的抗体或物质加入微孔板孵育，将其与已结合的待测物发生特异性反应。
5. 孵育：保温孵育一段时间，使反应充分发展。
6. 洗涤：通过加入缓冲液，用洗涤机或离心等方式清洗微孔板，去除未结合的物质。
7. 测定结果：加入合适的底物，使酶标记物发生催化反应，形成显色产物。
通过酶标仪测量光密度或发光强度，根据标准曲线或对照组数据计算出待测物的浓度。
酶标仪的应用酶标仪在医学诊断、生物学研究等领域具有广泛应用。
1. 医学诊断：酶标仪可用于检测特定抗体或抗原，例如检测病毒感染、肿瘤标志物、自身免疫疾病等。
通过测定样品中特定物质的浓度，可以帮助医生进行病情判断、疾病诊断和疗效评估。
酶标仪工作原理及使用方法
酶标仪工作原理及使用方法酶标仪简介：酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。
可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。
测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
酶标仪原理：酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单.微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.光是电磁波，波长100nm~400nm称为紫外光，400nm~780nm之间的光可被人眼观察到，大于780nm称为红外光。
人们之所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。
绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光，但对绿色不吸收，反射出来，所以植物呈现为绿色。
酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。
随着检测方式的发展，拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪，可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。
酶标仪 化学发光 荧光
酶标仪化学发光荧光
酶标仪是一种用于检测生物分子的分析仪器，主要应用于生物化学、免疫学、分子生物学等领域。
它可以通过检测光吸收、荧光或化学发光等信号，对样本中的生物分子进行定量或定性分析。
在酶标仪的检测方法中，光吸收、荧光和化学发光是三种常见的检测模式。
光吸收检测是基于物质对光的吸收特性来进行分析的。
在酶标仪中，通过使用特定波长的光照射样本，并检测透过或反射的光强度，可以测量样本中生物分子的浓度或活性。
荧光检测则是利用物质在受到激发光照射后发出的荧光信号来进行分析。
荧光检测具有较高的灵敏度和选择性，常用于检测标记有荧光染料的生物分子。
化学发光检测是基于某些化学反应产生的光发射现象来进行分析的。
在酶标仪中，通过引发化学反应并检测产生的光信号，可以测量样本中特定生物分子的浓度或活性。
这些检测模式各有特点和应用范围，根据不同的实验需求和生物分子的特性，可以选择合适的检测模式进行分析。
酶标仪的应用非常广泛，包括蛋白质定量、DNA/RNA 定量、酶活性检测、药物筛选、免疫学分析等。
它为生物研究、药物开发和临床诊断提供了重要的分析工具。
总的来说，酶标仪结合不同的检测模式，为生物分子的检测和分析提供了高灵敏度、高准确性和高效率的方法，对于生物科学和医学领域的研究和应用具有重要意义。
酶标仪的原理及应用实验
酶标仪的原理及应用实验酶标仪的原理酶标仪是一种用于检测酶活性的实验仪器，原理是通过测量底物的反应产物与酶反应所生成的物质的量的比例，从而确定酶活性的强度。
它主要由光源、检测系统、温控系统和数据分析软件等组成。
光源酶标仪的光源通常是白炽灯或氙灯，其特点是亮度高、颜色均匀，并且能够提供稳定的光源。
光源的光波长范围决定了酶标仪的检测范围。
检测系统酶标仪的检测系统通常由光电检测器和滤光片组成。
光电检测器可以将光信号转换为电信号，常用的有光电二极管和光电倍增管。
滤光片用于选择特定波长的光信号，以消除其他干扰信号。
温控系统酶标仪的温控系统用于维持反应体系的温度稳定。
通常采用Peltier元件来控制温度，可以在较短的时间内快速升温或降温。
温控系统的稳定性对于酶标仪的实验结果至关重要。
数据分析软件酶标仪通常配备了专业的数据分析软件，可以对实验结果进行处理和分析。
这些软件可以进行数据的图形化显示、数据的导出和保存等功能，方便用户对实验结果进行进一步的研究和分析。
