有关柱层析的一些心得
吸附柱层析实验结果讨论
吸附柱层析实验结果讨论吸附柱层析实验是一种常用的分离和纯化技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本文将讨论吸附柱层析实验的结果，重点探讨实验过程中的观察现象、数据分析以及可能的原因。
在吸附柱层析实验中，我们通常将待分离的混合物溶液通过填充了吸附剂的柱子进行处理，通过不同物质在吸附剂上的亲和力差异，实现目标物质的分离和纯化。
在实验中，我们可以通过观察溶液的颜色变化、流速变化以及收集到的洗脱液等数据来推测实验的结果。
我们需要观察溶液在柱子中的流速变化。
在吸附柱层析实验中，流速的变化可以反映出吸附剂对不同物质的亲和力。
如果某一物质与吸附剂的亲和力较强，那么它将被慢慢吸附在柱子上，从而导致流速的减慢。
相反，如果某一物质与吸附剂的亲和力较弱，那么它将很快通过柱子，流速变化不明显。
通过观察流速的变化，我们可以初步判断吸附柱层析实验的效果。
我们需要观察洗脱液中目标物质的含量。
洗脱液是通过洗脱剂将吸附在柱子上的目标物质进行洗脱得到的，其含量可以反映出目标物质在吸附柱上的含量。
通过定量分析洗脱液中目标物质的含量，我们可以判断吸附柱层析实验的纯化效果。
如果洗脱液中目标物质的含量较高，说明实验的纯化效果较好；反之，如果洗脱液中目标物质的含量较低，说明实验的纯化效果较差。
我们需要分析实验结果可能的原因。
实验结果的不理想可能是由多种因素造成的。
例如，吸附剂的选择、洗脱剂的浓度和pH值、流速的控制等都会对实验结果产生影响。
通过分析这些因素，我们可以找到实验结果不理想的原因，并采取相应的改进措施。
总的来说，吸附柱层析实验的结果可以通过观察流速变化和洗脱液中目标物质的含量来判断实验的效果。
实验结果的不理想可能是由多种原因造成的，需要进行深入分析，并采取相应的改进措施。
通过不断改进实验条件和操作技术，我们可以提高吸附柱层析实验的效果，实现更好的分离和纯化效果。
在今后的研究中，我们可以进一步探索吸附柱层析实验的机理，优化实验条件，提高实验效果。
层析柱的一些总结
多数微生物碱性蛋白酶不耐热，碱土金属，特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一，在丝绸、制革工业中也有广泛用途热稳定性将酶液分别置于不同的温度条件下（30℃，40℃，50℃，60℃，70℃）保温10min 后，立即在0℃冰浴中冷却，然后在40℃下测碱性蛋白酶活力，以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。
测量三个重复求平均值，将最高的酶活力定义为100%，分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与最高酶活性的比值。
以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于7,呢就带负电荷,用阴离子交换的柱子,如果是大于7,那选择阳离子交换的柱子,如果等电点是7,那上样的缓冲液pH大于它的等电点用阴离子,小于7的用阳离子,如此类推就可以缓冲液的PH＝pI值＋1，上阴离子柱，＝pI值－1，上阳离子柱，一般缓冲液ph范围在6.5～8.5之间，与PI值相差1个PH是比较理想的。
如果不清楚PI值，可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里，然后分别试阳离子和阴离子填料（50ul左右得体积就够了），看那个PH下挂得好。
强离子交换剂: 在宽pH范围内载量稳定，所以他的优点是不同pH下载量恒定，可控性好，平衡过程快速、简单。
弱离子交换介质的缺点：适用的pH范围比较小，随着pH不同载量发生变化。
但是大部分蛋白等电点在5.5 ~ 7.5 。
因此强/弱离子交换介质都可以使用弱离子交换介质（DEAE、ANX、CM)优点在于：和强离子交换介质的选择性不同，因此我们一般先使用强离子交换，如果优化条件还是达不到理想的分离效果，可以尝试弱离子交换，用选择性不同的介质尝试一下。
因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同，可以说是对不同蛋白的结合力有差异。
S技术规格离子交换剂类型Q Sepharose FF 季氨基，强阴离子DEAE Sepharose FF 二乙基氨基乙基，弱阴离子ANX Sepharose 4FF 二乙基氨基丙基，弱阴离子SP Sepharose FF 磺丙基，强阳离子CM Sepharose FF 羟甲基，弱阳离子离子容量Q Sepharose FF 0.18-0.25mmol（Cl-）/mlDEAE Sepharose FF 0.11-0.16mmol（Cl-）/mlANX Sepharose 4 FF 0.13-0.18mmol（Cl-）/mlSP Sepharose FF 0.18-0.25mmol（H+）/mlCM Sepharose FF 0.09-0.13mmol（H+）/ml动态载量Q Sepharose