肿瘤基因突变检测标本要求ppt课件
3
3. Bai H, et al. J Clin Oncol 2009; 27(16):2653-2659.
不同类型标本处理方式
• 新鲜组织标本：
1、迅速低温放置，如有条件可放置-80℃或者液氮保存，如果没有条件可使用-20℃保 存，但是保存时间不宜太久；
• 2、放入组织保存液中保存，组织保存液的能渗透0.5cm厚度的组织，因此用组织保存液 保存时，建议组织不宜过大。核酸在组织保存液中 37 ℃稳定存放1天，25 ℃稳定存放一 周，4 ℃ 1个月或–20 ℃长期存放
• 石蜡组织标本
1、手术、穿刺、活检标本等放入10%中性福尔马林中固定后制作成蜡块，可保存数年之久 。(病理科常规处理样本方式)
• 细胞学标本
1、胸水样本、心包积液、脑脊液等，建议在收到标本后两个小时内离心收集沉淀细胞进行 检测，如来不及操作可离心后将沉淀冻存至-20℃保存，等使用时取出；亦可将沉淀包埋成 蜡块后再切片检测；
• 冰冻标本
– 组织离体后立即速冻<1h
·
10
病理评估不达标样本导致EGFR突变检 测呈阴性结果
4 例肺肿块切除标本EGFR突变检测呈阴性
肺转移性肝细胞性肝癌
小细胞性肺癌
肿瘤细胞太少
Rubbish In; Rubbish Out
未检测到肿瘤组织
➢ 选择正确、合适的肺癌组织，是保证突变检测成功第一步及重要的步骤
·
7
细胞学标本
胸水或支 气管刷片
或痰液
涂片、染色 液基细胞学
细胞蜡块，切片染色
病理诊断 病理诊断 病理诊断
• 细胞学标本中通常肿瘤细胞数目较少，需要采用灵敏度高的ARMS检测方法 • 建议有条件的病理科制备细胞蜡块：
– 处理流程：细胞学标本经离心处理后，常规福尔马林固定、处理及石蜡包埋即可 – 制备细胞蜡块的好处： （1）便于长期保存；（2）方便用于EGFR基因突变的检测及其他分
·
11
标本的病理评估内容
• 诊断：确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌
• 肿瘤量：确保有足够的肿瘤组织用于突变检测 ▪ 尽量保证200-400个肿瘤细胞 ▪ 对于技术成熟的实验室，可以尝试进行<200个肿瘤细胞的标本检测 ▪ 5-10uM 10张切片能满足突变检测需求 ▪ 当细胞数较少时,可以适当增加切片数,以满足检测需求
2、或者将样本直接放置4℃保存过夜再离心收集沉淀，可能会一定程度影响DNA的完整性 ，但一般不影响实验结果。细胞学标本建议涂片后经病理诊断含有肿瘤后在进行检测。
• 血液标本
1、血液标本收集后使用EDTA抗凝，由于血浆、血清中游离核酸以及循环肿瘤细胞量极少 ，建议尽可能在收集标本后2小时内进行核酸提取，以避免核酸更深降解。
肿瘤基因突变检测标本
·
1
用于突变检测的标本
病理评估合格的 标本适用于EGFR 基因突变检测
·
建议采用灵敏度 高的ARMS检测 方法
2
肿瘤基因突变检测标本类型
• 冰冻组织
– 外科手术标本：最好标本，可得高质量肿瘤DNA – 支气管镜、穿刺活检测标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好
• 固定包埋组织
– 外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，但DNA片段化 – 支气管镜、穿刺活检测标本：可得肿瘤DNA量少且片段化