酶标仪的应用实验酶标仪在生物医学领域有着广泛的应用，可以用于检测酶活性、蛋白质含量、抗体浓度等各种实验。
酶活性检测酶标仪可以通过测量酶催化反应产物的浓度来确定酶活性的强度。
常见的酶活性检测实验包括酶动力学研究、酶抑制剂筛选等。
蛋白质含量检测酶标仪可以通过测量蛋白质与染色剂的反应产物的光吸收值来确定蛋白质的含量。
这种方法被广泛应用于蛋白质定量、蛋白质纯化等实验。
抗体浓度检测酶标仪可以通过测量抗体与抗原结合产生的信号强度来确定抗体的浓度。
这种方法被广泛应用于免疫学研究、疫苗开发等实验。
其他应用除了酶活性、蛋白质含量和抗体浓度检测外，酶标仪还可以用于DNA浓度检测、细胞增殖实验、荧光标记实验等多种实验。
酶标仪实验的步骤1.准备实验材料，包括底物、酶、抗体等。
2.设置酶标仪的参数，如波长、温度等。
3.加入适量的底物和酶或抗体到反应体系中。
4.将反应体系放入酶标仪中，启动实验。
酶标仪使用详解范文
酶标仪使用详解范文酶标仪是一种常见的实验仪器，用于检测生物样本中特定分子的浓度。
它广泛应用于生物医学研究、药物研发和临床诊断等领域。
本文将详细介绍酶标仪的使用方法及注意事项。
一、酶标仪的基本原理酶标仪是通过光学测量来确定样本中特定分子浓度的仪器。
其工作原理是利用底物与酶的反应产生的物质颜色变化来测定样品中酶活性或者其中一种特定分子的浓度。
酶标仪通过测量底物产生的吸光度或荧光来确定管内样本中特定分子的浓度。
二、酶标仪的使用步骤1.准备工作：首先打开酶标仪电源，等待其预热。
然后根据需要选择合适的检测模式，如吸光度或荧光模式。
2.设定参数：按照实验要求，设定酶标仪的参数，包括波长、时间和增益等，这些参数取决于所使用的底物和样品类型。
通常需要根据实验所需设定不同的参数。
3.校准仪器：在进行测量之前，需要对酶标仪进行校准，以确保测量结果的准确性。
校准一般分为零点校准和标准曲线校准两个步骤。
零点校准是将酶标仪的读数归零，标准曲线校准则是使用已知浓度的标准样品制作标准曲线，以便后续测量时根据标准曲线确定待测样品中的物质浓度。
4.加样测量：用自动吸管器或移液器将样品加入酶标仪中，确保每个孔都有足够的样品进行测量。
加样完成后，将酶标板或孔板插入酶标仪的样品槽内，等待测量结果。
5.数据处理：酶标仪会自动测量各个孔的吸光度或荧光值，并将结果显示在仪器屏幕上。
根据实验要求，将数据导出并进行数据处理，如制作标准曲线、计算浓度等。
三、酶标仪使用注意事项1.酶标仪是一种精密仪器，使用前需仔细阅读使用说明书，并按照操作步骤进行操作。
2.操作时要注意保持操作平台的清洁和无尘，避免杂质对测量结果的影响。
3.底物的选取应根据实验目的和样品特性进行选择，不同底物对于不同物质浓度的测定有其特定的敏感性和检测范围。
4.样品的加入量需要根据实验要求准确控制，加样时尽量避免泡沫的产生。
5.酶标仪在校准时需要使用标准样品，为确保准确性应使用不同浓度的标准样品制作标准曲线。
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细胞活力检测
细胞活性检测 – MTT、XTT法
• MTT-黄色染料 ↓被活体细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原 • 形成蓝紫色结晶-甲瓒 ↓DMSO溶解 检测OD570(OD630作为背景参照） 细胞质 线粒体 细胞核 cell
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最常见应用类型ELISA（酶联免疫吸附试验）实验
反应原理 阳性样品
阴性样品
加入底物
显色反应
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DNA、RNA或蛋白浓度检测
DNA双螺旋中碱基 蛋白质酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸成分含量
A = a*c*l a = 物质消光系数 c = 浓度 l= 光径（0.5mm或者1mm）
决定上 样体积
SMP软件自动给出 DNA浓度：OD260=1表示
50 µg/ml双链DNA(dsDNA)
DNA纯度：纯度计算(OD260/OD280)
21/02/2014
目前中国市场主要几个酶标仪厂家