FF 120mg HSA/ml 填料DEAE Sepharose FF 110mg HSA/ml 填料ANX Sepharose 4 FF 5mg 甲状腺球蛋白/ml 填料SP Sepharose FF 70mg RNAase/ml 填料CM Sepharose FF 50mg RNAase/ml 填料压力/流速Q Sepharose FF 400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmDEAE Sepharose FF 300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmANX Sepharose 4 FF 至少200cm/h，100kpa，XK50/60层析柱，柱床高25cmSP Sepharose FF 400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmCM Sepharose FF 300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cm平均颗粒大小 90um（45-165um）基质Sepharose FF 高度交联琼脂糖，6%Sepharose 4 FF 高度交联琼脂糖，4%PH稳定性Q Sepharose FF 1-14（短期），2-12（长期）DEAE Sepharose FF 1-14（短期），2-13（长期）ANX Sepharose 4 FF 2-14（短期），3-13（长期）SP Sepharose FF 3-14（短期），4-13（长期）CM Sepharose FF 2-14（短期），4-13（长期）化学稳定性在所有常用的水溶液缓冲液中稳定：8M尿素、6M盐酸胍、70%乙醇、1M NaOH和1M醋酸20%乙醇（Q , DEAE,ANX,CM ）,含0.2M醋酸钠的20%乙醇（SP）保存保存温度4℃-30℃l 1M NaOH和醋酸仅在清洗时使用Phenyl-Sepharose HP产品名称：苯基-琼脂糖凝胶6FF性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径：45-165µm工作PH值：3-13应用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称：苯基-琼脂糖凝胶H.P.性状：白色微球凝胶类型：疏水层析填料粒径：24-44µm工作PH值：3-13应用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称：苯基-琼脂糖凝胶CL-4B性状：白色微球凝胶类型：疏水层析填料粒径：45-165µm工作PH值：3-13应用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。
柱层析的一些心得
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分离的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
１．吸附剂常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等：吸附剂一般要经过纯化和活性处理，颗粒大小应当均匀。
对吸附剂来说粒子小、表面积大，吸附能力就高，但是颗粒小时，溶剂的流速就太慢，因此应根据实际分离需要而定。
供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性和碱性3种。
酸性氧化铝是用1％盐酸浸泡后，用蒸馏水洗至氧化铝的悬浮液pH为4，用于分离酸性物质；中性氧化铝的pH约为7．5，用于分离中性物质；碱性氧化铝的pH约为10，用于胺或其它碱性化合物的分离。
因硅胶略带酸性，只能用于对酸不敏感的化合物的分离。
常用300-400目的柱硅胶或H 硅胶。
若化合物的R f值相差较大，则可考虑使用２00-３00目硅胶以加快层析速度。
另：因吸附剂的比表面较大，天气潮湿时或长期放置中吸附的水分会对分离效果产生极大的影响（相当于大大增加了固定相的极性导致样品分不开），因此应将吸附剂放入９０～１００度烘箱内烘２小时后，取出在干燥器中冷却后再使用。
使用的硅胶，不用时一定要密封，防止吸潮。
TLC所用的硅胶板一定要保存在干燥器里面，或使用前在红外烘箱里干燥一段时间。
2．溶质的结构与吸附能力的关系化合物的吸附性与它们的极性成正比，化合物分子中含有极性较大的基团时，吸附性也较强，氧化铝对各种化合物的吸附性按以下次序递减：酸和碱>醇、胺、硫醇>酯、醛、酮>芳香族化合物>卤代物、醚>烯>饱和烃３．柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
层析柱装填要点和要求
层析柱装填要点和要求
1. 嘿，一定要注意啊，装填层析柱的时候，颗粒大小可不能马虎呀！就像建房子，砖的大小得合适吧。
比如说用硅胶装填，颗粒太大或太小，效果能好吗？