• 肿瘤比例：标识肿瘤丰富的区域，提高肿瘤细胞比例用于检测
▪ 尽量去除非肿瘤组织及细胞，提高检测的敏感性
▪ 不同敏感性的检测方法对肿瘤比例要求不一样
▪ 测序法：〉10%
▪ ARMS法：〉1%
·
12
·
13
• 细胞学标本
– 胸水、肺泡冲洗液和痰液标本：肿瘤细胞含量不确定，通常很少
• 血液标本
– 血清、血浆标本：含肿瘤DNA，但含量不稳定，DNA片段化 – 循环血肿瘤细胞：可得较高质量肿瘤DNA，但量很少
1. Dacic S. Adv Anat Pathol 2008; 15(4):241-247.
2. Sequist LV, et al. Clin Cancer Res 2006; 12(14S):4403s-4406s·.
·
4
手术标本
标本接收、固定
组织处理、石蜡包埋
切片及H&E染色
• 标本通常较大，能提供足够的肿瘤组织用于检测 • 标本可以是冰冻或福尔马林固定组织
·
组织学观察 5
支气管镜活检
▪ 标本较小 ▪ 通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理 ▪ 建议采用灵敏度高的ARMS检测方法
·
6
细针穿刺活检
▪ 标本较小 ▪ 通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理 ▪ 建议采用灵敏度高的ARMS检测方法
子生物学标记物的检测
·
8
四、胸水标本处理流程
收集胸水50-500mL 室温静置30分钟，吸去上清，剩余 5-50mL
沉淀物室温250g离心10分钟，吸去上清
பைடு நூலகம்
低温保存
酒精固定涂片
·
福尔马林固定切片
9
标本的质量控制
• 福尔马林固定的标本
– 固定要及时，离体后即时处理<1h – 固定液：10% 中性缓冲福尔马林（新鲜配制） – 固定液的量：应为组织体积的10倍以上 – 固定时间：小组织6-12h，大标本6-48h
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肿瘤基因突变检测
肿瘤基因突变检测癌症是一类难以预防的疾病，中晚期癌症治愈的可能性又很小，而早期癌症的治愈率可达65%以上，有些肿瘤可达90%以上，因此，战胜癌症的关键是早期发现癌症。
由于癌症早期常无特殊症状，甚至毫无症状，故癌症的早期发现、早期诊断主要是通过定期健康体检和人群筛查完成。
目前筛查癌症的方法主要是通过化验血肿瘤指标及B超、CT、MRI、PET-CT 等检查，但这些方法的敏感性和特异性均不高，发现有异常时往往已是中晚期。
17种常见高发肿瘤，包括乳腺癌（breast cancer）、结肠癌（colorectalcancer）、子宫癌（endometrial cancer）、脑胶质瘤（glioma）、白血病（leukemia）、肺癌（lungcancer）、淋巴癌（lymphoma）、成神经管细胞瘤（medulloblastoma）、黑色素癌(melanoma)、间皮瘤(mesothelioma) 、多性骨髓瘤(multiple myeloma) 、卵巢癌(ovarian cancer)、胰腺癌(pancreatic cancer) 、真性红细胞增多(polycythemia vera) 、前列腺癌(prostatecancer) 、肾细胞癌(renal cell cancer)和恶性内瘤(sarcoma)，其发病机制涉及与多种肿瘤发生共同相关的肿瘤易感基因群介导的分子改变，参与了肿瘤发生的早期分子事件。
系统寻找和探讨它们在肿瘤发生发展过程中的遗传学变异，对阐明肿瘤早期发生机制及寻找肿瘤早期预警、早期诊断和早期治疗的分子靶标都具有重要的现实意义。
利用高通量分子测序技术平台，可同时开展多个肿瘤基因突变检测项目，如EGFR、K-RAS 、N-RAS、B-RAF、PI3K 、p53、p16、BRCA1、BRCA2等。