产品线丰富（高中低，Multi-mode 11、Single-mode 9） 新产品推出速度快（Paradigm、I3+ MinMax 、I3+ Scanlater） 品牌知名度高、市场占有率大 MD主要竞争对手（Multi-mode 8、Single-mode 10） 新产品推出紧随MD（如Cytation3对应I3、Neo对应 Paradigm ） 产地瑞士、在欧洲及北美有较高知名度 （Multi-mode 3、Single-mode 3） 最近无新产品推出，进入中国较早，在东北地区用户较多 主要产品非酶标仪（Multi-mode 3、Single-mode 10） 最近无心产品推出 具有专利Alpha技术，但没有型号支持HTRF技术（认证） 主要产品非酶标仪（Multi-mode 4、Single-mode 2） 多功能酶标仪（覆盖全波长）仅一款VF，只有四功能 无最新产品问世
物质最佳吸收波长
不同物质有不同吸收峰，有些实验检测物质需要更宽的波长 范围
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全波长带来优势——ELISA不同颜色需不同波长 酶决定底物类型
碱性磷酸酶（AP） 常用底物：PNPP 405nm 特点：本底低，灵敏度高，较昂贵 辣根过氧化物酶(HRP) 底物：ABTS 410/650nm OPD 492nm TMB 450nm 特点：常用，灵敏度不如AP系统
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酶标仪能做什么？
凡是与光信号相关的实验、需要高通量、需要节省试 剂的实验 且可以转移到微孔板中液体物质 都可以考虑使用微孔板检测仪（酶标仪）进行信号检 测！
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Agenda
• 酶标仪工作原理及应用范围 • 光吸收检测技术原理及常见应用 • 荧光检测技术原理、分类及常见应用 • 化学分光技术检测原理及常见应用 • Alpha技术特点
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DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8
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酶活力分析
酶活性分析：就是指在一定条件下，通过连续 测定酶的吸光值，从而达到动态监测酶活性的 一个过程。
• 乳酸脱氢酶（ LDH ）活 性检测 • β-半乳糖苷酶检测 • 血清心肌酶活性检测 • 脱氢酶活性检测
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酶标仪常见技术和应用
尹迪
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酶标仪与分光光度计的不同？
1:通量上 支持6、12、24、48、96、384孔板，高端酶标仪 可达到3456孔板
2:功能上 单功能酶标仪（吸收光、荧光、化学发光） 多功能酶标仪
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酶标仪工作原理
• 工作原理为一台升级版的分光光度计
1.紫外可见分光光度计 2.可见分光光度计 3.紫外分光光度计 4.荧光分光光度计 5.近红外分光光度计 6.红外分光光度计 7.双光束紫外可见分光光度计 不同物质对 特点波长光 吸收值
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光吸收的基本检测类型
•应的产物产生的颜色变化（450nm） 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 浊度检测: 检测样品中微颗粒产生的光的散射 细菌的生长（600nm）
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光波长范围
多数低端单功能酶标仪光谱范围（400-750nm） 中、高端单功能或多功能光谱范围（200-1000nm）
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酶标仪——多功能微孔板读板机（仪）
学名：微孔读板机（仪） Microplate Reader 俗称：国内俗称酶标仪，因早期主要用于酶联免疫检 测（ELISA），故久之习称为酶标仪
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光吸收检测常见应用
利用光吸收原理最常见的几种生物学实验 DNA/RNA含量检测 常用于快速检测质粒DNA浓度 ELISA（酶联免疫吸附试验）检测 方法多（间接法、竞争法、双抗夹心法等）、应用广 细胞活力检测 MTT、XTT等 酶活动力学检测