2. 别忘了均匀装填呀！你想想，要是填得乱七八糟的，那不就像走在坑坑洼洼的路上，能顺顺畅畅吗？比如说填的时候东一块西一块的，那怎么行！
3. 要把气泡赶跑啊！气泡在里面就像个捣蛋鬼，会坏事的呀！就好比你吃饭的时候有颗沙子，多难受啊。
比如装的时候不小心混进了气泡，得想办法弄出去呀。
4. 压实也很关键呀！松松垮垮的可不行，这就好像搭积木不压实会倒一样。
比如说随便弄弄，那后续分离还能靠谱吗？
5. 速度不能太快也不能太慢啊！快了容易出问题，慢了又耽误时间。
就像开车，太快危险，太慢也急人。
比如填充的时候没把握好速度，那不就糟糕了。
6. 注意柱子的垂直哦！歪歪扭扭的可不像话，就跟站没站相一样。
比如说没放垂直，那后续操作能顺利吗？
7. 清洗干净也超级重要！脏兮兮的怎么用啊，就像你穿脏衣服出门一样。
比如装填前不认真清洗，那不是给自己找麻烦嘛。
8. 还有啊，多检查几遍呀！不检查怎么能放心呢，就像考试不检查会丢分一样。
比如说填完了就不管了，万一有问题呢！总之啊，装填层析柱这些要点和要求一定得认真对待，这样才能得到好的结果呀！。
过柱的实验方法和技巧
过柱的实验方法和技巧常说的过柱子应当叫柱层析分别，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的阅历成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，盼望能有所关心。
一：柱子可以分为：加压，常压，减压1.压力可以增加淋洗剂的流淌速度，削减产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如自然化合物的分别，一个柱子几个月也是有的。
2.减压柱能够削减硅胶的使用量，感觉能够节约一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必需同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
3.加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的供应可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特殊是在简单分解的样品的分别中适用。
压力不行过大，不然溶剂走的太快就会减低分别效果。
个人觉得加压柱在一般的有机化合物的分别中是比较适用的。
二：关于柱子的尺寸应当是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分别的难度。
试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分别的难度可想而知，唯恐要用很低极性的溶剂渐渐冲了。
而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较简单得到完全分别了。
当然采纳粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说或许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分铺张）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，详细的选择要详细分析。
假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm20cm的柱子）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
有关柱层析的一些心得
有关柱层析的一些心得柱层析是一种常见的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
我最近在研究中也运用了柱层析技术，并且收获了一些心得体会。
以下是我对柱层析的一些心得，进行了详细的总结。
首先，柱层析技术在样品分离和纯化方面具有很高的分离效率和选择性。
通过选择合适的固定相材料、流动相和操作条件，可以有效地分离复杂样品中的组分。
特别是使用高效液相色谱仪（HPLC）进行柱层析，不仅分离效果好，而且分析速度快，能够提高实验效率。
其次，柱层析技术在药物分析和毒理学研究中具有重要的应用价值。
通过柱层析技术可以准确测定药物的含量和纯度，为药物制剂的质量控制提供了可靠的方法。
另外，柱层析技术还可以用于检测和分析药物在人体内的代谢产物，了解其代谢途径和体内药代动力学特征。
在毒理学研究中，柱层析技术可以用于分析毒物在体内的分布和代谢情况，为毒物学评价提供可靠的数据支持。
再次，柱层析技术需要在操作中注意一些关键的因素。
首先是选择合适的柱层析柱和固定相材料。
不同的固定相材料对不同组分具有不同的亲疏水性和分离效果，选择适合样品特性的柱层析柱可以提高分离效率和选择性。
其次是合理选择流动相和操作条件。
流动相中添加适量的有机溶剂可以改变溶剂极性，调节柱层析的分离能力。