K-RAS 基因(K-ras,p21)突变检测KRAS基因（K-ras,p21）检测是目前医生了解大肠癌患者癌基因状况最直接、最有效的方法，通过检测不仅可以深入了解癌基因的情况，更重要的是筛选出针对抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者，帮助医生选择对肿瘤病人最有效的治疗方法。
肿瘤的基因检测ppt课件
肿瘤的基因检测
恶性肿瘤
WHO《全球癌症防治白皮书》：
癌症是基因病，要彻底战胜癌症，必须从基因入手。
肿瘤的发生：
原癌基因的激活，抑癌基因的灭活
肿瘤的个体化治疗： 肿瘤的动态监测：
肿瘤分子标志物
药物作用靶点相关基因，药物代谢通路基因等
基因检测
10/21/2018
2
精准医学计划
2015年1月30日奥巴马宣布 “精准医学计划 (Precision Medicine Initiative)“ 他希望，像按血型输血那样标准化地根据基因治疗癌 症等疾病；像量体温那样简单地把确定精确的用药剂量。
靶向药物
针对特定肿瘤基因位点开发 直接作用于肿瘤组织 疗效好，副作用小
10/21/2018 6 6
靶向用药指导基因检测
根据NCCN肿瘤学临床实践指南建议:肿瘤 个体化用药基因检测是服用靶向药物时必 检项目
7
靶向药物
肿瘤类型
检测项目
KRAS体细胞突变检测 （2,3外显子突变）
指标
突变 野生 突变 野生 突变 野生 突变 野生 突变 野生 突变 野生 高 低 高 低 高 低 野生 突变
最佳疗效分型
疗效
无效 有效
西妥昔单抗 （爱必妥） 帕尼单抗 （维克替比）
结直肠癌
BRAF体细胞突变检测 （15外显子突变, T1799A） PI3KCA体细胞突变检测 (9,20外显子突变) C-Kit体细胞突变检测 (9外显子突变)
KRAS野生/BRAF野生 /PIK3CA野生的疗效最 佳
无效 有效 无效 有效 无效 有效
突变检测 NCCN非小细胞肺癌临床指南： EGFR基因突变，尤其是外显子19缺失，外显子21突变（L861Q）及外显 子18突变（G719S），肿瘤对酪氨酸抑制剂（TKIs）的敏感度有重要 关系。 EGFR和KRAS突变在肺癌患者中互相排斥。 TKI治疗耐药与KRAS突变及特定的获得性EGFR突变（如T790M）有关。
恶性肿瘤
WHO《全球癌症防治白皮书》：
癌症是基因病，要彻底战胜癌症，必须从基因入手。
肿瘤的发生：
原癌基因的激活，抑癌基因的灭活
肿瘤的个体化治疗： 肿瘤的动态监测：
肿瘤分子标志物
药物作用靶点相关基因，药物代谢通路基因等
基因检测
10/21/2018
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精准医学计划
2015年1月30日奥巴马宣布 “精准医学计划 (Precision Medicine Initiative)“ 他希望，像按血型输血那样标准化地根据基因治疗癌 症等疾病；像量体温那样简单地把确定精确的用药剂量。
靶向药物
针对特定肿瘤基因位点开发 直接作用于肿瘤组织 疗效好，副作用小
10/21/2018 6 6
靶向用药指导基因检测
根据NCCN肿瘤学临床实践指南建议:肿瘤 个体化用药基因检测是服用靶向药物时必 检项目
7
靶向药物
肿瘤类型
检测项目
KRAS体细胞突变检测 （2,3外显子突变）
指标
突变 野生 突变 野生 突变 野生 突变 野生 突变 野生 突变 野生 高 低 高 低 高 低 野生 突变
最佳疗效分型
疗效
无效 有效
西妥昔单抗 （爱必妥） 帕尼单抗 （维克替比）
结直肠癌
BRAF体细胞突变检测 （15外显子突变, T1799A） PI3KCA体细胞突变检测 (9,20外显子突变) C-Kit体细胞突变检测 (9外显子突变)
KRAS野生/BRAF野生 /PIK3CA野生的疗效最 佳
无效 有效 无效 有效 无效 有效
