多功能酶标仪SpectraMaxi3的操作规程

多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程Standard Operation of SpectraMax i3

部门Department 签名/日期Signature/Date

起草人：Prepared by 樊小川，Xiaochuan Fan QC

审核人：Reviewed by 黄思佳，Sijia Huang QC

审核人：Reviewed by 褚夫兰，Fulan Chu QA

批准人：Approved by 张伯彦，Boyan Zhang 质量负责人

1 目的

建立多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪检测时的操作。

2 适用范围

本规程适用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3的操作

3 术语或定义

多功能酶标仪：指功能较强、精度较高的单体台式酶标仪，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FL)、时间分辨荧光（TRF)、化学发光（Lum)等。

4 责任

4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪的日常及定期维护，出现故障时负责联系厂家维修，保

证运行正常。

4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用

记录，且使用后及时清理台面，保持仪器洁净。

5 EHS要求

N/A

6 程序

6.1 仪器安装

仪器与电脑连接完毕并连接电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源的情况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。

6.2 SoftMax Pro软件操作基本步骤

6.2.1 打开软件

点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，出现"Plate Setup Helper"对话框。若无则点击图标。

6.2.2 连接仪器

点击‘Choose a diffecient instrument’，打开‘Instrument Connection’对话框，在“Availible Instruments”菜单中选择仪器连接线与电脑所接的串口号(COM)。

选择所购买的酶标仪型号SpectraMax i3或添加模块卡盒型号。最后点击“OK”键连接。

6.2.3 仪器检测参数设定

点击图标后出现“Settings”对话框，对话框最上方出现Read Mode（读板模式）和Read Type（读板类型）两个选项，读板模式有ABS(光吸收)、FL(荧光强度)、LUM(化学发光)和TRF(时间分辨荧光)，读板类型有终点检测（Endpoint）、动力学（Kinetic）、单孔扫描（Well Scan）和光谱扫描（Spectrum）四种。使用者根据实验

需要选择合适的读板模式和读板类型。

对话框下方左侧列表有如下选项，从上往下依次用鼠标点中选项，并在右栏中选择对应的参数设定。

1）Wavelengths（波长）

可以选择检测几种波长，光吸收模式最多为6 种，其他模式均为4 种。

a) 对于光吸收模式，可以在Lm1 后面的框中填入检测所用波长。

b) 对于荧光强度，时间分辨荧光和荧光偏振模式，可以在2个框中分别填入激发波

长和发射波长。Cutoff 一般选为自动(Auto)。

c) 对于化学发光模式，一般使用‘All’。当同时检测不止一色化学发光的时候可

填入相应的检测波长。

2）Plate Type（板型）

对于不同实验可以选择6-384 孔板及其具体的板型。

3）Read Area （读板区域）

可用鼠标先选中起始孔按住不放，进行拖曳直到选中微孔板上所有需要检测的孔。

4）PathCheck（光径校正）

仅用于光吸收模式，即将微孔板检测得到的原始光吸收值通过参比校正到1cm 光径长度时的光吸收值。可选择“Water Constant”(以水做参比)和“Cuvette Refence”

(在比色皿中加入相应溶液预读一次作为参比)。一般情况下可以不用校正。

5）shake

选中Before First Read 后可以选择读板之前震板，可选择0-999 秒。一般不选择。

6）Speed Read

可加速读数速度，为准确所读数值，默认不加速，一般不选择。

7）More Setting

Read order 可按实验要求选择按列（Column ）、排（Row ）或者孔（Well）扫描读数。

全部设定完后按对话框右下角的“OK”确认，回到"Plate Setup Helper"对话框。

6.2.4 检测样品分组设定

按键后出现‘Template Edite’对话框，先用鼠标拖曳选中要进行编辑的孔，被选中的空会变黑，然后点击Groups 栏中的下拉菜单选择所要进行的分组。具体设定

步骤如下：

1) 设定本底参照(BLANK)

进入上述界面后，点击Assignment Option栏中的下拉菜单选中“Plate blank”，则其他的数据结果均显示为扣除本底平均值的结果。

2) 设定标准样品(Standards)

当有一系列已知浓度梯度的样品做为标准样品时，点击Groups 栏中的“Standards”，再点击“assign”进行标记，继而点击“series”进行设定，新出现的对话框中“Start from”

中“Top to Bottom”、“Bottom to Top”、“Left to Right”或“Right to Left”表示该组内样品排列次序，根据实验进行选择；右上方的“pattern of Replicates”会自动显示复孔数目；下方的“Starting value”表示起始样品的浓度，可以在框内填入相应数值，“Step by”表示以什么方式设置浓度梯度，前面下拉框可以选择“+ 、-、*、/”，后面框内可以填入相应的值，比如起始浓度是2，增加2，则选择“+”，输入“2”。设定完毕，点对话框右下角“OK”确认。在上一界面中点右边的“Edit”，新对话框中“Sample Descriptor”下的“Column name”根据实验情况命名，默认是“Concentration”，“Units”

后面可以填入适当的浓度单位，设置好后退出“Template Edite”。

3）设定未知样品(Unknowns)

对未知样品进行分组设定时，进入“Template Edite”界面，选中微孔，点击“Groups”

栏“Unknowns”下的“Unknowns”，若未知样品已知浓度，选“Unk-dilution”，具体设定同标准样品。

4) 有多个标准样品或样品时点Groups 栏中的“add”，可以添加新组，其它设置同上。

6.2.5 数据分析设定

1) 在“standardCurve”进行数据分析设定，点击图标，进入‘Plot

Edite-standardcurve’进行图表设置，在该对话框中，“Grafe Title”中填入该图的名称，即以后在数据计算中要引用的名字。“Plot Name”中填入该条曲线的名称，“X-Axis”和“Y-Axis”可以通过下拉栏选择该曲线横坐标和纵坐标所引用的数据，如选择“Concentration”和“MeanValue”。在“Plot Attributes”中可选择图中每个点的形状和颜色。一张图中可以有多条曲线，按“add”可在该图中增加曲线。

2)“Curve Fit”右边的下拉菜单可选择曲线拟合的方式，如四参数方程“4-Parameter”，根据实验要求进行选择。