根据样品的特性选择合适的操作条件，比如流速、温度和检测波长等。
此外，保持仪器设备的良好状态，定期进行维护和校准，以保证柱层析的准确性和可重复性。
最后，柱层析技术需要进行数据处理和结果分析。
柱层析仪器通常配备有数据采集和数据处理软件，可以自动记录和处理实验数据。
在柱层析数据处理过程中，需要对峰形和峰面积进行分析，并对结果进行定量和定性的解释。
此外，还需要进行样品的质量控制和方法验证，以保证分析结果的准确性和可靠性。
在我的研究中，我运用柱层析技术成功实现了对样品中多个组分的分离和分析。
通过合理选择固定相、流动相和操作条件，我能够达到较好的分离效果和选择性，并获得准确的分析结果。
浅谈天然产物分离之柱层析
浅谈天然产物分离之柱层析胡利红彭宣嘉植物有效成分分离主要手段是柱色谱，其中包括：吸附性柱色谱；分配性柱色谱；离子交换柱色谱；凝胶过滤柱色谱；聚酰胺柱色谱以及大孔吸附树脂。
一、吸附性柱色谱我们常用的以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱，即是吸附性柱色谱。
本文重点介绍这种色谱方法。
一般而言，氧化铝用于分离脂溶性成分，在天然产物中包括生物碱，甾体和挥发油等。
而硅胶既可分离脂溶性成分，也可分离水溶性成分，根据需要可选用不同类型的硅胶，即正相硅胶或反相硅胶。
1、硅胶可以分为：正相色谱硅胶和键合相硅胶正相色谱硅胶是我们在实验室经常接触的，它的使用范围非常广泛，一般极性和非极性的化合物都可以用于分离。
硅胶的吸附能力取决于其结构中硅醇基的数目及含水量。
一般硅胶中的含水量若超出12%，则其吸附力极若，只可作为分配色谱的载体。
色谱硅胶应该是中性无色颗粒，由于在制备过程中接触强酸，常带有酸性，可用水洗至中性或用10%NaOH将其调至碱性，再在1100C下活化24小时用于来分离在酸性条件不稳定的化合物。
有时也可向其中掺入某种试剂，改良吸附性能，提高分离效率。
通常用硝酸银处理过的硅胶对不饱和烃类有很好的分离效果。
在键合相硅胶中，以C-18反相硅胶应用最为广泛，实验室中基本用的就是这种类型的反相材料，一般用于分离极性较大的化合物，可减少分离这类化合物时用正相硅胶吸附太大的缺点。
在利用键合相硅胶进行反相色谱时，常用甲醇-水，乙醇-水或乙腈-水为洗脱剂。
2、柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
柱层析使用技巧汇总
柱层析使用技巧汇总柱层析就是通常所说的过柱子，又叫柱色谱，属于色谱法中使用最广泛的一种方法。
对于含有多种有机物的混合样品，用重结晶无法提纯时，柱层析法可以说是有机实验中最有效的分离手段。
实验室中常用的是以硅胶和氧化铝做固定相的吸附柱。
硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
1、硅胶的使用初做柱层析很容易把柱子装得长了或短了，有时还会有大量的硅胶剩余，浪费硅胶，这主要是对硅胶等固定相的使用的量没有掌握。
柱层析用的硅胶一般是100-200目，100毫升硅胶的质量在47克左右，如果装一个直径是2.8 厘米的柱子，可以装18厘米高。
为了避免浪费硅胶和溶剂，最初学习装柱时最好对实验室中各种不同规格的柱子摸摸底。
方法很简单：用量筒量出100毫升干硅胶，直接倒入各种规格的柱子中，敲实，用刻度尺量出硅胶在柱子中的高度，这样就可以做到心中有数了。
一般在装柱的时候可以根据实验所需柱子的高度来调整硅胶的使用量，这样就可以大大地节省硅胶的使用，避免造成没有必要的浪费。
称量硅胶时一般称30~70倍于上样量，如果极难分，也可以用100倍量以上的硅胶。
2、洗脱剂的使用洗脱剂的极性可用薄层层析来确定，一般以待分离样品Rf 值为0.2-0.3为宜。
选择的洗脱剂应该使两相邻物质Rf 值之差最大化。
不要认为在板上爬得高分离的效果就比较好，如果Rf 在0.6，即使相差0.2 也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的过程，可以通过公式的比较：0.6/0.8 一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
有时虽然在薄层板上看到分离的效果很好，但过柱层析时还是很难分开。
这主要的原因就是薄层层析用硅胶比柱层析用硅胶要细得多，所以分离效果好。
解决的办法就是降低洗脱剂的极性，一般柱层析用洗脱剂比薄层层析用的展开剂极性要再降低一倍可以达到比较好的分离效果。
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常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分离的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
１．吸附剂常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等：吸附剂一般要经过纯化和活性处理，颗粒大小应当均匀。