突变检测 NCCN非小细胞肺癌临床指南： EGFR基因突变，尤其是外显子19缺失，外显子21突变（L861Q）及外显 子18突变（G719S），肿瘤对酪氨酸抑制剂（TKIs）的敏感度有重要 关系。 EGFR和KRAS突变在肺癌患者中互相排斥。 TKI治疗耐药与KRAS突变及特定的获得性EGFR突变（如T790M）有关。
肿瘤基因检测样本处理PPT
5. 需在邮件或送样信息中注明检测报告接收人，以便最后报告的发送
1
常见问题反馈
• 随样本一起来的送检信息单填写不全 • 寄送信息表还是用老版本，未进行更新。临床样本一定要使用新版寄
肿瘤基因检测样本处理
肿瘤产品线
遗传性肿瘤基因检测样本类型及要求
外周血：
DNA：
唾液：
1.EDTA抗凝管采集5mL静脉 1.DNA浓度
（需用配套采集器进行收集）
血。
≥30ng/μL,260/280≈1.8~2.0，总 1.液体与上层泡沫间的分层界面达
2.收集后如即刻寄送，冰袋运 量≥3μg。
到4ml及以上刻度线；
4.为保证石蜡标本DNA提取的成功率，请尽可能 送检1年以内的标本。
5.常温保存、运输。
石蜡样本处理及鉴定
病理鉴定确定癌细 胞含量为70%以上
为减少样本损耗，尽量避免铺到玻片上， 直接放到EP管中。
Oseq-T样本类型及要求
手术新鲜组织：
1.1.样本量大小约 10mm×10mm×4mm，重约 50mg为最佳，需请病理科对该组 织进行免疫组化或HE染色，病灶组 需确保未坏死肿瘤组织比例在70%
输。
2.需提供DNA/RNA提取操作规程。 2．严格按照采集说明书进行采集。
3.冻存新鲜外周血， -80 ℃保 3. -80℃保存，干冰/液氮运输。 3.常温运输
存。
（注：需用配套采集器进行收集）
样本采集管
EDTA采血管
可送检项目： 化疗12项， 遗传性肿瘤 Oseq-T对照
EP管（装石蜡切片及DNA）
可送检项目： 靶向，化疗 遗传性肿瘤 Oseq-T
唾液采集管
可送检项目： 遗传性肿瘤
唾液采集说明
1
常见问题反馈
• 随样本一起来的送检信息单填写不全 • 寄送信息表还是用老版本，未进行更新。临床样本一定要使用新版寄
肿瘤基因检测样本处理
肿瘤产品线
遗传性肿瘤基因检测样本类型及要求
外周血：
DNA：
唾液：
1.EDTA抗凝管采集5mL静脉 1.DNA浓度
（需用配套采集器进行收集）
血。
≥30ng/μL,260/280≈1.8~2.0，总 1.液体与上层泡沫间的分层界面达
2.收集后如即刻寄送，冰袋运 量≥3μg。
到4ml及以上刻度线；
4.为保证石蜡标本DNA提取的成功率，请尽可能 送检1年以内的标本。
5.常温保存、运输。
石蜡样本处理及鉴定
病理鉴定确定癌细 胞含量为70%以上
为减少样本损耗，尽量避免铺到玻片上， 直接放到EP管中。
Oseq-T样本类型及要求
手术新鲜组织：
1.1.样本量大小约 10mm×10mm×4mm，重约 50mg为最佳，需请病理科对该组 织进行免疫组化或HE染色，病灶组 需确保未坏死肿瘤组织比例在70%
输。
2.需提供DNA/RNA提取操作规程。 2．严格按照采集说明书进行采集。
3.冻存新鲜外周血， -80 ℃保 3. -80℃保存，干冰/液氮运输。 3.常温运输
存。
（注：需用配套采集器进行收集）
样本采集管
EDTA采血管
可送检项目： 化疗12项， 遗传性肿瘤 Oseq-T对照
EP管（装石蜡切片及DNA）
可送检项目： 靶向，化疗 遗传性肿瘤 Oseq-T
唾液采集管
可送检项目： 遗传性肿瘤
唾液采集说明
肿瘤标志物检测及应用PPT课件
肿瘤标志物还可以用于监测患者的病 情变化和复发情况，及时发现异常情 况并采取相应的治疗措施，提高患者 的生存质量和生存率。
05 肿瘤标志物检测的局限性及展望
CHAPTER
肿瘤标志物检测的局限性
灵敏度与特异性不足
受其他因素影响
目前大部分肿瘤标志物的灵敏度和特 异性有限，容易产生假阳性或假阴性 结果，影响诊断的准确性。
肿瘤标志物存在于患者的血液、体液 、组织或排泄物中，通过生物学、免 疫学或化学的方法进行检测。
肿瘤标志物的分类
01
02
03
按来源分类
可分为肿瘤细胞产生的标 志物和宿主对肿瘤反应产 生的标志物。
按功能分类
可分为肿瘤增殖相关标志 物、分化标志物、凋亡相 关标志物、血管新生相关 标志物等。
按性质分类
可分为蛋白质类、酶类、 激素类、糖类、癌基因产 物等。
过测量放射性强度进行定量检测。
免疫组化技术
03
利用抗体与抗原肿瘤标志物。
生物芯片技术
基因芯片
将大量基因探针固定在芯片上， 通过与待测标本杂交，检测基因 表达谱的变化。
蛋白质芯片
将大量蛋白质探针固定在芯片上 ，与待测蛋白质进行相互作用， 用于蛋白质表达和功能研究。
案例三：结直肠癌标志物检测与应用
要点一
总结词
要点二
详细描述
结直肠癌诊断、预后评估、复发监测
结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，早期诊断和治疗对 于提高治愈率和生存率至关重要。结直肠癌标志物检测可以 通过检测血液、粪便等生物样本中的肿瘤相关物质，辅助医 生对结直肠癌进行早期诊断、预后评估以及复发监测。常见 的结直肠癌标志物包括癌胚抗原（CEA）、糖链抗原19-9 （CA19-9）、糖链抗原72-4（CA72-4）等。
05 肿瘤标志物检测的局限性及展望
CHAPTER
肿瘤标志物检测的局限性
灵敏度与特异性不足
受其他因素影响
目前大部分肿瘤标志物的灵敏度和特 异性有限，容易产生假阳性或假阴性 结果，影响诊断的准确性。
肿瘤标志物存在于患者的血液、体液 、组织或排泄物中，通过生物学、免 疫学或化学的方法进行检测。
肿瘤标志物的分类
01
02
03
按来源分类
可分为肿瘤细胞产生的标 志物和宿主对肿瘤反应产 生的标志物。
按功能分类
可分为肿瘤增殖相关标志 物、分化标志物、凋亡相 关标志物、血管新生相关 标志物等。
按性质分类
可分为蛋白质类、酶类、 激素类、糖类、癌基因产 物等。
过测量放射性强度进行定量检测。
免疫组化技术
03
利用抗体与抗原肿瘤标志物。
生物芯片技术
基因芯片
将大量基因探针固定在芯片上， 通过与待测标本杂交，检测基因 表达谱的变化。
蛋白质芯片
将大量蛋白质探针固定在芯片上 ，与待测蛋白质进行相互作用， 用于蛋白质表达和功能研究。
案例三：结直肠癌标志物检测与应用
要点一
总结词
要点二
详细描述
结直肠癌诊断、预后评估、复发监测
结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，早期诊断和治疗对 于提高治愈率和生存率至关重要。结直肠癌标志物检测可以 通过检测血液、粪便等生物样本中的肿瘤相关物质，辅助医 生对结直肠癌进行早期诊断、预后评估以及复发监测。常见 的结直肠癌标志物包括癌胚抗原（CEA）、糖链抗原19-9 （CA19-9）、糖链抗原72-4（CA72-4）等。
肿瘤的分子生物学检验技术 ppt课件
ppt课件
10
3、rRNA基因
1、mtRNA 编码 两种rRNA,即 12SrRNA16SrR NA 2、位P于heH链 Leu tRNA tRNAVal 之间以tRNA 相 隔 3、变异常发生在 二级结构茎环上 。
ppt课件
11
4、非编码区
D-loop（约1120bp）
位于tRNAPro
和tRNAPhe基因之间， 约1120bp,是mtDNA中 变异最多的区域，参与 并调控mtDNA的复制和 转录。
（4）结果分析：根据酶解片段选择不同浓度的琼脂 糖或聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，染色后观察扩增 基因的变异情况。
ppt课件
35
二、线粒体病的分子生物学检验技术
（二）变性高效液相色谱法
在部分变性的条件下，通过杂合与纯合二倍体 在柱中保留时间的差异，发现DNA突变。异源 双链DNA与同源双链DNA的解链特性不同，在 部分变性条件下，异源双链因有错配区的存在
三、线粒体病的分子生物学检验应用
（一）MELAS综合征