对吸附剂来说粒子小、表面积大，吸附能力就高，但是颗粒小时，溶剂的流速就太慢，因此应根据实际分离需要而定。
供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性和碱性3种。
酸性氧化铝是用1％盐酸浸泡后，用蒸馏水洗至氧化铝的悬浮液pH为4，用于分离酸性物质；中性氧化铝的pH约为7．5，用于分离中性物质；碱性氧化铝的pH约为10，用于胺或其它碱性化合物的分离。
因硅胶略带酸性，只能用于对酸不敏感的化合物的分离。
常用300-400目的柱硅胶或H 硅胶。
若化合物的R f值相差较大，则可考虑使用２00-３00目硅胶以加快层析速度。
另：因吸附剂的比表面较大，天气潮湿时或长期放置中吸附的水分会对分离效果产生极大的影响（相当于大大增加了固定相的极性导致样品分不开），因此应将吸附剂放入９０～１００度烘箱内烘２小时后，取出在干燥器中冷却后再使用。
使用的硅胶，不用时一定要密封，防止吸潮。
TLC所用的硅胶板一定要保存在干燥器里面，或使用前在红外烘箱里干燥一段时间。
2．溶质的结构与吸附能力的关系化合物的吸附性与它们的极性成正比，化合物分子中含有极性较大的基团时，吸附性也较强，氧化铝对各种化合物的吸附性按以下次序递减：酸和碱>醇、胺、硫醇>酯、醛、酮>芳香族化合物>卤代物、醚>烯>饱和烃３．柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球是常用的手动加压的方法。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
体会：过柱时是否加压要具体分析，通常情况下直径比较粗的柱子用常压即可，因其横截面积的缘故淋洗剂的流速已足够快。
通常控制柱子下端液体流速大约在0.5~1滴每秒的范围比较合适。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
一般不推荐使用。
４．柱子的尺寸从理论上讲应该是粗长的好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，若需要时可增至100倍，具体选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分Rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的长度，也可以减小淋洗剂的极性等等。
细长柱子可以增加塔板数，但是也会增加过柱的时间使样品在固定相中扩散影响分离效果。
５．溶剂溶剂的选择是重要的一环，通常根据被分离物中各种成分的极性、溶解度和吸附剂的活性等来考虑先将要分离的样品溶于一定体积的溶剂中，选用的溶剂极性应低，体积要小。
如有的样品在极性低的溶剂中溶解度很小，则可加入少量极性较大的溶剂，使溶液体积不致太大。
样品的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离。
然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物白色谱柱中洗脱下来。
常用洗脱剂的极性按如下次序递增：己烷和石油醚<环己烷<四氯化碳<三氯乙烯<二硫化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<乙酸常选用石油醚，乙酸乙酯。
正己烷价格比较高。
使用乙醚、二氯甲烷等沸点较低的溶剂时，它和硅胶的吸附是一个放热过程，特别是夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。
由于硅胶中的活性羟基，用甲醇可能会洗下来一些硅胶中的东西，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。
展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
体会：１）过柱的淋洗剂极性通常要比过板时极性要小。
一般为了得到更好的分离，通常是要把样品的Rf值调到0.2-0.3之间，不过，许多情况下，如果接受瓶小一些，即使Rf 值在0.5，0.6。
２）尽量避免使用毒性较大的溶剂，如氯仿，可考虑用石油醚与乙酸乙酯调配。
３）当混合溶剂作为淋洗剂时，要考虑所用溶剂的沸点差异在使用过程中挥发程度不一样而造成的极性改变。
４）对于Rf值接近的化合物分离，可尝试极性相近但由不同溶剂组成的混合体系作为淋洗剂可能会产生意想不到的效果。
例如石油醚:乙酸乙酯＝５０:１与石油醚:二氯甲烷＝５:１的极性相近（仅是例子，具体比例有些忘了）的极性差不多，但是后者的分离效果可能优于前者。
６．装柱柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。
装柱可采用湿法和干法两种，二者各有优劣。