11月23日，读初三的晓炎从学校回家后，顾春娜就感觉女儿脸色 不好，以为晓炎在学校吃的没有营养，就赶紧给女儿做了顿好饭。 可晓炎吃过饭后不久，就开始呕吐。
当晚凌晨2点钟，晓炎出现了全身抽搐的症状，看到女儿四肢
颤抖，嘴眼歪斜，顾春娜赶紧拨打120，急救车将女儿送到医院救
（3）DHPLC检测上样前要验证PCR产物质量，以保 证结果准确性。
（4）结果分析：在部分变性条件下出现异源双链峰， 表明异质性突变位点，反之则为同源单峰。建议购买 阳性质控品。
ppt课件
39
二、线粒体病的分子生物学检验技术
（三）DNA芯片技术略 （四）DNA测序技术略
肿瘤的基因检测ppt课件
7/20/2020
3
治疗方式的改变
传统治疗方式
病理诊断
用药方案
治疗
监测反应
个体化治疗方式
更换方案
病理诊断
基因检测
用药方案
7/20/2020
个体化用药指导预后监测
治疗
无疗效， 毒副作用大
安全有效
4
肿瘤个体化治疗基因检测项目
靶向药物相关基因检测
检 测 项 目
化疗药物相关基因检测
7/20/2020
5
靶向治疗
EGFR突变
18,19,20,21号外显 子
检测结果 野生型
KRAS突变
12,13,61,146密码子 野生型
ERCC1多态性 DPYD多态性 MDR1多态性
C118T IVS14+1G>A C2677T/A
野生型 野生型 突变型
CDA多态性
A79C
野生型
解读
使用酪氨酸激酶抑制剂 （TKIs）疗效差 西妥昔单抗/帕尼单抗 疗效较好 铂类药物疗效较好 5-FU毒副作用较低 紫杉醇疗效好
7/20/2020
11
靶向药物的疗效与患者的基因有直接关系
➢ 美国国立综合癌症网络（NCCN）《结直肠癌临床实践指南》中明确指出，（1） 所有转移性结直肠癌患者都应检测KRAS基因状态；（2）只有KRAS野生型患者才 建议接受EGFR抑制剂（如爱必妥和帕尼单抗）治疗。
➢ 美国国立综合癌症网络（NCCN）《非小细胞肺癌临床实践指南》中也指出：当 KRAS基因发生突变时，不建议使用EGFR-TKls靶向治疗药物。
2、临床初诊，需要进行化疗的肿瘤患者； 3、肿瘤治疗后复发或发生转移，治疗方案无
效，需重新制定治疗方案的肿瘤患者；
肿瘤的基因诊断PPT课件
Insensitivity to anti-growth signals
Sustained angiogenesis
Tissue invasion & metastasis
Limitless replicative
一、肿瘤发生发展的分子机制 1、 肿瘤自身
Self-sufficiency in growth signals
表3
标志分类 分子遗传性
病毒性 组织性
肿瘤性
肿瘤基因诊断的分子标志及其应用
机制 染色体易位 点突变 缺失 改变拼接 扩增 比例改变 病毒转化
组织分化
肿瘤细胞特征
分子标志 t(9；22)，t（14；18），t(11；12) 等 p53,ER ras等
BRCA1，BRCA2，DCC等
CD44，muc-1,VLA-4等
表1细胞癌基因按其产物定位和功能分
定类位
功能
癌基因，产物
分泌蛋白
生长因子
sis PDGFβ链
跨膜蛋白
受体型酪氨酸激酶
膜结合蛋白
G-蛋白 非受体型酪氨酸激酶
胞浆可溶性蛋白
非受体型酪氨酸激酶 丝氨酸/苏氨酸激酶 信号转导连接蛋白
胞核蛋白
转录因子
erb B2 ,EGF样受体 erb B ,EGF受体 fms ,CSF-1受体
表2 已确定的几种抑癌基因
基因
染色体定 位
相关肿瘤
基因产物及功能
RB 13q14 WT 11p13
RB、成骨肉瘤、胃癌、SCLC、乳癌、结肠 p105，控制生长 癌
WT、横纹肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、 WT-ZFP，负调控转录因子 肝母细胞瘤
NF-1 17p12
样本流程图PPT课件
18
T790M突变检测常用方法学比较
技术
ARMS ddPCR
NGS
优点
缺点
临床应用 研究应用
简便快速 特异性好 技术普及度高 法规支持
敏感度高 绝对定量
可检测未知突 变 检测基因数量 不受限
只能检测已知突变 敏感度不够高
已知EGFR突变检 测
只能检测已知突变 仪器成本相对高 技术普及度尚低 敏感度或有瓶颈
2020/3/27
6
目录
1、肺癌 2、EGFR基因突变的非小细胞肺癌患者 3、 EGFR基因突变检测的必要性 4、血液检测流程及注意事项 5、 EGFR-TKI 治疗后获得性耐药
2020/3/27
7
1、肺癌
原发性肺癌(以下简称肺癌)是我国最常见的恶性肿瘤之一。国家癌症中心 2015年发布的数据显示，2006年-2011年我国肺癌5年患病率是130.2(1/10 万)。其中男性84.6(1/10万)，居恶性肿瘤第2位。女性45.6(1/10万)，居恶性 肿瘤第4位。
功能：EGFR在肿瘤细胞中常常过表达， 当其胞外部分与配体结合后，EGFR可在 细胞表面 形成同源和异源的二聚体并引 起胞内酪氨酸激酶结钩域活化，随后使 胞内信号蛋白发生磷酸化而被激活，促 进细胞增殖，血管生成、浸润、转移及 抑制凋亡；
2020/3/27
9
3、EGFR基因突变与TKI相关性
TKI药物可以结合胞内的酪氨酸激酶区域，抑制其激酶的活性，阻断下游信号转导过程， 抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡；临床研究表明EGFR突变类型与TKI治疗敏感性相关；
百分比 (%)*
Author | 00 Month Year
Set area descriptor | Sub level 1
肿瘤靶向治疗,基因检测ppt课件
Ⅲ、Ⅳ期患者：放/化疗+手术 局部晚期患者：手术、化疗、放疗、靶向
肿瘤个体化治疗
分子分型
标本→基因检测→遗传特性 →选择化疗/靶向药物
克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因
EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染 色体的p21和p23带
已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体： v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7
等位基因特异性扩增法（Allele Specific Amplification，ASA） 建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统 （Amplification Refractory Mutation System ， ARMS）、等位 基因特异性PCR（Allele Specific PCR， ASPCR）等。
STMN1表达检测意义
• 疗效：
低表达接受长春瑞滨/顺铂治疗 的效果较好，中位生存期较长；
STMN1高表达接受长春瑞滨/顺铂 的疗效较差。 • 预后： 表达水平越高，患者的生存率越 低，肿瘤发生转移的风险越高。
Elizabeth A et al. Cancer Res. 2002;62:6864-6869
一个PCR体系中：1对引物，1条探针
每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！
应用：对微量突变进行检测。
SNP位点检测应用
EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较
测序技术发展历程
Ion Semiconductor Sequencing
（2011）
Next-Gen Sequencing （2005以后） Sanger Sequencing （1977）
World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786.