无论采用哪种方法装柱，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且都不要有裂缝或气泡，虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，导致柱子开裂，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。
湿法装柱：关闭柱子下端活塞，把硅胶用适量的溶剂拌成半透明状的均匀稀糊（更像是汤），此时应充分搅拌，仔细观察没有气泡后，以玻璃棒引流倒入事先装有少量溶剂的空柱子中，然后打开活塞让溶剂流出，硅胶自然沉降。
注意：１）装柱溶剂极性不大于过柱淋洗剂；２）倒入硅胶稀糊应有耐心防止液体流击出气泡留于柱内；３）过程中若已产生气泡，则可趁着硅胶尚未完全沉降时用长玻棒搅动溶剂液面下的有气泡处的硅胶可将其赶跑。
待硅胶至所需高度后另加溶剂加压走柱，注意硅胶柱上方应时刻保留有一段溶剂！本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
缺点是所须溶剂体积较大（当然装柱时用溶剂可以重复使用），耗时长。
一般说来湿法装柱较干法紧密均匀，建议初学者采用。
干法装柱：是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，再用水泵在柱子下端直接抽，当硅胶不再下落时，保持水泵抽气状态下，从柱子上倒入溶剂，注意倒入的溶剂流量必须大于水泵抽气流量以保证柱子上方时刻保留一段溶剂！待溶剂前沿走到活塞时关闭活塞，注意此时因柱内负压溶剂仍在飞快往下走千万别让柱子干了！撤走水泵，待柱内液面不再下降，此时柱子的下半部分是均匀的而上半部分可以看见有气泡，打开活塞，倒入足够的溶剂后从上端用剪去缓冲球的双连球（即直接鼓气）加压，可将上半部分压均匀无气泡。
若想柱子装得紧密些，可用淋洗剂多走几次柱子。
本法的优点是装柱较方便，速度快，特别是装体积较大的柱子特别能显示时间优势（当然大柱子因为溶剂走得太快容易抽干所以对技术的熟练程度要求更高些）。
最大的缺陷在于抽气时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），不太适合低沸点的淋洗剂如乙醚，二氯甲烷（易产生气泡）。
解决的办法是：第一、硅胶一定要压结实；第二、一定要用较多的溶剂“走柱子”，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。
不论用湿法或干法装柱，若最后装好时硅胶表面不平整，可用干净玻棒将最上面约１厘米的硅胶重新捣松，待其自然降落后，再加点溶剂压紧即可。
７．上样样品上样分湿法、干法两种。
上样的基本要求是使样品以尽可能小的厚度上到柱子上，采用哪种方法应根据样品的实际情况而定，无论哪种都要求样品中不含大于淋洗剂极性的溶剂。
湿法上样：适合湿法的样品应该是粘度不大均匀液体样品或者在小极性溶剂（极性不大于淋洗剂）中溶解度非常好的固体样品（保证上样过程中不会析出）。
用于溶解样品的溶剂体积应越少越好。
打开活塞，控制柱子上方溶剂恰好流干时关闭活塞，即用滴管吸取样品，沿柱子内壁于硅胶面上方0.5cm以内距离均匀地加样，待样品布满硅胶面后打开活塞，继续加样。
加样的速度以柱子不出现气泡为限。
待所有样品上完后，用尽可能少的溶剂洗剂样品瓶，待样品在硅胶上恰好走干后依上样法将溶液加到硅胶上。
（若样品量比较大则可省去该步）。
另取干净滴管从上样处上方沿柱子内壁淋洗，确定所有样品开始在柱子中展开后可加入大量溶剂开始过柱。
若担心上样及加溶剂过程中会将柱子表面弄破可考虑在上样前先在柱子上加一层石英砂。
过程中时刻保持柱子不要干出气泡或裂纹！很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系，仍可用湿法。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这时候建议采用干法上样。
干法上样：干法就是把待分离的样品用少量低沸点大极性溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂，注意必须在油泵上完全抽干大极性溶剂！如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层，注意保留足够的溶剂使加入的干粉恰好能被覆盖以防柱子开裂（溶剂太多也不好，相当于增加了上样厚度）。
此时加入的干粉层中可能会有大量的气泡，但由于是松的，可以用玻棒稍做搅拌以除去气泡，同样要保持硅胶表面的平整。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起显色是一个很长的脱尾，这些溶剂虽溶解性好，但是沸点太高不易除去应避免），这时就必须用干法上柱了。
用于吸附上样的硅胶要求：１）样品和硅胶的量比例问题：应尽可能地少用硅胶，可先按1：2尝试，保证在旋干后固体是均匀的，不能看到有样品颗粒析出（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。
若有，则应重新用溶剂溶解后再加入硅胶重新抽干。
２）硅胶颗粒通常要比作为固定相的大，以保证能尽快脱附降低上样厚度。