肿瘤个体化治疗
分子分型
标本→基因检测→遗传特性 →选择化疗/靶向药物
克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因
EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染 色体的p21和p23带
已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体： v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7
等位基因特异性扩增法（Allele Specific Amplification，ASA） 建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统 （Amplification Refractory Mutation System ， ARMS）、等位 基因特异性PCR（Allele Specific PCR， ASPCR）等。
STMN1表达检测意义
• 疗效：
低表达接受长春瑞滨/顺铂治疗 的效果较好，中位生存期较长；
STMN1高表达接受长春瑞滨/顺铂 的疗效较差。 • 预后： 表达水平越高，患者的生存率越 低，肿瘤发生转移的风险越高。
Elizabeth A et al. Cancer Res. 2002;62:6864-6869
一个PCR体系中：1对引物，1条探针
每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！
应用：对微量突变进行检测。
SNP位点检测应用
EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较
测序技术发展历程
Ion Semiconductor Sequencing
（2011）
Next-Gen Sequencing （2005以后） Sanger Sequencing （1977）
World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786.
临床肿瘤基因检测简介PPT课件
该检测者在上海肺科医院行胸腔 镜手术，取出病理为肺腺癌。
病理：肺腺 癌
5
案例二：辅助诊断癌症，
个人不相信，不愿面对， 没有采取必要干预措施
2年半后诊断大肠癌中晚期
6
案例三：癌症复发监控
检测者女性，确诊宫颈癌，术后、放、 化疗后，经基因检测发现 FHIT和HLA-A有突变，确诊为术后复发。
7
肿瘤早期检查与治疗方法
genome 上的TKI 类药物相 关药敏/ 耐药信息
药物类型 EGFR TKI ALK TKI
检测基因 EGFR
耐药
KRAS
MET
药敏Leabharlann EGFR耐药ALK
药敏
ALK ROS1
突变位点
Exon 20 Insertion c.2369C>T (T790M)
c.34 (G12C、G12R、G12S) c.35 (G12A、G12D、G12V) c.37 (G13C、G13R、G13S) c.38 (G13A、G13D) c.181 (Q61K) c.182 (Q61L、Q61R) c.183 (Q61H)
29
LOGO
30
.
Amplification
c.2156 (G719A) c.2155 (G719C、G719S) Exon 19 Deletion Exon 19 Insertion c.2290_2291ins (A763_Y764insFQEA) c.2573 (L858R) c.2582 (L861Q)
1151Tins L1152R C1156Y F1174L L1196M G1202R S1206Y G1269A
LOGO
临床肿瘤基因检测简介
1
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病理：肺腺 癌
5
案例二：辅助诊断癌症，
个人不相信，不愿面对， 没有采取必要干预措施
2年半后诊断大肠癌中晚期
6
案例三：癌症复发监控
检测者女性，确诊宫颈癌，术后、放、 化疗后，经基因检测发现 FHIT和HLA-A有突变，确诊为术后复发。
7
肿瘤早期检查与治疗方法
genome 上的TKI 类药物相 关药敏/ 耐药信息
药物类型 EGFR TKI ALK TKI
检测基因 EGFR
耐药
KRAS
MET
药敏Leabharlann EGFR耐药ALK
药敏
ALK ROS1
突变位点
Exon 20 Insertion c.2369C>T (T790M)
c.34 (G12C、G12R、G12S) c.35 (G12A、G12D、G12V) c.37 (G13C、G13R、G13S) c.38 (G13A、G13D) c.181 (Q61K) c.182 (Q61L、Q61R) c.183 (Q61H)
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Amplification
c.2156 (G719A) c.2155 (G719C、G719S) Exon 19 Deletion Exon 19 Insertion c.2290_2291ins (A763_Y764insFQEA) c.2573 (L858R) c.2582 (L861Q)
1151Tins L1152R C1156Y F1174L L1196M G1202R S1206Y G1269A
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临床肿瘤基因检测简介
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